葡萄糖转运载体测定方法
葡萄糖含量的测定方法
葡萄糖含量的测定方法摘要：一、葡萄糖含量测定的意义二、葡萄糖含量测定方法概述1.氧化还原法2.酶法3.高效液相色谱法4.红外光谱法5.荧光光谱法三、各种测定方法的优缺点比较四、实际应用中的注意事项正文：一、葡萄糖含量测定的意义葡萄糖是生物体内重要的能量来源，其在生物体内的含量对于生物体的正常生理功能具有重要意义。
葡萄糖含量的测定对于糖尿病的诊断、治疗和监测具有重要意义。
此外，葡萄糖含量测定在食品、医药等领域也具有广泛的应用。
二、葡萄糖含量测定方法概述目前，葡萄糖含量的测定方法主要有氧化还原法、酶法、高效液相色谱法、红外光谱法和荧光光谱法等。
1.氧化还原法：通过测定葡萄糖在氧化还原反应中的电子转移，从而确定其含量。
该方法操作简便，但精度较低，适用于初步筛查。
2.酶法：利用葡萄糖氧化酶或葡萄糖酸化酶与葡萄糖反应生成物的水解酶活性变化来测定葡萄糖含量。
该方法灵敏度高，特异性强，但操作复杂，对酶的活性要求较高。
3.高效液相色谱法：通过测定葡萄糖与其他成分在液相色谱柱上的保留时间差异，从而实现定量分析。
该方法准确度高，但仪器设备较昂贵，对样品处理要求较高。
4.红外光谱法：利用葡萄糖在红外光谱上的特征吸收峰，通过谱图分析测定其含量。
该方法快速、简便，但对样品纯度要求较高。
5.荧光光谱法：通过测定葡萄糖在荧光光谱上的发射强度，从而确定其含量。
该方法灵敏度高，但仪器设备较昂贵，对样品处理要求较高。
三、各种测定方法的优缺点比较氧化还原法：优点——操作简便，成本低；缺点——精度较低，适用于初步筛查。
酶法：优点——灵敏度高，特异性强；缺点——操作复杂，对酶的活性要求较高。
高效液相色谱法：优点——准确度高，定量性强；缺点——仪器设备较昂贵，对样品处理要求较高。
红外光谱法：优点——快速、简便；缺点——对样品纯度要求较高。
荧光光谱法：优点——灵敏度高；缺点——仪器设备较昂贵，对样品处理要求较高。
四、实际应用中的注意事项1.选择合适的测定方法：根据实际应用场景和需求，选择具有较高准确度和灵敏度的测定方法。
肠道上皮主要葡萄糖转运载体及其作用机制
在 细 菌 和 植 物 ，有 关 哺 乳 动 物 小 肠 上 皮 ＳＷＥＥＴｓ 转 运 载体 的 结 构 和 功 能 研 究 较 少 ，其 可 能 主 要 转 运 单糖 和二 糖 。
葡 萄糖 是 生 命 活 动 的 主 要 能 源 物 质 ，它 在 肠 道的消化吸收是其利用的关键 。葡萄糖在肠 道上 皮 的 转运 主要 依赖 于 ＳＧＬＴ１，但 在进 食 后 ，肠 腔 葡 萄 糖 浓 度急 剧 升 高 ，ＳＧＬＴ１达最 大转 运 速 度 ，高 转 运 能 力 的 ＧＬＵＴ２会 短 时 间 内募 集 到 肠 道 上 皮 细 胞 顶 膜 参 与 葡 萄 糖 吸 收 。最 新 研 究 表 明 ，ＧＬＵＴ２ 募集 到顶 膜 的调 控 过 程 依 赖 于 蛋 白激 酶 Ｅｌ３Ⅱ （ＰＫＣ［３Ⅱ）。机 体 通 过 这 一 适 应 机 制 使 葡 萄 糖 的 吸 收 最 大 化 。 高 浓 度 的 葡 萄 糖 通 过 ＳＧＬＴ１和 ＧＬＵＴ２的吸 收还 能 作 为一 种 信 号途 径 调 节 胃肠 激 素的释放 。葡萄糖 的转运是其利用 的一个 限速 步 骤 ，也 是 一个 受 高 度 调 控 的过 程 ，很 多 影 响 葡 萄 糖 吸 收 的 因素都 是 通 过 影 响葡 萄 糖 转 运 载 体 的基 因 转 录 水平 、ｍＲＮＡ 稳定 性 和蛋 白水 平 发 挥 作 用 的 。 本文将从 ＳＧＬＴ１和 ＧＬＵＴ２的结构 、功 能 和影 响 其 表 达 的 因素 这 几 个 方 面 综 述 葡 萄 糖 在 肠 道 上 皮 的吸 收 机制 。
