紫外可见分光光度计基本常识与使用
紫外可见分光光度计的操作培训【可编辑全文】
分子吸收光谱法是基于测定在光程长度为ｂ （ｃｍ）的透明池中溶液的透射比（Ｔ）或吸光 度（Ａ）进行定量分析，其满足朗伯比尔定律。
朗伯比尔定律：分析物浓度c与吸光度A呈
线性关系
A=-lgT=lgIO/I=abc
符号 c b a IO I A T
名称 分析物浓度 通过试样光程长度 吸光系数 入射光辐射强度 透射光辐射强度
预置样品：将参比样品溶液和被测样品溶液分别 倒入比色皿中。打开样品室盖将盛有溶液的比色 皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖（一般情 况下参比放在第一个槽位中）
调零：将参比样品设置进光路中，按调零按钮进行调 零，数秒后调零完成显示Abs为0.00
测定吸光度：调零结束后将所要测定的样品（标准系 列）依次设置进光路测定吸光度。
分子吸收产生的原因：
分子吸收产生于分子价电子在电子能级间的跃迁。
紫外可见分光光度计的用途：
通过测定分子对紫外－可见光的吸收可以用于 鉴定和定量测定大量的无机化合物和有机化合物， 在化学和临床实验室所采用的定量分析技术中紫外 －可见分子吸收光谱法是应用最广泛的分析方法之 一。
仪器原理和仪器结构
仪器原理
吸光度 透射比
仪器结构
辐射源单色器
氘 灯 钨 灯 透 镜
吸收池
玻石 璃英 吸吸 收收 池池
接收器
阵狭 列缝 二 极光 管栅
紫外可见分光光度计结构简图
钨灯
320-2500nm
耦合透镜
氘灯
160-375nm
光源透镜 (消色差透镜)
支撑透镜
使用前后都应将吸收池洗净，测 量不用时不能用手接触窗口。擦 拭吸收池请用软质吸水纸，请勿 用热源烘干吸收池。
注意事项
仪器应放置在无腐蚀性的地方
实验室紫外分光光度计使用说明及注意事项
实验室紫外分光光度计使用说明及注意事项一、紫外分光光度计的使用方法及注意事项1.1 准备工作我们需要准备好紫外分光光度计。
在购买时，要选择一款性能稳定、精度高的仪器。
在使用前，还需要对仪器进行校准，以确保测量结果的准确性。
我们还需要准备一些标准溶液，用于后续的实验操作。
1.2 实验操作步骤(1)打开紫外分光光度计的电源，等待仪器自检完成。
(2)根据实验需求，选择合适的波长范围。
通常情况下，我们会选择一个较小的范围，如200-400nm,以便更好地观察样品的变化。
(3)将标准溶液倒入比色皿中，然后将比色皿放入紫外分光光度计的样品室中。
注意不要让比色皿中的溶液溢出。
(4)调整仪器的参数，如增益、狭缝宽度等，以获得最佳的测量结果。
(5)等待仪器显示稳定的读数后，记录下测量值。
这个数值就是样品在该波长下的吸光度。
(6)重复上述操作，分别测量不同波长的吸光度值。
根据实验需求，计算出样品的总吸光度。
1.3 注意事项(1)在使用紫外分光光度计时，要注意保护眼睛。
因为该仪器会产生较强的紫外线辐射，长时间直接观察可能会对眼睛造成伤害。
因此，在操作过程中，要佩戴防护眼镜。
(2)在测量过程中，要确保比色皿中的溶液不会溢出。
如果发现溶液有溢出的现象，要及时停止实验，避免影响测量结果和仪器的使用寿命。
(3)在调整仪器参数时，要根据实际需求进行调整。
不同的样品可能需要不同的参数设置才能获得准确的测量结果。
因此，在操作过程中，要灵活运用各种参数设置方法，以便更好地满足实验需求。
二、紫外分光光度计的应用领域及发展前景紫外分光光度计作为一种重要的分析仪器，广泛应用于生物化学、环境监测、食品检测等领域。
随着科学技术的发展，紫外分光光度计在更多领域的应用也将得到拓展。
例如，在药物研发过程中，紫外分光光度计可以用于测定药物的吸收光谱，从而为药物的设计提供重要依据；在新材料研究中，紫外分光光度计可以帮助研究人员了解材料的电子结构和能带结构等信息。
标题 紫外-可见分光光度计的正确使用方法
标题紫外-可见分光光度计的正确使用方法紫外-可见分光光度计（UV-Vis Spectrophotometer）是一种用于测量物质吸收和透过性的仪器。
正确的使用方法对于确保实验结果的准确性非常重要。
以下是紫外-可见分光光度计的正确使用方法的参考内容。
1. 仪器的准备：a. 检查光源和检测器：确保光源和检测器都处于正常工作状态，并没有损坏或需要更换的零件。
b. 清洁样品室：使用干净的棉纱或镜头纸轻轻擦拭样品室的玻璃表面，以确保获取准确的测量结果。
c. 预热：根据仪器的说明书，预热光度计至指定温度。
这个步骤通常需要一些时间，所以在进行实验前需要提前预热。
2. 样品的准备：a. 清洁样品：使用适当的方法和溶剂清洁或稀释样品，以确保最佳的光学透过性。
b. 样品的体积：添加合适量的样品到样品室中，以确保光路完全填充，并能够提供准确的测量结果。
