头孢氨苄胶囊混合工艺HPLC验证分析方法
药物分析辅导：头孢氨苄及其制剂含量测定方法
⾊谱条件与系统适⽤性试验：⽤⼗⼋烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以⽔-甲醇-3.86%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液（742：240：15：3）为流动相；检测波长为254nm。
头孢氨苄⼲混悬剂、头孢氨苄⽚、头孢氨苄胶囊和头孢氨苄颗粒含量测定⽅法同头孢氨苄。
⽂献报道的⽅法（HPLC法），试验条件除药典的⽔-甲醇-3.86%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液系统外，其它的如：周嘉等⽤HPLC法测定头孢氨苄胶囊的含量。
仪器：导津LC-10AD 液相⾊谱仪。
⾊谱柱为Spherisorb C18柱（5µm，4.6mm×250mm）；流动相为0.025mol/L磷酸溶液（⽤三⼄胺调pH3.0±0.1）-⼄腈（88：12）；流速为 0.9ml/min；检测波长为240nm；柱温为室温。
王建宁等⽤HPLC法测定头孢氨苄⽚的含量。
仪器：⽇⽴L-6200A⾼效液相⾊谱仪。
⾊谱柱为C18(250mm×4.6mm，5µm)；流动相：0.04mol/L磷酸溶液(⽤三⼄胺调pH3.0)-⼄腈(75：25)；流速：1mL/min；检测波长：240nm；柱温：室温。
程成等⽤HPLC法测定头孢氨苄胶囊的含量。
Waters⾊谱系统，⾊谱柱采⽤Nova Pak ODs柱(4µm，4.6mm×250mm)；流动相为0.01mol/L醋酸铵溶液(冰醋酸调pH4.0)-甲醇(70：30)；流速： 0.8ml/min；检测波长262nm；柱温25℃。
周静安等⽤HPLC法测定头孢氨苄胶囊的含量。
仪器：导津LC-10AD 液相⾊谱仪。
⾊谱柱为Shim-pack CLC-ODS柱（150mm×6mm）；流动相为甲醇-⽔（70：30）；流速为1.0ml/min；检测波长为262nm。
邓永辉等HPLC法测定头孢氨苄的含量。
仪器：导津LC-10AD 液相⾊谱仪。
⾊谱柱：250mm×4.6mm 不锈钢柱，填料为Hypersil ODS；磷酸⼆氰钾溶液(0.01mol/L)-⼄氰-甲醇(90：8：2)，并⽤磷酸溶液调节PH ⾄4.5±0.1；检测波长：254mm。
高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量
高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量摘要：在医学领域当中，孢氨苄胶囊属于一种半合成的抗生素，在临床治疗过程中具有突出的疗效，由于其具有良好的稳定性，而且内部不含有过多的毒性成分，在治疗过程中，病人也不会有副作用产生，因此得到了广泛的应用，该药品蛋白结合率较低，可以稳定葡萄球菌产生的青霉素酶，同时可以忍受革兰氏阳性菌产生的内酰胺酶。
以往经常使用碘量法测量药品的成分，但该方法操作繁琐，而且费时费力，检验过程中容易受到外在因素的影响，因此在药品检测过程中很少使用这种方法，而是使用高效液相色谱法。
关键词：高效液相色谱法；头孢氨苄胶囊；药品检测复方头孢氨苄胶囊主要有头孢氨苄和甲氧苄啶两种成分组成，由于该药品是通过化学加工过的方式制成，因此传统方法在检验的过程中会受到外在因素的影响。
头孢氨苄和甲氧苄啶共同使用可以起到断细菌在生长繁殖的作用而且可具有良好的抗菌作用，其抗菌性能要远远优于头孢氨苄。
为了能够了解该药品内部组成结构以及详细成分，本文采用高效液相色谱法，以乙酰苯胺为内标测定其含量，这种检测方法不仅操作便捷，检测结果的准确性能够得到保证，而且可以对其进行重复检测。
1仪器与试药1.1仪器由于该药品属于化学产物，仅仅依靠人力无法分辨其内部成分，因此必须使用相关的检测仪器才能够保证检测结果的准确性，常用的检测仪器有DIONEX P680AISO型高效液相色谱仪、UVD17OU型HPLC检测器、XS 225A分析天平。
除了检测仪器之外，还需要用到一些试剂以及药品，例如色谱纯，分析过程中用到的甲醇以及双蒸水，为了保证检测结果具有说服力，因此需要选取某些药物作为对照品，最后需要头孢氨苄胶囊，以上所述的药品以及检测器械其规格和质量必须与有关机构指定的标准相符合。
