U-3010紫外可见分光光度计
紫外可见分光光度计的使用
比 值
显 示
组成：光源、单色器、样品池、检测器
1．光源： ①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区
内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用
寿命长，价格低。 钨灯——可见光区 320～2500nm
氢灯或氘灯——紫外光区 195－375nm
U3010（碘钨灯、氘灯）波长范围190-900nm
。
二 分光光度计的使用-光度法
开始
方法正
将样品放入样品池 开始测量
打印数据 开始测量
测量参数设置
在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.
具体操作程序
Method:
1. 2. general: 计测量） Quantitation定量参数设置页面： Measurement测量方式选择Photometry（光度
在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择 “1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校准。 在concertration中键入标准浓度单位。 3. Instrument
4 standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称
三 注意事项
1. 2. 开机预热15分钟左右。 测定时应注意：
参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收
池，材料和规格一致。
使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触 窗口。
已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能 加热，以免引起光程长度上的改变。
3.
测量条件的选择：
选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收, 为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波 长的入射光。 控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸 光度只有控制在0.2~0.7读数范围内时,测量的准确度较高.
紫外可见分光光度计的使用
光吸收遵循朗伯-比尔定律：
A lg T lg I 0 bc
I
I0 入射光辐射强度 I 透射光辐射强度 T 透射比 a 吸光系数 ε 摩尔吸光系数
溶液对光吸收过程
仪器组成单光束分光光度计
0.575
光源
单色器
检测器
显示
吸收池
双光束分光光度计
光源 单色 器
比
光束分裂器
值
吸收池
检测器
显
示
组成：光源、单色器、样品池、检测器
2 运行UV Solution软件。软件将自动配置计算机的 串行口（RS 232 Port）见图
仪器在初始化过程中进行如下自检工作：
• ROM检测 • RAM检测 • 波长步进电机运转检测 • 氘灯点亮检测 • 钨灯点亮检测 • 仪器波长校正
3 仪器主机开始初始化。见图
4 仪器主机初始化完毕，进入工作状态。
1．光源： ①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区 内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用 寿命长，价格低。 钨灯——可见光区 320～2500nm 氢灯或氘灯——紫外光区 195－375nm
U3010（碘钨灯、氘灯）波长范围190-900nm
2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源
感谢下 载
选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量 • 使用按钮方式 ：按按钮 开始测量 • 如果要终止扫描按按钮 。
二 分光光度计的使用-光度法
开始
方法设定
样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池
进行用户基线校正 将样品放入样品池 开始测量
纳米金比色法测定多西环素和土霉素