表达的因素 ，旨在从分子层 面揭示葡萄糖在肠道 的吸收以及体 内葡萄糖平衡 的调控。
关键 词 ： 葡萄糖 ；转 运 载 体 ；肠 道 上 皮 ；Ｎａ 依 赖 性 葡 萄 糖 转 运 载 体 １；易 化 葡 萄糖 转 运 载 体 ２；
葡萄糖载体蛋白的发现
葡萄糖载体蛋白的发现葡萄糖是一种常见的糖类物质，也是人体所需的主要能源。
葡萄糖在人体内通过代谢产生能量，供给身体各器官进行正常运作。
而葡萄糖载体蛋白则是葡萄糖转运到细胞内的关键蛋白质，它能够将葡萄糖转运到细胞膜上的葡萄糖转运载体上，从而实现葡萄糖的吸收和利用。
葡萄糖载体蛋白的发现源于对葡萄糖转运机制的研究。
科学家们通过对葡萄糖转运机制的研究，逐渐发现了葡萄糖载体蛋白在葡萄糖转运中的关键作用。
在此基础上，科学家们设计并合成了一系列葡萄糖载体蛋白，从而为研究葡萄糖转运提供了重要的理论基础。
通过对葡萄糖转运机制的研究，科学家们发现了多种葡萄糖载体蛋白。
其中，最为重要的是葡萄糖转运蛋白GLUT1、GLUT2和GLUT4。
这三种蛋白质在葡萄糖转运过程中发挥着重要作用，它们能够将葡萄糖转运到细胞膜上的葡萄糖转运载体上。
此外，科学家们还发现了其他几种重要的葡萄糖载体蛋白，如GLUT5、GLUT6和GLUT7等。
通过研究葡萄糖转运机制，科学家们发现了葡萄糖载体蛋白在葡萄糖转运中的关键作用。
他们进一步研究了葡萄糖转运蛋白的分子机制，以及葡萄糖转运对人体的生理功能。
通过这些研究，科学家们揭示了葡萄糖转运蛋白在葡萄糖转运中的作用，并为开发新型葡萄糖转运蛋白药物奠定了重要的理论基础。
近年来，随着医学技术的不断发展，科学家们对葡萄糖转运蛋白的研究也取得了重要的进展。
研究人员们通过合成和修饰葡萄糖转运蛋白，探索了葡萄糖转运蛋白在治疗糖尿病等疾病中的作用。
此外，研究人员还发现了葡萄糖转运蛋白的异常表达与疾病之间的关系，为疾病的诊断和治疗提供了重要的理论基础。
总之，葡萄糖载体蛋白的发现和研究成果的取得，为研究葡萄糖转运机制及其在疾病治疗中的作用奠定了重要的理论基础。
而且，随着研究的深入，葡萄糖载体蛋白的研究成果还将为医学技术的发展和疾病的治疗带来更多的希望。
葡萄糖的测定方法
葡萄糖的测定方法葡萄糖是一种重要的碳水化合物，广泛存在于植物和动物组织中。
测定葡萄糖的含量对于食品加工、生物医学研究以及糖尿病的诊断和治疗等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的测定葡萄糖含量的方法。
一、离子色谱法（Ion Chromatography, IC）离子色谱法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法。
该方法利用离子交换柱，将样品中的葡萄糖分离出来，然后通过检测器进行测定。
离子色谱法具有灵敏度高、分离效果好、操作简便等特点，广泛应用于食品、饮料、药品等领域。
二、高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）高效液相色谱法是一种常用的分离和测定葡萄糖的方法。
该方法利用高效液相色谱仪，将样品中的葡萄糖分离出来，然后通过紫外检测器进行测定。
高效液相色谱法具有分离效果好、准确度高、灵敏度高等特点，广泛应用于食品、药品、环境监测等领域。
