溶血性链球菌
溶血性链球菌的检验
预防措施
采取积极的预防措施，如 加强个人卫生、避免接触 可能的感染源等，以降低 感染风险。
病情监测
对患者进行密切监测，及 时发现并处理可能出现的 并发症和异常情况，确保 患者安全。
05
注意事项与建议
实验室安全与防护措施
实验室防护
进行溶血性链球菌检验时，实验 操作区域应保持通风，工作人员 需佩戴一次性手套、实验服、口
溶血性链球菌的检验
2023-11-10
contents
目录
• 简介 • 检验方法 • 检验流程 • 结果分析 • 注意事项与建议
01
简介
溶血性链球菌的定义
• 溶血性链球菌是一种常见的革兰氏阳性菌，其特点是在培养过 程中能产生溶血现象。它是人体常见的病原菌之一，可引起多 种感染疾病，包括扁桃体炎、咽炎、丹毒、猩红热等。
03
检验流程
样品采集与处理
采集咽拭子、血液、尿液等样 品，确保采集方法和操作规范 。
将采集的咽拭子放入适量运输 培养基中，血液和尿液可直接 接种培养基。
在运输培养基中保存样品，尽 快送至实验室进行检测。
细菌分离与培养
将咽拭子接种至5%羊血平板和 巧克力平板上，血液和尿液接种
至巧克力平板上。
在35℃、5%CO2的环境中培养 24-48小时，观察细菌生长情况
04
结果分析
数据分析与解读
实验室数据评估
对实验数据进行分析，包括细 胞形态、生化反应、药敏试验 等，以确定溶血性链球菌的特
性。
数据对比与参照
将实验数据与已知的正常值或参考 范围进行对比，以确定是否存在异 常。
综合分析
结合患者的病史、临床症状和实验 室数据，进行综合分析，以确定病 情的严重程度和可能的治疗方案。
溶血性链球菌
多数菌株在血清肉汤中培养24h易形成透明质酸的荚膜，继 续培养后消失。该菌不形成芽 胞，无鞭毛，易被普通的碱性 染料着色，革兰氏阳性，老龄 培养或被中性粒细胞吞噬后， 转为革兰氏阴性。
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2、培养特征
需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培 养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大 多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。 最适生长温度为37℃，在20-42℃能生长，最适 pH为7.4-7.6。
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溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的 化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发 性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、 猩红热、肾小球肾炎。
溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 袭性酶有关，主要有以下几种： 1、链球菌溶血素：溶血素有O和S两种， O为含有-SH的蛋白质，具有抗原性，S为小分 子多肽，分子量较小，故无抗原性。 2、致热外毒素：曾称红疹毒素或猩红热 毒素，是人类猩红热的主要毒性物质，会引起 局部或全身红疹、发热、疼痛、恶心、呕吐、 周身不适。
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流行病学
溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、 粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接 触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食 品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感 染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。一 般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品： 1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性 炎症时造成食品的污染； 2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽 局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。
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血平板：菌落为灰白色，半透明或不透明， 表面光滑，有乳光，直径约0.5— 0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型 溶血性链球菌周围有2—4mm界限分明、 无色透明的溶血圈。
溶血性链球菌的制备流程
溶血性链球菌的制备流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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1. 菌株选择和培养。
选择溶血性链球菌标准菌株或临床分离株。
溶血性链球菌检验
2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局 部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；
3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。
溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼 吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细 菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。
①急性肾小球肾炎（acute glomerulonephritis）
在咽炎或脓皮病后均可发生，多见于儿童和青少年。 发病机理：Ⅲ型超敏反应；
Ⅱ型超敏反应；
②风湿热（rheumatism，or rheumatosis）
主要在咽炎后有可能发生，临床表现以关节炎、心肌炎为 主。
发病机理：尚未完全清楚，但本病不是链球菌直接侵袭所 致。
(3)血平板上分纯
观察溶血性链球菌在血平板上的菌落特征，灰白色、 半透明或不透明、表面光滑、圆形突起的细小菌落， 以及在菌落周围有2～4mm界限分明、无色透明的溶 血环。
(4) 杆菌肽敏感试验
杆菌肽是一种抗生素，挑取乙型溶血性链球菌液， 涂布于血平板上，用无菌镊子夹取的杆菌肽纸片， 放在上述平板上，置 36±1℃培养18～24小时，如 有抑菌带出现即为阳性。同时用已知阳性菌株作对 照。
根据抗原结构不同分类
根据多糖抗原不同分18群（其中致病菌株多 属于A群）。
各群之间，又按蛋白质抗原不同，分若干 型。如A群—— 分M、T、R…等约100个型
B群——分 4型 C群——分13型
在18个血清型群中,主要致病的血清群
A群：主要对人类致病，如猩红热、丹毒、扁桃腺炎以 及 各种炎症和败血症。对动物致病性不强，但在公共卫生上有 重要性；
溶血性链球菌