2方法与结果2.1色谱条件与系统适应性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂水-甲醇-3.85%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500；2.2对照品储备液的制备根据检测要求，选取适量的头孢氨苄对照液，记录其重量放置于专门的容器当中，向其中加入流动液体，达到稀释对照液的目的，摇匀，将稀释过后的对照液储存起来。
高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量
高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量头孢氨苄(cefalexin)为半合成抗生素，口服吸收良好，体内稳定，毒副作用较小，蛋白结合率低，对葡萄球菌产生的青霉素酶稳定；对革兰氏阳性菌产生的β-内酰胺酶有一定耐受性［1］，在临床上广为使用。
其含量测定中国药典(1995年版)采用碘量法［2］。
但此法操作繁琐，费工费时，影响因素多；还有采用高效液相色谱法的报道［3］，但内标物保留时间过长。
本文采用高效液相色谱法，以乙酰苯胺为内标测定其含量，方法简便、准确，重复性好，灵敏度高。
获得了较为满意的结果。
1 仪器与试药日立L-6200A高效液相色谱仪，L-4200H检测器，D-2500数据处理器。
头孢氨苄对照品(含量91.7%)、乙酰苯胺(内标物)、α-苯甘氨酸、7-氨基去乙酰胺基头孢烷酸(7-ADCA)，由中国药品生物制品检定所提供。
2 色谱条件色谱柱：YWG C18(250 mm×4.6 mm,10 μm)，流动相：0.015 mol。
L-1醋酸盐缓冲液(称取无水醋酸钠1.23 g，加水至1 000 mL，用醋酸调pH为4.0)-乙腈-甲醇(60∶6∶34)，检测波长：254 nm，流速：1.0 mL。
min-1。
3 线性范围精密称取头孢氨苄对照品约60 mg，置25 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10 mL置50 mL量瓶中，稀释成约为450 μg。
mL-1的溶液作为对照品溶液。
另精密称取乙酰苯胺适量，置25 mL量瓶中，加水溶解并稀释成约为550 μg。
mL-1的溶液，作为内标溶液。
精密量取对照品溶液0.1，0.5，0.75，1.0，1.5，3.0 mL，分别加入内标溶液2 mL，以流动相稀释至25 mL使内标最终浓度为44 μg。
mL-1［3］，摇匀，取20 μL 进样，色谱图见图1-A。
试验表明头孢氨苄浓度在18～535 μg。
mL-1范围内与对照品峰面积和内标物峰面积比呈良好的线性关系，回归方程为：A=0.015 81+0.009 83C r=0.999 9图1 对照品(A)与样品(B)高效液相色谱图1.头孢氨苄(3.98 min)2.乙酰苯胺(8.56 min)4 重复性和稳定性试验用样品进行6次试验测得平均含量为99.8%，RSD为1.7%。
头孢氨苄胶囊
头孢氨苄胶囊检验标准操作规程1.目的建立头孢氨苄胶囊检验标准操作规程，规范操作。
2.范围适用于头孢氨苄胶囊的检验。
3.依据《中国药典》2010版二部4.职责4.1 起草：QC ，审核： QA ，批准人：质量负责人4.2 QC实施本规程。
4.3 QA监督本规程的实施。
5.内容本品含头孢氨苄（C16H17N3O4S）应为标示量的90.0%～110.0%。
5.1鉴别5.1.1试液及仪器一般实验仪器和高效液相色谱仪5.1.2 分析步骤在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
5.2检查5.2.1有关物质5.2.1.1试液及仪器一般实验仪器和高效液相色谱仪0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：称取24g磷酸二氢钠，加水溶解并稀释至1000ml，即得。
磷酸盐缓冲液（pH7.0）：取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释至100ml，即得。
5.2.1.2 分析步骤取本品的内容物适量（约相当于头孢氨苄0.05g）置50ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取供试品溶液1ml，置100ｍｌ量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸对照品和α-苯甘氨酸对照品各约10mg，精密称定，置同一100ml量瓶中，加pH7.0磷酸盐缓冲液约20ml超声使溶解，再加流动相A稀释至刻度，摇匀。