三、酶法测定法酶法测定法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法。
该方法利用葡萄糖氧化酶将样品中的葡萄糖氧化成葡萄糖酸，然后通过测定酸碱度的变化来确定葡萄糖的含量。
酶法测定法具有操作简便、准确度高、灵敏度高等特点，广泛应用于食品、生物医学研究等领域。
四、光度法测定法光度法测定法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法。
该方法利用葡萄糖与某些试剂反应生成有色产物，然后通过测定产物的吸光度来确定葡萄糖的含量。
光度法测定法具有操作简便、准确度高、灵敏度高等特点，广泛应用于食品、药品、环境监测等领域。
五、红外光谱法红外光谱法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法。
该方法利用葡萄糖的特征吸收峰在红外光谱图上的位置和强度来确定葡萄糖的含量。
红外光谱法具有非破坏性、操作简便、准确度高等特点，广泛应用于食品、药品、农业等领域。
测定葡萄糖的方法有离子色谱法、高效液相色谱法、酶法测定法、光度法测定法和红外光谱法等。
每种方法都有其特点和适用范围，根据具体的需求选择合适的方法进行测定。
葡萄糖测定标准操作规程
葡萄糖测定标准操作规程1.检验原理：（葡萄糖氧化酶法）葡萄糖氧化酶（GOD ）利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。
过氧化物酶（POD ）在色原性氧受体4-氨基安替比啉（4-AA ）和对羟基苯甲酸钠去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量成正比。
D-葡萄糖+2O +O H 2−−→−GOD 葡萄糖酸+22O H222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD 红色醌类物质+4O H 2 2.试剂组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清或用草酸钾-氟化钠抗凝的血浆。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释：6.1在给定的样本/试剂比例和条件测定时，本试剂线性范围可达25mmol/L。
样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本，最大稀释倍数为10.6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×187.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在500nm处吸光度大于0.200时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：R1：无色或淡红色透明液体，无悬浮物及沉淀；R2无色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.2008.4线性范围：试剂的线性区间为[2.2-25]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.2-4.7]mmol/L区间内，线性绝对偏差不超过±10U/L；（4.7-25）mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：使用参考物质测定时，当浓度≤4.16mmol/L，实测值与标识值偏差应不超过±0.833mmol/L，当浓度＞4.16mmol/L，实测值与标识值偏差应在±20%范围内。