纳米金比色法测定多西环素和土霉素曲黎;魏燕丽;范淑敏【摘要】采用柠檬酸钠还原法合成粒径约13 nm 的纳米金粒子．采用紫外-可见分光光度计、荧光分光光度计研究了纳米金粒子与多西环素／土霉素分子的相互作用；通过改变缓冲溶液、纳米金粒子用量、反应时间确定了比色法测定的最优反应条件．结果表明：在弱酸溶液中，多西环素／土霉素分子中的氨基官能团（－NH2）得到电子成为带电基团（－ NH3＋）并通过静电引力与纳米金粒子结合，使得纳米金粒子发生聚集，导致纳米金吸收光谱发生红移和展宽，颜色由酒红色变成蓝色；在盐酸-柠檬酸钠的缓冲溶液中加入2 mL 纳米金，反应时间为10 min 的条件下测得多西环素和土霉素的线性范围分别为0．06～0．66 mg ・ L －1和0．59～8．85 mg ・ L －1，检出限（3σ）分别为0．0086、0．0838 mg ・ L －1．该方法前处理简单、灵敏、可靠，有望应用于食品分析和临床分析等领域．%The well-dispersed gold nanoparticles (GNPs) were synthesized through sodium cit-rate reduction method .UV-Vis spectrometer and fluorescence spectrophotometer were used to investigate the mutual effect between GNPs and doxycycline/oxytetracycline .The experimental parameters were optimized with regard to pH ,incubation time and concentration of the GNPs . The amino group ,which is positively charged in weakly acidic medium (namely , - N H3 + ) , integrates with the negative charge on the surface of gold nanoparticles to form a bigger binding product through electrostatic binding ,resulting the aggregation of GNPs with a red-to-purple-to-blue color change .The absorption band of GNPs had a red shift and broadened .Under opti-mal experimentalconditions ,the linear ranges of the colorimetric sensor were 0 .06 - 0 .66 mg ・L - 1 and 0 .59 - 8 .85 mg ・ L - 1 with the corresponding limit of detection (3σ) of 0 .008 6 and 0 .083 8 mg ・ L - 1 for doxycycline and oxytetracycline respectively .This method is promising for foods and clinical analysis owing to to its simple ,reliable ,convenient and low-cost .【期刊名称】《化学研究》【年(卷),期】2016(027)002【总页数】6页(P189-194)【关键词】纳米金粒子;比色法;多西环素;土霉素【作者】曲黎;魏燕丽;范淑敏【作者单位】河南科技学院新科学院，河南新乡 453003;河南科技学院新科学院，河南新乡 453003;河南科技学院新科学院，河南新乡 453003【正文语种】中文【中图分类】O652.7四环素类抗生素(tetracycline antibiotics)是含有并四苯基本骨架的一类广谱抗生素[1-3]. 土霉素和多西环素都可以促进畜禽的生长，预防和治疗畜禽、鱼类的疾病，并可以增加产奶量. 过量使用土霉素和多西环素造成动物产品中药物残留，影响人体健康，因此对动物源性食品中土霉素和多西环素的最高残留，各个国家都有相应的标准及检测方法[4-6]. 目前，我国对于土霉素和多西环素的测定，常用的方法有高效液相色谱法(HPLC)、紫外分光光度法[7]、电化学分析法[8-10]、荧光法[11-12]和细菌抑制法[13]等.纳米金比色法灵敏度高，简单、快速，是目前研究比较热门的分析测定方法. 纳米金比色分析的主要优势是通过肉眼即可观察其颜色变化，简单快速，而且省去昂贵复杂的仪器，另外纳米金的消光系数高，灵敏度高，因而比色分析被用于蛋白质，DNA，金属离子和小分子等多种物质的检测，同时被用于蛋白质之间、DNA之间的相互作用研究[14-16]. 