黄瓜花粉生活力的研究
花粉活力测定的3种办法
精心整理实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】-KI300ml。
???I2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
花粉生活力测定方法研究进展
花粉生活力测定方法研究进展花粉生活力测定方法研究进展摘要：总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。
关键词：花粉花粉活力测定方法花粉是高等植物的雄性配子体，在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。
花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象，也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。
花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。
在农业生产及农业常规杂交育种的中，研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。
农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难，为解决这一难题，保存花粉的活力成为重要手段，而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。
不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。
因此，掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。
综合前人的研究结果，花粉生活力的检测方法可以分为四大类：①染色法；②萌发测定法；③田间授粉检测法；④形态测定法、无机酸检测法。
1 染色法 1.1 TTC 染色法TTC 即235-氯代三苯基四氮唑，它是一种氧化还原染料，水溶液无色。
基本原理是1：当TTC 渗入细胞后，遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子，由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物，由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤：①配制PH 为7.17 的磷酸缓冲液。
称取0.832 克磷酸氢二钠和0.273 克的磷酸二氢钾溶于100ml 的蒸馏水中，调整pH 为7.17。
②TTC 溶液配制。
依据不同植物称取0.02～1.0g 的TTC 溶于100ml 的磷酸缓冲液中，于棕色瓶中黑暗处保存。
③染色。
取少量花粉置于载玻片上，加上一滴TTC 溶液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，然后放置于35℃的恒温箱中染色15～20min。
④镜检。
于10×10 倍镜下观察，凡具有活力的花粉被染成红色，部分丧失活力的呈现粉红色，无色的是的或不育的花粉粒。
黄瓜花粉萌发的实验
黄瓜花粉萌发的实验近年来黄瓜育种工作进展很快，出现了许多高产优质、抗病性强的新品种。
黄瓜是喜温性植物，温度过高或过低常常导致其授粉受精作用不良，进而影响产量和育种工作的顺利进行。
为了解决在配制黄瓜杂种一代品种中发生的父本、母本花期不遇和杂种一代纯度偏低等问题，成武县蔬菜局对黄瓜花粉在适宜的培养基上，花粉不同发育时期的萌发情况及花粉耐贮性进行了研究，从而为了解其授粉的最佳时机和花粉的耐贮性提供了可靠的依据和方法。
一、材料和方法1试验材料(1)品种以天津黄瓜研究所培育成功的黄瓜一代杂种“津研3号”的开花种株作为实验材料。
(2)主要试剂15％的蔗糖溶液、100mg/kg的硼酸溶液。
(3)主要仪器电子显微镜、双凹载玻片、培养皿、镊子、干燥器、冰箱、分析天平。
(4)溶液的配制用15mg蔗糖+0.1mg硼酸配制成100mL培养基。
2试验方法(1)花粉采集早晨采摘当日盛开的黄瓜雄花，取出花药放在干燥器内3～4h，然后取出，用镊子使花粉散出，拣出杂质。
(2)花粉贮藏·将已取得的花粉均分为2份，分别在不同条件下贮藏。
①一般室温下贮藏，将其中一份花粉装于指形管中室温下贮藏。
②低温下贮藏，将另一份花粉装于指形管中存于电冰箱内，温度控制在4℃左右。
(3)花粉萌发本实验采用液体培养基：15％的蔗糖+100mg/kg硼酸。
培养基用高压灭菌锅灭菌20min，然后在无菌室中分别将3-4滴培养液滴于双凹载玻片槽中，用毛笔沾取少许花粉均匀撒于培养液表面(注意不要搅拌，以防花粉混于液体中因缺少空气而影响其萌发，又因花粉深浅不一而在显微镜下检查时因光线折射而不易观察)。
处理好同温度下培养2～3h，镜检，记录其萌发率并比较萌发能力。
由于一天之中，随着时间的推移，温度和花龄都发生变化，即温度由低一高一低，花龄由幼一壮一老，由图1可知，采花当天花粉粒萌发有两个高峰时期，即早晨和下午16：00左右，中午因温度过高会使花粉萌发受阻。