如果样品室不完全填充或过于拥挤，可能会影响测量结果。
3. 校准：a. 参考空白：在测量目标物质之前，先进行空白测量。
在样品室中添加溶剂或介质，然后进行测量，并将其设置为参考光谱。
这样可以消除背景的干扰，使测量结果更加准确。
b. 波长校准：根据仪器的说明书，确定正确的波长校准，以确保获得准确的吸光度值。
这通常需要使用校准滤光片或标准样品来进行波长校准。
4. 测量操作：a. 设置波长：根据需要的波长，将仪器设置在对应的波长。
b. 吸光度的测量：在样品室中放置样品，并使用仪器进行吸光度测量。
等待仪器测量完成或按照仪器的指示进行测量。
c. 重复测量：进行至少三次重复测量，并计算平均值，以减小可能的误差。
5. 数据分析：a. 数据记录：记录测量结果和相应的实验条件，包括波长、样品浓度等信息。
b. 数据处理：使用适当的软件对数据进行处理，如绘制吸光度曲线、计算浓度或其他所需的数据处理操作。
6. 仪器的关机：a. 进行所需的数据保存或导出。
b. 关闭光度计，按照仪器的说明书进行正确的关机操作。
紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介
紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。
所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。
每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。
但是，如果检测到任何异常，初始化过程将立即中止，星标也不会加亮显示。
1.2屏幕显示和触摸键盘UV-1700的触摸键盘图可用数字键0~9和功能键F1~F4选择不同屏幕中的模式和设置。
选择时，按下相应的数字键或功能键即可，无需按ENTER键确认。
此外，输入数值时，如波长设置或显示模式等，必须按ENTER键确认输入值。
下面介绍每个键的基本功能，在不同屏幕下有一些键可能被赋予特殊的功能。
①START/STOP键一旦参数设置完成，可用该键开始和停止测量过程。
②AUTO ZERO键按该键，当前波长的吸光度自动调整为0（100%T）。
测量前，必须确保在样品侧和参比侧中都放有盛有空白的比色池。
③GOTOWL键该键可用来改变当前的波长。
④ENTER键输入数值后，按该键确认。
⑤Cursor光标键（＜（-），＞）这组键可控制液晶显示屏幕中光标的左右移动。
输入数值时，左光标键还可以用来输入负值（-）。
⑥Function功能键（F1~F4）这组键的功能与液晶显示屏幕下方所显示的功能相对应。
⑦RETURN键按下该键可返回当前屏幕的前一屏。
⑧MODE键用该键可从每种测量模式的参数设置屏返回到主模式屏。
⑨Print打印键用该键可输出当前屏幕显示的硬拷贝。
⑩Numeric数字键用该键可输入数值？CE键用该键可清除数值输入错误。
按该键，已输入的数值将被清除，可重新输入正确的数值。
模式选择和共享操作初始化完成后即显示模式选择屏幕各种模式概述：在模式选择屏幕下选择各种测量模式，即显示各自的参数配置屏幕。
①光度模式在固定波长下测量样品的吸光度或%透光率。
紫外可见分光光度计的介绍及使用
32
在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择 “1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校准。 在concertration中键入标准浓度单位。
3. Instrument
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4 standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称
可法可以开始测量： ❖ 使用菜单方式
选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量 ❖ 使用按钮方式 ：按按钮 开始测量 ❖ 如果要终止扫描按按钮 。
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二光度扫描
开始 方法设定
样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池
进行用户基线校正 将样品放入样品池 开始测量
打印数据
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开始测量
测量参数设置
在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.