目前，纳米金比色法已成功用于三聚氰胺、瘦肉精等物质的检测[17]. 本文采用纳米金比色法测定土霉素和多西环素，测定结果与药典分析结果一致. 此方法简单，测定速度快，而且不需要昂贵的仪器及大量的分析试剂，在食品分析及环境监测方面有很好的应用前景.1.1 仪器与试剂PHS-3C酸度计(上海仪电科学仪器有限公司)；U-3010紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)；F-7000荧光分光光度计(日本日立)； FA1204B电子分析天平(上海佑科仪器有限公司)；CL-2恒温加热磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司)；Tecnai G2 20s-twin高分辨型透射电子显微镜(日本).四氯金酸(Sigma-Aldrich 公司)；多西环素，土霉素对照品(中国药品生物制品检定所)；盐酸-乙酸钠缓冲溶液、盐酸-柠檬酸钠缓冲溶液；多西环素片剂(0.1 g，国药准字H13021945)和注射液(0.1 g，国药准字p0060405)为药店随机购买；二次蒸馏水、超纯水由实验室提供，所用试剂均为分析纯.1.2 纳米金的合成[5]用新配制的王水浸泡所用玻璃器皿24 h，超纯水洗后烘干备用. 将氯金酸配成1%的溶液，精确量取1 mL于100 mL棕色容量瓶中稀释至0.01%. 将0.01%的氯金酸溶液搅拌加热至沸后加入2.75 mL 1%的柠檬酸钠溶液，12 min后颜色由紫红色变为酒红色，冷却至室温，用0.2 μm超滤膜过滤，滤液于棕色试剂瓶中4 ℃保存备用.1.3 测定吸光度取2.5 mL新制纳米金于5 mL容量瓶中，加入盐酸-柠檬酸钠缓冲溶液，定容. 取2 mL纳米金，依次加入不同体积的多西环素标准溶液(1.50×10-4 g·mL-1 )/土霉素标准溶液(1.48×10-3 g·mL-1)，混合均匀，以水为参比分别测定吸光度.2.1 纳米金表征纳米金呈酒红色，其表观颜色及粒径与文献报道一致. 球形纳米金粒子存在表面等离子吸收的特征峰，以水为空白，绘制纳米金吸收曲线，如图1所示，在518 nm 处有最大吸收，据此可计算纳米金的粒径，约为13 nm[18]. 由纳米金的紫外可见吸收光谱图可以看出纳米金颗粒稳定，符合分析要求.纳米金的透射电镜分析(TEM)如图2所示，制备的纳米金为球形，粒径均匀，分散良好.2.2 多西环素/土霉素测定原理实验利用柠檬酸钠还原氯金酸制备纳米金，纳米金粒子表面包裹大量的柠檬酸根离子，由于静电排斥力纳米金不发生凝聚. 在弱酸溶液中，多西环素/土霉素分子中的氨基官能团(-NH2)可以得到电子(-NH3+)，和纳米金粒子之间通过静电引力相互作用，引发纳米金凝聚. 凝聚后的纳米金透射电镜图如图3所示，纳米金凝聚在一起，证明了纳米金粒子与四环素类抗生素之间的相互作用. 凝聚后纳米金颜色由酒红色变为紫色最终变为蓝色，由于纳米金表面等离子共振，其吸收光谱发生红移和展宽，紫外-可见吸收光谱如图4，纳米金的最大吸收峰由原来的518 nm红移至640 nm. 纳米金的共振散射光谱如图5所示，纳米金凝聚后，共振散射光谱增强. 并且在一定范围内纳米金的聚集与多西环素/土霉素的浓度呈现良好的线性关系，据此可建立简单、快速测定多西环素/土霉素的比色分析.2.3 实验条件优化将多西环素加入纳米金后，纳米金产生凝聚，其凝聚程度可用Δ(A640/A518)来表示. 在pp.0～7.0范围考查缓冲溶液对测定的影响. 图6显示不同缓冲溶液对测定的影响，结果表明使用盐酸-柠檬酸钠缓冲溶液的测定效果较好. 图7显示缓冲溶液加入量对测定的影响，700 μL pH为2.1的盐酸-柠檬酸钠缓冲溶液引起纳米金凝聚的Δ(A640/A518)值最大. 其原因是pH 过低时，纳米金粒子表面所带负电荷较少, 不利于结合多西环素, 而pH 过高, 多西环素中质子化的氢解离, 使正电荷减少,也不利于结合.同时我们也考察了纳米金的用量对体系测定的影响. 改变纳米金的用量从1～3 mL，不同纳米金用量对应的Δ(A640/A518)值如图8所示，纳米金的浓度增大时，其最大吸收峰值降低，当纳米金浓度高时，对仪器的染色比较严重，且对低浓度的多西环素变化不灵敏，当纳米金浓度低时，颜色变化不灵敏，因此实验选择2 mL纳米金.