主管检验师临床医学检验免疫学和免疫检验 第十七章 流式细胞仪分析技术及应用
第十七章流式细胞仪分析技术及应用
第一节概述
流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成，可对细胞悬液中的单个细胞或特定细胞或其超微结构进行多参数快速分析，带分选系统的流式细胞仪还可按实验设计要求分选出具相同特征的同类型细胞，用于培养或进一步研究。
一、工作原理
流式细胞仪的工作原理是采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析的精确性。
（一）基本组成结构
1.液流系统
由样本和鞘液组成。
待测细胞被制备成单个细胞的悬液，经荧光染料标记的单克隆抗体染色后置入样品管中，在清洁气体压力下进入流动室形成样本流。
鞘液是辅助样本流被正常检测的基质液，其主要的作用是包裹在样本流的周围，使其保持处于喷嘴中心位置以保证检测的精确性，同时又防止样本流中细胞靠近喷孔壁而堵塞喷孔。
2.光学系统
（1）激光光源
（2）分光镜
（3）光束成形器
（4）透镜组
（5）滤片
（6）光电倍增管（PMT）
3.数据处理系统
主要由计算机及其软件组成，进行实验数据的分析、存储、显示，是流式细胞仪组成部件中的重要环节。
（二）基本工作原理
检测需要标记了特异性荧光染料的单细胞悬液和鞘液，光电倍增管将已接收的光电信号转换成电压脉冲和积分脉冲，使信号放大，该信号进入计算机系统进行数据转换、储存、分析、处理按不同的检测设计采用相应软件程序对结果进行综合分析，并以图像和数据显示于荧光屏上，包括了单参数和二维或三维图像资料，阳性细胞百分率、斜率、峰值、峰面积等多参数资料。
二、散射光的测定
（一）前向散射光
（二）侧向散射光
三、荧光测量
（一）荧光信号测量与放大器
（二）荧光补偿
四、细胞分选原理
（一）分选的基本原理
当实验设计中设定了被分选细胞的特性参数时，此类细胞在形成液滴时会被充电，使其带有正电荷或负电荷，未被设定分选参数的细胞及空白液滴不带电荷。
带电荷的液滴在落入电极偏转板的高压静电场时，依所带电荷是正或是负而发生向右或向左偏转，落入指定的收集器中，完成细胞分选的目的。
（二）分选的技术要求
1.分选速度一般要求分选速度至少达5000个／秒左右。
2.分选纯度
3.分选收获率
4.分选得率
第二节数据的显示与分析
流式细胞仪收集细胞产生的各种电讯号，最终以数字及图式形式表示。
每种讯号（除外前向散射光信号）都包括峰值脉冲信号和面积脉冲信号两种。
峰值脉冲信号指的是脉冲的高度；面积脉冲信号指的是电压脉冲曲线内区域的大小。
一、参数
流式细胞仪的数据参数是指仪器采集的用于分析的信号，包括：
1.前向散射光（FS）反映颗粒的大小。
2.侧向散射光（SS）反映颗粒内部结构复杂程度、表面的光滑程度。
3.荧光（FL）反映颗粒被染上荧光部分数量的多少。
（二）双参数散点图
1.点图
由两维参数构成，利用颗粒密度反映同样荧光强度的颗粒数量的多少。
2.二维等高图
二维等高图用等高线来表示细胞数量。
一条等高线连接相同细胞数的点，不同的等高线代表不同的细胞数量，越往里面的线上的点代表的细胞数越多，等高线越密集，细胞数变化越快。
等高线选择通常采用等间距等高线或对数等高线。
3.假三维等高图
是计算机软件在二维等高图基础上作出的三维立体图；由于图中的一维不是参数，而是细胞数，因而称为假三维等高图。
（三）三参数散点图
散点图的三维坐标均为参数（散射光或荧光）而非细胞数。