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具体操作程序
Method:
1. general: Measurement测量方式选择Photometry（光度 计测量）
2. Quantitation定量参数设置页面：
可编辑ppt
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详细解析紫外可见分光光度计的使用方法和注意事项
详细解析紫外可见分光光度计的使用方法和注意事项紫外可见分光光度计是多功能实验仪器中的一种，它可以测量和分析样品中的紫外可见光谱的吸收。
由于紫外可见分光光度计的多种用途，它已成为实验室中不可缺少的仪器之一。
本文将详细介绍紫外可见分光光度计的使用方法和注意事项，以助于使用这种仪器的人员能够更加正确有效地使用该仪器。
首先，在使用紫外可见分光光度计之前，应检查仪器的各个部分和电源。
确保所有接头处都接好，确保仪器的电源也被正确插入。
其次，将样品分离出来，并将其原液和添加剂放入样品瓶中，然后将样品瓶装入仪器的样品腔内，这是进行测量的基本程序。
接下来，在配置仪器的参数和设置时，需要仔细校准谱线周期。
紫外可见分光光度计测量波长为200到900nm之间，但可根据样品的特性调整其扫描范围，以适应不同的应用需求。
最后，在完成配置后，操作员将进行实际测量。
接下来，我们来谈谈在使用紫外可见分光光度计时应该注意的事项。
首先，使用时应注意安全，任何维修或检修工作都应在专业的技术人员的指导下进行。
此外，请勿将恒温槽设定过高，否则可能会烧坏恒温槽以及样品。
其次，在使用仪器之前，请严格检查每个部件及其安装是否完好，确保各部件间的连接是正确的，以免测量过程中出现问题。
再次，在测量过程中应注意，不要让仪器受到震动，否则将影响测量的准确性。
最后，在使用之后，应当关闭采样灯管，按下关机按钮，以确保仪器的健康和安全。
以上就是本文所介绍的关于紫外可见分光光度计的使用方法和注意事项。
紫外可见分光光度计是多功能实验仪器中的一种，它可以测量和分析样品中的紫外可见光谱的吸收，是实验室中不可缺少的仪器之一。
使用前应确保所有部件安装正确，安全地进行操作，使用后应关闭电源，并及时检查、清洗和保养，以确保该仪器的正常使用。
紫外可见分光光度计的使用方法
紫外可见分光光度计的使用方法1、电源开关，使仪器预热20分钟；▪仪器接通电源后，仪器即进入自检状态，自检结束后波长自动停在546nm处，测量的方式自动设定在透射比方式（%T），并自动调100%和0%T。
注意：①开机前，先确认仪器样品室内是否有东西挡在光路上。
光路上有东西将影响仪器自检甚至造成仪器故障。
②检查透过率模式下，挡光位置，透过率是否显示00.0%T。
否则要调整暗电流，按“0%T”键，使透过率显示为00.0%T。
返回对光位置时仍能显示100.0%T，否则重新调100%T。
通过“▲”和“▼”键，设定测试波长；按“100%T”键，使透过率显示为100.0%。
如果您要获得被测样品的透射比参数时（透射比方式）：T2、按方式键“MODE”将测试方式设置为透射比方式：▪显示器显示“3、按波长设置键“▲”或“▼”设置您想要的分析波长，如340nm；▪按波长设置键“▲”或“▼”直到显示器显示“340nm xxx x%T”▪每当波长被重新设置后，请不要忘记调整“100.0%T”。
4、将您的参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中；▪比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米，大约25毫升。
否则，会影响测试参数的精确度。
▪被测试的样品中不能有气泡和漂浮物，否则，会影响测试参数的精确度。
