RACE技术原理
race实验原理
race实验原理
race实验原理是一种常用的实验方法，用于研究物质的分布在不同介质中的速
度差异。
其原理基于物质在不同介质中传播速度不同的特性。
在race实验中，通常采用两种或多种不同介质，例如液体和气体、固体和液体等。
实验过程中，将待研究的物质同时引入不同的介质中，并观察物质在不同介质中的行为变化。
物质在不同介质中的速度差异主要由两个因素决定：介质的性质和物质与介质
之间的相互作用力。
首先，介质的性质对物质的传播速度有重要影响。
不同介质具有不同的密度、
黏度、温度等特性，这些特性会影响物质的传播速度。
例如，在液体中传播的物质通常受到介质的黏性阻力，传播速度较慢；而在气体中传播的物质受到的阻力较小，传播速度相对较快。
其次，物质与介质之间的相互作用力也会影响物质的传播速度。
不同物质与不
同介质之间的相互作用力具有差异，这会导致传播速度的不同。
例如，水分子在水中会受到水分子之间的相互作用力的影响，传播速度较慢；而在空气中，水分子之间的相互作用力较小，传播速度较快。
通过观察物质在不同介质中的行为变化，可以定量或定性地研究物质在不同介
质中的传播速度差异。
这对于理解物质的传播特性、研究物质在不同介质中的性质变化等有着重要意义。
总之，race实验原理是一种通过观察物质在不同介质中的传播速度差异来研究
物质特性的实验方法。
其原理基于介质的性质和物质与介质之间的相互作用力所导致的传播速度的差异。
通过该实验方法，可以深入了解物质在不同介质中的行为，为进一步的应用和研究提供基础。
说明race技术的基本原理及其应用
说明Race技术的基本原理及其应用1. Race技术的背景和概述Race技术（Realtime Analysis and Characterization of Emissions）是一种用于实时分析和表征排放物的技术。
它通过采集和分析废气样品中的成分，并结合相关的数据处理和模型算法，用于评估和监测大气污染物的来源和趋势，从而为环境监测和管理部门提供决策支持和控制指导。
2. Race技术的基本原理Race技术的基本原理包括以下几个方面：2.1 排放源采样Race技术通过设计和布置采样点，采集排放源中的废气样品。
采样点的选择需要考虑排放物的类型和分布，并确保样品的代表性。
2.2 废气样品采集与处理采集到的废气样品需要进行预处理，如去除杂质和湿气。
这样可以保证后续的分析和测量结果的准确性和可靠性。
2.3 成分分析与测量Race技术通过使用高精度仪器，对废气样品中的成分进行测量和分析。
常用的测量技术包括质谱仪、红外光谱仪和气相色谱等。
这些仪器可以准确地测量废气中不同成分的含量和浓度。
2.4 数据处理和模型算法通过对采集到的废气样品数据进行分析和处理，Race技术可以对排放源的特征和趋势进行评估和建模。
这些模型和算法可以帮助环境监测和管理部门进行大气污染物的来源识别和趋势预测，从而制定相应的管控措施。
3. Race技术的应用Race技术在环境监测和管理中具有广泛的应用，主要包括以下几个方面：3.1 大气污染源识别和追踪通过对排放源的采样和分析，Race技术可以帮助环境监测和管理部门准确定位大气污染物的来源，包括工业排放、交通尾气和生活废弃物等。
这对于追踪和监测污染源，制定相应的污染治理措施非常重要。
3.2 污染物排放趋势和变化评估Race技术可以对废气样品中的污染物进行连续测量和分析，从而评估排放源的污染物排放趋势和变化情况。
这对于判断排放源的环境影响和制定长期的大气污染治理策略非常有价值。
3.3 环境影响评估和管理通过Race技术对废气样品的分析和模型算法的应用，可以对大气污染物的环境影响进行评估。
RACE技术原理
RACE的基本概念 不同厂家RACE试剂盒的介绍 RACE技术的关键环节
存在的问题及解决办法
RACE的基本概念
cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术是基于PCR技术由已知的部分
cDNA序列来获得完整cDNA序列的一种方法，
在PCR反应中有足够的全长产物能被探测。
TdT加尾反应及其替代反应
第三，若目的cDNA中含有与多聚尾互补的几个核苷酸同 聚区，则在合成第二条cDNA链时引物的延伸会从内部序 列而不是末端序列开始，产生非全长的第二条cDNA链。
我们所使用Invitron公司的RACE试剂盒，采用PCR介导的
连接反应，在一定程度上避免了以上的问题。
RACE试剂盒中末端转移的是多聚C尾，这样在反转录合 成第一链时5’端多聚G的二级结构影响反转录的彻底进行，
会产生提前终止反应。我们改进了加尾的程序，用TdT酶 加上多聚T尾，结果降低了反转录的难度，两个基因最终 均获得了完整的5’末端。
RACE引物的设计
在实验过程中总结如下经验：
1.
