水稻的蛋白质、核酸提取分析综合大实验
水稻实验总结报告范文(3篇)
第1篇一、实验背景随着我国农业现代化的不断推进，水稻作为我国主要粮食作物之一，其产量和质量对保障国家粮食安全具有重要意义。
近年来，我国水稻种植面积和产量均居世界首位，但在水稻育种、栽培技术等方面仍存在一定的问题。
为了提高水稻产量和品质，本研究室于2020年开展了水稻实验研究，旨在探讨适宜当地气候条件的水稻品种、栽培技术及病虫害防治方法。
二、实验目的1. 筛选适宜当地气候条件的水稻品种；2. 研究不同栽培技术对水稻产量的影响；3. 探讨水稻病虫害防治方法及效果。
三、实验材料与方法1. 实验材料：水稻品种包括常规稻和杂交稻，栽培技术包括不同施肥量、播种期、株距等，病虫害防治方法包括化学防治和生物防治。
2. 实验方法：（1）品种筛选：在实验基地种植不同水稻品种，观察其生长状况、产量和品质，筛选出适宜当地气候条件的水稻品种。
（2）栽培技术研究：采用不同施肥量、播种期、株距等栽培技术，对比分析其对水稻产量的影响。
（3）病虫害防治：在水稻生长过程中，观察病虫害发生情况，分别采用化学防治和生物防治方法进行防治，对比分析防治效果。
四、实验结果与分析1. 品种筛选结果：经过观察和比较，筛选出适宜当地气候条件的水稻品种为杂交稻“超级杂交稻1号”和常规稻“早熟中稻”。
2. 栽培技术研究结果：（1）施肥量：通过对比不同施肥量对水稻产量的影响，发现中等施肥量（氮肥：磷肥：钾肥=1：0.5：0.8）对水稻产量影响最大，产量最高。
（2）播种期：对比不同播种期对水稻产量的影响，发现早播（3月15日）的水稻产量最高。
（3）株距：对比不同株距对水稻产量的影响，发现株距为30cm×20cm的水稻产量最高。
3. 病虫害防治结果：（1）化学防治：采用农药喷雾防治水稻病虫害，防治效果较好，但易产生农药残留，对环境和人体健康造成一定影响。
（2）生物防治：采用生物农药防治水稻病虫害，防治效果较好，且对环境和人体健康无影响。
五、结论与讨论1. 结论：（1）适宜当地气候条件的水稻品种为杂交稻“超级杂交稻1号”和常规稻“早熟中稻”。
蛋白质提取实验报告
一、实验目的1. 熟悉蛋白质提取的基本原理和方法。
2. 掌握蛋白质提取过程中常用的实验技术。
3. 了解蛋白质提取过程中的注意事项。
二、实验原理蛋白质是生物体内重要的生物大分子，广泛存在于各种生物组织中。
蛋白质提取是指从生物材料中分离和纯化蛋白质的过程。
本实验采用组织匀浆法提取动物组织中的蛋白质，通过离心、透析等步骤去除杂质，最终获得纯净的蛋白质样品。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠肝脏组织、离心管、组织匀浆器、透析袋、蒸馏水、缓冲液、蛋白酶抑制剂等。
2. 实验仪器：电子天平、高速离心机、移液器、恒温水浴锅、pH计、紫外-可见分光光度计等。
四、实验步骤1. 称取小鼠肝脏组织1g，加入适量缓冲液，用组织匀浆器匀浆。
2. 将匀浆液以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
3. 将上清液转移至透析袋中，放入装有蒸馏水的烧杯中，透析24小时，去除小分子物质。
4. 将透析后的蛋白质溶液用pH计测定pH值，调节至7.0。
5. 加入适量的蛋白酶抑制剂，防止蛋白质降解。
6. 将蛋白质溶液转移至离心管中，以10000r/min离心10分钟，去除沉淀。
7. 收集上清液，用紫外-可见分光光度计测定蛋白质浓度。
8. 将蛋白质溶液转移至无菌容器中，4℃保存备用。
五、实验结果与分析1. 蛋白质提取效率：通过比较蛋白质提取前后样品的紫外-可见光吸收值，计算蛋白质提取效率。
本实验中，蛋白质提取效率为80%。
2. 蛋白质纯度：通过SDS-PAGE电泳分析，观察蛋白质条带，判断蛋白质纯度。
本实验中，蛋白质纯度较高，条带清晰。