5、打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。
▪一般情况下，参比样品放在样品架的第一个槽位中。
▪被测样品的测试波长在340nm—1000nm范围内时，建议使用玻璃比色皿，被测样品在190nm—340nm范围内时，建议适用石英比色皿。
▪仪器所附的比色皿，其透射率是经过测试和匹配的，未经匹配处理的，比色皿将影响样品的测试精确度。
▪比色皿的透光部分表面不能有指印、溶液痕迹。
否则，将影响样品的测试精确度。
6、将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整零ABS。
▪仪器在自动调整100%T的过程中，显示器显示“ 340nm Blank ...”当100.0%T调整完成后，显示器显示“340nm 100.0%T”7、将被测溶液推或拉入光路中，此时，显示器上所显示是被测样品的透射参比数。
紫外可见分光光度计的原理与使用方法
紫外可见分光光度计的原理与使用方法单光束分光光度计的原理是：光源发出光束通过准直系统，经过光栅
的分光作用后进入样品池，与样品发生相互作用后经过检测器，最后由显
示器显示吸光度数值。
双光束分光光度计的原理是：光源发出光束，一部分经过参比池进行
比较，另一部分经过样品池与样品相互作用，分别被检测器检测后与参比
值进行比较，最后由显示器显示吸光度数值。
使用紫外可见分光光度计的方法如下：
1.准备工作：
-检查仪器是否处于正常工作状态，确认光源、检测器和显示器的功
能正常。
-清洁样品池，确保无杂质和残留。
2.样品处理：
-准备需要测量的样品溶液，并将其转移到清洁的样品池中。
-如果样品浓度过高，可能会引起光透过度低，此时可进行适当稀释。
3.测量步骤：
-打开仪器电源，进行预热，通常需要一段时间让光源稳定。
-选择合适的波长范围和检测模式（吸光度/透过度）。
-调节仪器，使得显示器上的示数为零或基线稳定。
-将样品池放入样品室，尽量避免空气泡存在。
-记录或保存测量数据，可以进行后续数据处理和分析。
4.清洁和维护：
-测量完成后，及时清洁样品池和其他相关部件，防止污染和积累。
-关闭仪器电源，注意安全操作。
总结一下，紫外可见分光光度计是一种基于比尔－朗伯定律原理的实验仪器，主要用于测量物质溶液或气体的光吸收特性。
使用时需要进行准备工作，处理样品并进行测量，同时注意仪器的清洁和维护。
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由上数据发现它们符合朗伯-比尔定律即A=k.C（A为最大吸收波长下的最大吸 收值或最大吸收峰位下的最大峰值；C为溶液的浓度；k为常数） 由此根据“同一化合物在不同浓度下的吸光度在一定条件下符合朗伯-比尔律”， 我们可以对色料和溶剂进行定量分析。
4、定性、定量分析（综合）——配方分析
（1）由配方混合物的紫外可见光谱，判定其主要成分； （2）测试各主要成分在特定浓度下的紫外可见光谱； （3）根据曲线找到各特定峰位下峰值； （4）对各组分列方程，有多少组分就列多少个方程，设多 少个未知数； （5）求解方程即可得配方中各组分的初步浓度； （6）根据经验配方对所求浓度进行修正； （7）按所求值配置样品，测试紫外可见光谱与被分析物曲 线对比； （8）根据偏差作最终校正，即得最终配方分析结果。
光电管
——蓝敏光电管为铯锑阴极。适用波长范围：220625nm
—— 红敏光电管为银和氧化铯阴极适用波长范围： 600-1200nm。
三、紫外可见吸收光谱在墨水行业的应用
1、基本原理：
不同的有机化合物具有不同的紫外可见吸
收光谱，可进行简单的定性分析；同一化合物在
不同浓度下的吸光度在一定条件下符合朗伯-比尔
吸收池是用于盛放溶液并提供一定吸光厚度的 器皿。 它由玻璃或石英材料制成。 玻璃吸收池只能用于可见光区。最常用的吸收 池厚度为1cm。