广东省“六校联盟”2024届高三下学期联考生物试题含解析
广东省“六校联盟”2024届高三下学期联考生物试题注意事项1．考生要认真填写考场号和座位序号。
2．试题所有答案必须填涂或书写在答题卡上，在试卷上作答无效。
第一部分必须用2B 铅笔作答；第二部分必须用黑色字迹的签字笔作答。
3．考试结束后，考生须将试卷和答题卡放在桌面上，待监考员收回。
一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。
每小题只有一个选项符合题目要求）1．下图是水稻花粉母细胞进行分裂不同时期的显微照片，据此判断下列说法错误的是：（）A．图A到D是减数分裂I，图E和F为减数分裂IIB．有丝分裂会发生图B和图D所示的基因重组C．有丝分裂会发生图E到F过程中染色体数目的加倍D．水稻花粉母细胞通过如图分裂方式形成配子2．某种家鸡的羽毛颜色由两对等位基因A、a和B、b控制。
当基因B存在时，基因A的作用不能显示出来。
现有两组该品种的白羽家鸡杂交，F1都为白羽，让F1家鸡雌雄个体自由交配，F2中白羽：有色羽＝13：3。
下列叙述错误的是（）A．两对基因A、a和B、b的遗传遵循自由组合定律B．白羽鸡的基因型共有7种C．F1白羽鸡测交后代的表现型及比例为白羽：有色羽＝1：1D．F2白羽鸡中能稳定遗传的个体占3/133．下列关于原核生物和真核生物的叙述，正确的是A．原核生物细胞无线粒体，不能进行有氧呼吸B．真核生物细胞只进行有丝分裂，原核生物细胞只进行无丝分裂C．真核生物以DNA为遗传物质，部分原核生物以RNA为遗传物质D．真核生物细胞具有细胞膜系统(生物膜系统)，有利于细胞代谢有序进行4．葡萄糖转运载体（GLUT）有多个成员，其中对胰岛素敏感的是GLUT4,其作用机理如下图所示。
GLUT1～3几乎分布于全身所有组织细胞，它们的生理功能不受胰岛素的影响，其生理意义在于维持细胞对葡萄糖的基础转运量。
下列分析错误的是A．如果体内产生蛋白M抗体，可能会引发糖尿病B．如果信号转导障碍，可以加速含GLUT4的囊泡与细胞膜的融合C．GLUT1～3转运的葡萄糖，可保证细胞生命活动的基本能量需要D．当胰岛素与蛋白M结合之后，可以提高细胞对葡萄糖的转运能力5．下列关于探究酵母菌细胞呼吸方式实验的叙述正确的是A．选择酵母菌为实验材料是因为酵母菌是自养、兼性厌氧型微生物，易于培养B．通过设置有氧(对照组）和无氧(实验组）的对照，易于判断酵母菌的呼吸方式C．将进气管、排气管与锥形瓶连接后需要进行气密性检查，确保不漏气D．实验的因变量是澄清石灰水是否变浑浊和加入酸性重铬酸钾溶液后样液的颜色变化6．如图为生态系统能量流动示意图，下列叙述错误的是（）A．流经该生态系统的总能量是图中的N2B．N3是生产者用于生长和繁殖的能量C．蜣螂所利用的能量N6属于初级消费者同化的能量D．第一和第二营养级之间的能量传递效率为N5/N2×100%二、综合题：本大题共4小题7．（9分）人的原发性血色病由一对等位基因(H、h)控制，男性只要含有H基因就表现为患病，而女性只有在H基因纯合时才表现为患病；人的先天性夜盲症由另一对等位基因(B、b)控制，且两对基因独立遗传。
测定葡萄糖含量的方法
测定葡萄糖含量的方法测定葡萄糖含量的方法有多种，下面将介绍几种常用的方法。
