柱层析分离芦丁和槲皮素以及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素
槐花米中芦丁的鉴定
实验五 槐花米中芦丁的鉴定
一、实验目的
• 掌握硅胶薄层层析鉴定鼠李糖和葡 萄糖的方法。
• 掌握芦丁和槲皮素的化学检识方法。
二．实验原理
• 1.根据鼠李糖和葡萄糖在硅胶板上 的分配系数不同达到分离的目的。
• 2.根据芦丁和槲皮素的理化性质来 检识芦丁液的硅胶薄层层析 1. 硅胶板的活化；
• 2. 配制展开剂，正丁醇：醋酸：水＝ • 4：1： 5 • 3. 将展开剂倒入层析缸中，展开缸中展开
剂的高度4mm左右。 • 4. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm；
（一）糖液的硅胶薄层层析
• 5. 点样（点样顺序为：糖液、鼠李糖、葡 萄糖），点样一般为圆点，点样直径一般 不大于2mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。
• 6. 将硅胶板放入展开缸的展开剂中，浸入 展开剂的深度为距圆点5mm为宜，一般展距 为8cm，取出薄层板，晾干。
（一）糖液的硅胶薄层层析
7. 喷苯胺－邻苯二甲酸试剂，在105℃下 烘10min。 • 8. 实验结果见图1。
（二）芦丁、槲皮素及糖的化学检识
• 1. 浓硫酸和浓盐酸反应 • 取芦丁或槲皮素数毫克于比色瓷板上，
入少许镁粉，滴加数滴浓HCl，溶液由黄色渐变红 色者表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。
• 5.三氯化铝反应： • 取样品1mg溶于1ml乙醇中，加1%三氯化铁乙醇
液2-3滴，黄酮类呈鲜黄色。
6.醋酸镁反应
• 取样品乙醇液与醋酸镁试剂作纸上反映， 观察荧光。二氢黄酮，二氢黄酮醇类可显 天蓝色荧光，若有5-OH，色泽更明显。而 黄酮，黄酮醇和异黄酮类等显黄色—橙 色—褐色荧光。
分别加浓硫酸或浓盐酸1滴，注意呈色变化， 研磨后溶解成橙色溶液，加较多量的水稀 释后转为浅黄色，析出黄色沉淀。
芦丁槲皮素的聚酰胺薄层层析
芦丁槲皮素的聚酰胺薄层层析1. 引言哎呀，今天我们聊聊一个听起来有点高大上的话题——芦丁槲皮素的聚酰胺薄层层析！听起来像是科学家们在实验室里搞什么高深莫测的事情，但其实，这个过程简单得让人意想不到。
芦丁槲皮素，这个名字是不是很复杂？简单来说，它是一种存在于很多植物里的天然化合物，常被用作保健品，效果还挺不错的。
今天就让我们一起揭开这个神秘面纱，看看它是如何被提取和分离的。
2. 芦丁槲皮素是什么？2.1 认识芦丁槲皮素首先，芦丁槲皮素其实是黄酮类化合物，存在于一些水果和蔬菜里，比如柑橘类、苹果和洋葱等。
它不仅能帮助我们抗氧化，还能增强血管的健康。
要说这东西跟健康的关系，那真是如鱼得水，简直是“绝配”啊！2.2 为什么要分离？那么，为什么我们要对它进行分离呢？大家都知道，化合物的“干货”可多着呢，但想要从复杂的植物中提取出芦丁槲皮素，就得用到一些手段。
通过聚酰胺薄层层析，我们可以把它从一大堆杂七杂八的物质中分离出来，确保我们得到的是真材实料，正宗的芦丁槲皮素。
就像在一堆沙子里找金子，得花点功夫。
3. 聚酰胺薄层层析3.1 这个过程怎么进行？接下来，咱们就要谈谈聚酰胺薄层层析的具体步骤了。
首先，得准备好样品。
把含有芦丁槲皮素的植物材料处理成粉末，然后溶解在适合的溶剂中。
嘿，这里就像是给植物洗澡，帮它们去掉一些不必要的“赘肉”。
然后，拿出聚酰胺薄层板，涂上一层薄薄的胶，准备接受“洗礼”。
把刚才准备好的样品点在板子上，接着把板子放进盛有移动相的容器里。
这里的“移动相”可以理解为溶剂的混合物，简直就像是一条小河，把芦丁槲皮素从板子的底部慢慢洗到顶部。
你能想象到那种画面吗？就像在看一场精彩的运动会，选手们一争高下，争着往前冲。
3.2 观察与分析当一切都完成后，等到溶剂上升到一定高度，就可以拿出板子进行观察了。
这时候，你会看到不同的成分根据极性和质量分开，形成了一道道漂亮的色带。
简直像是大自然为我们准备的艺术展览！通过观察这些色带的位置和颜色，我们就能分析出芦丁槲皮素的存在与否，甚至还可以评估它的纯度。
芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定-2022年学习资料