3. 蛋白质浓度：通过紫外-可见分光光度计测定蛋白质浓度，计算蛋白质含量。
本实验中，蛋白质浓度为0.5mg/mL。
六、实验讨论与心得1. 实验过程中，组织匀浆的充分程度对蛋白质提取效率有重要影响。
匀浆过程中应尽量减少气泡产生，以保证蛋白质的完整性和提取效率。
2. 透析过程中，应选择合适的透析袋，以确保蛋白质不被透析袋孔径所截留。
植物(水稻)基因组DNA的提取
• DNA指纹技术及其在作物品种鉴别中的应用 • 水稻分子遗传图谱的构建与基因定位
植物基因组DNA的分离 ——CTAB微量法 • 学习从高等植物组织中提取基因组DNA的 方法
实验原理
• 破碎细胞壁释放释放DNA：1. 液氮冷冻，2. 用含渗透剂的 缓冲液直接研磨 • 保护DNA免受内源核酸酶的降解：1. SDS(十二烷基磺酸 钠）或CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）等去污剂；2. EDTA 螯合大多数核酸酶所需的辅助因子—镁离子 • 用氯仿:异戊醇去除蛋白质，RNA酶去除RNA
实验材料
• 6个水稻品种（系） • P1（E3003） • P2（E1001） • P3（E3005） • P4（E1049） • 两优287 • 红莲优6号
实验方法
• 取2ml离心管编号，取幼嫩水稻叶片（3-5cm）剪碎，放 入离心管中，加2CTAB溶液300l 和1粒钢珠，在捣碎 仪上研磨至浆状 • 取出钢珠后再加入2CTAB溶液200l，65℃温育30分钟 • 冷却至室温后，加入500l 的氯仿/异戊醇（体积比为24： 1），反复颠倒混匀，12,000rpm，离心10分钟； • 吸取上清300l至另一1.5ml离心管中，加入等体积的冰 冷异丙醇轻轻颠倒混匀，-20 ℃沉淀20分钟； • 12,000rpm，10分钟, 小心倒去上清 • 用70％的酒精1ml泡洗，12,000rpm，5分钟； • 倒掉酒精，用移液器尽量把残余酒精吸出。风干后每个样 品加去离子水50l ，4℃保存备用
水稻基因组DNA提取，PCR，纯化分子生物学实验报告
分子生物学实验报告实验内容：设计一个完整的实验，以水稻基因组为例，最终得到纯化的一个基因片段。
水稻基因组DNA提取以及基因片段的扩增、纯化和检测1.实验目的：1.1 熟练掌握实验室分子生物学相关的仪器的规范使用方法1.2 遵守实验室相关的实验规章制度，服从实验人员的管理1.3 熟练掌握实验室有关植物基因组DNA的简单提取方法以及检测方法1.4 了解琼脂糖凝胶电泳的原理，掌握胶体制备的方法以及电泳仪的操作方法1.5 掌握PCR技术的操作流程，熟练使用PCR仪并了解其工作原理及检测方法1.6 了解柱纯化的原理及使用方法2.实验原理1）水稻叶片基因组DNA提取水稻属于真核生物，其DNA以双链线性高分子形式存在于细胞核中，一般以染色质形式在。
由于植物组细胞破裂之后，DNA酶会水解DNA因此在提取过程总要加入EDTA螯合剂从而抑制DNA酶活性。
水稻叶片基因组DNA的提取主要是通过破碎组织和细胞从而通过对细胞内其他杂质的去处来达到基因组DNA的提纯。
提纯的产物通过1%的琼脂糖凝胶电泳进行检验。
本实验是通过CTAB法来进行提取的，它是一种阳离子表面活性剂，能溶解细胞膜和和核膜蛋白，使核蛋白解聚从而使DNA游离出来，已达到分离的目的。
2）特定基因片段的PCR扩增PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。
它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在95℃下解链;(2)退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(55℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3) 延伸(Extension):在TaqDNA 聚合酶合成DNA 的最适温度下,以目的DNA 为模板进行合成.由这三个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使目的DNA 扩增一倍,这些经合成产生的DNA 又可作为下一轮循环的模板,所以经30轮循环就可使DNA扩增上百倍。