图9考察了反应时间对测定的影响，连续测定1 h，结果表明:加入多西环素，10 min凝聚程度最大，10 min后基本不再变化，反应时间设为10 min.2.4 多西环素/土霉素的测定在最优条件下，按照实验方法依次加入多西环素标准溶液并测定其吸收光谱(图10)，由Δ(A640/A518)对多西环素的浓度作图(如图10所示)，线性范围为0.06～0.66 mg·L-1，线性回归方程为Δ(A640/A518)= 0.042+ 1.480 4c(多西环素，mg·L-1),相关系数为0.998，检出限(3σ)为0.008 6 mg·L-1,纳米金比色法测定多西环素具有检出限低，灵敏度高，方法简单等优点，有望应用于食品分析领域. 最优条件下测定土霉素，测定其吸收光谱(图11)，在0.59～8.85 mg·L-1 范围内，线性回归方程为Δ(A630/A518) = 0.222 + 0.077c(土霉素，mg·L-1),相关系数0.999，检出限(3σ)0.083 8 mg·L-1.2.5 常见物质的干扰表1考察了金属离子、氨基酸及结构类似药物的干扰. 结果表明，对于0.54 mg·L-1多西环素，该体系基本不受干扰，有较好选择性.2.6 回收率取多西环素20片，研细, 精密称取约一片多西环素质量，盐酸溶解后过滤，移至容量瓶，定容. 进行标准加入回收实验，精密量取适量样品溶液，分别加入标准溶液0.06、0.54 mg·L-1，测定吸光度，计算回收率，实验重复3次.精密量取1 mL多西环素注射液于棕色容量瓶中，进行标准加入回收实验，精密量取适量样品溶液，分别加入标准溶液0.12、0.42 mg·L-1，测定吸光度，计算回收率，结果见表2.2.7 含量测定精密量取多西环素片剂及注射液样品，按实验方法测定，结果见表3. 测定结果表明所购多西环素片剂及注射液含量在标示范围95.0%～105%内, RSD 较小, 符合药品质量管理规定.采用柠檬酸钠还原氯金酸方法得到纳米金. 在弱酸环境中纳米金可与多西环素、土霉素相互作用，产生凝聚，其吸收光谱发生红移，据此测定多西环素、土霉素. 优化了缓冲溶液、纳米金用量及反应时间等反应条件；在最佳条件下，测定结果令人满意. 同时分析了多西环素片剂及注射液，结果与药典方法结果一致. 该方法简单快速，且不需昂贵仪器及大量分析试剂，在食品及环境分析方面前景广泛.【相关文献】[1] CHOPRA I, ROBERTS M. 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紫外可见分光光度计的主要部件及应用
紫外可见分光光度计的主要部件及应用下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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紫外实验讲义
实验五紫外光谱法定性分析实验一、实验目的1．了解U-3010紫外可见分光光度计的构造、原理及使用方法。
2．了解紫外光谱法在定性分析中的应用。
3．掌握查阅紫外标准谱图的方法。
二、仪器与试剂仪器：U-3010紫外可见分光光度计1cm石英吸收池试剂：苯环己烷0.016mol/L丙酮正己烷溶液0.021mol/L丙酮甲醇溶液0.025mol/L丙酮水溶液5.0×10-5mol/L苯酚甲醇溶液4.9×10-5mol/L对溴苯胺甲醇溶液7.3×10-5mol/LC4H6O甲醇溶液（K带）0.015mol/LC4H6O甲醇溶液（R带）0.1mol/LNaOH溶液0.1mol/LHCl溶液三、实验内容1．检查仪器波长及分辨率2．环己烷的纯度检验3．氢键强度测定4．溶液酸碱性对紫外光谱的影响5．鉴定有机化合物结构四、实验原理及步骤1．检查仪器波长及分辨率（1）基本原理紫外可见分光光度计在使用前或使用一定时间后，需对光度计的波长标尺进行必要的检查与校正，以保证测试结果的准确可靠。
利用苯蒸气紫外光谱的B吸收带进行波长校正和分辨率检查，是实验室中常用的一种简便可行的方法。
苯蒸气在（230～270）nm间的B吸收带为苯的特征谱带，它以中等强度吸收和明显的振动精细结构为特征。
将实验测得的苯蒸气的紫外光谱与苯蒸气的标准紫外光谱图相对照，据此可判断所用仪器的波长精度及分辨率。
（2）实验步骤①于干燥洁净的1cm石英吸收池中，滴入一滴液态苯，盖上池盖，稍停片刻，待苯蒸气在吸收池中饱和后，放入样品光路，参比光路放入空吸收池，测定苯蒸气在（200～350）nm间的吸收光谱。
②将测得的苯蒸气的紫外吸收光谱与苯蒸气的标准紫外光谱图相对照，以检验所用仪器的波长精度及分辨率。
2．己烷的纯度检验 （1）基本原理检验某一化合物中是否有杂质的主要依据是根据其光谱特征的不同来判断。
可分为下述两种情况：①如果某一化合物在一定波长范围内无吸收，而杂质在该波长范围具有特征吸收，则可根据杂质吸收带的特征，即吸收峰的形状、波长及摩尔吸光系数等来检查该化合物中是否含有该杂质。
卫生化学笔记：紫外可见分光光度计
