芦丁的提取分离和鉴定
槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定张景清（⼴西科技⼤学⽣物与化学⼯程学院⼴西柳州545006）1.摘要:本实验以槐⽶为原料，采⽤碱提酸沉法从槐⽶中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体作⽅法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
该⽅法提取率⾼达26.3%，对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析，并与标准品做对⽐，结果表明提取的芦丁与标准品的纯度⼤致相等。
2.引⾔芦丁,亦称芸⾹苷,⼴泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐⽶和荞麦叶中含量最⾼,可作为⼤量提取芦丁的原料。
芦丁属于黄酮类化合物,在⼼脑⾎管疾病的治疗上起到了举⾜轻重的作⽤,具有VP样作⽤。
有助于保持⽑细⾎管正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作⽤。
其临床效果肯定,副作⽤少,同时也是⼀种植物原料药[1]。
黄酮类化合物的提取⽅法较多主要是依据其溶解性及酸性。
黄酮类化合物的提取⽅法⼀般有：①热⽔提取法②醇提法③碱提酸沉法④系统溶剂提取法本实验碱提酸沉法通过从槐⽶中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作⽅法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
3.实验原理槐⽶中含芦丁、槲⽪素、皂苷、⽩桦、酯醇等多种成分。
芦丁是其主要成分，含量为16%-25%。
芦丁属于黄酮类化合物，结构中含有多个酚羟基，呈酸性，苷元为槲⽪素，糖基为芸⾹糖。
芦丁为浅黄⾊细⼩针状结晶，95-97℃脱⽔，熔点314℃，可溶于沸⼄醇、⽆⽔⼄醇、⼄酸⼄酯、丙酮，不溶于⽯油醚和⽔。
芦丁可溶于碱液中，呈黄⾊酸化后⼜析出，故可采⽤碱提酸沉法得到芦丁产品。
然后利⽤在冷⽔中不溶，在热⽔中微溶的溶解度差精制，可获得纯度⾼的微细针状结晶，最后利⽤芦丁、槲⽪素、及糖的性质予以鉴定。
4.实验部分4.1实验药品槐⽶（市售），氧化钙AR（西陇化⼯股份有限公司），盐酸AR（西陇科学有限公司），四硼酸钠AR（⼴东省台⼭市化⼯⼚），甲醇AR（天津市⼤茂化学试剂⼚），三氯甲烷AR（成都市科隆化学品有限公司）,氯仿（分析纯，成都市科龙化⼯试剂⼚），⼄醇（分析纯）4.2实验仪器JJ200电⼦天平（常熟市双杰测试仪器⼚），SHZ-D（III）循环⽔式多⽤真空泵（河南爱博特科技发展有限公司），ZNLC-GS 130*60智能磁⼒搅拌器（河南爱博特科技发展有限公司），薄层⾊谱展开缸，紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）4.3实验步骤4.3.1芦丁的提取⽅法⼀：称取槐⽶10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于500ml烧杯中，加⼊250ml⽔，加热搅拌下添加⽯灰乳，保持PH=8-8.5。
芦丁的提取分离及鉴定
2. 实验仪器及药品
SHZ-D循环水式真空泵（河南省巩义市英峪 仪器一厂），电热恒温水浴锅（上海医疗器 械五厂），烧杯（1000ml），圆底烧瓶，球 形冷凝管，漏斗，托盘天平，抽滤瓶，布氏 漏斗滤纸，试管，滴管，新华1号滤纸，铅笔， 铁架台，电炉，石棉网，橡皮管。 槐花米（2011年购于同仁堂大药房）， 95%乙醇，浓硫酸，浓盐酸，镁粉，醋酸铅 试剂，1-萘酚，正丁醇，醋酸，1%三氯化铝 乙醇溶液，无水乙醇，硼砂水，饱和石灰水。
3、 结果与分析 、
从表3可以看出，在可见光下，芦丁和槲皮素的色 斑均呈现黄色，在253.7 nm紫外灯下，芦丁呈亮绿 色，槲皮素呈亮黄色。再加入1%三氯化铝-乙醇溶 液，荧光斑点的亮度更加明显。 主要原因是因为芦丁和槲皮素的区别在于芦丁水解 后失去了糖苷，其本身的结构发生了变化，故在紫 外灯光的照射下呈现出不同的颜色。 水提法 取20 g 槐花米按水提法的流程操作，可提 取出粗产品，收率仅为5.32 %。 碱液提取法 在加入石灰水中煮沸时, 调节不同酸 度，得酸度对产品质量的影响（见表4 ）
2 .色谱鉴定 色谱鉴定
点样：取新华一号滤纸，距下端3厘米处用铅 笔划线，为起始线，隔1.5厘米处点样品。将 点好样品的滤纸挂在层析缸中饱和半小时， 在上行展开。 芦丁乙醇溶液 b. 精制槲皮素乙醇溶液 展开剂：正丁醇-醋酸-水（4:1:5，上层） 2.2.2 显色：a. 可见光下观察色斑，紫外灯 下观察荧光斑。 1%三氯化铝-乙醇溶液，在观察荧光斑点。
二、论文设计全过程
芦丁的提取 分离及鉴定