精密量取上述溶液2.0ml，置20ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品溶液。
用高效液相色谱仪测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为0.2mol/L磷酸二氢钠溶液（用氢氧化钠试液调节pH值至5.0），流动相B为甲醇，按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为220nm，取杂质对照品溶液20μl注人液相色谱仪，记录色谱图，7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸峰与α-苯甘氨酸峰的分离度应符合要求；取供试品溶液适量，在80℃水浴中加热60分钟，冷却，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢氨苄峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
头孢氨苄生产工艺流程
提高反应温度：提高反应温度可以提高反应速率，缩短反应时间 优化反应时间：通过实验确定最佳反应时间，提高反应效率 改进反应器设计：改进反应器设计可以提高反应效率，降低能耗 优化原料配比：通过实验确定最佳原料配比，提高产品质量和产量
温度控制：优 化反应温度， 提高反应效率
压力控制：优 化反应压力， 提高反应速率
头孢氨苄原料：头孢氨苄酸、 头孢氨苄钠、头孢氨苄酯等
包装材料：玻璃瓶、塑料瓶、 铝箔等
质量要求：符合国家药品标 准，无毒、无害、无污染
头孢氨苄原料：纯度≥99% 溶剂：无水乙醇，纯度≥99.5% 催化剂：三乙胺，纯度≥99.5%
反应温度：20-30℃ 反应时间：2-3小时 反应压力：常压
原料种类：头孢氨 苄原料包括头孢氨 苄、盐酸、乙醇等
搅拌速度：优 化搅拌速度， 提高反应均匀
性
反应时间：优 化反应时间， 提高反应转化
率
采用高效节能 设备，如高效 电机、变频器
等
优化工艺流程， 减少能源消耗， 提高能源利用
率
采用清洁能源， 如太阳能、风
能等
加强废水、废 气、废渣等污 染物的处理和 回收利用，减
少环境污染
汇报人：
结晶法：通过 控制温度、浓 度等条件，使 头孢氨苄结晶
出来
萃取法：利用 有机溶剂与头 孢氨苄的溶解 度差异，进行
萃取分离
离子交换法： 利用离子交换 树脂对头孢氨 苄的吸附和交 换作用，进行
分离
膜分离法：利 用膜的渗透性 和选择性，对 头孢氨苄进行
分离
色谱法：利用 色谱柱对头孢 氨苄进行分离， 包括气相色谱 法和液相色谱
反应温度： 控制在2030℃
反应时间： 约2-3小时
药物分析实验：实验六 HPLC测定头孢氨苄胶囊的含量
五、注意事项
• 1．将配好的流动相接到流路中，开启泵起动开关，检测 是否漏液
• 2．流动相必须预先脱气，可用超声波、机械真空泵或水 力抽气泵脱气。
• 3．严格防止气泡进入系统，吸液软管必须充满流动相， 吸液管的过滤器始终浸在溶剂中，如变换溶剂，必须先停 泵，再将过滤器移到新的溶剂瓶内，然后才能开泵使用。
实验六 HPLC测定头孢氨苄胶囊的含量
一、实验目的
• 学习高效液相色谱分析的原理 • 学习外标法测定组分含量的方法 • 了解高效液相色谱仪的结构及正确使用方
法
二、实验原理
高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同 极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、 缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱， 经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内， 在柱内依据不同原理分离后，各成分先后 进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪 记录，从而达到分离分析的目的。
• 4．溶剂的变换必须注意溶剂的极性和互溶性。
• 5. 爱护实验器材
实验报告
1、 按要求填好实验报告，下次实验课前班 长统一收上来。
2、实验课成绩主要包括课堂表现和实验报告 两大部分。