思考题及记录-思考题：-1芦丁和槲皮素用不同展开剂系统展层将出现什么结果？为什么？-2芦丁和槲皮素聚酰胺薄 色谱将出现什么结果？为什么？-记录：-1芦丁和槲皮素的纸色谱、聚酰胺薄层色谱结果。-2糖的检出纸色谱结果。 1位移测定的结果-2测定克分子吸收系数、在吸收峰前后20m波长范围内，依次测定波-长和吸收值，用方格纸作图 精确的测出吸收峰的波长和吸收值，记-录测定结果。
四测定结果-槲皮素加位移试剂结果表（入，nm-加入试剂-编号-II峰-位移值-羟基位置-无水甲醇-1-25 -371-NaOH-430-I峰△59-4-0H-Na0H5'-分解-3,4’-0-MeONa-416-I △45-3-0H-MeONa5-AICIs-270-450-I峰△79-3,5及3’，4’-0H-AICI HCI-265-425-I峰△54-3,4-0Π-NaOAC-277-387-I峰△21-7-0H-NaO C/H3BO3-259-385-I峰△14-3’,4-0H-克分子吸收系数的测定：根据己测定的黄酮光谱，测 吸收峰的波-长和吸收峰前后20nm的波长范围。然后取样品溶液约3ml,置于1cm长的-石英杯中，测V,仔细 量在上述波长范围内各波长的吸收值，反复测-定三次。
四、槲皮素的降解-取槲皮素50mg,置于圆底烧瓶中，加水5m1,乙醇6ml,-KOH2g,置水浴上加热回流 0小时，蒸去乙醇，加水50m1溶-解，用浓盐酸酸化至pH2~3,用乙醚萃取三次，合并乙-醚液，回收乙谜，供 层层析点伴用。-五、槲皮素降解产物的薄层色谱-硅胶CMC-Na薄层-对照品：原儿茶酸Protocatech ic acid-间苯三酚Phloroglucinol-展开剂：氯仿-丙酮-醋酸8：20.5-显色剂：三氧化 试剂
二.纸色谱及薄层色谱鉴别-1.纸色谱：-新化一号层析滤纸-样品：自制芦丁、槲皮素-对照品：芦丁、槲皮素-展 剂：1正丁醇-醋酸-水4：1：5上层或4：1：1-2-25%醋酸水溶液-3》-85%醋酸水溶液-显色：1见光下观察，再在紫外光下观察-经氨气后再观察-喷三氧化铝试剂后再观察
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式综合化学实验:芦丁的提取分离和鉴定芦丁简介:芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。
目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。
尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。
芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinoe，一种由葡萄糖glucoe与鼠李糖rhamnoe组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174，178℃，无结晶水时188，190℃。
溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
补充知识:关于苷（gān）和甙(dài): 苷类（glycoide，旧称甙）又称配糖体，是糖或糖的衍生物的半缩醛羟基与另一类非糖物质中的羟基以缩醛键（甙键）脱水缩合而成的环状缩醛衍生物，水解后能生成糖与非糖化合物。
目前国际上通用“苷”如“皂苷”，而过去习惯使用的中文名称“甙”目前已不再使用如“皂甙”现统称“皂苷”。
一、目的要求：1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、掌握化学鉴别试验、苷水解、衍生物制备、熔点和薄层层析检测等手段在苷类结构鉴定上的作用。
3、通过UV、IR、HNMR和MS图谱解析，了解光谱方法黄酮类化合物结构鉴定中的作用。
二、已知重要成分性质：1、芦丁（rutin）：分子式C27H30O16·3H2O，为浅黄色针状结晶物，mp174～178℃（含三分子水）；100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，115～117℃软化，214～215 ℃发泡分解。
芦丁槲皮素鉴定实验报告
一、实验目的1. 了解芦丁和槲皮素的理化性质。
2. 掌握芦丁和槲皮素的提取、分离与鉴定方法。
3. 熟悉光谱分析在有机化合物结构鉴定中的应用。
二、实验原理芦丁和槲皮素均为黄酮类化合物，具有多种生物活性。
芦丁是槐米中的一种主要活性成分，槲皮素则广泛存在于多种植物中。