（四）流式细胞仪的多参数分析
三、设门分析技术
流式细胞仪的单参数或多参数分析均是基于选定的目的细胞群进行的，而细胞群的选定与设门（gating）分析技术密切相关。
门设置是指在某一张选定参数的直方图上根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并
要求该样本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。
根据门的形状又分为线形门、矩形门、圆形门、多边形门、任意形状门和十字门。
第三节流式细胞仪免疫分析的技术要求
一、免疫检测样品制备
1.外周血淋巴细胞样品的制备
2.培养细胞的样品制备
3.新鲜实体组织单细胞悬液的制备
最常用的方法有机械法、酶处理法、化学试剂处理法和表面活性剂处理法等方法。
4.单细胞悬液的保存
最常用的处理方法有三种：深低温保存法，乙醇或甲醇保存法，甲醛或多聚甲醛保存法。
二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色
（一）免疫荧光标记最常用的荧光染料
1.异硫氰酸荧光素（FITC）亮绿色荧光。
2.德州红红色荧光。
3.藻胆蛋白类橙色至红色荧光。
4.能量传递复合染料
（二）免疫荧光标记
在进行流式细胞分析前，首先应将已调好细胞比例的细胞悬液进行免疫荧光标记染色才能上机检测。
通常应用的标记染色为直接免疫荧光染色和间接免疫荧光染色两种方法。
（三）细胞自发荧光
三、免疫胶乳颗粒技术的应用
液相芯片技术实现了样本分析时的低样本量、多参数检测，具有更高的检测效率。
流式微球阵列（CBA）技术，应用标记不同含量荧光染料的微球代表不同待测物质，属于液相芯片技术。
四、流式细胞免疫学技术的质量控制
（一）单细胞悬液制备的质量控制
1.采用适当的制备方式
2.用溶血剂处理红细胞
3.实体组织来源标本在制备单细胞悬液过程中，最好采用机械法。
4.温度与pH
（二）细胞悬液免疫荧光染色的质量控制
1.温度对荧光染色的影响
2.pH对荧光发射强度的影响
3.荧光染料浓度的控制
4.固定剂对免疫荧光染色的影响
（三）仪器操作技术的质量控制
1.光路与流路校正
2.PM校正
3.绝对计数的校准
（四）免疫检测的质量控制
第四节流式细胞术在免疫学检查中的应用
一、淋巴细胞及其亚群的分析
（一）淋巴细胞及亚群分析
外周成熟的T细胞特有的标志TCR和CD3是重要的表面抗原。
按CD分子表达不同将T细胞分为CD4+和CD8+两大亚群，又称为辅助性T细胞和细胞毒性T细胞（Tc）。
（二）B淋巴细胞及亚群分析
外周血中成熟的B细胞特有的重要标志为BCR，即膜表面免疫球蛋白（Smlg）。
成熟的B细胞主要表达CD19、CD20、CD21、CD22分子，同时检测CD5分子，可进一步将外周成熟的休止B细胞分为B1细胞和B2细胞。
（三）NK细胞分析
临床上常用三色荧光抗体标记将CD3-CD16+CD56+淋巴细胞确定为NK细胞。
二、淋巴细胞功能分析
1.细胞介导细胞毒性试验
2.细胞内细胞因子测定
三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型
四、肿瘤耐药相关蛋白分析
五、AIDS病检测中的应用
AIDS患者的一个特征性免疫诊断指标表现为：T淋巴细胞总数减少，T细胞亚群CD4Th／CD8Tc比例倒置，Th／Tc＜1.0，Th细胞数量显著下降甚至测不出，而Tc细胞数量可正常或增加，NK细胞减少或活力下降，B淋巴细胞群则处于正常范围。