一种同时适用于水稻种子和叶片的简单快速DNA提取方法_闫双勇
子 DNA 样品 PCR 扩增成功率为 91.0%，3 个不同时期取材的叶片 DNA 样品 PCR 扩增成功率均在 97.0%以上。该方
法提取的 DNA 也可以进行高分辨率熔解曲线分析。
关键词：水稻；DNA 提取；聚合酶链式反应
中图分类号：Q751 文献标识码：A
文章编号：1006-8082（2011）05-0011-03
1：取样
2：细胞破碎
3：加热
4：离心
图 1 DNA 提取过程主要步骤流程图
播种后 117 d 取得的叶片样品。 1.2 DNA 提取
如图 1 所示，该方法主要包括取样、细胞破碎、加 热及离心这几个步骤。
取样：取 1 粒或半粒去壳的水稻种子（半粒种子为 沿种子横向切半粒，选择不包含胚的半粒进行 DNA 提 取）或从叶尖部取约 2 cm 的叶片作为 DNA 提取样品。 可在田间直接将样品放入 2 ml 离心管中。
·11·
闫双勇等：一种同时适用于水稻种子和叶片的简单快速 DNA 提取方法
2011，17（5）：11-13
表 1 研究中用到的 PCR 引物
引物名 Sn-5 RM523 RM22 Ehd1 Frg 720_25 920_20_611 860-20 920-27 920-20 920-22 920-20-2
片段大小 304/168
148 186 252 179/181 350 404 187 311 345 532 281
注：片段大小通过引物序列，用 NCBI 工具 Primer-Blas（t /tools/primer-blast）确定
表 2 不同样品纯度及产量比较
注：材料类型说明见材料与方法；经多重比较检验，P=0.05
100bp 250bp
CTAB法提取植物DNA
(6) 室温下12000rpm离心10分钟；
(7) 小心取上清置于一个新的EP管中（尽量避免吸取中间层）,加 入2倍体积的无水乙醇（或2/3体积的异丙醇）,轻轻混匀，-20 ℃10min,使核酸沉淀下来；
(8) 14000rpm离心10分钟,小心倒去上清液; 1ml 70%乙醇洗涤沉淀 2次；在室温下使DNA沉淀干燥；
• （2）紫外光吸收法：核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在 260nm。1ug/mL的DNA溶液A260=0.020，1ug/mL的 RNA溶液或单链DNA的A260=0.022~0.024。1个A260相 当于50ug/mL的DNA，40ug/mL的RNA。
• 蛋白质的最大吸收在280nm，多糖的最大吸收在230nm。 • 纯的DNA的A260/A280在1.8左右，纯的RNA的
实验原理
• 1、在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的 形式存在；在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜， 使核蛋白被释放出来。
• 2、在浓氯化钠溶液(1～2mol／L)中，DNA核蛋白的溶解 度很大，RNA核蛋白的溶解度很小；而在稀氯化钠溶液 (0.14mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白 的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液将 DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。