本实验通过碱酸法提取芦丁和槲皮素，并利用光谱分析（紫外-可见光谱、红外光谱、核磁共振波谱）对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、芦丁标准品、槲皮素标准品、无水乙醇、浓盐酸、镁粉、10%萘酚溶液、浓硫酸、聚酰胺薄层板、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
2. 实验仪器：电子天平、恒温加热器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
四、实验步骤1. 芦丁和槲皮素的提取（1）将槐米粉末用无水乙醇回流提取，过滤，收集滤液。
（2）将滤液浓缩至一定体积，用热水溶解，冷却后用盐酸调节pH值至2～3。
（3）静置沉淀，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩至近干。
（4）用少量无水乙醇溶解残渣，定容至一定体积，得到芦丁和槲皮素的提取液。
2. 芦丁和槲皮素的鉴定（1）紫外-可见光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用紫外-可见分光光度计测定其在200～400nm范围内的吸收光谱，与标准品进行比较。
（2）红外光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用红外光谱仪测定其红外光谱，与标准品进行比较。
（3）核磁共振波谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用核磁共振波谱仪测定其核磁共振波谱，与标准品进行比较。
3. 芦丁和槲皮素的分离（1）薄层色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，点样于聚酰胺薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（5:4:1）为展开剂进行薄层色谱分析，与标准品进行比较。
（2）高效液相色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，经适当处理后，用高效液相色谱仪测定其含量，与标准品进行比较。
五、实验结果与分析1. 紫外-可见光谱分析芦丁和槲皮素的紫外-可见光谱与标准品的吸收光谱基本一致，表明提取液中含有芦丁和槲皮素。
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式纸层析法是一种简单、快速、经济、易于操作的色谱分离技术，广泛应用于化学分析和药物化学等领域。
在实际应用中，纸层析法常用于对化合物的分离和纯化，并通过染色、显色等方法进行定性和定量分析。
在鉴定芦丁和槲皮素中，可以使用纸层析法进行分离和鉴定。
实验步骤如下：1.实验物料准备：准备好检测芦丁和槲皮素的纸层析板、标准品芦丁和槲皮素、溶剂毛细管、显色剂等。
2.准备样品溶液：取一定量的待测样品，将其溶解在适量的溶剂中，使浓度适当，以便在纸层析板上均匀涂抹。
3.准备标准溶液：准备芦丁和槲皮素的标准溶液，浓度分别为C1和C24.样品处理：将纸层析板上端标出起点线，再标出标准品C1和C2的位置，然后用毛细管在起点上均匀涂抹样品溶液和标准溶液。
5.平行纸层析：将涂抹好样品和标准品的纸层析板，放入干燥的脱水培养器中，在温度适宜的条件下进行平行纸层析分离，待样品跑至标准品C1和C2处时，取出纸层析板进行干燥。
6.显色：将纸层析板放入含有显色剂的容器中，在室温下进行显色反应，待出现斑点时取出。
7.结果分析：观察纸层析板上的斑点形成情况和色谱图，对比标准品的色谱图，根据斑点位置和色谱图形态，可以初步判断出纸层析板上的斑点是否与标准品C1和C2相同或相似。
8.定量分析：根据纸层析板上斑点的形成情况和色谱图，可以根据标准品的浓度、质量和相对迁移率等参数，计算出样品中芦丁和槲皮素的含量。
需要注意的是，纸层析法是一种相对简单的色谱分离方法，但是对于复杂样品的分离和鉴定较为有限。
在实际应用中，需要对样品进行预处理、选用合适的纸层析板和显色剂，并进行合理的操作控制和数据分析。
同时，纸层析法也可以与其他色谱分离方法如薄层色谱、柱层析等相结合，提高分析的准确性和可靠性。
柱层析分离芦丁与槲皮素
三．实验操作步骤
• （一） 柱层析分离芦丁和槲皮素 聚酰胺5g 加水50ml 5g， 50ml， 1. 装柱 聚酰胺5g，加水50ml，搅 倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 匀，倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 注意保持液面1cm高度。） 1cm高度 注意保持液面1cm高度。）