六、自身免疫性疾病相关HLA抗原分析
七、移植免疫中的应用
最典型的疾病是强直性脊柱炎，其外周的HLA-B27的表达及表达程度与疾病的发生有很高的相关性。
流式细胞术分析的工作原理及应用
流式细胞术分析的工作原理及应用1. 工作原理流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域的细胞分析技术。
它基于细胞在流式细胞仪中通过单个细胞传感器单元的原理，可以实时、快速地检测和分析细胞的各种特性。
1.1 流式细胞仪原理流式细胞仪是流式细胞术分析的核心工具。
它将细胞悬浮液注入到一个窄小的液流中，并通过雷射束（Laser Beam）对细胞进行激发。
当细胞经过激发光束时，会发射出特定波长的荧光信号。
流式细胞仪通过光学设备收集并分析这些信号，从而获得关于细胞的信息。
1.2 细胞荧光标记在流式细胞术分析中，细胞通常会被标记上特定的荧光染料，以便测量其特定特征。
这些标记可以是单一的，也可以是多重的，用于同时分析多个参数。
1.3 数据分析流式细胞仪在测量细胞荧光信号的同时，还会记录细胞的大小、形状和荧光强度等参数。
这些数据可以通过特定的软件进行分析和解释，以获得关于细胞数量、细胞类型和细胞功能等方面的信息。
2. 应用领域流式细胞术分析具有广泛的应用领域，在生物医学研究和临床诊断中发挥着重要作用。
2.1 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中广泛应用，可以用于分析免疫系统中不同类型的细胞数量和功能。
通过对白细胞表面标记物的检测，可以检测特定细胞亚群的存在，并研究其在疾病和免疫反应中的作用。
2.2 肿瘤学研究流式细胞术在肿瘤学研究中也扮演重要角色。
它可以用来研究肿瘤细胞的增殖、存活和死亡等关键特性，进而评估药物治疗对肿瘤细胞的影响。
此外，流式细胞术还可以检测循环肿瘤细胞，从而提供肿瘤早期诊断和治疗监测的手段。
2.3 微生物学研究流式细胞术被广泛应用于微生物学研究中，可以用于分析微生物的数量和生物学特性。
通过对细菌、真菌和病毒等微生物的荧光标记，可以确定它们的种类、数量和活性，从而研究其生长规律和致病机制。
2.4 干细胞研究流式细胞术在干细胞研究中也扮演重要角色。
流式细胞术分析及应用
Compensation
18
二、流式细胞术的应用
细胞表型分析 胞内蛋白的检测 细胞周期分析 细胞因子测定 分选 细胞内钙离子测量 ……
19
1.细胞表型分析
CD3 20
CD4
2.胞内蛋白的检测
21
22
3. 细胞周期的检测
23
CFSE（羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂）
Capture antibody Beads
Capture beads
+
+
Antigen (cytokines) Fluorescence Detector antibody
31
Beads Provide a Flexible Platform
Beads provide an expandable assay platform for use with a flow cytometer
Shades of a color
Antibody coupled PE label, emitting at FL2 intensity proportional to analyte conc.
