动物细胞培养(通用)
动物细胞培养(“细胞”相关文档)共10张
传代培养的绍鸭成纤维细胞形态（DAPI染色）
正常细胞
凋亡细胞
分裂中期细胞
• 汇合后挑取少许细胞，染色，观察拍照。
倒置显微镜下观察拍照。 原代培养的绍鸭成纤维细胞，相差显微镜照片 5cm摆放后倒置培养瓶，加少量营养液，保持湿润，37 ℃培养，2hr后翻转培养瓶，添营养液继续培养。 02 %EDTA ）消化2-3分钟，倾去大部分消化液，留少量消化液浸润细胞。 单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。 细胞株：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 加适量营养液吹打分散，补加营养液后，1：2分装培养。 02 %EDTA ）消化2-3分钟，倾去大部分消化液，留少量消化液浸润细胞。 定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，3-5天后更换培养液。 倒置显微镜下观察拍照。 原代培养 ：培养直接来自动物机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或传代培养。 双蒸水、Hank’s液、0. 单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。 实验九 动物细胞培养 维持液： DMEM培养基（含5%小牛血清、1万单位/ml青、链霉素）。 酒精棉球消毒鸭蛋，剥出鸭胚，去头、翅、爪和内脏， 加Hank’s 液，剪碎为0.
湿润，37 ℃培养，2hr后翻转培养瓶，添营养液继续培养。 • 3. 定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，3-5天后更换培养
液。 • 4 .倒置显微镜下观察拍照。
• 5.单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。
五、传代培养
• 当培养细胞接近汇合成片时，倾去培养液。
1万单位/ml青、链霉素）。 • 维持液： DMEM培养基（含5%小牛血清、
动物细胞培养
动物细胞培养简介动物细胞培养是一种在体外控制环境下培养和繁殖动物细胞的技术，广泛应用于生物医学研究、药物筛选、疾病治疗等领域。
动物细胞培养是通过提供适当的养分和生长条件，使细胞可以在无体内环境的情况下生长和繁殖。
培养基选择动物细胞培养的首要任务是提供合适的培养基，以满足细胞的生长和繁殖需求。
培养基通常由基础培养液和补充物组成。
基础培养液提供细胞生长所需的基本营养物质，如糖、氨基酸、维生素等。
补充物则包括生长因子、激素、抗生素等，以促进细胞生长和抑制细菌的污染。
常用的培养基有DMEM（Dulbecco最小培养基）、RPMI （Roswell Park红斯威尔纸培养基）、MEM（最小必需培养基）等。
选择适合特定细胞类型和研究目的的培养基对细胞的生长和研究结果至关重要。
细胞分离和传代在动物细胞培养过程中，细胞通常需要经过分离和传代的步骤，以保持细胞的健康状态并扩散细胞数量。
细胞分离细胞分离是将细胞从组织中分离出来的过程。
常用的细胞分离方法包括胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法、机械剪切法等。
分离得到的细胞可以直接用于培养，也可以进行进一步的传代。
细胞传代细胞传代是将已培养细胞进行分离并移植到新的培养皿中的过程，以维持细胞的持续生长。
传代可以通过机械分离、胶原酶等酶处理或稀释离心等方法进行。
传代过程中需要注意的是细胞的密度和周期，以避免细胞过度生长或死亡。
培养条件在动物细胞培养过程中，提供适当的培养条件对细胞的生长和繁殖至关重要。
温度和湿度动物细胞通常在37℃下生长，因此培养箱和孵育器需要保持恒定的温度。
同时，湿度的控制也是必要的，以避免细胞脱水。
CO2和pH值大多数动物细胞需要CO2的存在来维持酸碱平衡。
因此，在培养过程中，需要添加适量的CO2到培养箱中，以维持合适的pH值。
一般来说，细胞培养需要在5% CO2下进行，pH范围为7.2-7.4。
搅拌和通气为了促进细胞的生长和分裂，培养基需要定期搅拌以保持养分的均匀分布。
动物细胞培养基本方法
该操作方式在动物细胞培养和药品生产 中被广泛采用，它的优点是操作简便，生 产效率高，可长期进行生产，反复收获产 品，而且可使细胞密度和产品产量一直保 持在较高的水平。
动物细胞培养基本方法
3、灌流式操作 当细胞和培养基一起加入反应器后，在细