1.溶血性链球菌
①GB4789.11-2014 《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》于
2015年05月01日实施，代替GB/T 4789.11-2003 《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》。
注：根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其溶血性质分为三类，α-溶血性链球菌，也称甲型溶血，此类细菌致病力不强，多为条件致病菌。
在人类呼吸道及肠道中有α型溶血链球菌正常寄生，但有时也可引起亚急性心内膜炎等症。
β-溶血性链球菌，这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强，常引起人类和动物的多种疾病。
具体用途是用于研究和质量控制。
γ-溶血链球菌也称为丙型或不溶血性链球菌，该菌无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起感染。
②选作项目：链激酶试验：搜索了广东环凯/青岛海博/北京陆桥均没有发现“草酸钾血浆”或者链激酶实验套装在售。
③生化鉴定：搜索了广东环凯/青岛海博/北京陆桥仅在北京陆桥发现“溶血性链球菌荧光定量PCR检测试剂盒“
2.根据GB4789.35-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》可进行双歧杆菌计数嗜热链球菌鉴别乳杆菌鉴别如果对标准理解没有错误的情况下，应该问题不大。
3.若根据GB4789.34-2012 进行双歧杆菌的鉴定，需要气相色谱，这个仪器是微生物检验科所不具备的。
4.总之，从实验条件上，药品检验实验室是否可以用于保健食品的检测，尚不明确；从人员看，微生物检验科实验人员均没有上述检验项目的检验经验。
从检测标准看，除自学外，微生物检验科检验人员均没有相关标准的学习经历。
从仪器设备材料看，溶血性链球菌检验缺少相关试剂及仪器。
细菌性溶血性链球菌感染如何预防
细菌性溶血性链球菌感染如何预防在我们的日常生活中，细菌性溶血性链球菌是一种常见的致病菌，它可能引发多种疾病，给我们的健康带来威胁。
了解如何预防这种细菌感染对于保持身体健康至关重要。
首先，让我们来认识一下细菌性溶血性链球菌。
它是一种革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界和人类的鼻咽部、皮肤等部位。
当人体免疫力下降或出现创伤时，这种细菌就有可能趁机侵入人体，引发感染。
常见的由它引起的疾病包括猩红热、扁桃体炎、丹毒、急性肾小球肾炎等。
那么，如何预防细菌性溶血性链球菌感染呢？以下是一些有效的方法：一、保持良好的个人卫生习惯个人卫生是预防感染的第一道防线。
要勤洗手，尤其是在饭前便后、接触公共物品后。
洗手时要用流动的水，使用肥皂或洗手液，按照“七步洗手法”认真清洗，确保手部清洁干净。
每天要洗澡，保持身体清洁。
特别是在炎热的夏季或运动出汗后，要及时清洗皮肤，更换干净的衣物。
衣物要经常换洗，选择透气性好的材质，以减少细菌滋生的机会。
注意口腔卫生也很重要。
每天早晚刷牙，饭后漱口，使用牙线清洁牙缝。
定期更换牙刷，避免细菌在牙刷上滋生。
二、加强环境卫生保持居住环境的清洁和通风。
定期打扫房间，擦拭家具和地面，清除灰尘和污垢。
经常开窗通风，让新鲜空气进入室内，降低室内细菌和病毒的浓度。
对于公共场所，如学校、办公室、商场等，要加强清洁和消毒工作。
定期对地面、桌椅、扶手等进行消毒，减少细菌传播的风险。
三、增强免疫力健康的身体是抵御细菌感染的关键。
均衡饮食，摄入富含蛋白质、维生素、矿物质等营养物质的食物，如蔬菜、水果、肉类、鱼类、豆类等，为身体提供充足的营养支持。
适量运动有助于增强体质。
可以选择适合自己的运动方式，如散步、跑步、游泳、瑜伽等，每周至少进行 150 分钟的中等强度有氧运动。
保证充足的睡眠，让身体得到充分的休息和恢复。
成年人每天应保证 7-8 小时的睡眠时间，儿童和青少年需要更多的睡眠。
避免过度劳累和精神压力过大，学会放松自己，保持良好的心态。
溶血性链球菌讲义
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杆菌肽敏感试验
❖ 取乙型溶血性菌落的浓菌液涂布于血平板上， 用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽 纸片置于上述平板上，36℃培养18-24h，如 有抑菌圈出现即为阳性。用已知的阳性菌株 做对照
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结果报告
在 25g(ml）样品中检出或未检出溶血性 链球菌
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生物学性状
1．形态结构 2．培养特性 3．分类 4．生化反应 5. 抵抗力
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形态与染色
❖ 球形或卵圆形，直径0.5～ 1 μm，链状排列， 链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者 20～30个
❖ 无芽胞，无鞭毛，培养早期（2~4h）形成透 明质酸的荚膜
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生化反应
❖ 分解葡萄糖，产酸不产气。对乳糖、甘露醇、 水杨苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七叶苷的 分解能力因不同菌株而异
❖ 一般不分解菊糖，不被胆汁溶解 ❖ 触酶阴性(与葡萄球菌相区别)
பைடு நூலகம்
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毒素及侵袭性酶
❖ 链球菌溶血素 ❖ 致热外毒素：曾称红疹毒素或猩红热毒素
❖ 透明质酸酶：又称扩散因子，溶解细胞间质 ❖ 链激酶：又称链球菌纤维蛋白溶酶 ，能使血液中纤维蛋白酶
谢谢
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原变成纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织中的扩散作用，该 酶耐热，100℃50分钟仍可保持活性。 ❖ 链道酶：又称链球菌DNA酶 ❖ 杀白细胞素：能使白细胞失去动力
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抵抗力
❖ 该菌抵抗力一般不强，60℃30min即被杀死 ❖ 对常用消毒剂敏感 ❖ 在干燥尘埃中生存数月 ❖ 乙型链球菌很少有耐药性
溶血性链球菌
分布
溶血性链球菌溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻 腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品 也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。
1、链球菌溶血素：溶血素有O和S两种，O为含有-SH的蛋白质，具有抗原性，S为小分子多肽，分子量较小， 故无抗原性。
2、致热外毒素：曾称红疹毒素或猩红热毒素，是人类猩红热的主要毒性物质，会引起局部或全身红疹、发热、 疼痛、恶心、呕吐、周身不适。