33
Example 6-bead assay
IL-8 IL-1b
IL-6 IL-10 TNF
Detector Antibodies
3
现代流式细胞仪包括
液流系统
聚焦细胞以供检测
光学系统
激发和收集光信号
电子系统
将光信号转化为电信号，并使其数字化以供计 算机分析
4
液流系统
液流系统将样本悬液聚焦在光源的中心处
5
Sample Flow in Optical CuRate
流式细胞术分析技术及应用
活化T淋巴细胞 CD3+HLA-DR+ CD4+HLA-DR+ CD8+HLA-DR+ CD4+CD25+ CD8+ CD25+ CD8+CD38+HLA-DR+
B淋巴细胞(19+) CD19+CD23+ CD19+CD5+ CD19+CD5+CD23+
NK细胞CD3+CD(16+56)+ CD3+CD57+
淋巴细胞亚群数量检查意义
疾病 自身免疫病 AIDS
CD3 CD4
CD8
降低
增高
降低 严重降低 增高
CD4/CD NK 8
降低
降低
降低
SARS
降低 降低
慢性活动性肝炎、肝硬化
降低
肿瘤
降低 降低
降低
降低
正常或增高 降低
增高
降低
降低 降低 降低
非特异性的先天免疫细胞
γδＴ细胞:占外周血T细胞的10％以下，非抗原依赖型免疫细胞 ，在传染病、肿瘤病人外周血数量增加，表达CD3量较普通T细 胞多 NK细胞：占外周血淋巴细胞8－25％，传染病和肿瘤病人数量 偏低。NK细胞可以根据NKR的不同而分类，丙型肝炎的发生和 预后可能与NK细胞的表型相关 树突状细胞（DC）：分布在淋巴组织和外周血，机体主要的抗 原提呈细胞 Treg细胞：调节性T细胞，自身免疫性疾病的发生关系密切
淋巴细胞亚群
名称
辅助性/诱导性T细胞(Th/Ti)
辅助性T细胞(Th) 诱导性T细胞(Ti)
功能 辅助和诱导细胞免疫和体液免疫
流式细胞仪分析技术及应用(课件)
流式细胞仪分析技术及应用第一节概述第二节数据的显示与分析第三节流式细胞仪技术要求一、工作原理一、参数一、免疫检测样品制备二、散射光的测定二、数据显示方式二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色三、荧光测量三、设门分析技术三、免疫胶乳颗粒的应用四、细胞分选原理四、流式细胞技术的质量控制第四节流式细胞仪技术的要求第五节、流式细胞仪的科研应用第六节流式细胞术在临床检测中的主要应用✧流式细胞术(flow cytometry, FCM)亦称荧光激活细胞分选器(fluorescence-activated cell sorting, FACS):是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。
/是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。
/广泛应用于基础研究和临床实践各个方面，包括细胞生物学、肿瘤学、血液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等。
✧流式细胞术发展史1930年Caspersson和Thorell开始致力于细胞计数的研究1934年Moldaven最早设想细胞检测自动化，用光电仪记录流过一根毛细管的细胞1940年Coons提出结合荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白1949年Wallace Coulter申请了在悬液中计数粒子的方法的专利1950年Caspersson用显微UV-VIS检测细胞1953年Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理，成功设计红细胞光学自动计数器1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM发明第一台荧光检测细胞计1972年Herzenberg研制出细胞分选器1975年Kohler等提出单克隆抗体技术，为细胞研究提供大量的特异免疫试剂目前国内主要流式细胞仪厂家：Beckton Dickinson(BD)公司；BACKMAN COULTER公司✧流式细胞术的特点：最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选。