胞增长和产物形成过程中，不断地将部分条件 培养基取出，同时不断地补充新鲜培养基。
常用的消化液有胰蛋白酶、乙二胺四乙酸、胰酶 －柠檬酸盐、胰酶－EDTA、胶原酶、链霉蛋白酶、 木瓜蛋白酶等。
动物细胞培养基本方法
二 细胞计数 1 血球计数板计数 2 自动细胞计数器计数 3 结晶紫染色细胞核计数法 4 MTT染色计数法
动物细胞培养基本方法
动物细胞培养基本方法
动物细胞培养基本方法
1、培养过程需检测的物化参数 直接在线检出 取样离线检测 检测后计算
2、主要参数的检测和控制方法
动物细胞培养基本方法
2、主要参数的检测和控制方法
①温度 ②pH a在培养初期，偏碱，控制进二氧化碳量 b当细胞密度提高后控制NaHCO3的量 ③溶氧 ④搅拌 ⑤进出液流量
动物细胞培养基本方法
第七节 动物细胞制药的前 景与展望
动物细胞培养基本方法
动物细胞培养基本方法
3、贴壁-悬浮培养，或称假悬浮培养
将悬浮培养和贴壁培养相结合的方法。 ①微载体培养：细胞贴附在载体表面。创造大
的贴附面积，供细胞贴附生长增殖；载体体 积小，比重较轻，在轻度搅拌下即可携带细 胞自由地悬浮在培养基内，充分发挥悬浮培 养的一切优点。 载体：葡聚糖、聚苯乙烯、胶原等。
动物细胞培养基本方法
另一种是先将细胞和培养基加入反应器， 待细胞生长至一定密度后，向反应器内加 入诱导剂或病毒等，经一段时间作用后， 将反应物取出。
动物细胞培养
动物细胞培养
动物细胞培养是一种重要的生物技术手段，广泛应用于医药、生物学研究、食
品工业等领域。
通过细胞培养，可以获取大量同质的细胞群体，为疾病治疗、新药研发提供重要的支持。
动物细胞培养的原理
动物细胞培养是将动物组织或细胞在人工培养基中进行维持、增殖、传代等过程。
培养基通常包括营养物质、生长因子、激素等成分，提供细胞生长所需的营养和环境。
动物细胞培养的步骤
1.细胞来源：从动物体内收集组织样本，获得原代细胞。
2.细胞分离：通过消化酶等手段将组织分离成单个细胞。
3.传代培养：将分离的细胞在培养基中培养，定期传代以增殖细胞数
量。
4.检测与分析：对培养的细胞进行检测、分析，确保其健康状态。
动物细胞培养的应用
1.生物医学研究：细胞培养在癌症、遗传疾病等方面的研究中发挥重
要作用。
2.药物研发：通过细胞培养可以进行药物筛选、毒性测试等工作。
3.食品工业：利用细胞培养技术可以生产细胞培养肉等食品。
动物细胞培养的发展
随着生物技术的不断发展，动物细胞培养技术也在不断创新和提升。
新的培养
基配方、生长因子的发现以及工程技术的应用，使得动物细胞培养在医学和生物学领域有着广阔的应用前景。
动物细胞培养作为一种重要的生物技术手段，将继续在各个领域发挥重要作用，为人类健康和科学研究进步做出贡献。
动物细胞培养130913PPT课件
（2）适宜的温度和PH值
36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4
保证细胞顺利的 生长增殖
（3）必要的气体条件
O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
维持培养液的PH
CO2 培养箱-模拟人体环境
• 维持二 氧化碳 水平（510％）
• 湿度
• 温度 （37℃）
大面积皮肤烧 伤或烫伤？
（三）动物细胞培养
1、概念： 从动物机体中取出相关组织，将它分散成单 个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生 长和繁殖。
2、原理： 细胞增殖 （有丝分裂）
3、过程：
Q2 选什么组织？
动物胚胎或幼龄动物的组织、器 官，它们的细胞分化程度低，增 殖能力强，分裂旺盛，容易培养。
变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限 制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。
写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powerful You Will Be
（1）大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体）
资料1：
干扰素是动物细胞分泌产生的蛋白质，具有抗病毒 等多种生物学活性。 β干扰素是人的成纤维细胞产 生的，一个成纤维细胞产生的β干扰素量非常低。 现要获得大量的β干扰素。如何解决？
（2）培养的动物细胞可以用于检测有毒物质， 判断某种物质的毒性
信息2：
