[精品]RACE原理及实验步骤知识交流
race实验原理
race实验原理
race实验原理是一种常用的实验方法，用于研究物质的分布在不同介质中的速
度差异。
其原理基于物质在不同介质中传播速度不同的特性。
在race实验中，通常采用两种或多种不同介质，例如液体和气体、固体和液体等。
实验过程中，将待研究的物质同时引入不同的介质中，并观察物质在不同介质中的行为变化。
物质在不同介质中的速度差异主要由两个因素决定：介质的性质和物质与介质
之间的相互作用力。
首先，介质的性质对物质的传播速度有重要影响。
不同介质具有不同的密度、
黏度、温度等特性，这些特性会影响物质的传播速度。
例如，在液体中传播的物质通常受到介质的黏性阻力，传播速度较慢；而在气体中传播的物质受到的阻力较小，传播速度相对较快。
其次，物质与介质之间的相互作用力也会影响物质的传播速度。
不同物质与不
同介质之间的相互作用力具有差异，这会导致传播速度的不同。
例如，水分子在水中会受到水分子之间的相互作用力的影响，传播速度较慢；而在空气中，水分子之间的相互作用力较小，传播速度较快。
通过观察物质在不同介质中的行为变化，可以定量或定性地研究物质在不同介
质中的传播速度差异。
这对于理解物质的传播特性、研究物质在不同介质中的性质变化等有着重要意义。
总之，race实验原理是一种通过观察物质在不同介质中的传播速度差异来研究
物质特性的实验方法。
其原理基于介质的性质和物质与介质之间的相互作用力所导致的传播速度的差异。
通过该实验方法，可以深入了解物质在不同介质中的行为，为进一步的应用和研究提供基础。
RACE技术原理
RACE的基本概念 不同厂家RACE试剂盒的介绍 RACE技术的关键环节
存在的问题及解决办法
RACE的基本概念
cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术是基于PCR技术由已知的部分
cDNA序列来获得完整cDNA序列的一种方法，
在PCR反应中有足够的全长产物能被探测。
TdT加尾反应及其替代反应
第三，若目的cDNA中含有与多聚尾互补的几个核苷酸同 聚区，则在合成第二条cDNA链时引物的延伸会从内部序 列而不是末端序列开始，产生非全长的第二条cDNA链。
我们所使用Invitron公司的RACE试剂盒，采用PCR介导的
连接反应，在一定程度上避免了以上的问题。
RACE试剂盒中末端转移的是多聚C尾，这样在反转录合 成第一链时5’端多聚G的二级结构影响反转录的彻底进行，
会产生提前终止反应。我们改进了加尾的程序，用TdT酶 加上多聚T尾，结果降低了反转录的难度，两个基因最终 均获得了完整的5’末端。
RACE引物的设计
在实验过程中总结如下经验：
1.
2.
引物不能设计在保守区简并引物区。
2.
反转录提前终止
模板中有特殊的二级结构，反转录提前终止。通过提高 反转录的温度，加大反转录的反应体系以及反转录过程 中一直保持已变性的RNA模板处于50℃以上，避免以解
开二级结构的RNA再恢复原来的结构，以达到5’末端。
提供一种改进的反转录方法
1. 2.
3. 4.
5. 6.
7.