1. 离子色谱法：离子色谱法是目前常用的测定葡萄糖含量的方法之一。
该方法基于葡萄糖可被离子交换柱吸附，并通过洗脱来分离和测定样品中的葡萄糖。
该方法具有灵敏、准确、稳定等优点。
2. 光度法：光度法是一种简单、快速测定葡萄糖含量的方法。
该方法基于葡萄糖溶液可与酚类试剂发生氧化反应，并具有比色反应。
通过测定样品反应后的吸光度，并与标准曲线比对，可以确定样品中的葡萄糖含量。
3. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC法是一种测定葡萄糖含量的常用方法。
该方法通过将样品中的葡萄糖分离，再通过检测器进行检测和定量。
该方法具有高灵敏度、高准确性、高分辨率等优点，被广泛应用于食品、饮料、药品等行业。
4. 酶法：酶法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法。
该方法利用特定的酶（例如葡萄糖氧化酶）催化样品中的葡萄糖与氧发生反应，生成过氧化氢。
通过测定生成的过氧化氢数量，可以确定样品中的葡萄糖含量。
该方法具有高特异性、高灵敏度等特点。
5. 毛细管电泳法（CE）：毛细管电泳法是一种快速、准确的测定葡萄糖含量的方法。
该方法利用毛细管电泳技术，将样品中的葡萄糖分离，并通过检测器进行检测和定量。
该方法具有分离能力强、重复性好等优点。
同时需要注意的是，根据实际需要以及样品的性质，选择合适的测定方法进行葡萄糖含量的测定。
为了提高测定的准确性和可靠性，需重复测量，并进行平均处理。
此外，在实验过程中还需要注意样品的处理、实验条件的控制等因素，确保测定结果的准确性。
葡萄糖转运载体的生理意义
葡萄糖转运载体的生理意义葡萄糖转运载体（Glucose Transporters，简称GLUT）是一类存在于细胞膜上的膜蛋白，它们在细胞内外之间媒介葡萄糖的运输。
葡萄糖是生物体内主要的能量来源之一，不仅在细胞内进行能量代谢，还参与多种生理过程。
葡萄糖转运载体的存在和功能对于维持机体的正常生理功能具有重要的意义。
葡萄糖转运载体在细胞膜上的表达和调控是一个复杂的过程。
不同类型的细胞和组织中表达不同类型的葡萄糖转运载体，这种差异性表达使得不同组织对葡萄糖的利用能力各异。
例如，肌肉和脂肪组织主要表达GLUT4，而肠道上皮细胞主要表达GLUT2。
这种组织特异性的表达模式保证了葡萄糖能够被有效地运输到需要的组织和细胞中。
葡萄糖转运载体的主要生理意义之一是维持血糖平衡。
血糖水平的调节对于机体的正常生理功能至关重要。
当血糖浓度升高时，胰岛素的释放促使葡萄糖转运载体GLUT4从细胞内转移到细胞膜上，增加葡萄糖的进入，从而降低血糖水平。
相反，当血糖浓度降低时，胰高血糖素的释放抑制GLUT4的转运，减少葡萄糖的进入，以维持血糖水平的稳定。
葡萄糖转运载体在细胞内外葡萄糖平衡的调节中也发挥着重要的作用。
细胞内的能量代谢需要葡萄糖的供应，而细胞外的葡萄糖可以通过葡萄糖转运载体进入细胞内，满足细胞的能量需求。
同时，葡萄糖转运载体也在维持细胞内外浓度梯度方面起到重要的作用。
细胞内的葡萄糖浓度相对较低，葡萄糖转运载体通过主动转运的方式将葡萄糖从细胞外运输到细胞内，维持了细胞内外葡萄糖浓度的平衡。
除了在能量代谢和血糖调节中的作用外，葡萄糖转运载体还参与其他生理过程。
例如，葡萄糖转运载体在脑部的表达和调控对于脑细胞的能量供应至关重要。
脑细胞对葡萄糖的依赖性很高，葡萄糖转运载体通过将葡萄糖从血液中运输到脑细胞中，维持了脑部的正常功能。
此外，葡萄糖转运载体还参与胚胎发育、免疫应答、肌肉收缩等多个生理过程。
