硅胶色谱法
薄层色谱鉴别介绍
在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚
度等），化合物移动的距离和展开剂移动的 距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理 常数，其大小只与化合物本身的结构有关， 因此可以根据Rf值鉴别化合物。
比移值
组分二 组分一
被分离 混合物
薄层色谱展开示意图
薄层色谱法
优点
操作简单，定性结果直观
缺点
有一定毒性、定量方面的精密度 较差
却后使用。
固定相（吸附剂）的选择
纤维素、淀粉 硅酸镁 硫酸钙 硅胶 佛罗里硅土 氧化镁 氧化铝 对极性有机物的吸附作用增强
活性炭
2
供试品的制备：按照各药品质量标准规
定的方法进行提取分离。制得的供试品应放 置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样 量。 3 对照品溶液的制备：可按质量标准规定 精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶 中备用。标准药材对照溶液，一般需照供试 品的制备方法制备。在使用对照品溶液时一 定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止 造成对照品污染。
二．展开室应放在水平、稳定的实验台上，不能有阳光直射， 也不能在通风处放置，离开热源，避免温度波动对分离不利； 光敏物质的分离应将展开室置于暗处进行。 三．点样时间不应超过三分钟。硅胶的硅醇基以氢键形式优 先吸附水，物理吸附使硅胶的活度降低，影响了弱极性物质 的吸附，化合物的Rf值相应地增大。硅胶薄层的吸水速度很 快，当用预先经过活化的薄层板，在点样过程中干燥的薄层 会立即吸附空气中的水蒸气，在数分钟内达到平衡，吸附水 蒸气的量决定于点样速度即暴露在空气中的时间和空气的相 对湿度。Dallas指出0.25mm厚、20cm×20cm的硅胶薄层 板在50%相对湿度中放置约3min就失去活性的一半，而放 置15min时吸附的水分已达到最大值。在用相同条件分离同 一组化合物得到的结果不能重现时，必须考虑到相对湿度对 展开的影响，特别是我国南北地区湿度相差很大；即使在同 一实验室冬夏季节不同湿度也有明显差别，如果不注意湿度 的影响就得不到预期的结果。
硅胶吸附柱色谱技术实际应用
硅胶吸附柱色谱技术实际应用色谱法，又称层析法.是一种以分配平衡为机理的分配方法.色谱体系包含两个相,一个是固定相,一个是流动相.当两相相对运动时,反复多次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异,最后达到彼此分离的目的.色谱法从发明到现在已有八十多年的历史.它是纯化和分离有机或无机物的一种方法.色谱法按固定相的状态可分为柱色谱.平板色谱和棒色谱三种而实验室中最常用的是柱层析和薄层层析,以及它们之间的配合应用.[1]柱层析[2]1 吸附色谱地原理在一定条件下,硅胶与被分离物质之间产生作用,这种作用主要是物理和化学作用两种.物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范德华力.化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用.2操作步骤2.1 硅胶准备[3]硅胶一般选用250-400目(即40-63μm直径的硅胶颗粒),根据ΔRf选用硅胶的用量.2.2 实验仪器准备一支玻璃色谱柱,一个铁架台,烧杯,锥形瓶,径口直径较大的玻璃漏斗,一支玻璃棒,2.3 装柱[4]2.3.1 吸附剂的加入①干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相，或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。
操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。
②湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面平整。
俟填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将柱表面相平时，即加试样溶液.2.3.2试样的加入①将试样溶于层析时使用的流动相中，再沿色谱管壁缓缓加入。