在RNase-free的0.2 mL Eppendorf 管中加入以下成分： Oligo(dT)(0.5μg) 1μL Total RNA(4~5μg) 3μL DEPC-H2O To 25 μL 混匀，70℃保温10min；50℃保温5min；稍微离心一下。 在混合物中，依次加入以下成份： 10X SSⅡ（ SSⅢ ）Buffer 5.0μL 10mM dNTP mix 1.0μL 0.1M DTT 2.0μL RNase Inhibitor(40U/μL) 1.0μL DEPC-H2O To 24 μL 轻轻混合，在50℃保温5min后，在50℃下将3号管中的混合成分移入 2号管中。 每个反应加入1μL SuperScriptTM Ⅱ（SSⅢ ），轻轻混匀，50℃反应 50min。 70℃放置15min以终止反应。 -20℃保存。
RACE技术及其在植物基因研究中的应用
这些方法在编辑基因方面具有高准确性和高效率，可以实现对基因组的精细 操作。然而，基因编辑技术也存在一定的局限性，如潜在的脱靶效应、伦理问题 和技术成本高等。
二、药用植物中的应用
基因编辑技术在药用植物领域的应用主要涉及中药材、西药和保健品等方面。
1、中药材
中药材是中医临床用药的主要来源，但其品质和产量的不稳定一直是制约中 医临床疗效的瓶颈。基因编辑技术可以通过精准改良中药材的基因组，提高药材 的疗效和产量。例如，利用CRISPR-Cas9技术对人参基因组进行编辑，成功实现 了提高人参皂苷含量的目标。
RACE技术在植物基因研究中的 应用
1、基因功能分析
RACE技术可以帮助研究人员克隆植物基因，并通过同源重组、转基因等方法 研究基因的功能。例如，通过克隆植物抗病基因，利用RACE技术可以确定该基因 的全序列，进而研究其作用机制和抗病机理。
2、基因表达研究
RACE技术可以用于研究植物在不同生长发育阶段或不同环境条件下的基因表 达模式。研究人员可以通过比较不同样本中基因的表达水平，了解该基因在植物 生长和发育过程中的作用。
RACE技术及其在植物基因研究 中的应用0Fra bibliotek 引言目录
02 RACE技术概述
03 RACE技术在植物基因 研究中的应用
04 RACE技术的实验案例
05 结论
06 参考内容
引言
随着生物技术的不断发展，研究人员越来越多的使用各种新技术来研究植物 基因的特性和功能。其中，RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）技术 是一种广泛使用的基因克隆和表达分析方法。本次演示将介绍RACE技术的原理、 流程及其实验步骤，并探讨该技术在植物基因研究中的应用及优势和不足。
RACE技术的原理和操作
RACE(rapid-amplificationofcDNAends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。
cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。
完整的cDNA序列可以通过文库的筛选和末端克隆技术获得。
末端克隆技术是20世纪80年代发展起来的。
编辑本段优点与筛库法相比较，有许多方面的优点1）此方法是通过PCR技术实现的，无须建立cDNA文库，可以在很短的时间内获得有利用价值的信息。
2）节约了实验所花费的经费和时间。
3）只要引物设计正确，在初级产物的基础上可以获得大量的感兴趣基因的全长。
实验室现有的RACE试剂盒的简介RACE是一种从一个相同的cDNA模板进行5‘和3‘末端快速克隆的方法。
此方法会产生较少的错误条带。
此过程中使用的酶混合物非常适合长链PCR。
用此方法的要求是必须知道至少23－28个核苷酸序列信息，以此来设计5’末端和3‘末端RACE反应的基因特异性引物（GSPs）。
编辑本段引物的设计基因特异性引物（GSPs）应该是：23－28nt50－70％GCTm值≥65度，Tm值≥70度可以获得好的结果需要实验者根据已有的基因序列设计5‘和3‘RACE 反应的基因特异性引物（GSP1和GSP2).由于两个引物的存在，PCR的产物是特异性的。
编辑本段反应中涉及到的一些事项cDNA的合成起始于polyA+RNA。
如果使用其它的基因组DNA或总RNA，背景会很高。
RACEPCR的效率还取决于总的mRNA中目的mRNA的量和不同的引物有不同的退火和延伸温度。
进行5‘和3’RACEPCR的时候应该使用热启动。
4中给出了所有引物的相互关系。
重叠引物的设计会对全长的产生有帮助。
另外，重叠的引物可以为PCR 反应提供一个对照。
并不是绝对的要利用设计的引物产生重叠片段。