葡萄糖转运载体在维持血糖平衡、能量代谢以及多个生理过程中具有重要的生理意义。
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一.刷状缘膜囊的制备：（方法参照Kessler(1978),Shirazi-Beechey(1991)和Bauer （2001b）修正）所有操作过程需在冰上或者4℃下进行。
将冷冻样品进行称重，并在冷烧杯中用缓冲剂（100mM 甘露醇，2mM HEPES/Tris 缓冲剂，pH7.1）解冻。
解冻后，在冷的有盖培养皿中用剪刀和镊子将组织样剪为1cm小块，将小块组织样重放入冷烧杯，然后将组织块悬液振动2次(设定为No.80)，每次一分钟。
用布氏漏斗过滤振动后溶液，溶液转入250mL量筒，记录滤液体积后转移至400mL烧杯中。
将烧杯放置冰上，搅拌溶液。
制作多个平行样以备进一步分析，这些处理后样品为匀浆液。
已知浓度的氯化镁溶液加入到匀浆液中以达到10mM的终浓度，温和搅拌溶液20分钟，然后进行两种离心：5min，3000*g；30min，30000*g。
利用20-G型检测针对剩余的颗粒进行再悬浮，缓冲液为100mM甘露醇+20mM HEPES/Tris，pH7.5。
悬浮颗粒在组织研磨机（Potter-Elvehjam; Teflon/glass）中均匀搅拌十次后在30000*g离心30min。
最终颗粒用23-G型检测针在500μL缓冲液中（300mM甘露醇，0.1mM硫酸镁，20mM HEPES/Tris，pH7.5）再次悬浮。
悬浮颗粒（囊泡）由反复流过27-G型检测针10次的溶液制备均匀，避免出现气泡。
将试样等分入冷冻管后-80℃保存。
二.检测利用BSA(牛血清白蛋白)作为匀浆蛋白浓度和囊泡浓度的标准。
麦芽糖酶是刷状缘膜富集度的标记酶，Truner 和Moran（1982）的方法测定麦芽糖酶活，使用25mM磷酸盐缓冲液（pH6.3）和30mM麦芽糖。
释放的葡萄糖通过COBAS FaraⅡ（全自动生化仪）（Roche，Montclair，NJ）测定麦芽糖酶活表达为μmol product/min*mg of protein。
囊泡中麦芽糖酶活的富集（enrichment）表示为囊泡麦芽糖酶活/匀浆麦芽糖酶活。
37℃下将5μL（50μg of protein）的小囊泡置于预热的微量离心管中，预热的培养基中包含100mM硫氰酸钠或硫氰酸钾、99.8mM甘露醇、20mM HEPES/Tris （pH7.5），再加入200μM葡萄糖（1.0μCi【U-14C】-D-glucose）。
加入1mL冰冻终止溶液（150mL氯化钠，250μM根皮苷）3s后葡萄糖吸收被终止。
移取0.9mL上述溶液，迅速通过0.45μm圆形纤维素薄膜。
整个薄膜用终止溶液（5*1mL）清洗。
将薄膜置于20mL 闪烁计数瓶中，瓶中加入12mL scintillation cocktail（Scintisafe Plus 50%LSC Cocktail）。
样品通过Quantasmart软件用于放射性测定（闪仪Tri-Carb 2900TR/SL）。
在Na+和K+存在的前提下，葡萄糖吸收的测定重复五次。
钠依赖性葡萄糖的吸收通过硫氰酸钠孵化值减去硫氰酸钾孵化值得到。
三.免疫印迹囊泡和匀浆液（40µg蛋白/道）在60℃下孵育，然后用7.5%的SDSPAGE分离。
蛋白通过电转移至0.45µm的硝化纤维膜上，用固绿染色法（固绿染色液）使其显现出来（Fisher Scientific, Pittsburgh,PA）。