• ③酶的作用，细胞中普遍存在的核酸酶在细胞壁或膜遭到 破坏时被释放出来，它会降解DNA分子。故须用酶的变性 剂、抑制剂使之失活。常用的酶抑制剂有柠檬酸盐、氟化 物、砷酸盐、乙二胺四乙酸盐、(ETDA-Na)等。
• 操作过程最好在低温(0℃左右)下进行。SDS和苯酚作为 蛋白变性剂，同时可使核酸酶被破坏而失活。
大米中蛋白质含量的测定
精心整理
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目的意义：
水稻是重要的粮食作物之一，其品质优劣是值得人们重视的问题。
一个高产水稻品种，往往由于食味差、或营养不丰富，而不受大众的欢迎。
因此，在保证高产的同时，还要改善稻米的品质。
本实验将测定大米品质的几个重要生化指标，为水稻育种提供理论依据。
Ⅰ大米蛋白质含量的测定——考马斯亮兰G —250法
一、原理
考马斯亮G —250是一种染料，在游离状态下呈红色，在465nm 波长处有最大光吸收。
它能与蛋（0～17212（1（2）85%（W/V （3）3三、实验方法
1．标准曲线的制作：
取6只10ml 刻度试管，编号，按下表数据配制牛血清白蛋白标准溶液。
准确吸取上述各管溶液0.1ml ，对应放于另外6支10ml 刻度试管中，加入5ml 考马斯亮兰G-250溶液，盖塞，将试管中溶液给向倒转混合，放置2分钟后，用10mm 光径的比色杯在595nm 波长下比色。
以光密度值为纵坐标，以蛋白质浓度值为横坐标，制作出标准曲线。
精心整理
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2．样品中蛋白质提取：
（1）准确称取稻米粉0.5克，放入研钵中，加2ml0.1mol/LNaOH ，研磨成匀浆，转入到10ml 离放置30（232分钟，用5ml
（1差。
（2）定容时蒸馏水要沿着管壁缓慢加入，以免产生大量气泡，造成定容不准确，实验也会出现误差。
（3）谷物种子蛋白质主要是谷蛋白和醇溶蛋白，因此，稻米粉蛋白含量应为碱溶性谷蛋白和醇溶性蛋白含量之和。
稻米中提取血清白蛋白介绍
武大专家稻米中提取手术常用药物血清白蛋白09-11-25 07:48汉网消息（记者杨佳峰通讯员王怀民）外科手术常用药物人血清白蛋白，由于需要从人血中提取，价格昂贵。
现在，专家可以从稻米中提取人血清白蛋白，从而大幅降低药物价格。
这项技术由武大专家经过4年研究首创，利用该技术，从1亩水稻中可提取2公斤人血清白蛋白。
据了解，这项名为“水稻胚乳细胞生物反应器技术平台及其应用”的国家“863”项目，日前刚刚通过专家鉴定。
该项研究课题组负责人、武汉大学生科院杨代常教授告诉记者，该技术通俗来讲，就是将人的基因通过水稻来表达，然后从水稻中提取带有人类生物特性的人血清白蛋白，500亩水稻大约可提取1000公斤人血清白蛋白。
以中国工程院院士、中国农业大学教授李宁等为首的专家组认为，该技术使传统的蛋白药物的工业发酵生产方式变为农业生产方式生产，在蛋白药物生产方式上产生重大变革，具有极高的推广价值和应用前景，可以产生巨大的经济和社会效应。
目前，我国人血清白蛋白每年临床需要110~120吨，因血浆供应不足，人血清白蛋白市场缺口高达60吨至80吨。
人血清白蛋白在临床上主要用于治疗因失血、烧伤、烫伤、整形外科手术及脑损伤引起的低蛋白血症以及肝硬化、肾水肿等疾病。
协和医院血液科夏凌辉教授称，目前人血清白蛋白完全从人的血浆中提取，因此价格昂贵，现在100克进口人血清白蛋白的价格至少为400元，国产的300元以上。
杨代常教授透露，高纯度的重组人血清白蛋白质量超过国际同类产品，开始进入国际工业试剂市场，可望再经4~5年的努力，使重组人血清白蛋白进入医药市场。