三．实验操作步骤
• 2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g，在水浴上除尽 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g， 溶解 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 50%的乙醇冲洗 3. 洗脱 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 待两层析带之间的距离约1cm 1cm后 再用90% 90%的 待两层析带之间的距离约1cm后，再用90%的 乙醇冲洗。 乙醇冲洗。
二、实验原理
• 2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占 展开剂的极性较小（ 比例>50% >50%） 丁酮： 60： 比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60： 20： 洗脱先后顺序: 20：20; 洗脱先后顺序: • 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 • 用正相色谱理论来解释。 用正相色谱理论来解释。
三．实验操作步骤
• 4. 收集 用试管收集，每试管接收30 ml。 用试管收集，每试管接收30 ml。 • 5. 检测 分离结果用TLC检测。 分离结果用TLC检测。 TLC检测
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作 • 1. 配制展开剂，甲醇：丙酮：苯＝8：1：1 配制展开剂，甲醇：丙酮： • 2. 将展开剂倒入展开缸中，展开缸中展开剂 将展开剂倒入展开缸中， 的高度4mm左右。 4mm左右 的高度4mm左右。 • 3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm； 画基线，基线距底边1.0 1.5cm； 1.0～ • 4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、芦丁、 点样（点样顺序：试样1 试样2 芦丁、 槲皮素) 点样一般为圆点， 槲皮素)，点样一般为圆点，点样直径一般不 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。
天然药化槐米中芦丁的提取分离、鉴定及槲皮素的制备
的硼酸使成饱和溶液进行测定。本法适用于在加入醋酸钠 5 分钟后有分解现象者，方法 二：于 3ml 样品中加入 5 滴硼酸饱和溶液后，快速加入醋酸钠，立即测定。
1%鼠李糖标准品水溶液 展开剂：正丁醇：醋酸：水（4：1：5 上层） 显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺溶液后，105℃烘烤 5 分钟，显棕红色斑点。
6.光谱测定 芦丁溶液的配制 精密称取的芦丁纯品 1g，用无水甲醇溶解，并稀释至 10ml，从中吸取 5ml，置 50ml 容量瓶 中，用甲醇稀释至刻度。 A. 甲醇光谱：取样品液置石英杯中，至 200～500nm 内进行扫描，重复一次，观察紫外光
取上述溶液 1~2ml，然后滴加 2%的 ZrOCl2 的甲醇溶液，观察颜色变化（生成黄色的络 合物）。然后向试管中加入 2%的枸橼酸甲醇溶液，观察颜色变化（黄色溶液显著褪色）。 （3）Molish 反应
取上述溶液 1~2ml，置于试管中，加 10%等体积的α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴 加少量浓硫酸，观察现象（两液界面处产生紫红色的环）。 4．芦丁和槲皮素的薄层色谱鉴别
槐花米的主要成分为芦丁。芦丁可降低毛细血管脆性和调节渗透性。临床上用作毛细血 管脆性引起的出血症，并常作为高血压症的辅助治疗药， 一、实验目的与要求