实验部分
鉴定
结果分析与 讨论
OH
一、实验部分
1.实验原理 实验原理 芦丁（Rutin） C27H30O16·3H2O，浅黄色针 状结晶，mp 174～178 ℃（含三 分子水）；188 ℃（无水物）。 难溶于冷水（1:8000～10000）， 可溶于热水（1:180～200），热 甲醇（1:10），冷甲醇 （1:100），热乙醇（1:60）， 冷乙醇（1:650）；难溶于乙醚、 三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、 丙酮，易溶于碱液。
槐花米中芦丁的提取分离和鉴定
五、思 考题
❖ 苷类结构的检识大体程序如何？ ❖ 苷类水解的方法？ ❖ 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素
3-OH上？ ❖ 苷元的结构怎样确定？ ❖ 怎样确定苷键的构型？
六、实验课后总 结与讨论
❖ 芦丁提取 ❖ 芦丁的分离纯化 ❖ 芦丁的理化鉴别 ❖ 芦丁的苷元-槲皮素的制备 ❖ 芦丁与槲皮素的波谱鉴定
▪ 芦丁可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、 乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
▪ 芦丁的溶解度，在冷水中1:10000，沸水中1:200，沸乙醇 中1:60，沸甲醇中1:7
▪ 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中， 酸化后又可析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
碱溶酸沉法原理
②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。 ❖ 显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外灯
(365nm)下观察。
5、芦丁的IR、1HNMR鉴定
❖ 样品：自制芦丁。 ❖ 实验：KBr压片，红外分光光度仪测试。 ❖ IR谱图与芦丁标准谱图对照。 ❖ DMSO-d6作溶剂，测芦丁的1HNMR。
四、注意事 项
调节 PH8-9
1.5g CaO 加10ml水
直火加热
保持微 沸
注3意0m及时in补充水
和石灰乳，维持 PH 8~9
双层滤纸趁 热抽滤
• 趁热抽滤时，注意防 止滤液因减压而沸腾。
滤液 残渣
在60-70度下，用 浓盐酸调PH3-4
静置
2、芦丁的精制与水解
第一次实验所得滤液
• 酸水解过程ຫໍສະໝຸດ 抽滤中，注意补充由槐花米中提取芦丁的方法很多，本实 验是根据芦丁在冷水和热水中的溶解度差异 的特性进行提取和精制，或根据芦丁分子中 具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大 溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液 加酸酸化后则芦丁游离析出。
实验 槐米中芦丁的提取、分离与鉴别
实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别一、实验目的（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。
（2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。
二、实验原理芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。
溶解度情况如下：水：1:10000(冷)，1:200(热)甲醇：1:100(冷)，1:9(热)乙醇：1:300(冷)，1:30(热)吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。
再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。
利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。
三、实验内容（一）芦丁(芸香苷)的提取1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。
称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤饼用水洗3-4次），干燥后得粗品。
槐米中芦丁的提取分离与鉴定
O
O CH2O
O OH
OH
HO 7 5
OH 3'
4' O
3 OH
OH
O
槲皮素
OH OH
OH OH
芦丁
项目一 芦丁的提取分离与鉴定
v 子项目一 槐米中芦丁的提取 v 子项目二 槐米中芦丁的精制 v 子项目三 水解芦丁得到槲皮素 v 子项目四 芦丁和槲皮素的鉴别
