葡萄糖-6-磷酸脱氢酶检测试剂盒(简易比色法)

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牛葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)elisa试剂盒说明书

牛葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)elisa试剂盒说明书

牛葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)elisa试剂盒说明书牛葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)elisa试剂盒说明书elisa试剂盒常见组成部分:1)酶和底物:在ELISA中zui常用的酶为HRP和ALP。

2)抗体:在ELISA中应用的抗体可分为多克隆抗体(多抗)和单克隆抗体(单抗)。

3)抗原:在ELISA中应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。

主要有三类,即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。

4 人E选择素(ESelectin/CD62E)检测试剂盒包被:将免疫活性物质(抗原或抗体)结合于固相载体上的过程称为包被。

常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纤维薄膜等;常用的方法有吸附法、化学交联法及亲和素生物素间接包被法5)固相载体:固相载体是ELISA中用以分离结合标记物和游离标记物的主要手段,应与各种免疫活性物质有良好的结合性能并且不改变其免疫活性。

常用的固相载体有聚苯乙烯塑料和硝酸纤维素膜。

牛葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)elisa试剂盒样本实验前准备:ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

(1)血清室温血液自然凝固1020分钟后,离心20分钟左右(20003000转/分)。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

(2)血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合1020分钟后,离心20分钟左右(20003000转/分)。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

(3)尿液:用无菌管收集。

离心20分钟左右(20003000转/分)。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照此实行。

(4)细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。

离心20分钟左右(20003000转/分)。

仔细收集上清。

(5)培养细胞检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.27.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变检测国家参考品的建立

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变检测国家参考品的建立

M. λDNA/HindⅢ Marker 1. 兔睾丸(rabbit testis) 2. 小鼠睾丸(micetestis) 3. 大鼠睾丸(rat testis) 4. 貂睾丸(mink testis) 5. 狗睾丸(dog testis) 6. 羊睾丸(sheep testis) 7. 猪睾丸(pig testis)图1 基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图Fig. 1 Genomic DNA agarose gel electrophoresis2.2 基因组DNA的浓度与纯度基因组DNA经 3 次平均测定,A260 /A280值均在1.7~1.9之间,浓度在 100~400 ng·μL-1之间(表2)。

药物分析杂志ChineseM. 100 bp DNA Ladder 1. 阳性对照品(positive control) 2. 兔睾丸(鲜)[rabbit testis (fresh)] 3. 兔睾丸(干)[rabbit testis (dry)] 4. 小鼠睾丸(mice testis) 5. 大鼠睾丸(rat testis) 6. 貂睾丸(mink testis)7. 狗睾丸(dog testis) 8. 羊睾丸(sheep testis) 9. 猪睾丸(pig testis)10.空白对照(blank control) 退火温度(annealing temperature):A. 58 ℃ B. 59 ℃ C. 60 ℃图2 兔睾丸 DNA PCR 特异性扩增图谱Fig. 2 PCR specific amplification map of rabbit testis DNA2.4 克隆结果及序列比对结果经过分子克隆蓝-白斑筛选,可见氨苄阴性平皿长满了细菌,氨苄阳性平皿出现蓝-白菌落(图3)。

挑取白色菌落培养后,提取质粒 DNA,在 59 ℃的退火温度下进行 PCR 扩增,琼脂糖凝胶电泳结果显示,克隆鉴定结果与预期目的条带位置一致,在 326 bp 出现1条特异性 兔睾丸 DNA 分子克隆蓝—白斑筛选图Fig. 3 Rabbit testis DNA molecular cloning blue-white spot screeningM. 100 bp DNA Ladder 1. 兔睾丸阳性对照品克隆(rabbit testis positive control clone) 2、3. 兔睾丸克隆(rabbit testis clone) 兔睾丸质粒 DNA PCR 扩增图谱Fig. 4 PCR amplification map of rabbit testis plasmid DNA图5 克隆目的基因序列与靶基因序列 BLAST 结果Fig. 5 Cloning of the target gene sequence and target gene sequence BLASTJournal of Pharmaceutical Analysis 药物分析杂志ChineseM、1~10. 同图 2(same as Fig. 2)图 6 引物特异性电泳结果Fig. 6 Primer-specific electrophoresis results2.5.2 稳定性 随机抽取1盒试剂盒,将其放入-20 ℃冰箱中冷冻,取出融化;如此反复冻融5、10、15、20次,在 59 ℃的退火温度下进行 PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳结果显示,兔睾丸阳性对照品和正品兔睾丸均在 326 bp 处出现1条特异性扩增条带,空白对照未出现扩增条带,结果稳定(图 7)。

