硅胶薄层色谱板的制备和硅胶色谱柱的填装
请简述硅胶薄层层析的操作过程及注意事项
硅胶薄层层析是一种广泛应用于化学分离和分析中的技术，其操作过程相对复杂，需要严格的步骤和注意事项。
在进行硅胶薄层层析实验时，需要特别注意以下几个方面：一、准备工作1.1 准备硅胶薄层板在进行硅胶薄层层析前，首先需要准备好硅胶薄层板。
选择适当尺寸和厚度的硅胶薄层板，并确保其质量良好，无明显破损和污染。
1.2 准备混合溶液根据待分离物质的性质和分离条件，准备合适的溶剂和硅胶薄层层析用的移动相。
溶剂的选择应考虑其与样品的亲和性和分离度，移动相的浓度和pH值等因素。
1.3 样品预处理将待分离的样品进行预处理，包括溶解、过滤、浓缩等步骤。
确保样品的纯度和浓度符合硅胶薄层层析的要求。
二、操作步骤2.1 样品施加将经过预处理的样品施加在硅胶薄层板上，一般采用微量注射器或者均匀吹洒的方式进行。
2.2 样品带移动将硅胶薄层板放入层析槽中，加入足够的移动相，让样品随着移动相的运动而扩散和分离。
2.3 层析过程监控通过目视或者专用的层析仪器对层析过程进行监控，及时观察样品在硅胶薄层板上的分离情况，掌握分离的进展。
2.4 结果记录根据层析的结果，对硅胶薄层板进行标记和结果记录，以备后续的分析和处理。
三、注意事项3.1 操作规范在进行硅胶薄层层析实验时，需要严格遵守操作规程，确保操作步骤的准确性和标本的纯净性。
3.2 安全防护在使用化学药品和溶剂时，注意做好安全防护措施，避免化学品的接触和吸入，确保实验环境的安全。
3.3 质量控制在每个步骤中都要进行严格的质量控制，确保样品和试剂的质量符合实验要求，避免质量不合格对实验结果的影响。
3.4 数据分析对实验结果进行准确的数据分析和结果解读，确保实验的可靠性和结果的科学性。
对实验中出现的异常情况进行合理分析和处理，避免结果的误解和错误判断。
通过以上的简述，我们对硅胶薄层层析的操作过程及注意事项有了较为全面的了解。
只有在严格遵循操作规程，进行安全防护和质量控制的基础上，才能保证硅胶薄层层析实验的准确性和可靠性。
硅胶层析柱的填装方法
硅胶层析柱的填装方法硅胶层析柱所用的硅胶是试剂级，100-200目，在实验前将10g左右的硅胶放在托盘中，130℃真空干燥箱内活化16h，活化后放在干燥器中冷却，待用。
将无水硫酸钠盛装在托盘中，在450℃马弗炉中活化2h，后取出放在干燥器中冷却，待用。
一、装柱过程：1、取40ml烧杯4个，100ml量筒2个（分别倒取二氯甲烷100ml，正己烷90ml），40cm玻璃棒1个，250ml烧杯1个（盛装废液用），铁架台1个，层析柱1个（长350mm，内径20mm），不锈钢铁勺1个，20ml注射器（带针头）2个（以上仪器均干净）。
2、拌硅胶。
将活化过的硅胶倒入40ml烧杯中，用另一个20ml烧杯盛取二氯甲烷并缓慢倒入硅胶中，同时用玻璃棒不断搅拌，赶走硅胶中的气泡。
3、倒硅胶。
用少量二氯甲烷淋洗层析柱，玻璃棒引流；之后将上述拌好的硅胶沿着玻璃棒倒入层析柱，倒完后缓慢抽出玻璃棒。
4、敲柱子。
用橡皮管敲击柱子，赶走层析柱硅胶中的气泡，然后打开活塞，流出洗脱液，让硅胶自然沉降；在此期间，用不锈钢小勺舀取一勺无水硫酸钠，倒入层析柱中；等到柱子快干是关闭活塞（二氯甲烷的液面在无水硫酸钠的表面以上）。
5、走柱子。
柱子装好后用20ml二氯甲烷冲洗层析柱2次，注意用玻璃棒引流，缓慢倒下二氯甲烷，并打开活塞，使洗脱液缓慢流下，确保液面保持在硫酸钠表面以上，不能流干；再用40ml正己烷冲洗层析柱，待液面在硫酸钠以上些许时关闭活塞。
6、层析柱至此装好，待用。
二、样品走柱子过程：1、将样品液转移到装好的层析柱中后，用1-2ml正己烷清洗鸡心瓶，并转移到层析柱内，流出液弃去。
2、用25ml正己烷洗脱层析柱，弃去流出液，关闭活塞。
3、将盛装废液的烧杯移去，将K-D浓缩瓶接在层析柱下，再用30ml二氯甲烷/正己烷淋洗液（体积比2:3）洗脱层析柱，以2-5ml/min流速接收流出液于K-D 浓缩瓶中。