3、透明质酸酶：又称扩散因子，能分解细胞间质的透明质酸，故能增加细菌的侵袭力，使病菌易在组织中扩 散。
大多数链球菌无鞭毛,不能运动,但D群和X群中某些菌株具有鞭毛。不能形成芽孢。多数链球菌在血清肉汤幼 龄培养物（2-2.5h）中,易发现荚膜,当培养时间延长,荚膜即逐渐消失。
链球菌用普通苯胺染料易于着染,自病灶分离的链球菌为革兰阳性,但若长时间培养,或被吞噬细胞吞噬后,革 兰染色常为阴性。
培养特征
溶血性链球菌需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大多 数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。最适生长温度为37℃，在20-42℃能生长，最适pH为7.4-7.6。 在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、 直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株溶血不一。
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流行病学
溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、 粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接 触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食 品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感 染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。一 般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品： 1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性 炎症时造成食品的污染； 2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽 局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。
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培养基和试剂 1葡萄糖肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.1 规定。在肉浸液肉汤内加人1％葡萄糖。 2肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.1规定。 3匹克氏肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.62规定。 4血琼脂平板：按GB/T4789.28一2003中4.6规定。 5人血浆。 6 0.25%氯化钙。 7 0.85％灭菌生理盐水。 8杆菌肤药敏纸片（含0.04单位）。
溶血性链球菌又称沙培林 对热和化学清毒剂均敏感,常 引起扁桃体、咽部、中耳等 感染。亦为肾盂肾炎、产褥 热、猩红热的病原。
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一、生物学特性
二、流行病学 三、致病性
四、抵抗力
五、检验和控制
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1、形态与染色 链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链 状排列，长短不一，从4-8个至20-30个菌细胞组成 不等，链的长短与细菌的种类及生长环境有关。在 液体培养基中易呈长链，固体培养基中常呈短链， 由于链球菌能产生脱链酶，所以正常情况下链球菌 的链不能无限制的延长。
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4、抗原结构
链球菌的抗原构造较复杂，主要有三种： （1）核蛋白抗原 或称P抗原，无特异性， 各种链球菌均相同。 （2）多糖抗原或称C抗原，系群特异性抗 原，是细胞壁的多糖组分，可用稀盐酸等提 取。 （3）蛋白质抗原 或称表面抗原，具有型特 异性，位于C抗原外层，其中可分为M、T、 R、S四种不同性质的抗原成分，与致病性 有关的是M抗原。
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溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的 化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发 性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、 猩红热、肾小球肾炎。
溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 袭性酶有关，主要有以下几种： 1、链球菌溶血素：溶血素有O和S两种， O为含有-SH的蛋白质，具有抗原性，S为小分 子多肽，分子量较小，故无抗原性。 2、致热外毒素：曾称红疹毒素或猩红热 毒素，是人类猩红热的主要毒性物质，会引起 局部或全身红疹、发热、疼痛、恶心、呕吐、 周身不适。
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致 病 性
3、透明质酸酶：又称扩散因子，能分解 细胞间质的透明质酸，故能增加细菌的侵 袭力，使病菌易在组织中扩散。 4、链激酶：又称链球菌纤维蛋白溶酶， 能使血液中纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶， 具有增强细菌在组织中的扩散作用，该酶 耐热，100℃50分钟仍可保持活性。 5、链道酶：又称链球菌DNA酶，能使脓 液稀薄，促进病菌扩散。 6、杀白细胞素：能使白细胞失去动力， 变成球形，最后膨胀破裂。
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5、分类
根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血 及其溶血性质分为三类。 （1）α-溶血性链球菌：菌落周围有1-2mm宽的草绿 色溶血环，也称甲型溶血，这类链球菌多为条件致病 菌。 （2）β-溶血性链球菌：菌落周围形成一个2-4mm宽、 界限分明、完全透明的无色溶血环，也称乙型溶血， 因而这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强， 常引起人类和动物的多种疾病。 （3）γ-链球菌：不产生溶血素，菌落周围无溶血 环，也称为丙型或不溶血性链球菌，该菌无致病性， 常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起感染 。
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4、杆菌肽敏感试验：取典型菌落的菌液涂布 于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04 单位的杆菌肽纸片置于上述平板上，36℃培 养18-24h，如有抑菌圈出现即为阳性。用已 知的阳性菌株做对照。