物GSP中的GC含量要在50－70％之间。
这样可以使用降落PCR。
避免使用自身互补性的引物序列，否则会产生回折和形成分子内氢键。
RACE原理及实验步骤
3'-RACE 基本原理
3’ RACE流程图
先利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结 合位点，以Oligo（dT）30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV 作用下，反转录合成标准第一链cDNA.利用该反转录酶具有 的末端转移酶活性，在反转录达到第一链的5'末端时自动加 上3-5个（dC）残基，退火后（dC）残基与含有SMART寡核苷 酸序列Oliogo（dG）通用接头引物配对后，转换为以SMART 序列为模板继续延伸而连上通用接头。然后用一个含有部分 接头序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作为上 游引物，用一个基因特异引物2（GSP 2 genespecific primer，GSP）作为下游引物，以SMART第一链cDNA为模板， 进行PCR循环，把目的基因5'末端的cDNA片段扩增出来。最 终，从2个有相互重叠序列的3'/ 5'-RACE产物中获得全长 cDNA，或者通过分析RACE产物的3'和5'端序列，合成相应引 物扩增出全长cDNA。
Southern blotting：
Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位 的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切 酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链 DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者 紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交， 用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含 量。
• 明显增加BD SMART RACE扩增的特异性 • 降落PCR的退火温度符合首次PCR循环的Tm 高于通用 引物的Tm 。 • 退火温度在随后降低到与通用引物相配合的程度，引起 特异性基因模版的指数和高效率的扩增。 • 当引物的T m>70°C时建议使用降落循环程序。
race实验原理
race实验原理摘要：一、实验背景及目的二、实验原理简介1.种族内竞争与合作2.种族间竞争与合作3.实验设计及方法三、实验结果与分析1.实验数据概述2.种族内竞争与合作对实验结果的影响3.种族间竞争与合作对实验结果的影响四、实验启示与应用1.人类社会中的竞争与合作现象2.企业竞争与合作案例分析3.对现实生活的启示正文：一、实验背景及目的在人类社会中，竞争与合作无处不在。
为了更好地理解这一现象，科学家们设计了race实验。
该实验旨在探讨种族内和种族间竞争与合作对实验结果的影响。
通过这个实验，我们可以了解到竞争与合作在人类社会中的重要作用。
二、实验原理简介1.种族内竞争与合作：在种族内，个体之间既存在竞争关系，也存在合作关系。
竞争关系主要体现在资源争夺上，而合作关系则体现在共同解决问题、分享利益等方面。
2.种族间竞争与合作：不同种族之间的个体同样存在竞争与合作关系。
种族间竞争可能导致资源分配不均，合作则有助于实现共赢。
3.实验设计及方法：实验采用随机分组的方法，将参与者分为不同种族。
在每个种族内，参与者需要完成一系列竞争与合作任务。
任务包括个人利益最大化、团队利益最大化以及混合利益最大化等。
通过观察实验过程中各种现象，研究者分析竞争与合作对实验结果的影响。
三、实验结果与分析1.实验数据概述：实验结果显示，在种族内，竞争与合作并存。
在种族间，竞争与合作现象更加明显。
同时，合作对实验结果具有积极意义，能够提高整体收益。
2.种族内竞争与合作对实验结果的影响：在种族内，竞争与合作的平衡有助于实现个体和团队的利益最大化。
适当的竞争可以激发个体的潜能，提高整体竞争力；合作则有助于资源共享、风险共担，提高团队凝聚力。
3.种族间竞争与合作对实验结果的影响：在种族间，竞争与合作共同影响资源分配。
合理的合作可以使各种族实现共赢，降低资源争夺导致的冲突。
同时，适度竞争有助于激发各种族的潜力，提高整体竞争力。
四、实验启示与应用1.人类社会中的竞争与合作现象：race实验反映了人类社会中的竞争与合作现象。
race实验原理