2.
引物不能设计在保守区简并引物区。
2.
反转录提前终止
模板中有特殊的二级结构，反转录提前终止。通过提高 反转录的温度，加大反转录的反应体系以及反转录过程 中一直保持已变性的RNA模板处于50℃以上，避免以解
开二级结构的RNA再恢复原来的结构，以达到5’末端。
提供一种改进的反转录方法
1. 2.
3. 4.
5. 6.
7.
在RNase-free的0.2 mL Eppendorf 管中加入以下成分： Oligo(dT)(0.5μg) 1μL Total RNA(4~5μg) 3μL DEPC-H2O To 25 μL 混匀，70℃保温10min；50℃保温5min；稍微离心一下。 在混合物中，依次加入以下成份： 10X SSⅡ（ SSⅢ ）Buffer 5.0μL 10mM dNTP mix 1.0μL 0.1M DTT 2.0μL RNase Inhibitor(40U/μL) 1.0μL DEPC-H2O To 24 μL 轻轻混合，在50℃保温5min后，在50℃下将3号管中的混合成分移入 2号管中。 每个反应加入1μL SuperScriptTM Ⅱ（SSⅢ ），轻轻混匀，50℃反应 50min。 70℃放置15min以终止反应。 -20℃保存。
race技术
race技术简介Race技术是一种用于并发编程中的竞态条件检测技术。
竞态条件是指多个线程或进程同时访问共享资源时可能引发的不确定行为。
Race技术旨在通过检测和定位竞态条件，帮助开发人员找出并发程序中的潜在问题并进行修复，提高程序的并发性能和可靠性。
背景在多线程或多进程编程中，线程或进程之间共享资源是非常常见的情况。
然而，当多个线程或进程同时访问并修改同一共享资源时，会引发竞态条件。
竞态条件可能导致程序的行为变得无法预测，从而引发错误和异常。
传统的调试工具无法准确地捕捉并发程序中的竞态条件。
因此，开发人员需要借助专门的竞态检测工具来分析和检测并发程序中的竞态条件。
Race技术的原理Race技术的实现原理通常基于两种方法：静态分析和动态检测。
静态分析静态分析是指在编译阶段分析程序的源代码，通过静态分析工具检测潜在的竞态条件。
静态分析可以查找代码中的潜在问题，如未同步的共享资源访问、没有正确加锁或解锁等。
静态分析可以在编码前发现潜在的竞态条件，减少运行时出错的可能性。
然而，由于静态分析无法获得程序的动态执行信息，它可能会导致一定的误报和漏报。
动态检测动态检测是指在程序运行时通过监控共享资源的访问和修改，来检测并发程序中的竞态条件。
动态检测可以提供更准确的竞态条件信息，并帮助开发人员定位问题所在。
动态检测通常使用基于日志或采样的方法。
基于日志的方法会记录并发程序中的共享资源访问和修改序列，并通过分析记录的日志来检测竞态条件。
这种方法对程序的性能有一定的影响，因为需要记录大量的日志。
采样方法是指定期间隔对并发程序进行采样，记录共享资源的访问和修改情况。
通过对采样数据进行分析，可以检测到竞态条件。
采样方法对程序的性能影响较小，但可能会遗漏一些竞态条件。
Race技术的应用Race技术可以应用于各种类型的并发程序，包括多线程程序、多进程程序和分布式系统。
在以下情况下，Race技术尤为重要：•并发性能调优：通过检测并发程序中的竞态条件，可以定位和解决性能瓶颈，提高并发程序的性能和响应速度。
RACE原理及实验步骤
3'-RACE 基本原理
3’ RACE流程图
先利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结 合位点，以Oligo（dT）30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV 作用下，反转录合成标准第一链cDNA.利用该反转录酶具有 的末端转移酶活性，在反转录达到第一链的5'末端时自动加 上3-5个（dC）残基，退火后（dC）残基与含有SMART寡核苷 酸序列Oliogo（dG）通用接头引物配对后，转换为以SMART 序列为模板继续延伸而连上通用接头。然后用一个含有部分 接头序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作为上 游引物，用一个基因特异引物2（GSP 2 genespecific primer，GSP）作为下游引物，以SMART第一链cDNA为模板， 进行PCR循环，把目的基因5'末端的cDNA片段扩增出来。最 终，从2个有相互重叠序列的3'/ 5'-RACE产物中获得全长 cDNA，或者通过分析RACE产物的3'和5'端序列，合成相应引 物扩增出全长cDNA。