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明分光光度法货号:BC0930规格:50管/48样产品内容:提取液:60mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体47.5mL×1瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1支,-20℃保存;试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;试剂四:液体×1支,-20℃保存;产品说明:葡萄糖-6-磷酸酶((glucose6phosphatase,G6Pase,EC3.1.3.9)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。

G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖,变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH,在340nm下测定NADH生成速率,即可反映G6P活性。

需自备的仪器和用品:紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤:一、样本的前处理:1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

二、测定步骤:1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

工作液的配制:临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用;用不完的试剂4℃保存一周;2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。

3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液,立即混匀,记录340nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC2100规格:50T/48S产品内容:试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存。

临用前配制,加入5mL试剂一,混匀。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。

临用前配制,加入5mL试剂一,混匀。

;产品说明:磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH依次催化NADPH 合成,与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。

此外,6PGDH逆境生理中具有重要作用。

6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰,而NADP+没有;通过测定340nm吸光度增加速率,计算6PGDH活性。

需自备的仪器和用品:紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤:一、样本的处理称约0.1g组织,加入1mL试剂一,冰上充分研磨,10000rpm4℃离心10min,取上清液,待测。

二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min以上,调节波长到340nm,蒸馏水调零。

2.试剂一置于37℃水浴预热30min以上。

3.加样表:在比色皿中依次加入试剂名称(μL)测定管(μL)空白管(μL)样本100-蒸馏水-100试剂一700700试剂二100100试剂三100100于340nm处测定3min内吸光值变化,第0s吸光值记为A1,第180s吸光值记为A2。

记△A测定=A2测定-A1测定,△A空白=A2空白-A1空白。

三、6PGDH活性计算:1)按蛋白浓度计算活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U(U/mg pr)。

6PGDH酶活性(U/mg prot)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(Cpr×V样)÷T=536×(△A测定-△A空白)÷Cpr(2)按样本鲜重计算活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U(U/mg prot)。

115462例新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查及基因突变分析

115462例新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查及基因突变分析

·115JOURNAL OF RARE AND UNCOMMON DISEASES, FEB. 2024,Vol.31, No.2, Total No.175【第一作者】张禾璇,女,副主任技师,主要研究方向:新生儿疾病筛查、产前筛查。

Email:******************【通讯作者】张禾璇·论著·115462例新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查及基因突变分析*张禾璇* 杨 雪 王侣金 李林洁 张晓怡 刘兴宇 余 蕾贵州省贵阳市妇幼保健院优生遗传科 (贵州 贵阳 550003)【摘要】目的 了解贵阳地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD)缺乏症发病情况和基因突变特点,为贵阳地区G6PD缺乏症的防治提供科学参考。

方法 募集该地区2020年8月至2023年1月出生的新生儿,应用荧光分析法对其血斑样本进行G6PD酶活性筛查,召回初筛阳性儿,完成G6PD酶活性诊断及多色探针荧光 PCR 熔解曲线法(Multicolor probe melting curve analysis method ,MMCA)基因突变分析。

结果 共募集115462例新生儿,G6PD酶活性筛查血斑样本共筛出阳性1606例,筛查阳性率为1.39%(1606/115462),其中男性为1.83%(1130/61801)、女性0.89%(476/53661),男女新生儿G6PD酶活性初筛阳性率差异有统计学意义(P <0.01);召回初筛阳性患儿,G6PD基因突变检出率87.07%(909/1044),其中男性为90.09%(764/848),女性为73.98%(145/196),男女间G6PD基因突变检出率差异有统计学意义(P < 0.01)。