（四）检测器
检测器的作用是检测光信号。常用的检测器有 光电管。 光电管由一个半圆筒形阴极和一个金属丝阳极组 成。当照射阴极上光敏材料时，阴极就发射电子。 两端加压，形成光电流。
3、定量分析
不同浓度D212的紫外可见吸收曲线
D212
1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 2 4 6 8 10 12 14
D212工作曲线
y = 0.1051x + 0.0046 R2 = 0.9999
以S902作溶剂：2%D212——最大吸收峰位：430nm；峰值：0.277 4%D212——最大吸收峰位：430nm；峰值：0.422 6%D212——最大吸收峰位：430nm；峰值：0.633 8%D212——最大吸收峰位：430nm；峰值：0.845 12%D212——最大吸收峰位：430nm；峰值：1.268
（二） 单色器
单色器是从连续光谱中获得所需单色光的装置。 常用的有棱镜和光栅两种单色器。
棱镜单色器 的缺点是色散率随波长变化，得到的
光谱呈非均匀排列，而且传递光的效良好的几乎相
同的色散能力。因此，现代紫外 — 可见分光光度 计上多采用光栅单色器。
（三）吸收池
紫外可见吸收光谱
一、紫外可见吸收光谱的简介 二、UV-1750设备介绍 三、紫外可见吸收光谱在墨水行业的实际应用 四、如何使用紫外可见分光光度计
传美讯研发部
郭炎坚
一、紫外可见吸收光谱简介
1、紫外-可见吸收光谱：
（Ultraviolet and Visible Spectroscopy, UV-VIS） 统称为电子光谱。紫外-可见吸收光谱法是利用某些 物质的分子吸收200～800nm光谱区的辐射来进行 分析测定的方法。这种分子吸收光谱产生于价电子 和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，广泛用
3、紫外可见吸收曲线简介
A
末端吸收
最强峰
肩 峰
峰谷
次强峰
max
min
紫外可见吸收光谱示意图
最强峰
次强峰
最大吸收波长
4、紫外可见光谱的两个重要特征
max,
A
例：λmaxD211 = 390 nm (A=0.827 ) 稀释比：1：5000
二、UV-1750设备介绍
1、紫外-可见分光光度计的基本结构：
十字绣黑色墨水
D921特征峰
D939特征峰 D212特征峰
No. 1 2 3
波长(nm) 629 565.5 411
吸收值 0.334 0.569 0.206
对应原料 D939 D921 D212
原料特征波长 （nm） 629.5 563 430
D921
D939
D921
D212 D212
D939
紫外-可见分光光度计由光源、单色器、 吸收池、检测器以及数据处理及记录（计 算机）等部分组成。
双光束分光光度计的原理图
（一）光源 光源的作用是提供辐射——连续复合光 可见光区 钨灯 320-2500nm 优点：发射强度大、使用寿命长 紫外光区 氢灯或氘灯 180-375nm 氘灯的发射强度比氢 灯大4倍 玻璃对这一波长有强吸收，必须用石英光窗。 紫外—可见分光光度计同时具有可见和紫外两 种光源。
于有机和无机物质的定性和定量测定。
2、紫外可见吸收光谱的特点
（1）紫外可见吸收光谱所对应的电磁波长较短，能量大， 它反映了分子中价电子能级跃迁情况。主要应用于共轭 体系（共轭烯烃和不饱和羰基化合物）及芳香族化合物 的分析。 （2）由于电子能级改变的同时，往往伴随有振动能级的 跃迁，所以电子光谱图比较简单，但峰形较宽。一般来 说，利用紫外可见吸收光谱进行定性分析信号较少。 （3）紫外可见吸收光谱常用于共轭体系的定量分析，灵 敏度高，检出限低。
定律：所以我们可以利用有机物的紫外可见光谱 进行定性分析和定量分析