Southern blotting：
Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位 的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切 酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链 DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者 紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交， 用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含 量。
• 明显增加BD SMART RACE扩增的特异性 • 降落PCR的退火温度符合首次PCR循环的Tm 高于通用 引物的Tm 。 • 退火温度在随后降低到与通用引物相配合的程度，引起 特异性基因模版的指数和高效率的扩增。 • 当引物的T m>70°C时建议使用降落循环程序。
race实验原理
race实验原理摘要：一、实验背景1.实验目的2.实验意义二、实验原理1.实验基本流程2.实验核心方法3.实验关键参数三、实验应用1.实验领域2.实验实例3.实验成果四、实验展望1.实验局限性2.实验改进方向3.实验未来前景正文：一、实验背景随着科技的快速发展，人工智能、大数据等领域的研究日益深入。
在这些领域中，有一种名为“race”的实验，它旨在通过模拟人类认知过程，探究人类思维的奥秘。
本文将为您详细介绍race 实验的原理。
二、实验原理1.实验基本流程race 实验是一种基于认知神经科学、计算机科学等多个学科的实验方法。
实验过程中，参与者需要完成一系列与认知能力相关的任务，如记忆、决策等。
通过记录参与者在实验中的脑电波、眼动等生理信号，研究者可以分析人类认知过程的神经机制。
2.实验核心方法实验核心方法为脑电波信号的分析。
脑电波信号可以反映大脑神经活动的实时状态，通过分析这些信号，研究者可以了解参与者在进行不同认知任务时的神经活动特点。
此外，眼动信号的分析也是实验的重要部分，它可以反映参与者的注意力和视觉搜索策略。
3.实验关键参数实验关键参数包括实验任务的设计、实验环境的设置以及实验数据的分析方法。
任务设计需要充分考虑人类认知过程的特点，以保证实验的有效性；实验环境的设置要尽量模拟现实场景，以减少外部因素对实验结果的影响；数据分析方法需要结合实验目的，选择合适的统计和建模技术。
三、实验应用1.实验领域race 实验广泛应用于心理学、神经科学、人工智能等领域，为研究人类认知过程提供了有力的工具。
2.实验实例以心理学为例，研究者可以通过race 实验探究人类记忆、决策等认知过程的神经机制。
在神经科学领域，实验可以帮助研究者了解大脑不同区域的功能和相互联系。
在人工智能领域，实验可以为机器学习、自然语言处理等领域的研究提供启示。
3.实验成果通过race 实验，研究者们取得了一系列重要成果，如揭示了人类认知过程的神经机制、提出了新的学习算法等。
race扩增原理
race扩增原理Race扩增原理Race扩增是一种常用的基因扩增技术，广泛应用于分子生物学、遗传学和生物医学研究领域。
它是通过DNA聚合酶在模板DNA上的连续合成过程，使得DNA片段在特定的温度条件下反复复制，从而实现DNA的扩增。
Race扩增是基于聚合酶链反应（PCR）技术的改进，PCR是一种通过酶催化链式反应来扩增特定DNA片段的方法。
而Race扩增则是针对某个已知DNA片段的末端序列未知的情况下，通过一系列特定的引物设计和PCR反应来扩增该DNA片段的未知序列，从而获得该DNA片段的完整序列。
Race扩增的基本原理是利用已知序列的引物和一系列特定的引物设计来扩增目标DNA片段的未知序列。