紫外可见分光光度计（一）概述一、光学分析法光是一种电磁辐射，电磁辐射是一种以巨大的速度通过空间而不需要任何介质作为传播媒介的光子流，具有波粒二象性电磁波谱：按波长顺序排列的电磁辐射近紫外区（200-400nm）和可见光区（400-780nm）能级跃迁类型为：原子的价电子或分子的成键电子能级二、光学分析法的分类1.光谱法与非光谱法当物质与电磁辐射相互作用时，若物质内部发生能级跃迁，记录由能级跃迁所产生的辐射能强度随波长的变化的图谱称为光谱（spectrum）,利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法称为光谱分析法。
2.吸收光谱与发射光谱物质通过电致激发，热致激发或光致激发等过程获取能量，成为激发态的原子或分子，激发态的原子或分子极不稳定，它们可能以不同的形式释放能量，从激发态回到基态或低能态，如果是以电磁辐射的形式释放多余的能量就产生发射光谱。
吸收光谱是物质吸收相应的辐射能而产生的光谱。
其实质在于辐射使物质粒子发生由低能级（一般为基态）向高能级（激发态）的能级跃迁，被选择性吸收的辐射光子能量应为跃迁后与跃迁前两个能级间的能量差。
利用物质的吸收光谱进行定性，定量及结构分析的方法称为吸收光谱法。
3.分子光谱法与原子光谱法原子光谱法是测定气态原子（或离子）外层或内层电子跃迁所产生的原子光谱为基础的分析方法。
为线状光谱。
分子光谱法是以测定分子转动能级，分子中原子的振动能级（包括分子转动能级）和分子电子能级（包括振动-转动能级）跃迁所产生的分子光谱为基础的定性，定量和物质结构分析方法，为带状光谱。
三、紫外-可见分光光度计当辐射通过固体、液体或气体等透明介质分子时，物质分子选择性吸收紫外-可见光谱区的光辐射，根据吸收特征和吸收程度来研究物质组成和结构的定性、定量分析方法。
紫外可见分光光度法的特点：灵敏度较高；准确度较高；选择性较好；仪器设备简单；应用范围广。
（二）基本原理一、紫外-可见吸收光谱的形成1.分子的能级分布分子电子能级分子振动能级分子转动能级2.紫外-可见吸收光谱及其特征吸收峰谷肩峰末端吸收二、紫外-可见吸收光谱与分子结构的关系1.有机化合物的电子跃迁类型σ → σ*跃迁：需能量最大，吸收峰波长一般小于150nm。
紫外分光光度计的表征用途
紫外分光光度计的表征用途紫外分光光度计是一种常用的实验仪器，用于测量物质在紫外光区域的吸收和透过性。
它在许多科学领域，如化学、生物学、医药等方面都有着广泛的应用。
下面我们将详细介绍紫外分光光度计的表征用途。
一、物质浓度测定紫外分光光度计可以通过测量溶液或物质在特定波长下的吸光度来确定物质的浓度。
根据比尔-朗伯定律，溶液中物质的吸光度与浓度成正比。
因此，通过测量吸光度和已知浓度的标准溶液建立标准曲线，再测量待测溶液的吸光度，就可以计算出待测溶液的浓度。
这种测定方法在化学分析中得到广泛应用，如测定水中污染物的浓度、药物的含量等。
二、物质结构分析紫外分光光度计还可以用于物质的结构分析。
不同的物质具有不同的吸收特性，在紫外光区域吸收的峰位和强度可以提供物质的结构信息。
通过对比样品的吸收特性和已知物质的光谱数据，可以确定物质的结构或成分。
三、酶活性测定酶是生物体内的一种重要催化剂，其活性的高低直接关系到生物体的正常功能。
紫外分光光度计可以用于测定酶的活性。
通过测量酶催化反应中产生的物质在特定波长下的吸光度变化，可以计算出酶的活性。
四、药物代谢研究药物代谢研究是药物开发和临床应用的重要环节。
紫外分光光度计可以用于测定药物在体内的代谢过程。
通过测量药物及其代谢产物在特定波长下的吸光度，可以了解药物在体内的代谢速度和代谢产物的形成情况，从而评估药物的代谢动力学和代谢途径。
五、环境监测紫外分光光度计在环境监测中也有着重要的应用。
例如，可以用于测定大气中臭氧、二氧化硫等污染物的浓度，以评估空气质量。
同时，紫外分光光度计也可以用于水体中重金属、有机污染物等的测定，以监测水体的污染程度。
紫外分光光度计具有广泛的应用领域。
它不仅可以用于物质浓度测定和物质结构分析，还可以用于酶活性测定、药物代谢研究以及环境监测等方面。
通过紫外分光光度计的应用，我们可以更好地了解和掌握物质的性质和特性，为科学研究和实际应用提供有力支持。
紫外可见分光光度计的使用方法
紫外可见分光光度计的使用方法1、电源开关，使仪器预热20分钟；▪仪器接通电源后，仪器即进入自检状态，自检结束后波长自动停在546nm处，测量的方式自动设定在透射比方式（%T），并自动调100%和0%T。
注意：①开机前，先确认仪器样品室内是否有东西挡在光路上。
光路上有东西将影响仪器自检甚至造成仪器故障。
②检查透过率模式下，挡光位置，透过率是否显示00.0%T。