仪器名称规格数量烧杯40ml 4个250ml 1个量筒100ml 2个玻璃棒40cm 1个铁架台1个层析柱350mm×20mm 1个不锈钢小勺1个注射器20ml 2个。
制作薄层色谱硅胶板经验总结
制作薄层色谱硅胶板经验
总结
Prepared on 24 November 2020
制作薄层色谱硅胶板经验总结
（1）CMC配制：CMC的浓度为3-4‰。
在500ml烧杯中加入150ml水，在磁力搅拌器搅拌下慢慢加入，促使其溶解，搅拌20min后，再加入350ml水，一直搅拌1h。
抽滤得CMC溶液待用。
（2）硅胶液配制：在研钵中加入约100ml上述CMC溶液，用研棒不断搅拌下，慢慢加入硅胶GF254粉末（CMC水溶液的用量大约是硅胶质量的2-3倍之间），直至感到液体变得较粘稠状，且用研棒蘸取硅胶液可见粘丝状即可。
切记不能马上就开始铺板，需要将其再放置约十几分钟，以使硅胶粉末能够充分吸收水分溶胀，过早铺板，将会造成硅胶板起泡、起鼓或起楞等。
（3）铺板：用药勺取适量硅胶液置于玻璃板上，并用药勺大致均匀地摊开，尤其四个角及边缘铺满，然后将该玻璃板在桌面上做上下地且幅度要大些颠动几次即可。
（4）干燥：自然晾干十几小时。
（5）活化：放在恒温干燥箱里于105-110℃干燥30min，然后冷却室温，取出存放在干燥器保存，待用。
薄层色谱和柱色谱分离法
Rf = 溶质的最高浓度中心至原点中心的距离/溶剂前沿至原点中心的距离
薄层层析可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01μg）的分离：也可用于多达５００mg样 品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。
三、 仪器及试剂
硅胶薄板、展开缸、苏丹红乙醇溶液、间硝基苯胺乙醇溶液、苏丹红间硝基苯胺混合溶液、 乙酸乙酯：石油醚（5:95）
薄层色谱和柱色谱分离法
一、 实验目的
１．了解色谱分离的原理及其应用。
2．初步掌握薄层色谱和柱色谱的操作技能。
二、 实验原理
色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同， 使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。 流动的液体称为流动相，流动相可以是气体，也可以是液体；固定不动的物质称为固定相，可 以是固体也可以是液体（需吸附在支持剂上）。根据组分在固定相中的作用不同，分为吸附色 谱、分配色谱、离子交换色谱等。按操作条件可分为柱色谱、薄层色谱、纸色谱、气相色谱和 液相色谱等。层析缸ຫໍສະໝຸດ 层析板 试样点展开剂
展开版
四、 操作要点和说明
１． 铺板 本实验直接使用购买的薄层硅胶板，每人一块
２． 点样 用毛细管点样，样点距玻璃板１cm，样点直径不超过２mm，三个样点间距５-６mm。
３． 展开 薄层色谱的展开，需要在展开缸中进行如图。展开方式采用倾斜上行法。
４． 计算Rf值 准确地找出原点，溶剂前沿以及三个样品展开后斑点的中心，分别测量溶剂前沿和样点 在薄层板上移动的距离（如图），求出其Ｒf值。
柱色谱是利用各组分在固定相上的吸附能力和流动相的解析能力不同，使混合物随流动相 流过固定相，发生反复多次的吸附和解析过程，从而使混合物各组分分离开。所用仪器为色谱 柱。纸色谱、气相色谱和液相色谱看教材。
新实验0918(药物合成实验报告)
实验一TLC铺板、干燥、活化、色谱用硅胶柱的填装1．硅胶薄层色谱板的制备、干燥和活化薄层色谱中的吸附剂是铺在玻璃、塑料或金属片或薄板上的较薄的、均匀的一层细粉状物质，因支持剂的种类、制备方法和选用溶剂的不同，可按吸附、分配或二者结合的方式达到分离化合物的目的。
可以通过比较斑点的R f值，或将未知样品与对照品在同一板上展开至同样高度，对样品进行初步的鉴定。
还可通过比较可见斑点的大小进行半定量的判断。
还可以通过光密度测量法实现定量测定。