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71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
流式细胞仪分析技术及应用
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
主管检验师临床医学检验免疫学和免疫检验 第十七章 流式细胞仪分析技术及应用
第十七章流式细胞仪分析技术及应用第一节概述流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成，可对细胞悬液中的单个细胞或特定细胞或其超微结构进行多参数快速分析，带分选系统的流式细胞仪还可按实验设计要求分选出具相同特征的同类型细胞，用于培养或进一步研究。
一、工作原理流式细胞仪的工作原理是采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析的精确性。
（一）基本组成结构1.液流系统由样本和鞘液组成。
待测细胞被制备成单个细胞的悬液，经荧光染料标记的单克隆抗体染色后置入样品管中，在清洁气体压力下进入流动室形成样本流。
鞘液是辅助样本流被正常检测的基质液，其主要的作用是包裹在样本流的周围，使其保持处于喷嘴中心位置以保证检测的精确性，同时又防止样本流中细胞靠近喷孔壁而堵塞喷孔。
2.光学系统（1）激光光源（2）分光镜（3）光束成形器（4）透镜组（5）滤片（6）光电倍增管（PMT）3.数据处理系统主要由计算机及其软件组成，进行实验数据的分析、存储、显示，是流式细胞仪组成部件中的重要环节。
（二）基本工作原理检测需要标记了特异性荧光染料的单细胞悬液和鞘液，光电倍增管将已接收的光电信号转换成电压脉冲和积分脉冲，使信号放大，该信号进入计算机系统进行数据转换、储存、分析、处理按不同的检测设计采用相应软件程序对结果进行综合分析，并以图像和数据显示于荧光屏上，包括了单参数和二维或三维图像资料，阳性细胞百分率、斜率、峰值、峰面积等多参数资料。
二、散射光的测定（一）前向散射光（二）侧向散射光三、荧光测量（一）荧光信号测量与放大器（二）荧光补偿四、细胞分选原理（一）分选的基本原理当实验设计中设定了被分选细胞的特性参数时，此类细胞在形成液滴时会被充电，使其带有正电荷或负电荷，未被设定分选参数的细胞及空白液滴不带电荷。
流式细胞仪在临床检验中的应用
流式细胞仪在临床检验中的应用流式细胞仪在临床检验中的应用1.引言1.1 背景流式细胞仪是一种用于分析细胞的仪器，通过激光照射细胞样本，并测量样本中细胞的荧光或散射等特性来定量分析细胞的类型和数量。
它在临床检验中具有广泛的应用，能够对各种细胞进行精确的分析和鉴定。
1.2 目的本文旨在介绍流式细胞仪在临床检验中的应用，包括其原理、操作步骤、常见应用以及相关注意事项。
2.流式细胞仪的原理2.1 光学原理流式细胞仪利用激光器产生的高能光束对细胞样本进行照射，并通过多个光学元件将光信号转换为电信号，最终通过计算机进行数据采集和分析。
2.2 流体力学原理流式细胞仪通过控制样本在微细管道中的流速和流动方式，使细胞依次通过激光束，实现对单个细胞的分析。
3.流式细胞仪的操作步骤3.1 样本准备样本准备包括细胞的收集、细胞的处理和细胞的染色等步骤，确保样本的质量和准确性。
3.2 仪器设置仪器设置包括激光器的选择和调节、光学元件的调整、流速的设置等，确保仪器的正常运行和数据的准确性。
3.3 数据采集在操作过程中，根据实验需要选择合适的参数进行数据采集，并通过计算机软件进行数据保存和分析。
3.4 数据分析根据数据分析的需要，通过计算机软件对采集的数据进行分析和解读，得出相应的结果和结论。
4.流式细胞仪的应用4.1 细胞表型分析流式细胞仪可用于对细胞的表型进行分析，识别不同类型的细胞，并分析其表面标记物的表达情况。
4.2 细胞功能分析流式细胞仪可用于评估细胞的功能，如分析细胞的增殖能力、细胞凋亡情况等。
4.3 细胞排序流式细胞仪可根据设定的标准将细胞进行排序，以获取特定类型的纯细胞。
4.4 微量分析流式细胞仪具有高敏感度和高分辨率的特点，可进行微量样本的分析，如检测稀有细胞、测定细胞内分子的含量等。
5.注意事项5.1 样本处理注意事项样本的处理过程中需要注意避免细胞的损伤和样本的污染，以保证实验结果的准确性。