为了指示刷状缘膜的纯度，连续用探针检测SGLT1，GLUT2和碱性磷酸酶。
薄膜在封闭溶液中（2.3%康乃馨脱脂奶粉溶于30mM Tris碱，300mM NaCl，0.1%（vol/vol）吐温20，pH7.5）封闭1.5h。
将薄膜置于迷你转迹机中，每个样品道的封闭液中放置50µL抗-SGLT1抗体（兔抗兔SGLT1；1：325稀释度；100µg/µL初始浓度），然后在摇床中室温杂交1h（摇床）。
将薄膜浸在含有150µL封闭液迷你转迹机中，再将薄膜从迷你转迹机中取出，在封闭液中继续浸泡5min。
辣根过氧化物酶共轭二抗（驴抗兔免疫球蛋白；1：5000稀释度）作用于每个薄膜样品各1h。
将薄膜在封闭液中浸泡5次，每次5min，再在TBS/Tween20（30mM Tris base，300mM Nacl，0.1%【vol/vol】Tween20，pH7.5）中浸泡10分钟。
对薄膜轻轻点样以除去多余水分，发光底物也通过blotted 处理5分钟。
薄膜轻轻blotted，包在塑料包中，进行曝光，洗照片。
准备下一个探针时，将薄膜在60℃溶液中进行水浴分带（69mM SDS，62mM Tris Base，7.8µL/mL β-巯基乙醇）。
在探测GLUT2之前，需将样品在封闭液中封闭2h（2.5%康乃馨脱脂牛奶混于30mM Tris Base，150mM Nacl，pH7.5）。
薄膜在含有50µL anti-GLUT2抗体（兔抗鼠GLUT2；1:165稀释度；100µg/µL初始浓度）的样品道中杂交1.5h。
杂交完成后，每个薄膜浸泡于迷你转迹机中的240mL封闭液中。
从迷你转迹机中取出后，薄膜在封闭液中浸泡3次，每次5分钟。
辣根过氧化物酶共轭二抗（驴抗兔免疫球蛋白；1:5000稀释度）作用于每个样品各1.2h。
剩余的清洗液和化学发光显影部分和SGLT1探测处理方法一样。
显影后，将薄膜再次分条带。
探测碱性磷酸酶前将样品在封闭液中（2.0%脱脂牛奶混于10mM Tris Base，200mM Nacl，pH7.5）孵育1.5h。
在不同管中薄膜与碱性磷酸酶抗体（小牛抗兔碱性磷酸酶，calf antirabbit；1:10000；10mg/mL初始浓度）杂交1h。
杂交后，将薄膜在封闭液中浸泡5次，每次5min。
辣根过氧化物酶共轭二抗（驴抗兔免疫球蛋白；1:5000稀释度）作用于每个样品各1h。
剩余的清洗液和化学发光显影处理同SGLT1探测相同。
四.相关蛋白丰度及分子大小的测定：扫描放射自显影的数字成像，并利用UN-SCANIT软件程序对光密度进行扫描和评估（方法参照Swanson，2000）。
光密度值作为任意单位被报道，并用信号值减去放射自显影照片的一个平均背景值作为实际值。
用每段肠道的匀浆信号值减去囊泡信号值，就可以得到SGLT1，GLUT2和碱性磷酸酶的富集值。
通过利用十二指肠的光密度值减去各个肠段的光密度值，把用于评估整个肠道SGLT1丰度的光密度值标准化至十二指肠样品。
SGLT1和GLUT2的表观位移权重通过对移动距离和已知Marker的位移进行回归得到，范围为184.5-9.1kDa（用标准点预染的蛋白梯）。
五.数据分析囊泡和匀浆麦芽糖酶活性，麦芽糖酶丰度，SGLT1丰度，葡萄糖吸收值通过利用SAS的GLM程序进行裂区设计得到。
整体设计模型是block（嵌段）和treatment（处理），整个设计的误差是block×treatment。
裂区模型包括肠段和处理×肠段，用残差平方和作为误差。