TLC中涂布的物质与柱色谱用的吸附剂非常相似，如硅胶、氧化铝、聚酰胺等，只是它们的颗粒更细一些，一般直径为5～40μm。
有些还含有石膏、淀粉等粘合剂以增强涂层与薄板的粘合力。
有时里面还含有荧光指示剂(如硅酸锌等)，在254或365nm的紫外光下能显示荧光，可借此对分离的斑点进行检测。
到目前为止，硅胶是最常用的薄层色谱吸附剂。
在涂布吸附剂时，用于排列和放置薄板的排列盘和具有平整表面的薄板是必需的。
而涂布器也很常用，当它从玻璃板上移过时，会在板的表面均匀铺上所需厚度的吸附剂涂层。
（1）实验目的掌握硅胶薄层色谱板的制备方法。
（2）仪器和试剂①玻璃板(5×10cm或10×20cm，洁净且干燥)；②薄层色谱用硅胶G；③0.4％羧甲基纤维素钠水溶液；（3）实验步骤①把玻璃板在排列盘中依次相邻放好，置涂布器于其中一端。
②在具塞锥形瓶中把一份硅胶G和2～3份CMC-Na溶液混合，并用力振摇30秒。
③把混好的糊倒入涂布器中，均匀地移动涂布器至排列盘的另一端后，移开涂布器。
④铺好的板静置5分钟，然后把它们面朝上移至一个水平的平面上，阴干。
⑤把阴干后的板在105℃的烘箱中烘30分钟。
⑥待板凉至室温后，置干燥器中保存。
2．色谱用硅胶柱的填装液相柱色谱可以是液-固色谱或液一液色谱。
如果固定相是吸附剂，也称为液相吸附色谱.若为离子交换物质，就称为离子交换色谱；若为非离子的聚合物，如聚苯乙烯或hadex,则称为凝胶渗透色谱、凝胶过滤色谱或分子排阻色谱。
实验室硅胶柱操作规范
实验室硅胶柱操作规范1、操作步骤1.1 硅胶准备柱硅胶一般选用200-300目，拌样硅胶一般选用100-140目。
拌样硅胶用量为样品量的1-8倍，柱硅胶用量为样品量的8-100倍，对于极难分离的样品，还可以使用硅胶H作为柱硅胶。
1.2 实验仪器准备一支玻璃色谱柱，一个铁架台，烧杯，锥形瓶，径口直径较大的玻璃漏斗，一支玻璃棒，硅胶管，螺旋夹，夹子等。
1.3 装柱1.3.1 将硅胶管与色谱柱下端相连(若色谱柱带活塞则不用)，往硅胶管上加上螺旋夹，取与色谱柱口径相应的棉花，厚薄适中(太厚流速慢，太薄易漏硅胶)，置入色谱柱底部，将色谱柱固定于铁架台上。
1.3.2 吸附剂的加入①干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相；或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。
操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。
②湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面平整。
装完柱后需等硅胶沉降压实后再上样，通常需要半天到一天时间。
1.3.3试样的加入①湿法：将试样溶于层析时使用的流动相中，过滤，待填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将与柱表面相平时，再沿色谱管壁缓缓加入滤液。
注意勿使吸附剂翻起。
②干法：选择适当溶剂使样品刚好完全溶解，过滤后取100-140目硅胶适量，将样品溶液缓慢加入到拌样硅胶中，边加入边搅拌，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状（一般需放入通风橱中挥干过夜）；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。
如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。
上完样后可在拌样硅胶上面加入少量100-140目的保护硅胶，在保护硅胶之上还可以加入脱脂棉以防止加流动相时破坏硅胶保护层。
新实验0918(药物合成实验报告)