因此，人工辅助授粉后，将载玻片放于一底部有少量蒸馏水的培养皿中(注意不要使水没过载玻片)，盖好培养皿，放在室内培养2～3h后，在10×10倍的电子显微镜下镜检3个互不重叠的视野。
实验：园艺植物花粉生活力测定
天竺葵柱头上的花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
蒂氏荚蒾花粉（灰色) 其中一个已开始萌发
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
勿忘草的花粉 最小的花粉粒之一，直径只有0.005毫米
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桦树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
柳树花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
染色者为发育不良、生活力弱的花粉。观察3~4个视野，
五、方法步骤：
（三）花粉生活力试验
3.取另一载玻片，加少量同种待测花粉，然后在花
粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各一滴，仔细搅匀，盖上盖
玻片，用镊子轻轻压实。经3～4分钟后，放在显微
镜下检查。
有生活力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的 花粉为黄色或无色，连续观察3～4个视野，分别记 录有生活力及无生活力的花粉数。
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
实验二花粉生活力的测定
实验二花粉生活力的测定一实验目的掌握花粉生活力鉴定的方法和原理二实验材料羽衣甘蓝、矮牵牛、三色堇等植物的花粉三仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、玻璃棒、滴管、量筒、电炉、石棉网、烘箱蔗糖、琼脂、蒸馏水、磷酸二氢钾、磷酸二钠、TTC四实验原理花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少通常与其生活力密切相关，因此可利用花粉的形态观察过氧化物酶、脱氢酶活性的高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，主要有1 直接鉴定法2 形态观察法3 染色观察法4 培养基发芽法五实验步骤花粉生活力的测定染色观察法——TTC染色1 配置TTC染色液，称取0.5gTTC溶于100ml磷酸盐缓冲液中，装入棕色瓶2 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入1~2滴0.5%TTC染色液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，于35~40°C条件静置15~20min。
3 观察统计：在显微镜下观察三个不同视野。
凡被染成红色或玫瑰色都是有生活力的花粉.培养基发芽法——固体培养基1 配制培养法：取1g琼脂，5g蔗糖，量94ml蒸馏水，装入烧杯，加热使琼脂溶化，配成5%浓度培养基。
同法配置10%、15%、20%浓度的培养基。
2 制片：用滴管吸取少量培养基，趁热滴在载玻片上，使放置凝固。
3播种花粉：少量的花粉均匀撒播4培养与观察：将制好的片子放在垫有湿润滤纸的培养皿内，于20—22℃温箱中培养。
待花粉萌发后于显微镜下观察，并统计发芽率，观察是每片随机取三个视野，统计花粉总数，计算平均发芽率。
六作业及思考题同种植物材料培养基法测得的花粉生活力较低染色法测得的花粉生活力较高原因：因为用染色法时，只要是有活力的花粉粒就会被染上颜色，而有活力的花粉粒却不一定会萌发。
花粉的采集与保存、形态观察及生活力测定思考题
花粉的采集与保存、形态观察及生活力测定1.上述方法是否适合于所有植物花粉活力的测定？答：否。
形态观察法只适用于测定新鲜花粉的生活力，不适用于测定贮藏的花粉，体积较小的花粉和形态结构不规则的花粉，这都会影响实验结果。
染色观察法不适用于测定花粉颜色与染色结果相近的植物花粉活力，会对观察有一定的干扰。
另外，碘－碘化钾染色法不能准确表示花粉的活力，也不适用-KI 于研究某一处理对花粉活力的影响。
因为核期退化的花粉已有淀粉积累，遇I2呈蓝色反应。
另外，含有淀粉而被杀死的花粒遇I-KI也呈蓝色。
2培养基发芽法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定，不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发。
不同种类植物花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
2.哪种方法更能准确反应花粉的活力？答：个人认为发芽实验法更能准确反应花粉活力，虽然发芽试验法更为麻烦一些，但其结果更接近花粉的自然生活力，能较为直接的反应花粉的萌发率。
3.还有哪些方法可以用来检测植物花粉活力？答：①醋酸洋红染色法。