2005年4月，美国一家非官方癌症研究中心发布信 息说，“高露洁”牙膏中含有的抗菌化学物质三 氯生可能是致癌物质。公众对此表示怀疑。如何 检验该药物的毒性？
(通用版)高二生物专题04动物细胞工程暑假作业(含解析)
专题04 动物细胞工程【基础回顾】1.动物细胞培养——动物细胞工程技术的基础(1)动物细胞的培养过程(2)培养条件①无菌、无毒的环境：对和所有培养用具进行无菌处理，添加，定期更换培养液以清除。
②营养：除正常的有机和无机营养外，加入等一些天然成分。
③适宜的温度和pH：温度为℃(哺乳动物)，pH为。
④气体环境：含95%空气加的混合气体，其中后者的作用是。
(3)应用：生物制品的生产、检测有毒物质、医学研究。
2.动物体细胞核移植技术和克隆动物(1)动物体细胞核移植技术的过程(2)原理：。
(3)结果：。
(4)应用：①加速家畜进程，促进优良畜群繁育。
②保护。
③生产医用蛋白。
④作为异种移植的供体。
⑤用于组织器官的移植。
3.动物细胞融合和单克隆抗体的制备(1)动物细胞融合①原理：。
②融合方法：聚乙二醇(PEG)、、电激等。
③意义：突破了的局限，使成为可能，也为制造开辟了新途径。
(2)单克隆抗体①制备过程②优点：特异性强、，可大量制备。
③用途：作为；用于治疗疾病和。
【想一想】例1.如图为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中B、E两点表示经筛选、分装后继续培养。
下列判断错误的是A．B点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养B．接触抑制现象主要发生在AB段和DE段C．分瓶后的每个培养瓶中的细胞群称为一个克隆D．E点后的细胞大多数具有异倍体核型，从而可连续传代例2.核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径(如图)。
正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。
现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的杂交瘤细胞。
关于筛选原理的叙述，正确的是A．免疫的B细胞及其互相融合细胞因全合成途径被A阻断而在HAT培养基上不能增殖B．骨髓瘤细胞及其互相融合细胞因无法进行上述两个途径而在HAT培养基上不能增殖C．杂交瘤细胞因为可以进行上述两个途径所以能在HAT培养基上大量增殖D．HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞既能大量增殖又能产生高纯度的目标抗体例3.下图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程，有关叙述不正确的是A．图中实验小鼠注射的甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原B．利用聚乙二醇、灭活的病毒和电激等方法均可诱导细胞融合获得乙C．用特定的选择培养基对乙筛选，融合细胞均能增殖，未融合细胞均不能增殖D．丙需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选后可获得大量能分泌所需抗体的丁【练一练】1.抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两个合成途径的研究。
动物细胞培养方法
动物细胞培养方法
动物细胞培养是一种常用的实验手段，广泛应用于细胞生物学、药物研发、生物医学研究等领域。
以下是一般性的动物细胞培养方法：
1.细胞系的选择：选择合适的动物细胞系是动物细胞培养的第一步。
细胞系的选择要考虑细胞类型、来源、生长特性和用途等因素。
2.细胞培养基的准备：准备适用于所选细胞系的培养基。
培养基包括基本培养基和补充物，如生长因子、抗生素等。
不同的细胞系需要不同的培养基。
3.细胞的解冻：从冷冻保存的细胞库中取出细胞，进行解冻。
解冻过程要尽可能快速，以减少细胞对冷冻损伤的敏感性。
4.细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要将其传代，以维持细胞的生长状态。
传代过程包括细胞的分离、计数和重新接种。
5.细胞培养条件的控制：控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。
通常细胞培养箱会提供稳定的培养环境。
6.细胞的观察和检测：定期观察细胞的形态、生长状态，并进行必要的细胞检测，如细胞计数、细胞周期分析等。