一种从水稻种子中提取重组人血清白蛋白的方法申请号/专利号：201010597544本发明提供了一种从转基因水稻中提取重组人血清白蛋白的方法，包括步骤：１）将含有重组人血清白蛋白的稻米研磨至８０－１２０目，与提取缓冲液按１∶５混合，在５５～６０℃提取１～３小时，得混合物Ｉ；所述提取缓冲液包含１０～３０ｍＭ磷酸盐缓冲液、１０～２０ｍＭ醋酸钠、１５～３０ｍＭ硫酸铵与５～２０ｍＭ辛酸钠，其ｐＨ为６．５～８；２）将混合物Ｉ的ｐＨ调节至４．０～４．５，室温沉淀３～１２小时，得混合物ＩＩ；３）过滤混合物ＩＩ，收集滤液，获得含有高浓度重组人血清白蛋白的溶液。
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水稻的蛋白质、核酸提取分析前言：水稻是全世界最重要的粮食作物之一，其栽培面积和总产量仅次于小麦。
我国是稻谷生产的大国。
近年来水稻播种面积为世界第二，产量稳居第一。
由于亚洲30多亿人口中4/5及非洲和拉丁美洲近30亿人口中1/3均以稻米为主要食物来源，所以水稻生产对发展中国家的重要性尤为突出。
我国目前还是一个农业大国，搞好水稻的种植和研究对于国计民生具有重大意义。
一、实验目的：1、掌握水稻的催芽技术；2、掌握水稻的蛋白质、核酸提取分析技术；3、加深对生物大分子提取分离技术、分光光度技术、凝胶电泳技术、高速离心分离技术的理解和运用。
4、掌握PCR、蛋白质印迹、SDS-PAGE等分子生物实验技术。
二、实验材料：水稻三、综合大实验模块及流程图：四、实验时间安排计划：（一）第一周周一：查阅资料，药品准备、水稻的选种、浸种；周二：查阅资料，药品准备、稻种消毒；稻种破胸、培养；记录；周三: 实验讲解、药品准备，水稻过氧化物同工酶的电泳周四:水稻过氧化物同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析;周五: 水稻种子蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析（二）第二周周一：水稻DNA提取及聚合酶链式反应扩增PsbA-trnH片段；周二：Western-blot 检测人类TES蛋白在大肠杆菌中的诱导表达；周三：数据整理、结果分析、讨论，书写实习报告。
1. 水稻的催芽培养一、实验目的：掌握水稻种子的浸种、消毒和催芽技术，以及实验室条件下水稻幼苗的培养方法。
二、实验原理：水稻种子萌发需要的基本条件是种子活力、水分、温度和空气，对于处在非休眠期的种子来说，满足以上条件，就可以萌发生长。
水稻种子常带有稻粒黑粉病、恶苗病、胡麻斑病、绵腐病和稻瘟病等病菌。
因此，进行稻种消毒处理，是防止病菌侵入，减轻水稻病害发生的重要措施。
三氯异氰尿酸是一种高效、广谱、低毒、安全的消毒剂。
为白色结晶性粉末，含有效氯80～85%，具有氯臭味，在水中分解成异氰尿酸和次氯酸，次氯酸扩散到细菌表面，并穿透细胞膜直接氧化菌体蛋白，从而消灭病原微生物，是一种极强的氧化剂，对细菌、病毒、真菌、芽孢有较强的杀灭作用。
三、器材与试剂：1、器材：恒温水箱、培养皿、恒温光照培养箱、500ml烧杯、玻棒、消毒脱脂棉2、试剂：85％强氯精（三氯异氰尿酸）300－500倍液四、实验材料：水稻种子五、实验步骤（一）种子的浸种消毒：1．强氯精浸种：稻种先用清水浮选、预浸（早稻常规24小时，杂交稻12小时）吸水，再用85％强氯精300－500倍液浸24小时，浸后清水3～5次洗净再催芽。
2．多菌灵浸种：50％超微多菌灵可湿性粉剂500倍液浸种（即100克多菌灵兑水50公斤，可浸种子35－40公斤）48小时，浸后洗净再催芽。
3. 使百克浸种：用25％使百克乳油2500－3000倍液浸48小时，浸后可直接进行催芽播种。
（二）种子的破胸催芽：将消毒清洗后的稻种沥去明水，在40℃的干净热水中加热15～30分钟，也可用烧杯装种子和清水的混合物（1：1）进行水浴，期间搅拌数次，促进水稻种皮的发胀破裂。
在培养皿内铺1厘米厚的消毒棉花，将加热后的稻种捞出，均匀摊在棉花表面，加入与棉花等高的清水，放入温度28℃、湿度80%的培养箱里光照培养。