其步骤如下：1. 通过已知序列设计外向引物（3'末端向外）和反向引物（5'末端向外），并合成引物。
2. 利用外向引物进行PCR扩增，得到目标DNA片段的一个部分序列。
3. 通过已得到的部分序列设计内向引物（在已知序列的3'末端内部），并合成引物。
4. 利用内向引物进行PCR扩增，得到目标DNA片段的另一个部分序列。
5. 通过已得到的两个部分序列设计新的外向引物和反向引物，继续PCR扩增，直到得到目标DNA片段的完整序列。
Race扩增的关键在于引物设计。
对于未知序列的DNA片段，可以通过已知序列的末端部分设计引物，从而扩增未知序列。
由于PCR 反应的高度特异性，只有与引物序列完全匹配的DNA片段才能被扩增，因此引物的设计必须准确。
Race扩增还可以结合其他技术来增加扩增效率和准确性。
例如，可以利用聚合酶链反应实验中的链延伸反应（anchored PCR）来进行Race扩增，通过在反向引物的3'末端添加一个特定的序列，从而增加PCR的特异性和扩增效率。
此外，还可以利用引物的嵌合反应（nested PCR）来进行Race扩增，通过两对引物的连续扩增，进一步提高PCR的特异性和扩增效率。
5’-race鉴定转录起始位点的原理
5’-race是一种用于鉴定RNA转录起始位点的实验技术，它可以帮助研究者确定基因的启动子区域和转录调控元件，对于理解基因表达调控机制具有重要意义。
本文将介绍5’-race的原理及其在实验中的应用。
一、什么是5’-race？5’-race是Rapid Amplification of cDNA Ends的缩写，翻译为cDNA末端快速扩增。
该技术最早由Frohman等人于1988年提出，并在随后的研究中不断完善和应用。
5’-race主要用于鉴定mRNA的5’端序列，揭示RNA的转录起始位置，并发现新的调控元件。
二、5’-race的原理1. 引物连接：5’-race首先通过连接一个短寡核苷酸引物到RNA的5’端，同时进行逆转录反应以合成cDNA。
这个引物称为内引物。
2. 增大cDNA：在反转录后，通过PCR技术进行cDNA的快速扩增，采用一个外引物和内引物的连接引物结合进行扩增。
3. 清除非特异产物：将PCR产物纯化后，对于其中非特异扩增的产物进行去除，留下特异的5’端cDNA。
4. 提取cDNA：将特异5’端cDNA变性后进行连接进行克隆。
5. 测序：对克隆产物测序，最终得到RNA的转录起始位点。
三、5’-race的应用1. 确定基因启动子区域：通过5’-race技术可以鉴定基因的转录起始位点，从而确定基因的启动子区域，帮助研究者进一步分析基因的转录调控机制。
2. 发现新的转录起始位点：对于未知基因或未知转录本，5’-race可以帮助研究者发现新的转录起始位点，进一步研究其功能及调控机制。
3. 肿瘤基因的研究：在肿瘤基因研究中，通过5’-race技术可以鉴定肿瘤相关基因的启动子区域和转录调控元件，对于肿瘤的发生和发展具有重要意义。
四、5’-race的优势与局限1. 优势：5’-race技术可以在较短的时间内鉴定RNA的转录起始位点，帮助研究者快速了解基因的转录调控机制。
2. 局限：5’-race技术对于RNA的质量和纯度要求较高，同时在设计引物和PCR条件优化上也需要一定的技术经验。
5race原理
5race原理
5race原理是一种基于人工智能技术的全新算法原理，它的提出对于人工智能
领域具有重大意义。
本文将对5race原理的背景、原理和应用进行介绍，以便更好
地理解和应用这一算法原理。
首先，我们需要了解5race原理的背景。
随着人工智能技术的不断发展，传统
的算法已经不能满足日益增长的数据处理需求。
因此，人工智能领域急需一种全新的算法原理，以应对大规模数据处理和复杂任务求解的挑战。
正是在这样的背景下，5race原理应运而生。
那么，5race原理究竟是什么？简而言之，5race原理是一种基于多元化数据处
理和深度学习技术的算法原理。
它通过对大规模数据进行分析和学习，能够更加精准地理解和处理复杂的任务和问题。
与传统的算法相比，5race原理在处理大数据
和复杂任务时具有更高的效率和准确性。
接下来，我们来看一下5race原理的应用。
由于其高效和准确的特点，5race原