7.防止细胞污染：严格遵循无菌操作规程，防止培养物受到细菌、真菌、支原体等的污染。
使用无菌操作室和经过无菌处理的实验器材。
8.制备细胞冻存物：定期制备细胞冻存物，以备将来使用。
冻存物的制备需要使用适当的冻存液和合适的冷冻保存温度。
9.特殊操作：针对具体实验需求，可能需要进行细胞转染、感染、药物处理等特殊操作。
在进行动物细胞培养时，实验者需具备丰富的培养经验和相关技能，同时需按照实验室的标准操作规程进行操作，以确保实验的准确
性和可重复性。
动物细胞工程的主要技术(细胞培养)
有关概念
细胞贴壁： 培养液中分散的动物细胞，置于适宜的条件下， 能够分裂，这些细胞贴附在培养瓶上，成为细胞贴 壁生长。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就 会停止分裂增殖的现象。
相关问题
1.为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官和组织 做动物细胞培养材料？ 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛 2.为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 分散成单个细胞便于物质交换，使营养物质吸 收及代谢废物排出更容易，利于细胞生长蛋白质， 易被胰蛋白酶催化分解，从而使细胞分离开。
相关问题
4.培养的细胞为何贴壁生长？ 大多数组织细胞不适应悬浮生长，它们必须在固定 的表面生长和分裂 5.动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培 养成生物个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发 育成新的动物个体
二 动物体细胞克隆技术
1.概念：是将动物的一个细胞的细胞核移 入一个已经去掉细胞核的卵细胞中，使其 重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的 胚胎始终发育为动物个体。
有关概念
细胞株：传代培养的细胞一般传至10代左右 细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞 存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生 长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变， 使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细 胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞株传代在 40~50代内，遗传物质没有改变；细胞系无限传 代下去，遗传物质改变。
专题2
细胞工程
概念
动 物 细 胞 工 程 常用 技术
应用细胞学的方法，按照人们的 需要和预定的设计，有目的、有 计划地保存、改变动物细胞和创 造新的动物细胞，进而培育成新 的物种或者品种的一门科学技术。 动物细胞培养（基础） 动物细胞融合 单克隆抗体 动物体细胞克隆技术
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细胞污染处理
病毒：由于病毒寄生生存，爆发后尽快 和正常细胞隔离，灭菌后丢弃处理，相 对来说容易处理，但是对操作者威胁较 大。
细胞污染处理
真菌（霉菌和酵母菌）：目前没有好的 抑制方法，包括现在常用的两性霉素， 一旦污染容易反复爆发，因为孢子很难 杀灭。
细胞污染处理
支原体：支原体污染后，因为它们不会 使细胞死亡可以与细胞长期共存，培养 基一般不发生浑浊，细胞无明显变化， 外观上给人以正常感觉，实则细胞已经 受到多方面潜在影响，如引起细胞变形， 影响DNA合成，抑制细胞生长等。污染 细胞应灭菌后丢弃处理.
其他:
密封, 防止上冻, 时间尽量短
细胞污染及处理
微生物: 细菌、真菌（霉菌和酵菌）、 病毒、 支原体 化学物质 细胞交叉污染
细胞状态观测与检测
时刻观察细胞形态,密度 观察培养基颜色，透明度 培养温度，CO2浓度 无菌检测 病毒检测 内毒素检测 支原体检测
细胞污染途径
抗生素:5-10倍常用量 霉菌:25ug/ml制霉菌素 或 10ug/ml 酮 康唑 加温 支原体: 410C ,5-10h 动物体内接种
细胞污染处理