本研究共检出 13种类型G6PD 基因单一突变型(c.1024 G > T、c.1388 G > A、c.95 A > G、c.1376 G > T、c.592C > T、c.871 G > A、c.519 C > T、c.392G > T、c.493 A > G、c.1004C > A、c.1360C > T、c.383T > C、c.517T > C)和6种复合突变型(c.1376 G>T杂合复合c.95A>G杂合突变、c.1024 G>T杂合复合c.95A>G杂合突变、c.1024 C>T杂合复合c.1388 G>A杂合突变、c.1024 C>T杂合复合 c.519C>T杂合突变、c.1376 G>T杂合复合c.1024 C>T杂合突变、c.95A>G杂合复合c.1388 G>A杂合突变)。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性浓度检测法的初步研究

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性浓度检测法的初步研究

法 及 简 易 快 速 高 铁 血 红 蛋 白还 原 试 验 检 测 法 的 检测 结 果 具 有 高 度 一 致 性 。G-6一PD 活 性 浓 度 检 测 法 可 用 不 洗 涤 红
细 胞 ,其 检 测 试 剂 及 检 测 方 法 具 有 良好 的 重 复 性 。制 备 溶 血 液 时 吸 样 量 从 7~ 13 l的 G-6一PD 活 性 浓 度 检 测 结 果
出 G-6一PD 在 Hb中 的 活 性浓 度 (U/g Hb),对 同 一 标 本 用 简 易 快 速 高 铁 血 红 蛋 白还 原 试 验 、G-6一P/6一GP 比值 法 进
行 对 比试 验 。结 果 G-6一PD 活 性 浓 度 的参 考 范 围 为 ≥ 5.0 U/g Hb,G-6一PD 活 性 浓 度 检 测 法 与 G-6一P/6一GP 比值
检 验 医学 与 临 床 2008年 1月 第 5卷 第 2期 Lab Med Clin,January6一磷 酸脱 氢 酶 活 性 浓 度 检 测 法 的初 步 研 究
贾璋林 ,杨发 达 ,谭桂彩 ,孙 威 (广 州 中医药大学 附属 南海妇产 儿童 医院检验科 ,广 东佛 山 528200)
[Abstract] Objective To establish a simple,quick and automated method to detect the glucose-6一phosphate dehydrogenase(G-6一PD)activity.M ethods To prepare the reagents of the G-6一PD activity and detect by Hitachi一
value m ethod and easy m ethem oglobin reduction test.U nwashed red blood cells could be used to detect the G-6一PD active concentration. T here w as satisfactory reproducibility of the reagents and the analytical m ethod of G-6一PD ac— tive concentration. There w as no significant difference of the G -6一PD active concentration in the application of sam ple volume from 7 tA to 1 3 tA in procedure of hemolysate preparation.There was higher 6一PD active concentration de— tected by whole blood anticoagulated with ACD than that by packed red cells(P ̄ O.05).Conclusion The analytical m ethod of G-6一PD active concentration is a sim ple,quick and autom ated m ethod with satisfactory reproducm ility for detecting G-6一PD activity.

小鼠葡萄糖 6磷酸脱氢酶 (G6PD) 酶联免疫分析试剂盒 使用说明书

小鼠葡萄糖 6磷酸脱氢酶 (G6PD) 酶联免疫分析试剂盒 使用说明书

小鼠葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)酶联免疫分析试剂盒使用说明书产品编号:E0716m10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

11. 覆膜:5张12. 使用说明书:1份自备物品1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)2. 微量加液器及吸头,EP管3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸标本的采集及保存1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3. 其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。

实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。

空白孔加样品稀释液50μl,余孔分别加标准品或待测样品50μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁。

为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 立即在每个孔中加入检测溶液A工作液50μl(在使用前半小时内配制),轻轻晃动混匀,酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3. 弃去液体,甩干,洗板3次。