理在许多领域都有着广泛的应用前景。
比如，在医疗领域，它可以帮助医生更好地诊断疾病和制定治疗方案；在金融领域，它可以帮助银行和投资机构进行风险评估和投资决策；在智能制造领域，它可以帮助企业提高生产效率和产品质量。
可以说，5race原理的应用将会深刻改变人们的生活和工作方式。
综上所述，5race原理是一种基于人工智能技术的全新算法原理，它具有高效、准确的特点，并在各个领域都有着广泛的应用前景。
相信随着人工智能技术的不断发展，5race原理将会发挥越来越重要的作用，为人类社会带来更多的便利和进步。
RACE技术的原理和操作
RACE技术的原理和操作RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）技术是一种用于扩增cDNA末端序列的方法，广泛应用于克隆和鉴定未知基因的研究中。
下面将详细介绍RACE技术的原理和操作步骤。
一、原理：RACE技术是通过逆转录反应将RNA转录成cDNA，然后利用特殊的引物设计，通过聚合酶链式反应（PCR）进行扩增，最终得到所需的cDNA末端序列。
RACE技术主要包括5'-RACE和3'-RACE两个步骤。
5'-RACE：用于扩增未知序列的5'端操作步骤：1.提取总RNA，并进行逆转录反应，得到第一链cDNA。
2.利用聚dT载体和逆转录酶进行第二链合成。
3.利用内源引物（如具有较高表达的基因的已知序列）和外源引物A 进行PCR扩增。
4. 应用Nested PCR进行第二轮扩增，内嵌引物（nested primer）会在前一轮PCR反应的基础上扩增更长的特异性产物。
5.得到扩增的特异性产物后，纯化PCR产物并进行测序分析，获得5'端的未知序列。
3'-RACE：用于扩增未知序列的3'端操作步骤：1.提取总RNA，并进行反转录反应。
2.利用特异性引物（如基因的已知3'端序列）和逆转录酶进行第一轮PCR扩增。
3. 利用Nested PCR进行第二轮扩增，内嵌引物（nested primer）会在前一轮PCR反应的基础上扩增更长的特异性产物。
4.纯化PCR产物并进行测序分析，获得3'端的未知序列。
二、操作：1. 提取总RNA：一般使用RNAiso Plus试剂或类似试剂从细胞或组织中提取总RNA。
2. 逆转录反应：利用逆转录酶将RNA转录成cDNA。
逆转录酶一般有M-MLV逆转录酶和SuperScript III等。
3.第一链合成：利用聚克隆酶将逆转录的cDNA合成第一链，即得到第一链cDNA。
4.第二链合成：利用特殊的引物和逆转录酶将第一链cDNA合成第二链。
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RACE试剂盒中末端转移的是多聚C尾，这样在反转录合 成第一链时5’端多聚G的二级结构影响反转录的彻底进行，
会产生提前终止反应。我们改进了加尾的程序，用TdT酶 加上多聚T尾，结果降低了反转录的难度，两个基因最终 均获得了完整的5’末端。
RACE引物的设计
在实验过程中总结如下经验：
1.
2.
引物不能设计在保守区简并引物区。
2. RACE的引物
即使3个酶促反应均平稳顺利进行，但结果也通常会出现 一些非特异性产物或非全长的产物背景。
存在的问题及解决办法
1.
反转录
RNA的质量
有高质量的不被核糖核酸酶降解的RNA，RNA的完整性 至关重要。一旦RNA降解就要重新提取，免得后期工作 没有结果既浪费时间又浪费试剂，给试验带来麻烦。
各引物之间尽量不要重叠，由于引物的重叠，会引起很 严重的引物多联体现象，不能准确地扩增。 尽量多设计引物，以减少PCR扩增的非特异性。也可以 考虑在PCR鉴定阳性克隆的时候另设计一对引物，便于 鉴定的正确性。
3.
PCR扩增及产物的克隆
PCR扩增存在的问题
一方面可能未找到最佳扩增条件而导致产生许多不确定的、不需要的 产物，有时甚至没有目的产物； 另一方面，可能根本就没有扩增到任何产物。
增加PCR扩增效率，提高扩增产物的特异性解决方法：
1.
热启动PCR(hotstartPCR)，长距离PCR(long distance PCR)和降落 PCR(touch－down PCR)以及加大反应体系中Mg2+的浓度提高扩增效 率。
2.
