基因工程的基本操作程序第二课时上课课件

目的基因的获取 目的基因的获取
基因工 程基本 操作四 个步骤
基因表达载体的构建 基因表达载体的构建
将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入受体细胞 导入
目的基因的检测与鉴定 目的基因的检测与鉴定
利用PCR技术扩增目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术扩增
多聚酶链式反应 体外 概念：PCR全称为_______________，是在生物____ 全称为_______________ ____复制 ① 概念：PCR全称为_______________，是在生物____复制 特定DNA DNA片段 特定DNA片段 ___________的核酸合成技术 ___________的核酸合成技术 DNA复制 ②原理：__________ 原理： DNA复制 ③条件：已知基因的核苷酸序列 条件：_______________________、 _______________________、 四种脱氧核苷酸 、___________ (做启动子)、 _______________、 (做启动子 做启动子) _______________ 一对引物 __________ 等 TaqDNA聚合酶 TaqDNA聚合酶 ATP 前提条件： 前提条件： 双链的解开 。 指数 方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） 2n 方式： _____方式扩增 ④方式：以_____方式扩增， ____（ 为扩增循环的次数） ⑤过程： 过程：
检测—性鉴定等 鉴定—— 抗虫鉴定、抗病鉴定、
三、将目的基因导入受体细胞
转化： 转化：
受体细胞 目的基因进入_________内 目的基因进入_________内，并且在受体细胞 _________ 内维持_____ _____的过程 _____和 表达 的过程。 内维持_____和_____的过程。 稳定 农杆菌转化法 将目的基因导入 植物细胞 基因枪法 花粉管通道法
四、目的基因的检测与鉴定——检查是否成功 检查是否成功
①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 DNA 方法: DNA分子杂交 方法: DNA分子杂交 过程:A.首先取出转基因生物的基因组 首先取出转基因生物的基因组DNA 过程 首先取出转基因生物的基因组 B.用含目的基因的 用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记 片段用放射性同位素等作标记, 用含目的基因的 片段用放射性同位素等作标记 以此做探针 C.使探针和转基因生物的基因组杂交 若显示出杂交带, 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带 使探针和转基因生物的基因组杂交 若显示出杂交带 表明染色体已插入染色体DNA中 表明染色体已插入染色体 中 检测目的基因是否转录出了mRNA ②检测目的基因是否转录出了mRNA 方法: 方法: 分 子 杂 交 过程:用上述探针和转基因生物的 杂交,若出现杂 过程 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交 若出现杂 用上述探针和转基因生物的 杂交 交带,表明目的基因转录出了 表明目的基因转录出了mRNA. 交带 表明目的基因转录出了 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法: 方法: 抗原抗体杂交
方法 将目的基因导入
动物细胞
——显微注射法 ——显微注射法
将目的基因导入 ——感受态细胞 ——感受态细胞 微生物细胞
1、将目的基因导入植物细胞的方法： 将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法
农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法
农杆菌介绍: 农杆菌介绍 Ti质粒上有 质粒上有T-DNA, 质粒上有 称为可转移的DNA, 称为可转移的 它可转移到受体细 胞,并整合到受体细 并整合到受体细 胞染色体DNA上. 胞染色体 上
2、将目的基因导入动物细胞 方法： ①方法：显微注射法 程序： ②程序：
取卵（受精卵） 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 受精卵 新性状动物 显微注射
3、将目的基因导入微生物细胞 原核生物特点：繁殖快、单细胞、 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 方法： ②方法：
用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态 细胞吸收DNA分子 细胞混合 感受态细胞吸收 分子
二、基因表达载体的构建—— 核心 基因表达载体的构建
5.基因表达载体的组成： 5.基因表达载体的组成： 基因表达载体的组成 复制原点+目的基因+启动子+终止子+ 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 启动子： 启动子：位于基因的首端的一 段特殊的DNA片断，它是RNA DNA片断 RNA聚 段特殊的DNA片断，它是RNA聚 合酶识别和结合的部位， 合酶识别和结合的部位，有了 它才能驱动基因转录出mRNA mRNA， 它才能驱动基因转录出mRNA， 最终获得蛋白质 终止子： 终止子：位于基因的尾端的一 段特殊的DNA片断，能终止mRNA DNA片断 段特殊的DNA片断，能终止mRNA 的转录 标记基因的作用是为了鉴别受 标记基因的作用是为了鉴别受 体细胞中是否含有目的基因， 体细胞中是否含有目的基因， 从而将有目的基因的细胞筛选 出来