槐花
相关内容介绍
芦丁的提取分离与鉴定
槐米
天然药物化学实训
项目一 槐米中芦丁的提取分离
与鉴定
实训目的
v 能够运用碱溶酸沉法和结晶法的操作技术对 槐米中的芦丁进行提取分离
v 能够运用酸水解的操作技术对槐米中芦丁进 行水解
v 能够运用纸色谱、薄层色谱法和化学法鉴别 芦丁、槲皮素和糖类化合物
实训结果
得到两个单体化合物
OH OH
HO
O
OH OH O
自的原理有什么不同？ 4、黄酮类薄层色谱中常用到AlCl3乙醇溶液显色？显色
后一般呈什么颜色？ 5、薄层色谱的操作要点有哪些？
子项目三 芦丁 和槲皮素的鉴别
糖 的 鉴 定
残渣
芦丁的提取分离与鉴定
水解所得滤液20ml
用饱和Ba(OH)2调PH值至中 性，折叠滤纸过滤
滤液 蒸干，放冷 加2-3ml乙醇溶解
试剂
盐酸-镁粉反应 Molish反应 FeCl3反应
试验记录
试验现象 芦丁
黄酮母核
性
将样品溶液1ml，加入少许镁粉振摇，滴加几
反 滴浓盐酸，1-2min内，观察颜色变化。
应
Molish反应
苷类
将样品溶液1ml，加入等体积10%α-萘酚溶 液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意 观察两界面产生的变化。
芦丁的提取分离和鉴别
芦丁的提取分离和鉴别槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾。
味苦性凉，入肝、大肠经。
具有清热凉血、止血的功效，常用于治疗便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血和赤血下痢等，常炒炭应用。
槐花米主要化学成分为芦丁（芸香甙），具有维生素P样作用，可降低毛细血管脆性、调解其渗透性。
临床用于防治高血压脑病、视网膜出血和慢性气管炎等。
芦丁羟基化衍生物曲克芦丁能抑制血小板聚集，防止血栓形成的作用，同时能对抗内源性血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低其脆性，防止水肿，对急性缺血性脑损伤有显著保护作用，临床用作抗血小板药物。
一、实验目的：1．掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法；2．掌握黄酮类成分的主要性质及鉴别方法。
二、仪器与试药（一）仪器SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（250mL） ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）（二）试药槐花米粗粉硼砂氧化钙乙醇盐酸浓硫酸硅胶 CMC-Na 镁粉α-萘酚甲醇乙酸乙酯脱脂棉三氯化铝试液芦丁和槲皮素对照品甲酸丙酮三、主要成分的结构与性质：*皂苷（Saponin ），粗品为白色粉末，mp 210～220℃，易溶于吡啶，能溶于200倍的甲醇中，酸水解得上述两种苷元及糖。
糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
R=H 槲皮素R=–glu –rha 芦丁白桦脂醇 槐花二醇四、实验原理：1．芦丁分子结构中含有酚羟基，具有弱酸性，能与碱反应生成盐而溶于水，此盐加酸酸化，又析出芦丁，利用此性质进行提取。
并可利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差悬殊，用水重结晶。
2．芦丁在酸性溶液中可被水解，生成槲皮素和糖。
五、实验内容OOROOH OHOH O H OH CH 2OHOH OH（一）芦丁的提取分离和纯化60-70℃用浓盐酸调pH3-4[注3]，滤液（弃去）1:200的溶解度加蒸滤液冷却、静置、析晶，过滤 芦丁精品（60-70℃干燥，称重）注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基的作用，使其不与Ca 2+络合，生成钙盐沉淀，使提取收率下降。
实验二2 芦丁的提取分离
“山行/六七里”为什么不能划分为“山/行六七里”？
明确：“山行”意指“沿着山路走”，“山行”是个状中短语，不能将其割裂。“望之/蔚然而深秀者”为什么不能划分为“望之蔚然/而深秀者”？明确：“蔚然而深秀”是两个并列的词，不宜割裂，“望
之”是总起词语，故应从其后断句。【教学提示】引导学生在反复朗读的过程中划分朗读节奏，在划分节奏的过程中感知文意。对于部分结构复杂的句子，教师可做适当的讲解引导。目标导学三：结合注释
．初读文章，结合工具书梳理文章字词。2．朗读文章，划分文章节奏，标出节奏划分有疑难的语句。节奏划分示例
环滁/皆山也。其/西南诸峰，林壑/尤美，望之/蔚然而深秀者，琅琊也。山行/六七里，渐闻/水声潺潺，而泻出于/两峰之间者，酿泉也。峰回/路转，有亭/翼然临于泉上者，醉翁亭也。作亭者/谁？山