1．掌握酸碱法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握化学鉴别实验、苷的水解及薄层检查等方法在苷类化合物鉴定中的作用。 3.了解 UV 在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 二、实验原理 芦丁（rutin）C27H30O16：浅黄色针状结晶 mp174~178℃（含三分子结晶水）；188℃（无 结晶水）。难溶于冷水，可溶于热水、热甲醇、冷甲醇、热乙醇、冷乙醇，不溶于乙醚、氯 仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液，酸化后析出。全水解得槲皮素和葡萄糖及鼠 李糖。 槲皮素（quercetin）C15H10O7﹒2H2O:黄色结晶,mp313~314℃（2 分子结晶水）。316℃ （无水物）。能溶于冷乙醇、易溶于沸乙醇，可溶于甲醇、乙酸乙脂、冰醋酸、吡啶、丙酮 等，不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等。
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二、实验原理
• 2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占 比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60： 20：20; 洗脱先后顺序: • 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 • 用正相色谱理论来解释。
二、实验原理
• 二）．黄酮苷元之间的比较： • 用氢键吸附的原理来解释。
二、实验原理
• 本实验利用聚酰胺在乙醇-水系统中，洗 脱原理与RP-18的洗脱原理类似，因此，芦 丁先从聚酰胺柱上洗脱出来，槲皮素后从 聚酰胺柱上洗脱出来。
三．实验操作步骤
• 4. 收集 • 5. 检测 用试管收集，每试管接收10 ml。 分离结果用TLC检测。
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作
• 1. 配制展开剂，甲醇：丙酮：苯＝8：1：1 • 2. 将展开剂倒入展开缸中，展开缸中展开剂 的高度4mm左右。 • 3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm； • 4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、芦丁、 槲皮素)，点样一般为圆点，点样直径一般不 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作 • 5. 倾斜展开缸，使展开剂到入展开缸的另 一个槽中，聚酰胺薄膜浸入展开剂的深度 为距圆点5 mm为宜，一般展距为8 cm,取出 薄层板，晾干。 • 6. 喷1％的AlCl3显色。 • 7. 实验结果见图1。
四．体会与讨论
• 1. 画出聚酰胺薄膜层析鉴定芦丁和槲皮素 分析图
实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以 及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素
一 、实验目的
• 掌握用聚酰胺柱层析分离芦丁和槲皮素 的方法。
二、实验原理
1. 槲皮素与芦丁的结构
OH HO O OH
OH OH O
槲皮素
HO O
OH
OH
O Glc OH O
Rha
芦丁
二、实验原理
• 根据聚酰胺的“双重功能”来进行分离。 • 一）．比较黄酮苷 • 1. 展开剂的极性较大（水溶性溶剂所占比 例>50%）时，如：含水醇或水：甲醇：丁 酮：乙酰丙酮=65：15：15：5; 洗脱先后 顺序: • 三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元 •验操作步骤
• （一） 柱层析分离芦丁和槲皮素 1. 装柱 聚酰胺5g，加水30 ml，搅 匀，倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 注意保持液面1cm高度。）
三．实验操作步骤
• 2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g，在水浴上除尽 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。 3. 洗脱 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 待两层析带之间的距离约1cm后，再用90%的 乙醇冲洗。