注意勿使吸附剂翻起。
或将试样溶于适当的溶剂中。
与少量吸附剂混匀，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。
如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。
柱色谱是较经典的无机物分离技巧[新版]
![柱色谱是较经典的无机物分离技巧[新版]](https://img.taocdn.com/s3/m/6cfaa615df80d4d8d15abe23482fb4daa58d1d90.png)
柱色谱是较经典的有机物分离技术，原理和薄层色谱相同，但装置有所不同，主要由一个均匀玻璃柱和填充填料组成，填料是决定柱效的主要因素，填料必须满足具有不溶于所使用流动相、不使欲分离的样品破坏或分解、惰性大、可逆性强和吸附容量大。
同时，填料颗粒直径要均匀。
最常见的柱色谱是硅胶色谱、氧化铝色谱、离子交换柱色谱、聚酰胺柱色谱和凝胶柱色谱。
分配柱色谱是利用混合物中各组分在两种不相混溶的液体之间的分配系数不同，而得到分离的方法，分为正相和反相分配色谱两种类型：正相分配色谱：以水或亲水性溶剂为固定（液）相，以水不相混溶的有机溶剂作移动相的分配色谱称为正相分配色谱。
一般而言，分离水溶性或极性较大的成分，如生物碱、苷类、糖类、有机酸等化合物，常用正相分配色谱。
反相分配色谱：以亲脂性有机溶剂作固定（液）相，以水或亲水性溶剂作移动相的分配色谱称为反相分配色谱。
当分离脂溶性或极性较小的成分，如高级脂肪酸、油脂、游离甾体等物质时，常用反相分配色谱。
实践中有70%以上的分配色谱都采用反相色谱。
分配柱色谱往往适用于分离水溶性或极性较大的组分，如生物碱、苷类、糖类、有机酸、酚类及氨基酸的衍生物；对某些非极性化合物，如油脂、甾体等物质，可采用反相分配柱色谱法。
应用实例：狄戈辛（异羟基洋地黄毒苷）的分离支持剂：国产层析硅胶80 100目，加2/3量的水（以乙酸乙酯饱和），调匀，再以乙酸乙酯（水饱和）浸泡，调成稀糊状，湿法装柱，柱直径与长度比1:2 以上。
实验方法：取样品与1 2倍量硅胶磨匀，加入柱顶，用水饱和的乙酸乙酯（含0.5%甲醇）洗脱，分部收集，各流分均作纸色谱及薄层色谱检查，比移值相同的流分合并，减压蒸干，以甲醇结晶，得到洋地黄毒苷、羟基洋地黄毒苷、异羟基洋地黄毒苷三种单体。
吸附柱色谱是将待分离混合物样品均匀地加在装有吸附剂的柱子中，再加适当的溶剂（洗脱剂）冲洗，由于吸附剂对各组分吸附能力不同，各组分在柱中向下移动的速度不同，吸附力最弱的组分随溶剂首先流出，通过分段定量收集洗脱液而使各组分得到分离。
薄层 色谱法
答辩汇报PPT提纲制作
毕业设计答辩汇报提纲， 要起到提纲挈领的作用。 汇报提纲不是毕业设计作 品的目录摘录，两者之间 有联系，但区别也很大。 毕业设计汇报提纲的制作 ，常用的形式有图表式、 条目式及阶梯式，以起到 提纲挈领的作用，如右图 所示。
4. 答辩汇报PPT制作
硅胶粘合薄层活度的测定方法，目前一般都采用Stahl活度测定，样品为二甲黄、苏丹红、靛酚 蓝等量混合溶液，点在薄层板上，用石油醚展开10cm，斑点应不移动，如用苯展开则应分成三个斑 点，合格的硅胶粘合薄层，其Rf值分别为：二甲黄0.58±5%，苏丹红0.38±5%，靛酚蓝0.08±5%， 其活度为Ⅱ~Ⅲ级，水分含量5%~15%。如Rf值＜标准值，表明硅胶的含水量小（新鲜活化的硅胶板 ），吸附能力强，活度级别为＜Ⅱ级，如Rf值＞标准值，表明硅胶的含水量大（暴露在空气中时间较 长的硅胶板），吸附能力弱，活度级别为＞Ⅲ级。
【思考题】
1．影响薄层色谱Rf值的因素有哪些？ 2．用硅胶薄层板分离混合物，是属于哪一种色谱原理？
实验二 四逆汤中乌头碱的限量检查
【实验目的】
1.掌握薄层色谱的基本操作方法和分离原理、 以及薄层色谱斑点的检出识别方法。
2.熟悉薄层色谱对杂质限量检查的方法、薄层 色谱斑点比移值Rf的计算方法。
【实验原理】
第三部分 仪器分析实验 第十七章 薄层色谱法
实验一 薄层色谱法测定硅胶（黏合板）的活度
【实验目的】
1.掌握粘合薄层的制备方法。 2.了解粘合薄层活度的测定方法。
【实验原理】
硅胶的吸附性质决定于连接在硅原子表面的羟基基团—硅醇基（—Si—OH），经活化后的硅胶 如暴露在空气中，则能吸附水分使之减活。
硅胶柱色谱分离三七皂苷实验报告