之僧/曰/智仙也。名之者/谁？太守/自谓也。太守与客来饮/于此，饮少/辄醉，而/年又最高，故/自号曰/醉翁也。醉翁之意/不在酒，在乎/山水之间也。山水之乐，得之心/而寓之酒也。节奏划分思考
，云归而岩穴暝，晦明变化者，山间之朝暮也。野芳发而幽香，佳木秀而繁阴，风霜高洁，水落而石出者，山间之四时也。直译法：那太阳一出来，树林里的雾气散开，云雾聚拢，山谷就显得昏暗了，朝则
自暗而明，暮则自明而暗，或暗或明，变化不一，这是山间早晚的景色。野花开放，有一股清幽的香味，好的树木枝叶繁茂，形成浓郁的绿荫。天高气爽，霜色洁白，泉水浅了，石底露出水面，这是山中四
于《岳阳楼记》的千古名篇——《醉翁亭记》。接下来就让我们一起来学习这篇课文吧！【教学提示】结合前文教学，有利于学生把握本文写作背景，进而加深学生对作品含义的理解。二、教学新课目标导
学一：认识作者，了解作品背景作者简介：欧阳修(1007—1072)，字永叔，自号醉翁，晚年又号“六一居士”。吉州永丰(今属江西)人，因吉州原属庐陵郡，因此他又以“庐陵欧阳修”自居。谥号文忠
芦丁的提取分离和鉴定实验报告 -回复
芦丁的提取分离和鉴定实验报告 -回复一、实验目的：1. 学习芦丁的提取和分离方法。
2. 使用色谱技术鉴定提取物中的芦丁成分。
二、实验原理：1. 芦丁的提取方法：a. 在芦丁含量较高的植物材料中，如杜仲叶中，芦丁可直接通过浸泡、搅拌等方法提取得到。
b. 在含量较低的植物材料中，我们可以使用一些有机溶剂，如乙醇、甲醇等，通过溶剂提取的方法获得。
2. 芦丁的分离方法：a. 使用分离漏斗将提取得到的芦丁溶液与适量的水混合，待分离出有机层后，可以将有机层收集起来。
b. 进一步使用旋转蒸发仪将有机层中的溶剂去除，得到芦丁的纯净固体。
3. 芦丁的鉴定方法：a. 若提取得到的芦丁为固体，我们可以通过比色法，如硼酸铁法，来进行初步鉴定。
芦丁在硼酸铁试液中呈蓝色、紫色。
b. 若提取得到的芦丁为液体，我们可以使用色谱技术，如高效液相色谱（HPLC），对芦丁进行鉴定。
通过比对标准品和峰面积的计算，可以确定芦丁的含量。
三、实验步骤：1. 准备材料：杜仲叶样品、乙醇等有机溶剂、色谱柱、色谱仪等。
2. 提取芦丁：将杜仲叶样品研磨成细粉，加入适量的乙醇中，摇匀浸泡。
放置一段时间后，使用滤纸或过滤器将提取液与渣滓分离开。
3. 分离芦丁：将提取液转移到分离漏斗中，加入适量的水，并进行摇匀，待有机层与水层分离后，打开分离漏斗放流，收集有机层。
4. 蒸发溶剂：将有机层转移至旋转蒸发仪中，控制温度和转速，使溶剂快速蒸发。
待溶剂完全蒸发后，将得到芦丁的固体。
5. 鉴定芦丁：若得到的芦丁为固体，可以进行硼酸铁法的比色鉴定。
若得到的芦丁为液体，可以使用色谱技术进行鉴定，并比对标准品确定芦丁的含量。
四、实验结果及讨论：根据实验操作，我们成功地提取和分离得到了芦丁，并通过比色法或色谱技术进行了鉴定。
通过实验结果，可以初步确定芦丁的含量和纯度。
五、实验总结：通过本次实验，我们学习了芦丁的提取、分离和鉴定方法。
实验结果的准确性和可靠性对于芦丁的研究和应用具有重要意义。
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综合化学实验: 芦丁的提取分离和鉴定芦丁简介:芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。
目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。
尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。
中药槐米（炒碳）味苦性凉、具清热凉血、止血之功。
常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
西医研究其主要有效成分为有机化合物“芦丁”而中药槐米中芦丁的含量可高达12~16%，是主要的芦丁天然来源。
槐米中还含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
研究文献证明芦丁具有VitP（维生素P）样作用（VitP具有生物类黄酮的功能，可防止维生素C被氧化而受到破坏，增强维生素功效；增加毛细血管壁强度，防止瘀伤。
有助于牙龈出血的预防和治疗，有助于因内耳疾病引起的浮肿或头晕的治疗等）。
而芦丁具有类似作用如可降低毛细血管脆性和调节通透性等，在医学临床上常将其用作毛细血管脆性引起的出血症以及防治高血压病等的辅助治疗药物。
芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinose，一种由葡萄糖glucose与鼠李糖rhamnose组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无结晶水时188~190℃。
溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
补充知识:关于苷（gān）和甙(dài): 苷类（glycosides，旧称甙）又称配糖体，是糖或糖的衍生物的半缩醛羟基与另一类非糖物质中的羟基以缩醛键（甙键）脱水缩合而成的环状缩醛衍生物，水解后能生成糖与非糖化合物。
目前国际上通用“苷”如“皂苷”，而过去习惯使用的中文名称“甙”目前已不再使用如“皂甙”现统称“皂苷”。
一、目的要求：1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、掌握化学鉴别试验、苷水解、衍生物制备、熔点和薄层层析检测等手段在苷类结构鉴定上的作用。
3、通过UV、IR、HNMR和MS图谱解析，了解光谱方法黄酮类化合物结构鉴定中的作用。
二、已知重要成分性质：1. 芦丁（rutin）：分子式C27H30O16·3H2O，为浅黄色针状结晶物，mp174～178℃（含三分子水）；100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，115～117℃软化，214～215℃发泡分解。
难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、二硫化碳、苯等，易溶于吡啶，甲酰胺特别是碱液。
通常常用的溶剂下其溶解情况为：较难溶于冷水（1：8000～10000），冷乙醇（1：650）；可溶于热水（1：180～200）以及冷甲醇（1：100）；较易溶于热乙醇（1：60）和热甲醇（1：10）。
2. 槲皮素（quercetin）为芦丁的苷元其分子式为：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
一般在碱水中溶解显黄色。
HOO3. 皂苷（saponin）一般为白色粉末，mp 210℃～220℃。
易溶于吡啶。
能溶于甲醇（1：200），可酸水解得下列两种苷元及糖。
糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
（1）白桦酯醇（betulin）无色针晶，mp215～220℃，能溶于醋酸，丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等；难溶于石油醚和水。
（2）槐花二醇（sophoradiol）无色针晶，mp219~224℃，溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇、难溶于水。
HOCH 2OHHOOH （1）（2）芦丁属于黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，因此可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。
通过纸色谱及紫外光谱等可进行黄酮及糖的鉴定。
芦丁酸性条件下水解的过程见下反应方程式：三、提取分离和纯化+鼠李糖+葡萄糖注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用，实验证明，提取时加入硼砂，产品质量要好些。
注2：加石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但pH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的降解。
注3：pH过低会使芦丁形成锌盐而降低收率。
四、芦丁的鉴定定性反应鉴别见附录。
（一）芦丁的酸水解称取精品芦丁2 g置500ml烧瓶中加2%的H2SO4200ml加热回流1小时酸性滤液沉淀中和冷水洗两次，干燥用95%乙醇25 ml重结晶中性滤液，结晶时可加入冷水20 ml，最后称重，计算收率。
浓缩黄色细针状结晶浓缩液（槲皮素）（供糖的鉴定）（二）糖的鉴定（纸色谱法）纸层析鉴定：采用中速层析滤纸（裁剪尺寸：5×20cm）取水解母液20ml，于水浴上加热，同时于搅拌下加BaCO3细粉中和至中性，过滤去多余BaCO3后，滤液浓缩至2~3ml，得样品液供纸色谱点样用。
标准对照品：以葡萄糖和鼠李糖标准品作对照（1％葡萄糖标准品醇溶液及1％鼠李糖标准品醇溶液）。
展开剂：正丁酵-醋酸-水（BAW）（4：1：5）上层，悬挂并利用上层展开剂纸色谱分离。
显色剂：苯胺以及邻苯二甲酸混合试液，喷后105℃烘10分钟。
显棕红色斑点。
注意事项:纸层析展开时可事先用铅笔在裁剪好的层析纸上画出展开起点(即点样的位置)和预制终点(即展开完毕后展开液的前沿)，这样方便进行测量计算比移值。
另外由于糖液一般无色，因此点样位置也可事先用铅笔点出标记，注意如果糖液浓度过低（实验时应尽量将糖液蒸发浓缩至3毫升以内）则应多次点样以达到浓集的目的，否则展开后的点不够明显。