race实验原理摘要：一、实验背景1.实验目的2.实验意义二、实验原理1.实验基本流程2.实验核心方法3.实验关键参数三、实验应用1.实验领域2.实验实例3.实验成果四、实验展望1.实验局限性2.实验改进方向3.实验未来前景正文：一、实验背景随着科技的快速发展，人工智能、大数据等领域的研究日益深入。
在这些领域中，有一种名为“race”的实验，它旨在通过模拟人类认知过程，探究人类思维的奥秘。
本文将为您详细介绍race 实验的原理。
二、实验原理1.实验基本流程race 实验是一种基于认知神经科学、计算机科学等多个学科的实验方法。
实验过程中，参与者需要完成一系列与认知能力相关的任务，如记忆、决策等。
通过记录参与者在实验中的脑电波、眼动等生理信号，研究者可以分析人类认知过程的神经机制。
2.实验核心方法实验核心方法为脑电波信号的分析。
脑电波信号可以反映大脑神经活动的实时状态，通过分析这些信号，研究者可以了解参与者在进行不同认知任务时的神经活动特点。
此外，眼动信号的分析也是实验的重要部分，它可以反映参与者的注意力和视觉搜索策略。
3.实验关键参数实验关键参数包括实验任务的设计、实验环境的设置以及实验数据的分析方法。
任务设计需要充分考虑人类认知过程的特点，以保证实验的有效性；实验环境的设置要尽量模拟现实场景，以减少外部因素对实验结果的影响；数据分析方法需要结合实验目的，选择合适的统计和建模技术。
三、实验应用1.实验领域race 实验广泛应用于心理学、神经科学、人工智能等领域，为研究人类认知过程提供了有力的工具。
2.实验实例以心理学为例，研究者可以通过race 实验探究人类记忆、决策等认知过程的神经机制。
在神经科学领域，实验可以帮助研究者了解大脑不同区域的功能和相互联系。
在人工智能领域，实验可以为机器学习、自然语言处理等领域的研究提供启示。
3.实验成果通过race 实验，研究者们取得了一系列重要成果，如揭示了人类认知过程的神经机制、提出了新的学习算法等。
race扩增原理
race扩增原理Race扩增原理Race扩增是一种常用的基因扩增技术，广泛应用于分子生物学、遗传学和生物医学研究领域。
它是通过DNA聚合酶在模板DNA上的连续合成过程，使得DNA片段在特定的温度条件下反复复制，从而实现DNA的扩增。
Race扩增是基于聚合酶链反应（PCR）技术的改进，PCR是一种通过酶催化链式反应来扩增特定DNA片段的方法。
而Race扩增则是针对某个已知DNA片段的末端序列未知的情况下，通过一系列特定的引物设计和PCR反应来扩增该DNA片段的未知序列，从而获得该DNA片段的完整序列。
Race扩增的基本原理是利用已知序列的引物和一系列特定的引物设计来扩增目标DNA片段的未知序列。
其步骤如下：1. 通过已知序列设计外向引物（3'末端向外）和反向引物（5'末端向外），并合成引物。
2. 利用外向引物进行PCR扩增，得到目标DNA片段的一个部分序列。
3. 通过已得到的部分序列设计内向引物（在已知序列的3'末端内部），并合成引物。
4. 利用内向引物进行PCR扩增，得到目标DNA片段的另一个部分序列。
5. 通过已得到的两个部分序列设计新的外向引物和反向引物，继续PCR扩增，直到得到目标DNA片段的完整序列。
Race扩增的关键在于引物设计。
对于未知序列的DNA片段，可以通过已知序列的末端部分设计引物，从而扩增未知序列。
由于PCR 反应的高度特异性，只有与引物序列完全匹配的DNA片段才能被扩增，因此引物的设计必须准确。
Race扩增还可以结合其他技术来增加扩增效率和准确性。
例如，可以利用聚合酶链反应实验中的链延伸反应（anchored PCR）来进行Race扩增，通过在反向引物的3'末端添加一个特定的序列，从而增加PCR的特异性和扩增效率。
此外，还可以利用引物的嵌合反应（nested PCR）来进行Race扩增，通过两对引物的连续扩增，进一步提高PCR的特异性和扩增效率。
RACE不用试剂盒
5'race 现在的通用方法是根据CLONTECH SMART RACE kit 改进而来的方法那个试剂盒很坑爹的，价格高的离谱。
其实在实验过程中完全没有必要买试剂盒，下面我来告诉你怎么玩。
原理：5'race的关键目的就是要克隆出已知片段上游的未知片段。
方法就是在反转录的过程中人为的在5'端加上接头，然后利用接头上面的特异序列作为引物和你已知序列上面的一段引物扩增cDNA片段，就能得到5'未知序列片段。
方法：在反转录的过程中加入5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'这个接头引物。
在反转录之后这段序列就会位于整个mRNA反转录出来的cDNA的最前端。