硅胶柱色谱分离三七皂苷实验报告硅胶柱色谱分离三七皂苷实验报告一、实验目的1. 学习硅胶柱分离技术的原理和方法。
2. 学习三七皂苷的提取和分离纯化方法。
3. 掌握TLC检测和硅胶柱色谱分离三七皂苷的方法。
二、实验原理1. 硅胶柱分离技术硅胶柱属于柱式色谱中的一种，主要利用硅胶在柱中的作用来实现样品的分离和纯化。
硅胶是一种具有很强吸附能力的固体，在某些条件下，硅胶的吸附能力能与物质间的相互作用力相抵消，从而实现物质的分离。
硅胶柱适用于对极性化合物的分离和纯化。
2. 三七皂苷的提取和分离纯化方法三七皂苷属于三萜类化合物，主要存在于三七的根和根茎之中。
其提取和分离纯化方法主要通过超声波辅助提取和硅胶柱色谱分离纯化方法实现。
三、实验步骤1. 样品的提取将三七根茎切碎，加入95%的乙醇中，隔水加热至70℃，加入超声波处理仪中捣烂3次，每次3min，静置20min。
离心后取上层液。
重复以上步骤2次，将上层液合并。
2. TLC检测将3mg的样品溶解于1ml的甲醇-水混合液中，使用玻璃棒将硬度为H的硬质TLC板打磨，并在板上绘制出标线，加样后按照以下条件进行TLC检测：样品扫描时间为20min；紫外吸收检测波长为210nm；运行溶剂为甲醇和水的混合液。
检测完后，标记出三七皂苷的Rf值。
3. 硅胶柱分离将10g的硅胶加入50ml的甲醇中混合均匀，并通过吸滤将其裹在滤纸中。
取10g样品溶解在5ml的甲醇水混合液中，经旋转蒸发浓缩至干燥，加入50ml的甲醇中混合均匀，并过滤。
将样品溶液加入硅胶柱中，并用甲醇作为洗脱溶剂进行洗脱，收集洗脱出的3ml/管收集。
4. TLC检测纯化后的样品，并重复以上步骤，直至获得纯品。
4. 结果分析经TLC检测，三七皂苷的Rf值为0.37。
经过硅胶柱分离后，收集了10管色谱图谱中相对独立的峰3处的样品。
各样品的TLC 图谱分别检测，第3例样品的TLC检测Rf值为0.37，符合标准物质的TLC检测Rf值，可以确定为三七皂苷。
硅胶色谱实验报告
一、实验目的1. 掌握硅胶色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。
2. 熟悉硅胶色谱实验的操作步骤和注意事项。
3. 通过实验，加深对色谱分离原理的理解。
二、实验原理硅胶色谱是一种常用的液-固吸附色谱方法。
它利用硅胶作为固定相，有机溶剂作为流动相，根据样品中各组分的吸附性能差异实现分离。
在实验过程中，样品溶液被点样在硅胶层析板上，随着流动相的展开，样品中的组分在层析板上形成不同的色带，从而实现分离。
三、实验仪器与药品1. 仪器：硅胶层析板、层析缸、点样器、毛细管、烘箱、电子天平、移液管等。
2. 药品：硅胶、有机溶剂（如石油醚、丙酮、正己烷等）、待分离的混合物样品等。
四、实验步骤1. 薄层板的制备：（1）称取适量硅胶，加入适量水，搅拌均匀，形成糊状物。
（2）将糊状物均匀涂布在5cm×15cm的层析板上，涂布厚度约为0.5mm。
（3）将涂布好的层析板放入烘箱中，于105℃下活化0.5小时，取出后置于干燥器中备用。
2. 点样：（1）用毛细管吸取少量待分离的混合物样品，点样于活化后的硅胶层析板下端2cm处，点样点直径约为2mm。
（2）点样后，用铅笔在点样点处作一标记，作为原点。
3. 展开剂的选择与制备：根据待分离样品的性质，选择合适的有机溶剂作为展开剂。
如石油醚、丙酮、正己烷等。
4. 展开操作：（1）将点好样的层析板放入层析缸中，确保层析板与缸底之间留有适当空间。
（2）向层析缸中加入适量的展开剂，使展开剂液面低于原点。
（3）待展开剂前沿到达层析板顶端时，取出层析板，晾干。
5. 结果观察与记录：（1）观察层析板上的色带，记录各组分的位置。
（2）计算各组分的比移值（Rf值）。
五、实验结果与分析1. 实验结果：（1）在本次实验中，成功分离了待测混合物中的A、B、C三种组分。
（2）各组分在层析板上的位置及Rf值如下：组分A：Rf=0.3组分B：Rf=0.6组分C：Rf=0.82. 结果分析：（1）根据实验结果，可知待测混合物中的A、B、C三种组分在硅胶层析板上的吸附性能存在差异，从而实现了分离。
简述采用硅胶板薄层色谱分离实验时具体的操作步骤和注意事项
简述采用硅胶板薄层色谱分离实验时具体的操作步骤和注意事项一、实验操作步骤采用硅胶板薄层色谱分离实验的操作步骤如下：1.硅胶板的制备：选择合适的硅胶板，如硅胶G板或硅胶H板。
将硅胶与适量的黏合剂混合，搅拌均匀后涂在玻璃板上，制成硅胶薄层板。