否则要调整暗电流，按“0%T”键，使透过率显示为00.0%T。
返回对光位置时仍能显示100.0%T，否则重新调100%T。
通过“▲”和“▼”键，设定测试波长；按“100%T”键，使透过率显示为100.0%。
如果您要获得被测样品的透射比参数时（透射比方式）：T2、按方式键“MODE”将测试方式设置为透射比方式：▪显示器显示“3、按波长设置键“▲”或“▼”设置您想要的分析波长，如340nm；▪按波长设置键“▲”或“▼”直到显示器显示“340nm xxx x%T”▪每当波长被重新设置后，请不要忘记调整“100.0%T”。
4、将您的参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中；▪比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米，大约25毫升。
否则，会影响测试参数的精确度。
▪被测试的样品中不能有气泡和漂浮物，否则，会影响测试参数的精确度。
5、打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。
▪一般情况下，参比样品放在样品架的第一个槽位中。
▪被测样品的测试波长在340nm—1000nm范围内时，建议使用玻璃比色皿，被测样品在190nm—340nm范围内时，建议适用石英比色皿。
▪仪器所附的比色皿，其透射率是经过测试和匹配的，未经匹配处理的，比色皿将影响样品的测试精确度。
▪比色皿的透光部分表面不能有指印、溶液痕迹。
否则，将影响样品的测试精确度。
6、将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整零ABS。
▪仪器在自动调整100%T的过程中，显示器显示“ 340nm Blank ...”当100.0%T调整完成后，显示器显示“340nm 100.0%T”7、将被测溶液推或拉入光路中，此时，显示器上所显示是被测样品的透射参比数。
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5 吸光度自动校零 在开始测试前，需要进行吸光度校零。在样品室参比和样 品光路中分别放入空白样品。按按钮 进行吸光度校零。 6 在wavelength中设定扫描的最大吸收波长， 7 放入标样，选中第一个标样，点measure依次测定完成 后自动给出标准曲线。 8 选择SAMPLE进行样品测定，全部测定完后点击END，此 时 自动生成一个文件，打开此文件，另存为所需的文件名。 9 关机时，先退出UVsolution，再关电脑，最后关光度计上 的power。
光吸收遵循朗伯-比尔定律：
I0 A lg T lg bc I
I0 入射光辐射强度 I 透射光辐射强度 T 透射比 a 吸光系数
ε 摩尔吸光系数
溶液对光吸收过程
仪器组成单光束分光光度计
0.575
光源
单色器
吸收池
检测器
显示
双光束分光光度计
光束分裂器 光源 描
开始
方法设定
样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池 进行用户基线校正 将样品放入样品池 开始测量
打印数据 开始测量
启动UV Solution软件
1. 打开仪器主机电源。用鼠标点击Windows开始菜单中的 [Hitachi Applications]选项中的[UV Solutions 2.0] 选项。 或者直接在桌面上双击UV Solution图标。
2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源 的混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成部 件和作用是： ①入射狭缝——限制杂散光进入。 ②色散元件——即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光 分解为单色光。 ③准直镜——把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把 来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上。 ④出射狭缝——只让特定波长的光射出单色器。
。
二 分光光度计的使用-光度法
开始
方法设定
样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池
进行用户基线校正
将样品放入样品池 开始测量
打印数据 开始测量
测量参数设置
在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.