为什么？？MMLV反转录酶有一种特性就是在反转录到序列末端的时候加上三个C来终止这个反转录过程，利用这添加上去的CCC和上面给你的那个接头引物的GGG碱基配对，MMLV就会以上面那个引物为模版将反转录出来的第一链继续延伸出接头引物的互补链，从而形成一个带接头的cDNA 5'-末端。
这个就是RACE的核心原理。
具体不明白的看看这篇说明书就好，GOOGLE一搜，结果满天飞的，我就不给你传文件了。
SMART™ RACE cDNA Amplification Kit User Manual你肯定有一下问题1.上面给你的那个接头引物能不能换掉。
上面那个引物看起来好像很普通，其实里面大有玄机，如果你用DNAMAN软件预测一下引物的二级结构就可以发现，这个引物自身能形成一个类似老虎钳子的形状，而且仅仅只有GGG三个核苷酸暴露在外面用来和MMLV添加出来CCC配对。
所以这个引物的设计是非常巧妙的。
不建议你更换，而且你换掉以后自己要在你实验动物的基因组中验证是否存在相同或互补序列，这也是另一个问题。
2.是不是用普通的方法合成该接头引物即可。
答曰，可以。
clontech公司提供的试剂盒里面的这段引物其实并非全是单链DNA，用于配对的那关键的GGG用的是RNA单链，为什么？原因是DNA-RNA的结合能力强于DNA-DNA。
RACE原理及实验步骤
cDNA 第 一链的合成
PCR 阳性对 照
cDNA末 端快速扩
增
SMART技术
原理：在合成cDNA的反应中事先加进的3’末端带
Oligo（dG）的SMART引物，由于逆转录酶以mRNA 为模板合成cDNA，在到达mRNA的5’末端时碰到真核 mRNA特有的“帽子结构”，即甲基化的G时会连续在合成 的cDNA末端加上几个（dC），SMART引物的Oligo （dG）与合成cDNA末端突出的几个C配对后形成cDNA 的延伸模板，逆转录酶会自动转换模板，以SMART引物 作为延伸模板继续延伸cDNA单链直到引物的末端，这样 得到的所有cDNA单链的一端有含Oligo（dT）的起始引 物序列，另一端有已知的SMART引物序列，合成第二链 后可以利用通用引物进行扩增。由于有5’帽子结构的 mRNA才能利用这个反应得到能扩增的cDNA，因此扩 增得到的cDNA就是全长cDNA。
3'-RACE 基本原理
3’ RACE流程图
先利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结 合位点，以Oligo（dT）30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV 作用下，反转录合成标准第一链cDNA.利用该反转录酶具有 的末端转移酶活性，在反转录达到第一链的5'末端时自动加 上3-5个（dC）残基，退火后（dC）残基与含有SMART寡核苷 酸序列Oliogo（dG）通用接头引物配对后，转换为以SMART 序列为模板继续延伸而连上通用接头。然后用一个含有部分 接头序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作为上 游引物，用一个基因特异引物2（GSP 2 genespecific primer，GSP）作为下游引物，以SMART第一链cDNA为模板， 进行PCR循环，把目的基因5'末端的cDNA片段扩增出来。最 终，从2个有相互重叠序列的3'/ 5'-RACE产物中获得全长 cDNA，或者通过分析RACE产物的3'和5'端序列，合成相应引 物扩增出全长cDNA。
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二、引物设计
A
B
C
引物 序列
引物在基 因上的位
置
降落 PCR
D
巢式 引物
A. 引物序列
特异引物(GSPs) 应当： • 23–28 个核苷酸 • GC含量为 50–70% • Tm 大于或等于65°C，如果Tm >70°C可获得最好的结果 (可
四、 3'-RACE、5'-RACE基本原理
race定义：cDNA末端快速扩增技
术（rapid amplification of cDNA ends， RACE）是一种基于PCR从低丰度的转录本中 快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法，以 其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的 重视。
RACE
The relationship of gene-specific primers to the cDNA template.