薄层板制成后需干燥，然后活化处理，以提高分离效果。
2.点样：将待分离的样品溶液点在硅胶板上，用毛细管或自动点样器进行点样操作。
点样时需注意控制点样量，过量的样品可能导致拖尾、边缘效应等。
3.展开：在密闭的容器中进行展开，选择合适的展开剂，确保待分离的组分能够得到较好的分离。
展开剂的选择应根据样品的性质进行优化。
4.显色：展开后的薄层板需进行显色处理，以便观察和检测组分的斑点。
根据待分离组分的性质选择合适的显色剂，如荧光剂、金属盐等。
5.检测与记录：通过合适的方法对薄层板上的组分进行检测，如紫外可见吸收光谱法、荧光法等。
记录各组分的斑点位置、大小及颜色等信息，以便后续的分析和处理。
6.薄层板的回收和处理：实验结束后，需对薄层板进行回收和处理。
对于有价值的组分，可进行进一步分离和纯化。
对于不再需要的薄层板，需按照实验室规定进行处理，避免对环境造成污染。
二、注意事项在进行硅胶板薄层色谱分离实验时，需要注意以下几点：1.硅胶板的选择与制备：根据实验需求选择合适的硅胶板类型（如硅胶G 板或硅胶H板）。
制备时需确保硅胶与黏合剂的比例合适，搅拌均匀，避免出现硅胶颗粒等杂质。
同时，制成的薄层板需干燥并活化处理，以提高分离效果。
2.点样操作：点样时需控制点样量，避免过量的样品导致拖尾、边缘效应等问题。
可以采用毛细管或自动点样器进行点样，提高点样精度和效率。
3.展开剂的选择与优化：展开剂的选择对于薄层色谱分离的效果至关重要。
应根据待分离组分的性质选择合适的展开剂，并进行优化实验，以提高分离效果。
同时，需注意展开剂的配比和组成，以获得最佳的分离效果。
4.显色处理：选择合适的显色剂对展开后的薄层板进行显色处理，以便观察和检测组分的斑点。
黄酮类化合物--鉴定
Rf值( )＞( )＞( )＞( ) (2)聚酰胺TLC(条件60%甲醇—水展开),
Rf值( )＞( )＞( )＞( ) (3)纸色谱(条件8%醋酸水展开),
感谢下 载
感谢下 载
第6章 黄酮类化合物
----黄酮类的鉴定
鉴
定
一、薄层色谱法（TLC） 二、 纸色谱法（PC)
一、 薄层色谱法
一般采用吸附薄层，吸附剂大多用硅胶和聚 酰胺。
（1）硅胶薄层色谱: 用于分离与鉴定弱极性黄酮类化合物 分离苷元常用展开剂：甲苯-甲酸甲酯-甲酸；氯仿-甲
醇等。 （2）聚酰胺薄层色谱：分离含游离酚羟基的黄酮苷与苷元。
TBA t-BuOH: HOAc: H2O=3:1:1 水饱和n-BuOH 层析行为: Rf值: 苷元>单糖苷>双糖苷 一般:苷元在0.70以上，而苷则小于0.7。
纸色谱
A
苷元B
D
C
第二相展开采用水性展开剂
B
C
如：2~6% HOAc水溶液
3% NaCl 水溶液
HOAc:浓HCl:H2O= 30: 3 : 10
苷元
层析行为: 连接糖链越长, Rf 越大(>0.5);
A
D
苷元Rf较小，有的留在原点。
7
双相色谱
第I向 醇性展开剂 II向 水性展开剂
（BAW、TBA、水饱和正丁醇）
第
（2~8%HAc、3%NaCl、1%HCl）
正相色谱 反相色谱 Rf固规定律相：（极水性）小极的性化合> 物流R动f大相 附原理） 苷元>单糖苷>双糖苷 规律与左边相反 母核相同，二-OH>三-OH>四-OH>五-OH黄酮
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硅胶色谱法
硅胶色谱法是一种分离和纯化化合物的方法，也是一种广泛应用于化学和生化分析中的分离技术。
它基于化合物在硅胶柱中的亲水性和疏水性之间的差异，将化合物分离为不同的组分。
硅胶是一种亲水性极强的材料，它的表面上具有大量的硅氧键，可以与水分子形成氢键。
因此，化合物在硅胶柱上的保留时间通常与其极性有关。
极性较高的化合物会与硅胶表面形成氢键，因此在硅胶柱上停留的时间更长；而极性较低的化合物则更容易通过硅胶柱。
硅胶色谱法通常涉及以下步骤：
样品预处理：将待分离的混合物进行预处理，如提取、浓缩、纯化等。
制备硅胶柱：在管柱中加入硅胶，使其填满柱子。
样品进样：将经过预处理的样品加入硅胶柱顶端，使其缓慢流动经过硅胶柱。
洗脱：通过改变流动相的性质，如溶剂极性、pH值等，使不同的化合物在硅胶柱上停留时间不同，从而实现分离和纯化。
柱后处理：将洗脱得到的组分进行柱后处理，如浓缩、干燥等，得到纯化的化合物。
硅胶色谱法广泛应用于有机化学、生物化学、制药和环境分析等领域，是一种快速、可靠、经济的分离和纯化方法。