每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)简介:葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase ,G-6-PD 或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶(EC1.1.1.49)。

Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯,后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),同时NAPD 被还原成NADPH ,其反应公式如下:G-6-P+NAPD +→6-PGA +L-NADPH 。

在上述偶联反应中,NADPH 生成速率与样本中酶活性呈正比,通过分光光度计或自动分析仪检测吸光度上升速率(ΔA /min),上升速率(ΔA /min)与G-6-PD 活性呈正比,比色杯光径1.0cm ,直接计算酶的活性单位。

100T 该试剂盒试剂可以检测50次样本,该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

组成:自备材料:1、生理盐水2、水浴锅3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考):1、预备溶血液:取新奇抗凝血,离心取上清及白细胞层,用4℃预冷的生理盐水洗涤,每次取上清时,务必去除剩余的白细胞层,再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液,4℃保存备用。

临用前,以样本稀释液稀释,即为溶血液。

4℃保存10h ,编号名称TE0085 100TStorage试剂(A): 样本稀释液100ml -20℃ 避光试剂(B): G6PD assay buffer 100ml 4℃ 试剂(C): NADP 18mg -20℃ 试剂(D): G-6-P 1支-20℃ 试剂(E): G-6-P 稀释液10mlRT 使用说明书1份-20℃保存48h。

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3、 生化分析仪检测:按照下表设置主要参数。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用
量或适当稀释后再进行测定。
波长
340nm
反应温度
37℃
孵育时间
90s
比色杯光径
1.0cm
系数
8040
待测样品
6μl
检测工作液
264μl
G-6-P 工作液
33μl
计算: 分光光度计计算公式:G6PD(U/L)=Δ A/min×(106/62 20)×(1000/ 20)=Δ A/min×8040
组成:
名称 试剂(A): 样本稀释液 试剂(B): G6PD assay buffer 试剂(C): NADP 试剂(D): G-6-P 试剂(E): G-6-P 稀释液 使用说明书
编号 TE00 85
Storage
100ml -20℃ 避光 100ml 4℃ 9mg -20℃
1 支 -20℃ 10ml RT
加入物
空白管 测定管
检测工作液(μl)
880
880
G6PD assay buffer (μl)20-溶血液(μl)

20
混匀,孵育。
G-6-P 工作液(μl)
100
100
混匀,孵育,在 340nm 处 1-3min 各管吸光度变化,计
算各管ΔA/min。
北京雷根生物技术有限公司
生化分析仪计算公式:G6PD(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(303/6)=ΔA/min×8040
参考范围:
成年健康人红细胞 G6PD:8-18U/g Hb
注意事项:
1、 血清中 G6PD 活性在室温可以保存 2 天,4℃保存 1 周,-20℃保存 1 个月。 2、 严重黄疸、脂血或溶血的血清,可能会引起测定管吸光度增高。 3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1份
操作步骤(仅供参考):
1、 准备溶血液:取新鲜抗凝血,离心取上清及白细胞层,用 4℃预冷的生理盐水洗涤 2 次, 每次取上清 时,务必 去除剩余 的白细胞 层,再加 预冷的生 理盐水配 成含红细 胞压积为 30%的红细胞悬液,4℃保存备用。临用前,以样本稀释液稀释 25 倍,即为溶血液。
2、 分光光度计检测:按照下表设置空白管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避 免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
北京雷根生物技术有限公司
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)
简介:
葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase,G-6-PD 或 G6PD)是糖 酵解途径、 柠檬酸循 环以外的 另一个葡 萄糖分解 途径的磷 酸葡萄糖 酸途径(磷 酸戊糖途 径) 中的第一个酶(EC1.1.1.49)。Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色 法)其检测原理是红细胞 G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯,后者徆快氧化成 6-磷酸 葡萄糖酸(6-PGA),同时 NAPD 被还原成 NADPH,其反应公式如下.100T 该试剂盒试剂 可以检测 50 次样本,该试剂盒仅用于科研领域,丌宜用于临床诊断或其他用途。
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