B. 引物在基因上的位置
• BD SMART RACE Kit得到的扩增产物大于6.5 kb • 对引物加以筛选，使5'-和3'-RACE 产物达到2 kb
C. 降落PCR
经典的RACE技术是Frohman等（1988）发明的 一项技术，主要通过RT-PCR技术由已知部分 cDNA序列来得到完整的cDNA5'和3'端，包括单 边PCR和锚定PCR。该技术提出以来经过不断发展 和完善，克服了早期技术步骤多、时间长、特异性 差的缺点。
对传统RACE技术的改进主要是引物设计及RTPCR技术的改进：
利用锁定引物（（lock docking primer）合成第一
First-strand cDNA 合成
5'- & 3'-RACE PCR
另备物品
下列试剂需另外准备：
由于 SMART™ RACE cDNA Amplification Kit 没有PCR polymerase，可以使用以下物品：
Advantage 2 PCR Kit (Cat.Nos.639206/639207)
中文名称：巢式引物 英文名称：nested primer 定义：为巢式聚合酶链反应所设计的引物，第二
组引物是在第一组引物扩增得到的产物序列范围 内设计的。
三、总RNA 和Poly A+ RNA的制备
A. 总的预 防
B. RNA 分离
C. RNA 分析
RNA 分析
推荐使用变性甲醛琼脂糖电泳检测RNA 样品。哺乳动物的总 RNA 展示为两条4.5 和1.9 kb的带，分别对应28S 和 18S 核糖体RNA，它们之间的亮度比率约为1–2:1。哺 乳动物的Poly A+ RNA 会产生0.5–12 kb 的弥散带， 亮度较核糖体RNA带弱。
产物 鉴定
cDNA 第 一链的合成
PCR 阳性对 照
cDNA末 端快速扩
增
SMART技术
原理：在合成cDNA的反应中事先加进的3’末端带
Oligo（dG）的SMART引物，由于逆转录酶以mRNA 为模板合成cDNA，在到达mRNA的5’末端时碰到真核 mRNA特有的“帽子结构”，即甲基化的G时会连续在合 成的cDNA末端加上几个（dC），SMART引物的 Oligo（dG）与合成cDNA末端突出的几个C配对后形 成cDNA的延伸模板，逆转录酶会自动转换模板，以 SMART引物作为延伸模板继续延伸cDNA单链直到引物 的末端，这样得到的所有cDNA单链的一端有含Oligo（ dT）的起始引物序列，另一端有已知的SMART引物序 列，合成第二链后可以利用通用引物进行扩增。由于有5’ 帽子结构的mRNA才能利用这个反应得到能扩增的 cDNA，因此扩增得到的cDNA就是全长cDNA。
பைடு நூலகம்
一、成分及另备物品
保存条件： 1. Control Human PlacentalTotal RNA
和 BD SMART II A Oligonucleotide在– 70°C下保存。 2. NucleoTrap Gel Extraction Kit 室温下 保存。 3. 其余试剂–20°C下保存。
• 明显增加BD SMART RACE扩增的特异性 • 降落PCR的退火温度符合首次PCR循环的Tm 高于通用 引物的Tm 。 • 退火温度在随后降低到与通用引物相配合的程度，引起 特异性基因模版的指数和高效率的扩增。 • 当引物的T m>70°C时建议使用降落循环程序。
D. 巢式引物
在首次试验时，不要使用巢式PCR。混合的通用引物（ UPM）和基因特异引物（GSP）通常能得到较好的低的非 特异性背景的RACE产物。但是，巢式特异引物可以作为探 针在鉴定RACE产物的Southern blotting中使用。 此 外巢式PCR在使用特异引物进行5'- or 3'-RACE存在高 背景或高非特异性扩增时有必要使用。在巢式PCR中，使 用外侧引物进行一个初步的扩增，如果扩增产物模糊不清 ，可以使用内部引物重新扩增初步产物的一部分。BD SMART RACE 指南包括了可选的步骤，指明了巢式引物 能够被使用的地方。本试剂盒提供的通用巢式引物A 可用 于5'- and 3'-RACE。按照上述指南可以设计巢式特异引 物。巢式引物与外侧特异引物尽可能不重叠，如果因序列 有限而必须重叠，其内部引物的3'末端的序列也要尽可能 唯一。
BD SMART™ RACE cDNA Amplification Kit
User Manual
Table of Contents
成分及 另备物
品
引物设 计
Poly A+ RNA 和总RNA 的
制备
3'-RACE和 5'-RACE的 基本原理
RACE
使用降落PCR)。 • 至少需要两个特异引物才能进行完整的BD SMART RACE：即
用于5'-RACE PCR的反义引物和用于3'-RACE PCR的正义引物。如果 只进行5'- 或3'-RACE则只需一个特异引物。引物长度在23–28个核苷 酸，长于30个核苷酸没有优势。模版、引物及RACE产物下图所示。