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3、链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2mL， 加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链 球菌18-24h36℃肉浸液肉汤培养物0.5mL 及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于36℃ 水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝 块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性， 如24h后不溶解即为阴性。同时用肉浸液 肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的 菌株做阳性对照。
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葡萄糖肉浸液肉汤
配方（每升）：
牛肉(提取浸出 500g 粉)
氯化钠 5g
原
蛋白胨
磷酸氢二钾
10g
2g
葡萄糖
10g
理： 蛋白胨、牛肉浸出粉提供氮 源、维生素和生长因子；氯化钠 维持均衡的渗透压；磷酸氢二钾 为缓冲剂；葡萄糖提供碳源。
最终pH 7.5±0.2
将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合 后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉 渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加 水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正 pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。
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（一）检验
1、样品处理：取25g固体（或25mL液体） 检样加入225mL灭菌生理盐水，制成混悬液。 2、吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸 液肉汤，或直接划线于血平板（如检样污染 严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤）， 36℃培养24h，接种血平板，36℃培养24h, 挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平 板上分纯，观察在液体和固体中的培养特征、 溶血情况及革兰氏染色、形态，并进行链激 酶试验和杆菌肽敏感试验。
在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉 淀生长。 在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边 缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株 溶血不一。
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3、生化反应 分解葡萄糖，产酸不产气， 对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨 醇、棉子糖、蕈糖、七叶苷的分 解能力因不同菌株而异。一般不 分解菊糖，不被胆汁溶解，触酶 阴性。
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报告
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血平板：菌落为灰白色，半透明或不透明， 表面光滑，有乳光，直径约0.5— 0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型 溶血性链球菌周围有2—4mm界限分明、 无色透明的溶血圈。
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血琼脂平板（BA）
配方：pH7.4-7.6豆粉琼脂 脱纤维羊血
100ml 5—10ml
制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使 其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每 100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔 血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板 或分装试管，制成斜面备用。 亦可用其它营养丰富的基础培养基配制血琼脂。
多数菌株在血清肉汤中培养24h易形成透明质酸的荚膜，继 续培养后消失。该菌不形成芽 胞，无鞭毛，易被普通的碱性 染料着色，革兰氏阳性，老龄 培养或被中性粒细胞吞噬后， 转为革兰氏阴性。
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2、培养特征
需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培 养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大 多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。 最适生长温度为37℃，在20-42℃能生长，最适 pH为7.4-7.6。
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抵抗力
该菌抵抗力一般不强，60℃30min即 被杀死，对常用消毒剂敏感，在干燥 尘埃中生存数月。乙型链球菌对青霉 素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺 均敏感。青霉素是链球菌感染的首选 药物，很少有耐药性。
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设备和材料 1冰箱：O℃——4℃。 2恒温培养箱：36℃士1℃。 3恒温水浴锅：36℃土1℃。 4显微镜：10*～l00*。 5均质器或灭菌乳钵。 6离心机：4000r/min。 7架盘药物天平：0g——5009，精确至0.5g。 8灭菌试管：10mm*100mm、l6mm*160mm。 9灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具1mL 刻度）。 10灭菌锥形瓶：100mL。 11灭菌培养皿：直径90mm。 12灭菌棉签、镊子等。
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匹克氏肉汤
含1%胰蛋白胨的牛心浸液 200mL 1：25000结晶紫盐水溶液 10mL 1：800三氮化钠溶液 10mL 脱纤维兔血(或羊血) 10mL
制法 ： 将上述已灭菌的各种成分，用无菌 手续依次混合，分装于无菌试管内，每 管约2mL，保存于冰箱内备用