此法的染色原理是靠花粉中的脱氢辅酶而染色，有活力的花粉被染成红色，部分失去活力的呈现粉红色，而无活力或不育的花粉无色。
②过氧化物酶染色法。
此法又称联苯胺染色法,是根据花粉中过氧化物酶的活性来判断花粉的活力。
由于有活力的花粉含有活跃的过氧化物酶，所用试剂与过氧化物酶发生氧化反应而染色，有活力的花粉被染成红色，无活力的花粉则呈现黄色或无色透明。
③MTT染色法。
MTT染色法是根据花粉粒中脱氢酶的活性判断花粉生活力，镜检时,花粉呈现蓝色表明花粉有活力。
④FCR染色法。
此法也叫荧光染料反应法，其基本原理是荧光染料本身不产生荧光，无极性，并能自由地透过完整的原生质膜。
当此种染料进入原生质后，即被醋酶作用形成一种能产生荧光的极性物质一荧光素。
由于荧光素不能自由地出人原生质膜，而只在细胞内积累，因此可以根据花粉产生荧光的情况来判断花粉的生活。
瓜菜花粉细胞学观察及活力测定概述
瓜菜花粉细胞学观察及活力测定概述贾聖凤;孙德玺;孙守如;邓云;朱迎春;安国林;李卫华;刘君璞【摘要】植物的生长发育从花粉发育开始,对植物花粉细胞学的观察与活力测定是研究雄配子发育的工作基础.花粉的生长发育关系到瓜菜类作物自身的生活发育,花粉的活力为花粉发育、植株受精提供了保障,花粉细胞学观察为更好利用掌握花粉发育过程进而研究花调控的分子机制做准备.但影响花粉整个生长发育阶段的因素有很多,为准确地判断花粉活力以及花粉发育关系到植株育性、花芽分化、结实率、光周期等,进一步影响到分子育种及农业经济效益,因此对花粉进行活力测定与细胞学观察必不可少.笔者对葫芦科植物花粉细胞学以及活力测定方法进行了综述,重点介绍了花粉细胞学以及活力测定的方法,对各种相应的方法在蔬菜中的应用进行了总结,并对观察测定的应用进行了一定程度的展望.所介绍的观察测定方法为更好地选出适合判断西瓜、甜瓜、黄瓜等花粉活力及细胞学观察的方法提供了一定的参考,以便于开展授粉育种工作.【期刊名称】《中国瓜菜》【年(卷),期】2019(032)003【总页数】7页(P1-7)【关键词】瓜菜作物;花粉细胞学观察;花粉活力测定【作者】贾聖凤;孙德玺;孙守如;邓云;朱迎春;安国林;李卫华;刘君璞【作者单位】中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009;河南农业大学园艺学院郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009;河南农业大学园艺学院郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009【正文语种】中文现所知的植物种类近30 万种，开花植物比例较大，占据90%以上，其中我国栽培的蔬菜包括20多个科，其中葫芦科为8 大科之一，包括苦瓜、冬瓜、丝瓜、黄瓜、西瓜、南瓜、西葫芦等，在中国蔬菜生产中占有重要到地位[1]。
花粉生活力测定
（三）TTC法：（染色法） TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花 粉呼吸过程中脱氢酶的活性。2、3、5-氯化三苯基四氮唑 (TTC)的氧化状是无色的，被氢还原时成红色的TTF。 具有活力的花粉呼吸作用较强，由于呼吸作用产生的氢能 使TTC还原成TTF，因此花粉便染成红色；而无生命的花 粉没有呼吸代谢活力，TTC不被还原，因而不着色。所以， 可根据花粉染不染成红色来判断有无生命力，从而测定花 粉生活力。
（二）联苯胺法：（染色法）
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利 用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色， 依据颜色可知花粉有无活性。实验中甲液成分为联苯胺， α-萘酚、碳酸钠，乙液成分为过氧化氢。
H2O2 + 酚
（无色）
过氧化氢酶
醌 + H2O
（红色、玫瑰红色）
1、配制药液 a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液； b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液； c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。 以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用 d.使用时将这三种溶液等量配成“甲液”，放入棕色滴瓶中 备用， e.将过氧化氢用蒸馏水稀释成0.3%的溶液作为“甲液”，随 配随用。 2、观察 取花粉少许撒入凹型载玻片，然后在花粉上滴“甲液”一滴， 片刻后，再滴入“乙液” 一滴，仔细搅匀，盖上盖玻片。 经3～5分钟后，再放在显微镜下检查。 有生活力的花粉呈红色或玫瑰红色，不着色者为无生活力的 花粉。为了确定具有生活力的花粉百分率，要连续观察3～5 个视野，求其平均值，将观察结果填入表内。
配置培养基（ 100ml水+1g+琼脂+0.01g硼酸+ 5-20g糖 ） 煮沸溶化 用玻棒分装与凹玻片中 播撒花粉 置于培养皿中20-25℃恒温培养数小时 保持湿度 在显微镜下镜检计数