每天观察一次，并及时浇水。
六、注意事项1.清水浮选和消毒时要剔除秕谷和病谷，以免以后长菌；2.培养时浇水要适量，过多易导致根部发霉。
2. 1植物组织中过氧化物酶同工酶的电泳分析──聚丙烯酰胺凝胶柱状电泳一．目的要求同工酶是一组催化相同化学反应，而结构、理化性质及在组织中的分布均不同的酶。
由于同工酶广泛分布于各种生物体内，并且在表达上具有组织特异性、器官特异性和生长发育时期的特异性，所以，通过分析同工酶，可以从分子水平研究植物的生长发育规律和遗传变异规律。
本实验要求掌握过氧化物酶同工酶的电泳分析原理及柱状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术。
二．实验原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（简称Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂过硫酸铵和加速剂四甲基乙二胺（简称TEMED）的催化下，聚合而成的具有三维网状结构的凝胶。
通过改变凝胶的浓度和交联度，来控制凝胶孔径的大小；通过改变催化剂的用量，控制凝胶聚合的速度。
本实验采用不连续的电泳体系，使样品在不连续的两相之间积聚浓缩成很薄的起始区带（约10－2cm），然后再根据电荷效应和分子筛效应进行分离。
电泳区带用特异性染色法显示出过氧化物酶同工酶的酶谱。
三．实验材料、仪器及试剂１．仪器：CR21G高速冷冻智能离心机日本日立公司24DN制胶玻璃板北京六一仪器厂DYC P3313型电泳槽北京六一仪器厂微量注射器上海安亭微量进样厂烧杯研钵培养皿电冰箱滴管２．试剂：1N HCl 48mlA：Tris 36.6克用蒸馏水定容至100ml，pH8.9四甲基乙二胺（TEMED）0.24毫升Acr 28克C：蒸馏水定容至100ml Bis 0.74克G：过硫酸铵0.56克，用蒸馏水定容至100ml，现用现配。
1N HCl 48mlB：Tris 5.98克蒸馏水定容至100ml，pH6.7四甲基乙二胺（TEMED）0.46毫升Acr 10克D：蒸馏水定容至100ml Bis 2.5克F：蔗糖40g加水溶解定容至100ml。
E：电极缓冲液Tris 6克蒸馏水定容至1000ml，pH8.3，甘氨酸28.8克临用时稀释10倍H：显色溶液（1）称取0.25克联苯胺溶解在18ml冰醋酸中，用水定容至100ml；（2）3％H２O２临用时取（1）10ml，取（2）5ml，加水稀释至50ml。
I：固定液：7％的醋酸溶液J：前沿指示剂：0.1％溴酚兰溶液３．实验材料：萌发4～5天的水稻幼苗四．实验步骤及方法１．凝胶柱制备：（１）将洗净烘干的凝胶电泳玻璃管一端插在疫苗瓶的橡皮帽中，或用其它材料将玻璃管一端封闭。
将封闭的一端朝下垂直插入制胶板上。
（２）下层胶的制备：将试剂A、C、G、水以1：2：1：4的比例混合配制于小烧杯中（用量根据玻璃管大小而定），用皮头吸管吸取胶液灌入玻璃管内约6.5cm高（可预先做记号）。
然后立即顺管壁（不要滴加）加入3～5mm高的水层，以隔离空气加速凝胶的过程，加水时一定要防止搅动胶面。
约30min后凝聚成胶，此时胶与水之间形成一条明显的界限。
倒出胶面上的水，并用滤纸条吸干。
（３）上层胶的制备：将试剂B、D、G、F以1：2：1：4的比例混匀。
先用部分胶液冲洗分离胶面，倒出，再立即灌入余下的浓缩胶约1cm，然后按上述方法小心地加一层水。
约30min聚合完全，吸去水层，用电极缓冲液洗涤胶面，再用滤纸吸干。
将已加好样品的胶管，轻轻除去下端的皮塞或封闭物，将管插入圆盘电泳槽孔中，记录各管所在编号位置。
管要插得垂直，插好后，加电极缓冲液，至少盖过管顶，检查是否漏水，若不漏水，即可在上下电泳槽中加满电极缓冲液，然后点样电泳。
２．样品的制备及点样：取2 g萌发4～5天的水稻幼苗，剪碎后，放在研钵中，加入适量（10ml）的电极缓冲液，研成匀浆。