• 色谱仪：岛津高效液相色谱仪 • 色谱柱：ODS柱（4.6250mm，5m） • 柱温：室温 • 流动相：水-甲醇-3.86%醋酸钠溶液-4%
醋酸溶液（742：240：15：3） • 检测波长:25（约相当于头孢氨苄0.1g），置 100ml量瓶中，加超纯水溶解，定容，摇匀，滤 纸过滤，取滤液10ml，置50ml量瓶中，用超纯水 定容。摇匀后用滤头过滤1-2ml溶液。取20µl注入 色谱仪，记录色谱图。
高效液相色谱流程
头孢氨苄胶囊的质量分析
谢 谢 / THANKS
制作人：吴爽
实训
四、注意事项
（三）滤膜应不大于 0.8 μm，并使用惰性材料制成的滤器，以 免吸附活性成分或干扰分析测定。 （四）采用对照品比较法测定供试品溶液的浓度时，需分别配制 供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为 供试品溶液中被测成分规定量的 100%±10％，所用溶剂也应完 全一致。
实训
三、实验内容
（一）检查 溶出度 经 45 分钟时，取溶液适量，立即用适当的微孔滤膜滤 过，自取样至滤过应在 30秒种内完成。精密量取续滤液适量 V1ml，用溶出介质 V2 ml 定量稀释制成每 1ml 中约含 25μg 的溶液，作为供试品溶液，照紫外-可见分光光度法（附录
ⅣA），在 262nm 的波长处测定吸光度 AX；另精密称取头孢
实训
三、实验内容
（一）检查
溶出度 则每粒胶囊的溶出量为（V×cX×V2／V1）g，6粒胶囊
中，每粒胶囊的溶出量按标示量计算（即溶出度），均不低于 规定的限度，即标示量的 80%，应符合规定。
溶出度 %
溶出量 标示量
100
%
实训
三、实验内容
（二）含量测定 照高效液相色谱法（附录Ⅴ D）测定。 1. 色谱条件与系统适用性试验 避光操作。照高效液相色谱法 (附录Ⅵ D)测定。 （1）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂；以水-甲醇- 3.86％ 醋酸钠溶液- 4％醋酸溶液（742 : 240 : 15 : 3）为流动相；检测波长为 254nm；取供试品溶液适 量，在 80℃ 水浴中加热 60 分钟，冷却，取20μl注入液相色谱 仪，记录色谱图，头孢氨苄峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
氨苄对照品适量，加溶出介质溶解并定量稀释制成每 1ml 中
(整理)头孢氨苄胶囊工艺验证方案与报告1
工艺验证方案浙江东日药业有限公司目录1验证方案的起草与审批1.1 验证方案的起草1.2 验证方案的审批2 概述3 验证人员4 时间进度表5 验证目的6 工艺流程图7 有关的文件7.1 工艺规程7.2 标准操作程序7.3 质量标准8 验证内容8.1 制粒工序8.1.1 干混过程8.1.2 制粒过程8.2 干燥工序8.3 整粒工序8.4 总混工序8.5 填充抛光工序8.6 铝塑工序9成品检验报告1 验证方案的起草与审批1.1 验证方案的起草1.2 验证方案的审批2概述头孢氨苄胶囊为本公司头孢类胶囊剂车间的专有品种，根据工艺验证验证周期，为了保证产品质量，对本品的生产工艺进行再验证。
本次验证是在厂房、设备、公用设施的验证合格的基础上对现行头孢氨苄胶囊（20万粒）生产工艺过程的验证，计划在三批产品的生产过程中实施。
3 验证人员工艺验证小组人员组成：4 时间进度表年月日至年月日完成工艺验证5 验证目的通过对头孢氨苄胶囊（20万粒）生产过程中存在的可能影响产品质量的各种工艺因素进行再验证，证实在正常条件下，本品工艺处于控制状态，且能够稳定地生产出符合质量标准要求的产品。
6 生产工艺流程及处方 6.1生产工艺流程6.2处方（每20万粒计）：7 有关文件7.1工艺规程：头孢氨苄胶囊生产工艺规程 TS-GY-1016-007.2 标准操作规程：称量、制粒、干燥、整粒、总混、填充、抛光、铝塑包装等标准操作规程。
7.3 质量标准：头孢氨苄胶囊原辅材料、包装材料、中间产品、成品的质量标准。
8 验证内容8.1制粒工序8.1.1 干混过程8.1.1.1 验证场所：制粒间(A3JE-007)。
8.1.1.2 设备：LGH-100高速混合制粒机(A3SB-007)。
8.1.1.3 验证目的：确定头孢氨苄、淀粉投入高速混合制粒机内混合3分钟后，主药含量以头孢氨苄计应均匀(RSD≤3%)。
8.1.1.4 验证方法：操作按标准程序进行，在设定的混合时间后按对角线法取样（五份样品），进行含量测定，填写记录。