将肠道样品位置的一次和二次效应进行对照。
肠道长度和重量通过嵌段和处理模型进行分析，模型用残差作为误差值。
SC-9117;SC-2317，wanghcang@闪烁计数瓶：液体闪烁计数所用的闪烁体是液态，即将闪烁体溶解在适当的溶液中，配制成为闪烁液，并将待测放射性物质放在闪烁液中进行测量。
应用液体闪烁计数可达到4π立体角的优越几何测量条件，而且源的自吸收也可以忽略，对于能量低，射程短、易被空气和其它物质吸收的α射线和低能β射线（如3H和14C），有较高的探测效率，液体闪烁计数器是α射线和低能β射线的首选测量仪器。
1.探测机理闪烁液产生光子的过程是，从放射源发出的射线能理，首先被溶剂分子吸收，使溶剂分子激发。
这种激发能量在溶剂内传播时，即传递给闪烁体（溶质），引起闪烁体分子的激发，当闪烁体分子回到基态时就发射出光子，该光子透过透明的闪闪烁液及样品的瓶壁，被光电倍增管的光阴极接收，继而产生光电子并通过光电倍增管的倍增管的位增极放大，然后被阳极接收形成电脉冲，完成了放射能→光能→电能的转换。
2.闪烁液液体闪烁计数系统作用的闪烁溶液，是指闪烁瓶中除放射性被测样品之外的其它组分，主要是有机溶剂和溶质（闪烁体），有时为了样品的制备或提高计数效率的需要，还加入其它添加剂。
⑴溶剂：从β源放射β射线到发射能被肖阴极接收的光妇的这一系列能量转移环节中，能量转移效率是很低的，只有少部分放射能量被利用来发射光子，其中放射源与溶剂之间，能量转移效率大约为5￣10％。
对溶剂的选择，主要视其对闪烁体的溶介度和将放射能转移给闪烁体的效率而定。
如果以一定浓度的闪烁体在甲苯溶液中产生的脉冲高度为100％，那么，凡能产生80％以上的脉冲高度的都定为溶剂，能使脉冲高度随其浓度上升而逐渐减小的称为稀释液，而在浓度很低时就能引起脉冲高度显著下降的叫淬灭剂。
在液体闪烁计数系统中，一个好的溶剂应满足下列条件：①对闪烁体的溶介度高；②对放射源的转移效率高；③对闪烁发射的光子透明度高；④在无论有无助溶剂的帮助下都可以溶介放射性样品；⑤在计数器的工作温度下来结冰；⑥能够形成均相的测量溶液。
一般认为，烷基苯是最好的溶剂，如甲苯，二甲苯。
此外，苯甲醚也是比较好的溶剂。
另外，对于含水量较多的样品，采用1，4－二氧不作为溶剂，因为该有机化合物的极性较大，既能很好地溶介闪烁体又可溶介含水量较多的样品，能改善计数效率，缺点是价格昂贵，冰点高，久放后产生淬灭作用很强的过氧化物，必须经纯化才能使用，并应加入 0.001％的二乙基二硫代氨基甲酸钠或丁基氢氧基甲苯（BHT），以抑制纯化的二氧六环变质。
溶剂在闪烁溶液中约占99％，因此，它的纯度对闪烁液的品质是很大的影响因素。
溶剂中不发光的杂质、氧和水的含量多少，都关系到淬灭程度。
原则上讲，溶剂应具有闪烁纯，即不含或很少含有影响闪烁计数的淬灭成分。
实际证明，“分析纯”试剂可以不经纯化而直接使用。
⑵闪烁液：在液体闪烁计数系统中，闪烁体又称荧光体，是闪烁液的溶质，它的很多，根据其荧光特性及作用，可分为两类，即第一闪烁和第二闪烁体。
①第一闪烁体：（初级闪烁体）：常用的第一闪烁体：对联三苯（TP）：化学结构它是最早使用的闪烁体之一。
它的计数率高，价格比较便宜，但是，在低温或含水溶液介度不高。
2,5－二苯恶唑（PPO）：化学结构它是目前普遍使用的闪烁体，能很好地溶介在常用的溶剂中，在含水的情况下也是如此，在甲苯中的溶介度达200克／升以上。
它的化学性质稳定，价格也较便宜。
但是，它的最大缺点是有明显的浓度淬灭（自身淬灭），即随着PPO在溶剂中的浓度升高，计数效率下降。