点样时也需要注意点样液斑不易扩散太大，应控制液斑直径在3 mm以内，同时各点样点之间应尽量保持距离不可过于靠近，否则展开后可能得到较大的样班，而且不同样斑之间可能重合相互干扰而不易测量比移值。
下图给出正确的纸层析法标示。
（三）芦丁和槲皮素的薄层层析鉴定吸附剂：硅胶G（400目）以0.4% 羧甲基纤维素钠（CMC-Na）水液作为粘合剂制薄层层析板，板片自然阴干后于烘箱中100 ℃活化1小时。
展开剂：（1）CHCl3-MeOH-HCOOH（15：5：1）（2）CHCl3-丁酮-HCOOH（5：3：1）显色剂：1%的FeC13和1%的K3[Fe（CN）6]水溶液，使用时等体积混和。
注意：薄层层析点样注意事项依照纸层析五、实验说明及注意事项1．用石灰水调节芦丁提取溶液的pH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。
但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮结构在强碱性条件下易被破坏。
2．调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低（pH2以下）会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。
3．注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。
六、思考题1．苷类结构检识的一般程序？2．苷类水解的催化方法？3．怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O位上？4．怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖？5．UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
附录：芦丁的定性检测1．芦丁的定性反应取芦丁适量，加乙醇使溶解，分成三份供下述试验用：(1)盐酸镁粉试验：取样品液适量，加2滴浓HCl、再酌加少许镁粉，即产生剧烈的反应，并逐渐出现红色至深红色。
(2)锆-枸试验：取样品液适量，然后加2％ZrOCl2的甲醇溶液，注意观察颜色变化，再加入2％枸椽酸的甲醇溶液，并详细记录颜色变化。
(3)α-萘酚-浓硫酸反应：取样品液适量，加等体积的l0％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色。
2．芦丁的UV(1)鉴定试剂的配制①甲醇钠溶液：取0.25g金属钠，切碎，小心加入色谱甲醇10ml 中，此液置于玻璃瓶中，用橡皮塞密封。
②三氯化铝溶液：取1g无水三氯化铝，小心加入色谱甲醇20ml 中，放置24小时后全部溶解即得。
③醋酸钠：用无水粉末醋酸钠。
④⑤硼酸饱和溶液：取无水硼酸，加入适量色谱甲醇、制成饱和溶液。
（上述贮备液可放置六个月）（2）芦丁溶液的配制精密称取芦丁纯品0.5g，用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
（3）光谱的测定①甲醇光谱：取样品液置石英杯中，至200～500nm内进行扫描，重复一次，观察紫外光谱。
②甲醇钠光谱：取样品液置石英杯中，加入甲醇钠溶液3滴后，立即测定，放置5分钟后再测一次。
③三氯化铝光谱，在盛有样品液的石英杯中，加入三氯化铝6滴，放置1分钟后进行测定。
测定后加入3滴盐酸溶液（盐酸：水＝1：1）再进行测定。
④醋酸钠光谱：取样品液约3ml，加入过量的无水醋酸钠固体，摇匀（杯底剩有约2mg的醋酸钠），加入醋酸钠后两分钟内测定，5分钟到10分钟后再测定一次。
3．芦丁及槲皮素的色谱支持剂：中速层析滤纸（5×20cm）展开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层样品：自制槲皮素的乙醇溶液自制芦丁的乙醇溶液对照品：槲皮素标准品的乙醇溶液芦丁标准品的乙醇溶液显色剂：三氯化铝乙醇溶液喷雾预习报告及实验报告格式和要求：预习报告：1、实验目的2、实验原理3、实验步骤：（1）要求将实验内容分拆，并画出流程图（2）要求写明各试剂的用途和各步骤的目的和实验原理4、回答指导教师提出的问题实验报告：实验报告一律每班用一样大小软皮本，正面写实验报告，背面写实验记录，上课前交预习报告和上一次的实验报告（预习报告和实验报告写一份即可）。
组号同组人（预习报告完成）天气情况实验室温度湿度（预习报告完成）1、实验目的（预习报告完成）2、实验原理（预习报告完成）3、实验步骤：（1）要求将实验内容分拆，并画出流程图（预习报告完成）（2）要求写明各试剂的用量和加入时间（实验报告完成）（3）要求写明各试剂的用途和各步骤的目的和实验原理（实验报告完成）4、实验数据5、描述实验结果6、对实验数据进行处理和分析，并分析实验结果的合理性。
（实验后完成）7、回答讲义后思考题。