利用抑制PCR(suppression PCR)技术改进RACE程序，可大大减少非特 异性的线性化扩增。
M
1
2
3
4
5
6
M
M：2000marker； 1：3GSP441+AUAP； 3：3552+AUAP； 5：3IPCR2+AUAP 2,4,6：AUAP；
图 多轮PCR扩增的电泳结果 Fig. Results of PCR amplified
图 5’RACE、3’RACE克隆的片段与GsAP2序列拼接的结果 Fig. The contig result of 5’RACE 、3’RACE and GsAP2 by software
单引物的线性扩增问题：坚持做单引物对照，并减少引物的浓度。
3.
M
1
2
3
M
4
5
M
6
7
8
9
M：2000marker； 1：5GSP11+NAP； 2：NAP； 3：GSP 11； 4：5GSP22+AUAP； 5,7,9：AUAP； 6,8：5GSP44+ AUAP
图 多轮PCR扩增的电泳结果 Fig. Results of PCR amplified
为Frohman在1985年首次报道。
3’RACE 和5’RACE
3’RACE原理示意图
5’ 3’ 5’ 3’ AAP GI … IG 5’ 3’CC…CC AUAP 5’ 3’ 3’ GI … IG CC…CC AUAP
mRNA
GSP
(A)n
(A)n 5’
5’
GSP2
3’ 5’ nested GSP 5’ nested GSP
TdT加尾反应及其替代反应
首先在反转录后，一些无用的核苷酸和过多的cDNA引
物的存在会干涉加尾的成功，降低目的cDNA加尾的有 效性，从而导致第二链cDNA合成效率的降低。 其次，TdT反应难以控制，所有的cDNA都被加尾，而不 管是否是全长cDNA，这样产生的非全长的cDNA将和全
长产物一起完成PCR反应，而且会优先扩增，不能保证
快速扩增cDNA末端 ——RACE
RACE的基本概念 不同厂家RACE试剂盒的介绍 RACE技术的关键环节
存在的问题及解决办法
RACE的基本概念
cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术是基于PCR技术由已知的部分
cDNA序列来获得完整cDNA序列的一种方法，
M 1
2
M 3
4
M 5
6
A：The first PCR； BC：Nest PCR M：2000marker； 1：5GSP11+NAP； 2：NAP； 3：5GSP332+AUAP； 4,6：AUAP； 5：5GSP333+AUAP
A
B
C
图 多轮PCR扩增的电泳结果 Fig. Results of PCR amplified
不同厂家RACE试剂盒的介绍
Invitrogen GeneRacerTM Kit
BD SMARTTM RACE
RACE技术的关键环节
RACE 技术的关键环节有2个：
1. 3个连续的酶促反应 （逆转录、TdT加尾、PCR扩增）
TdT加尾反应是用脱氧核糖核酸末端转移酶（TDT）催
化，它可将dT依次加在寡核苷酸的3’端
在PCR反应中有足够的全长产物能被探测。
TdT加尾反应及其替代反应
第三，若目的cDNA中含有与多聚尾互补的几个核苷酸同 聚区，则在合成第二条cDNA链时引物的延伸会从内部序 列而不是末端序列开始，产生非全长的第二条，采用PCR介导的
连接反应，在一定程度上避免了以上的问题。
2.
反转录提前终止
模板中有特殊的二级结构，反转录提前终止。通过提高 反转录的温度，加大反转录的反应体系以及反转录过程 中一直保持已变性的RNA模板处于50℃以上，避免以解
开二级结构的RNA再恢复原来的结构，以达到5’末端。
提供一种改进的反转录方法
1. 2.
3. 4.
5. 6.
7.
在RNase-free的0.2 mL Eppendorf 管中加入以下成分： Oligo(dT)(0.5μg) 1μL Total RNA(4~5μg) 3μL DEPC-H2O To 25 μL 混匀，70℃保温10min；50℃保温5min；稍微离心一下。 在混合物中，依次加入以下成份： 10X SSⅡ（ SSⅢ ）Buffer 5.0μL 10mM dNTP mix 1.0μL 0.1M DTT 2.0μL RNase Inhibitor(40U/μL) 1.0μL DEPC-H2O To 24 μL 轻轻混合，在50℃保温5min后，在50℃下将3号管中的混合成分移入 2号管中。 每个反应加入1μL SuperScriptTM Ⅱ（SSⅢ ），轻轻混匀，50℃反应 50min。 70℃放置15min以终止反应。 -20℃保存。