细菌：细菌污染后，培养基1-2 天就会 变色，应迅速将污染细胞与其它细胞系 隔离，灭菌后丢弃， 还要用实验室消毒 剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA 过 滤器。
空气 器材 操作 血清 组织样本
细胞污染的影响
培养基浑浊 细胞生长缓慢 细胞活性较低 细胞病变或死亡
污染细胞抢救
抗生素:5-10倍常用量 霉菌:25ug/ml制霉菌素 或 10ug/ml 酮 康唑 加温 支原体: 410C ,5-10h 动物体内接种
污染细胞抢救
合成培养基
液体 干粉
血清
FBS FCS 新生牛血清 人自体 AB 灭活：560c，30min
细胞计数
计数板： 充分混匀,
计上不计下， 计左不计右， 每个象限不少于50个细胞， 多次计数取平均值。
细胞的运输
细胞株:
最好370C, 瓶内留有空气, 防震防压, 时间尽量短
合成培养基
合成培养基: 根据细胞生长的需要按一定配方制成的 粉状物质。其主要成分是氨基酸、维生 素、碳水化合物、无机离子和其他辅助 物质。它的酸碱度和渗透压与活体内细 胞外液相似。
合成培养基
合成培养基（化学成分清楚） 合成培养基是用化学成分明确的试剂配制的培养基， 组分稳定，可大量供应。合成培养基发展至今已有几 十种，大部分已商品化。由于细胞种类和培养条件不 同，适宜的合成培养基也不同，在动物细胞培养中最 常用培养基7－8种，如BME、MEM、DMEM、IMEM、 HAM F12、PRMI1640、M199等。 由于天然培养基的一些成分仍然不清楚，不能用 已知的化学成分代替，因此必需在合成培养基中添加5 ％~10％的小牛血清。在杂交瘤培养中，要求更严格， 添加浓度更高，一般为10％～20％的胎牛血清。血清 的加入对培养非常有效，但对培养产物的分离纯化和 检测会组成一定的不便。
四、培养基的分类
无血清培养基 无血清培养基（serum free medium, SFM）是全部用已知成分组 配的不加血清的合成培养基，通常在含有细胞所需营养和贴壁因 子的基础培养基中加入适宜的促细胞生长因子，保证细胞良好生 长，是最适合于制药生产的培养基。它提高了培养的质量，避免 了使用血清带来的麻烦：血清中某些细胞毒性成分，血清中存在 病毒、真菌、支原体等微生物污染的危险，血清中蛋白对产物蛋 白测定的干扰。产品纯化容易，组分稳定，可大量配制。已有各 种无血清培养基上市。 一些合成培养液可以作为无血清培养液的基础，如CMRL 1060、TC199、IMDM、McCoy 5a、Ham’s F10和F12。已有其他 商品化的无血清培养液，如淋巴细胞无血清培养基、内皮细胞无 血清培养基、杂交瘤细胞无血清培养基、巨噬细胞无血清培养基 等。 无血清培养基通常添加生长附加成分，如激素与生长因子、 低分子营养成分和转铁蛋白等，主要包括胰岛素、孕酮、硒酸钠、 腐胺、转铁蛋白。对于大规模生产用的无血清培养基，往往成分 不完全清楚，但简单而且低成本。
谢谢!
细胞传代
消化液：胰蛋白酶（含或不含EDTA）， 吹打 传代比例:视生长情况，防止细胞生长过 密
细胞冻存和复苏
冻存液：DMSO 冻存条件：-80；液氮 原则：缓冻速溶
细胞生长条件
无污染 无毒 营养: 细胞培养的培养基必须供给活细胞所需要的全 部盐类、氨基酸、脂肪、糖类、维生素,生长因子等。 温度:35-37 0c 渗透压:人:290mmol/L Ph: 7.2～7.4 CO2:5%
培养瓶的选择
透气盖 不透气盖 瓶底包被的基质 吹打时避免碰到瓶底细胞生长一侧
培养基
天然培养基 合成培养基 无血清培养基
天然培养基
天然培养基（小牛血清、胚胎液）: 是最早期人们采用的细胞培养基，直接取自于动物组 织提取液或体液作为培养基，如血浆凝块、血清、淋 巴液、胚胎浸出液等。营养价值高，但成分复杂，而 且不稳定，来源也受到限制，不宜大量培养和生产使 用。水解乳蛋白和胶原是两种较好的天然培养基，富 含氨基酸。 血清是天然培养基中最有效和最常用的培养基，有些 成分功能明确，另外一些成分功能不明确。血清的来 源有胎牛血清、新生牛或成牛血清、马血清、鸡血清、 羊血清及人血清，最广泛应用的为胎牛血清和新生牛 血清。血清和水解酪蛋白应用于许多细胞系和原代及 传代细胞培养。
动物细胞培养相关知识
哺乳细胞种类
原代培养： 传代培养：细胞系和细胞株 细胞系（cell line） ：初代培养物开始第 一次传代培养后的细胞 细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克 隆形成法从原代培养物或细胞系中获得 具有特殊性质或标志物的培养物称为细 胞株
细胞种类
贴壁细胞：贴壁,伸展,接触抑制,密度限 制 悬浮细胞: 血液白细胞