5.2 仪器操作注意事项在使用流式细胞仪时，需要仔细阅读和遵守仪器使用说明书，正确操作仪器，防止损坏和误操作。
免疫学检验-流式细胞仪分析技术及应用ppt课件
lymphocyte culture，MLC）或称混合淋巴细胞反应 （mixed lymphocyte reaction，MLR）为基本技术 的 HLA分型法。能用本法测定的抗原称为 LD抗原 （lymphocyte defined antigen），包括 HLA－D、 －DP。 MLC又有单向和双向之分。
流式细胞仪 产生分析的电 信号主要是光 散射信号和荧 光信号，流式 细胞仪依据细 胞流经光照射 区时电压讯号 的强弱来分析 和分选细胞 （图22－2）。
基本工作原理
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（一）单向MLC １、阴性分型法 ２、阳性分型法 （二）双向MLC
第三节 HLA分型的实际应用 • HLA与器官移植 • HLA与自身免疫性疾病 • HLA与输血反应 • HLA与法医鉴定
第二十二章 流式细胞仪分析技术及应用
流式细胞仪原理及应用
流式细胞仪的科研应用
免疫功能研究 血小板分析（心脑血管疾病） 细胞周期和倍体分析 细胞凋亡 干细胞研究 树突细胞研究 肿瘤相关基因表达的研究 抗肿瘤药物作用机制以及多药耐药性的研究 放疗/化疗疗效的研究
BD Biosciences Immune Function
数据分析
等高图和密度图分析
BD Biosciences Immune Function
数据分析
三维图分析
BD Biosciences Immune Function
BD Biosciences Immune Function
流式细胞仪的应用
流式细胞仪的临床应用
= HIV免疫分型，CD4绝对计数 = 淋巴细胞亚群分析 = 白血病和淋巴瘤的免疫分型 = 肿瘤的细胞周期和倍体分析 = 网织红细胞计数 = 细胞移植的免疫状态监测 = 干细胞计数 = 阵发性血红蛋白尿 = HLA-B27检查 = 血小板功能及相关疾病
……
BD Biosciences Immune Function
流式细胞仪的原理
BD Biosciences Immune Function
液流系统：鞘液包绕着单行排列的细胞依次高速通过流动池，
而激BD光Bi聚osc焦ienc于es 流动池中心的样本流上，随后经检测的样本和 鞘液Im流mun向e F废unct液ion 桶。
淋巴细胞亚群分析
根据CD4、CD8表达，T淋巴细胞又分为 T辅助/诱导细胞（CD3+CD4+） T抑制/细胞毒性细胞（CD3+CD8+） Th/Ts 评价那些自身免疫失调、被怀疑是免疫失调
或已知患有免疫缺陷的病人的免疫状态
流式细胞仪分析技术及应用PPT课件
（四）石蜡包埋组织单细胞悬液制备 该制备方法的建立扩大了流式细胞术的应
用范围，有利于进行临床回顾性研究和利 用。 常用的方法有二甲苯脱蜡法、组织清洁剂 脱蜡法和甲氧-双氧水处理法。 对石蜡切片的要求较严格。
50
（五）活检标本单细胞悬液制备 活检标本及各种内镜取材标本也克制备成
能对于处在快速直线流动状态 中的细胞或生物颗粒同时进行 多参数、快速定量分析和分选
5
一、流式细胞仪分析的工作原理
荧光显微镜技术
激发光源改为激光
单克隆抗体与 荧光染料技术
计算机技术 处理光信号
提高检测灵敏度 和特异性
提高检测速度和 统计分析精确性
6
（一）流式细胞仪基本结构
液流系统
1
包括流动室（flow chamber）和液流驱动系统 作用：依次传送待测样本中的细胞到激光照射区 理想状态：细胞逐个传送到激光束的中心，而且
侧向散射光检测器
在激光束的垂直方 向，又称90°散射
SSC信号的强弱与 细胞内颗粒结构的 质量成正比，用于 检测细胞内部结构 属性
28
前向散射光示意图
细胞大小
29
结构复杂程度
侧向散射光示意图
30
当荧光抗体或其他染料染色的颗粒通过 激光束时，染料吸收光子跃迁到激发态，返 回基态时，染料释放出能量，大部分以光的 形式释放。
分选的方式有捕获式分选和电荷式分选，目前应 用最多的是电荷式分选。
21
电荷式分选1
当单细胞悬液形成液柱通过 流动室时，液柱被分割成一 连串均匀的液滴。
根据设定的被分选细胞的某 个参数由逻辑电路判断是否 被分选。
22
电荷式分选2
充电电路对选定细胞液滴充 电，使其带正电荷或负电荷， 未被设定分选参数的细胞液 滴则不带电荷。