具体操作程序
Method:
1. 2. general: 计测量） Quantitation定量参数设置页面： Measurement测量方式选择Photometry（光度
3. 吸收池 玻璃——由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区； 石英——适用于紫外和可见光区 4．检测器：将光信号转变为电信号的装置
光电管
光电倍增管 二极管阵列检测器 5．记录装置：讯号处理和显示系统
Slit 1不存在，Mirror取代了光栅grating 1 Grating2 variable-pitch aberration-corrected diffraction grating 旋转镜将光分成两束，分别通过参比池和样 品池，然后聚集在PMT
Light一般选择“Auto”
Monitor显示页面
Processing数据处理页面
Report报告结果页面
样品名设置，备注信息及文件名输入
基线校正
用户基线校正方法：可将scan speed 设小一些；进行样 品扫描时，可设大一些。 将空白样品分别放入样品室的 参比光路和样品光路。按按钮
紫外可见分光光度计
主要内容
1、工作原理及仪器组成 2 、分光光度计的使用 波长扫描 定量测定
3 、注意事项
一、工作原理及仪器组成
物质的颜色与吸收光的关系： 当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色
的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。
物质所显示的颜色是吸收光的互补色。
颜 色 的 产 生
植物叶子呈现绿色是 因为植物中存在一种 吸收蓝紫光和红光的 载体——叶绿素
互 补 色 原 理
光谱示意
完全吸收
复合光 表观现象示意
完全透过
吸收黄色光
利用一定频率的紫外--可见光照射分析物，它将有选择 地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。
物质对光的选择性吸收－溶液对光的作用
溶液对光的作用示意图
系统基线校正方法。 使用空气作为参比和样品。按按钮 出对话框见图，选 择System后按[OK]按钮，进行系统基线校正。
测
有两种方法可以开始测量： 使用菜单方式
量
选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量 使用按钮方式 ：按按钮 开始测量
如果要终止扫描按按钮
2 运行UV Solution软件。软件将自动配置计算机的 串行口（RS 232 Port）见图
仪器在初始化过程中进行如下自检工作：
ROM检测 RAM检测 波长步进电机运转检测
氘灯点亮检测
钨灯点亮检测
仪器波长校正
3 仪器主机开始初始化。见图
4 仪器主机初始化完毕，进入工作状态。
[Load]按钮:用于装载原来保存的方法文件。
[Save]按钮:保存当前的设置参数。 [Save As]按钮:将当前设置参数另存为一个方法文件。
Instrument仪器参数设置页面
Data mode读数显示方式，选择Abs吸光度，波长扫描的起止
范围一般为190-800，狭缝值一般为2
在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择 “1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校准。 在concertration中键入标准浓度单位。 3. Instrument
4 standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称
5 测量参数设置
1 在[Edit]菜单中选择[Method…]选项，或按按钮。出现下列窗口。
General:总体设置页面
Measurement测量: Wavelength scan 波长扫描 Time scan 时间扫描 Photometry 定波长测量 Operator操作者: 输入操作者的姓名 Instrument仪器:仪器型号由软件自动从仪器主机获得。 Use Sample Table使用样品表:选择是否使用样品表。 Comments备注:填写一些备注信息。
比 值
显 示
组成：光源、单色器、样品池、检测器
1．光源： ①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区
内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用
寿命长，价格低。 钨灯——可见光区 320～2500nm
氢灯或氘灯——紫外光区 195－375nm
U3010（碘钨灯、氘灯）波长范围190-900nm