在10000×g离心5分钟，取上清液2ml，加入等体积40％蔗糖和1ml 0.1％溴酚兰混匀。
用微量进样器吸取100μl样品液，让针头穿过胶面上的缓冲液，慢慢推动进样器，使样品落在胶面上。
推动时不宜过猛，以免样品与缓冲液混合。
３．电泳：接通电源，负极在上，正极在下。
电泳初始期电压控制在70～80V，待样品进入分离胶后，加大电压到100～120V，继续电泳。
当溴酚兰指示剂移至距胶管底部1cm处时停止电泳，关闭电源。
倒出电泳槽中的电极缓冲液，取出凝胶玻璃管。
用带长注射针头（10cm）的注射器吸满蒸馏水。
针头插入玻璃管壁与凝胶之间，边插入边注水，并使针头沿管壁转动，直到胶条脱离玻璃管滑出。
若仍不自动滑出，可用洗耳球轻轻把凝胶柱吹出。
但不能用力过大，以免凝胶滑出过猛而断裂。
整个过程要求动作慢，细心，以保证获得好的实验结果。
４．染色：将取出的凝胶放入培养皿中，加入染色液，染色至可见清晰的过氧化物酶同工酶棕色谱带，弃去显色剂。
用蒸馏水清洗凝胶柱，然后将凝胶柱放入7％的醋酸溶液中保存。
过氧化物酶同工酶显色后，２～３天内可保持清楚。
５．结果观察和记录：观察过氧化物酶同工酶的酶谱，并绘出模式图。
五．实验数据（照片）六．实验结果经过氧化物同工酶显色后观察到，进样量为＿＿时，＿＿实验材料共产生了＿＿同工酶色谱带；进样量为＿＿时，＿＿实验材料共产生了＿＿同工酶色谱带；进样量为＿＿时，＿＿实验材料共产生了＿＿同工酶色谱带；七. 实验分析2. 2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定水稻种子蛋白质的分子量一、目的要求（1）学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量的原理和方法。
（2）掌握板状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术。
二、实验原理天然蛋白质在电场中泳动的迁移率主要取决于其所带电荷的多少、分子量大小及分子的形状等因素。
在有阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）存在时，蛋白质的迁移率则主要取决于它的分子量大小，而与其所带电荷的多少及形状无关，并且蛋白质的电泳迁移率与其分子量的对数呈直线关系。
欲测定某蛋白质的分子量时，只要将该蛋白质与几种已知分子量的标准蛋白质置于相同的条件下进行电泳，根据测得的迁移率即可通过标准曲线求得其分子量。
实验证明，分子量在12000 ~ 200000道尔顿之间的蛋白质，用此法测分子量与用其他测定方法相比，误差一般在±10%以内。
此方法具有重复性高，样品用量少，设备简单，操作方便等优点，现已成为测定蛋白质分子量的常用方法。
本实验选用分子量在10000 ~ 70000道尔顿范围的标准蛋白质制作标准曲线，使用10% 的聚丙烯酰胺凝胶并制成板状，以不连续电泳系统进行电泳来测定蛋白质的分子量。
三、实验材料、仪器和试剂1.试剂（1）低分子量标准蛋白质的组成（纯品）：使用方法：开封后溶于200微升重蒸水中，分装于20个小管内，每小管10微升，再于每小管内加入等体积2×样品缓冲液（10微升），置—20℃保存。
使用前置室温融化后，沸水浴中加热3 ~ 5分钟后上样。
2×样品缓冲液：0.5 M Tris — HCl ，pH6.8 2.0毫升甘油（丙三醇） 2.0毫升20%（W/ V）SDS 2.0毫升0.1%（W/ V）溴酚兰0.5毫升2-β-巯基乙醇 1.0 毫升重蒸水 2.5毫升（2）凝胶试剂a．30%丙烯酰胺（W/ V）：30g丙烯酰胺，0.8g甲叉双丙烯酰胺，溶于100mL蒸馏水中，过滤。
于4℃暗处贮存，一月内可使用。
b．1mol/L，pH8.8Tris––HCl缓冲液：Tris121g溶于蒸馏水，用6N HCl调至pH8.8，用蒸馏水定容至1000mL。