2、定性分析 D211、 D261、 D231、 D241的紫外可见光谱
D211 D261 D231 D241
D211——最大吸收峰位：390nm；峰值：0.827；副峰位：301nm；峰值：0.423 D231——最大吸收峰位：664nm；峰值：0.725；副峰位：624nm；峰值：0.683 D261——最大吸收峰位：545nm；峰值：0.788；副峰位：518nm；峰值：0.764 D241——最大吸收峰位：574nm；峰值：0.926；副峰位：430nm；峰值：0.624 另外：S101——最大吸收峰位为197nm；S201——最大吸收峰位为215nm； S102——最大吸收峰位为260nm； 由此根据“不同的有机化合物具有不同的紫外可见吸收光谱”，我们可以对我 们的色料和溶剂进行简单的定性判断与分析。
1、样品配置
（1）所需仪器： 微样取样器（1uL、5uL、10uL）、洗耳球、移液管（25mL、50mL）、容量 瓶（50mL）、烧杯、试管。 （2）溶剂选择（即参比液的选择）： 因为我们的产品是水性的，所以一般选择S902作稀释溶剂；特殊情况如104E 等水溶性较差的可选择S201或其他溶剂。 （3）稀释比的选择： 考虑到吸收值在0.6-1.2之间测试的准确率最高，一般色浆选择——1：5000、 墨水选择——1：2500、溶剂选择——5：100。 （4）配置步骤及注意事项： 1、用移液管、洗耳球准确移取稀释溶剂于容量瓶中，移液管要干净、数量要 准确； 2、用微样取样器（或精密电子称）准确取测试样品于容量瓶中，微样取样器 使用正确、注意用溶剂漂洗取样器，确保测试样品移取完全稀释于稀释溶剂中； 3、充分摇匀，待用。
3、软件操作
1、开机：取下保护罩，插上三线电源（接地线）、打开液晶显示屏、打开电源 设备进行初始化（大概需要3分钟）； 2、连接软件：先从电脑桌面打开操作软件控制程序，然后从仪器操作界面选择 “外部控制”，合上仪器液晶显示屏，最后用鼠标由操作软件选择“连接” 即可； 3、扫描基线：用鼠标选择“基线”即开始扫描基线； 4、用软件进行光度测试：配置系列标准试样及测试样品，鼠标选择光度模式， 相关设置见图1； 5、用软件进行光谱测试：配置测试样品，鼠标选择光谱模式，相关设置见图2。
D939的 次强峰 显而易见十字绣黑色墨水为D939、D212、D921三色的混合黑色 ！
不同的199有不同的紫外可见光谱
黑——D231 绿——D732A
红——D232
蓝——新原料
D241、D881分析客户墨水
蓝——D881 红——D241 黑——客户墨水
四、如何使用紫外可见分光光度计
1、样品配置； 2、设备操作； 3、软件操作； 4、数据读取及报告 制作。
2、设备操作
1、开机：取下保护罩，插上三线电源（接地线）、打开液晶显示屏、打开电源设备进行初 始化（大概需要3分钟）； 2、模式选择：一般地我们选择（2.光谱）模式进行测试——其它模式无特殊测试时请不要 选择； 3、参数设定： （1）测量方式：ABS ， 间隔：0.5nm； （2）扫描范围：800-190nm； （3）记录范围：0.000A-2.000A； （4）扫描速度：中 （5）扫描次数：2 （6）显示模式：覆盖 （8）光源选择：自动 4、基线扫描：打开参比仓，取出测试和参比比色皿，分别装上稀释溶剂（容积2/3），注 意用专用擦镜纸擦干净比色皿镜面，装好比色皿，盖上仓盖，选择基线扫描开始校正 基线。 5、测试：扫完基线10分钟后，取出测试比色皿，装上测试样品（容积2/3），注意用专用 擦镜纸擦干净比色皿镜面，装好比色皿，盖上仓盖，选择开始键开始测试。
4、数据读取及报告制作
1、测试时间 2、报告名称 3、稀释比 4、光谱图形 5、吸收值数据 6、分析备注 7、测试及报告人
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