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头孢氨苄胶囊混合工艺HPLC验证分析方法
摘要：目的：为了证明头孢氨苄胶囊混合配料在hplc条件下适合该产品的检查要求，证明在生产工艺过程中各混合时间点对其含量的影响以及头孢氨苄的专属性。
方法：hplc。
结果：该hplc条件可以检测出在混合工艺过程中，各混合时间点对药品含量的均匀性有多大影响，检测出在5分钟、10分钟、15分钟各上中下、左中右的取样点头孢氨苄配料样品的峰面积，时间较长的混合点的含量较均匀。
另外头孢氨苄胶囊配料样品的供试溶液在加热情况下头孢氨苄峰与其相邻的杂质峰完全分离。
因此可以确定该方法对头孢氨苄胶囊有专属性。
结论：利用高效液相色谱法可以检测出生产过程中，总混各阶段的各个时间点对头孢氨苄胶囊的含量也有一定影响，对混合过程中各个时间点的检测，以确保药物各组分布均匀，含量均匀，做到对药品含量均一性的控制，从而保证药品质量符合要求。
关键词：头孢氨苄混合hplc
【中图分类号】【文献标识码】【文章编号】1008-1879（2012）12-0391-01
为了证明在生产过程中总混阶段不同时间点对配料的混合程度及均匀性的考察，利用hplc对其混合各个时间点的配料含量的检测，使药物各组分在制剂中混匀，保证药物剂量准确，从而做到对药品质量的检测。
检测出样品在加热情况下破坏出来的杂质可以与
头孢氨苄峰完全分离，由此可知，该方法对头孢氨苄胶囊有专属性。
1材料
1.1仪器。
series 1500高效液相色谱仪，ar224cn分析天平，auw220d电子天平，液相专用柱c18。
1.2试剂。
流动相（水：甲醇：3.86%醋酸钠溶液：4%醋酸溶液，742：240：15：3）、头孢氨苄对照品，批号130408-200710，来源中国药品生物制品检定所。
1.3方法。
洗脱顺序：等度洗脱，检测波长：254，进样量：20ul、10ul。
2分析验证方法
2.1头孢氨苄对照品含量。
取对照品约25mg，精密称定，置25ml 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，精密量取10ml注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.2各混合时间点含量确定。
2.2.15分钟：称取该混合时间点头孢氨苄胶囊配料适量（约相当于头孢氨苄0.1g），置100量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.2.210分钟：称取该混合时间点头孢氨苄胶囊配料适量（约相当于头孢氨苄0.1g），置100量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml量瓶中，用流动相稀
释至刻度，摇匀，精密量取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.2.315分钟称取该混合时间点头孢氨苄胶囊配料适量（约相当于头孢氨苄0.1g），置100量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图。
（注：头孢氨苄胶囊规格为0.1250g，理论装量为0.1350g）。
2.3专属性确认。
取供试品溶液适量，在80℃水浴中加热60分钟，冷却，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。
3验证结果
3.1由图谱可知，混合5分钟时，各取样点的峰面积相对偏差较大，说明在混合5分钟时，药物混合不均匀，各取样点的含量偏差较大，其rsd值为1.6%。
3.2由图谱可知，混合10分钟时，各取样点的峰面积趋于平稳，相对偏差较小，说明在混合10分钟时，药物混合相对均匀，总体含量相对均匀，rsd值为1.3%。
3.3由图谱可知，混合15分钟时，各取样点的峰面积比较平稳，相对偏差较小，说明在混合15分钟以后，药物混合相对均匀，总体含量相对均匀，其rsd值为0.5%。
因此可以判定在混合过程中，混合时间对药物含量的均匀性有很大影响。
所以掌握混合阶段的时间可以保证药物剂量准确，从而做到对药品质量的检测。
3.4有图谱可知，头孢氨苄样品峰面积与相邻杂质峰面积的分离度大于1.5，符合规定。
因此可以判定该方法对头孢氨苄胶囊有专
属性。
对照品
参考文献
[1]《中国药典》2010版二部.附录xix a.药品质量标准分析方法验证指导原则。