实验一 TLC铺板、干燥、活化、色谱用硅胶柱的填装1．硅胶薄层色谱板的制备、干燥和活化薄层色谱中的吸附剂是铺在玻璃、塑料或金属片或薄板上的较薄的、均匀的一层细粉状物质，因支持剂的种类、制备方法和选用溶剂的不同，可按吸附、分配或二者结合的方式达到分离化合物的目的。
可以通过比较斑点的R f值，或将未知样品与对照品在同一板上展开至同样高度，对样品进行初步的鉴定。
还可通过比较可见斑点的大小进行半定量的判断。
还可以通过光密度测量法实现定量测定。
TLC中涂布的物质与柱色谱用的吸附剂非常相似，如硅胶、氧化铝、聚酰胺等，只是它们的颗粒更细一些，一般直径为5～40μm。
有些还含有石膏、淀粉等粘合剂以增强涂层与薄板的粘合力。
有时里面还含有荧光指示剂(如硅酸锌等)，在254或365nm的紫外光下能显示荧光，可借此对分离的斑点进行检测。
到目前为止，硅胶是最常用的薄层色谱吸附剂。
在涂布吸附剂时，用于排列和放置薄板的排列盘和具有平整表面的薄板是必需的。
而涂布器也很常用，当它从玻璃板上移过时，会在板的表面均匀铺上所需厚度的吸附剂涂层。
（1）实验目的掌握硅胶薄层色谱板的制备方法。
（2）仪器和试剂①玻璃板(5×10cm或10×20cm，洁净且干燥)；②薄层色谱用硅胶G；③ 0.4％羧甲基纤维素钠水溶液；（3）实验步骤①把玻璃板在排列盘中依次相邻放好，置涂布器于其中一端。
②在具塞锥形瓶中把一份硅胶G和2～3份CMC-Na溶液混合，并用力振摇30秒。
③把混好的糊倒入涂布器中，均匀地移动涂布器至排列盘的另一端后，移开涂布器。
④铺好的板静置5分钟，然后把它们面朝上移至一个水平的平面上，阴干。
⑤把阴干后的板在105℃的烘箱中烘30分钟。
⑥待板凉至室温后，置干燥器中保存。
2．色谱用硅胶柱的填装液相柱色谱可以是液-固色谱或液一液色谱。
如果固定相是吸附剂，也称为液相吸附色谱.若为离子交换物质，就称为离子交换色谱；若为非离子的聚合物，如聚苯乙烯或hadex,则称为凝胶渗透色谱、凝胶过滤色谱或分子排阻色谱。
硅胶干柱层析的操作方法
硅胶干柱层析的操作方法
硅胶干柱层析是一种常用的色谱分离和纯化方法，其操作方法如下：
1. 准备硅胶干柱：选择合适的硅胶粒径和填充长度，并在长颈漏斗或塑料柱内均匀填充硅胶。
2. 洗涤硅胶：用适量的洗涤剂或溶剂来洗涤硅胶，去除杂质和表面活性剂。
3. 将待分离混合物按一定的量和浓度溶解于适量的溶剂中，然后以毛细作用引入硅胶干柱的顶部。
4. 打开流速调节装置，控制溶剂以一定的流速通过硅胶干柱。
5. 观察溶剂在硅胶上的下降速度，逐渐减小溶剂流速，使溶质逐渐吸附于硅胶上形成各自的色谱带。
6. 当色谱带出现在硅胶干柱底部时，关闭流速调节装置。
7. 根据需要，可以将各个色谱带收集在不同的试管中，然后进行进一步的分析或纯化。
8. 若需要进行连续分离，可继续添加溶剂，以移动特定的色谱带。
9. 使用无色的溶剂后，关闭流速调节装置，并将硅胶干柱保存在密封好的容器中，防止湿气和污染。
注意事项：
- 操作过程中要注意保持硅胶干柱的垂直和无空隙状态，以避免溶剂漏出或色谱带扩散。
- 操作结束后要及时将硅胶干柱清洗干净，并记录相关操作步骤和结果。
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五、思考题
• 为什么铺好的硅胶TLC板要在烘箱中干燥？
三、实验步骤
•
㈠、硅胶薄层色谱板的制备 1、把一份硅胶H和三份0.75%CMCNa水溶液（M:V）溶液置研钵中充分研匀。 2、将玻璃板置一水平的平面上，取 适量硅胶和CMC-Na混合物倒入玻璃板上， 轻轻震动使混合物在玻璃板上铺匀，阴干。 3、把阴干好的硅胶板在105℃的烘 箱中烘30min。 4、待板凉至室温后，至干燥器中保 存。
硅胶薄层色谱板的制备和 硅胶色谱柱的填装
天然药物学
一、实验目的
• 掌握硅胶薄层色谱板的制备方法。 掌握硅胶色谱柱的填装方法。
二、原理及应用
• 吸附色谱。 硅胶薄层板可用于化合物定性与定量。 硅胶色谱柱可用于化合物分离和纯化。薄层色Biblioteka 的操作技术流程装置图（一）
薄层板
层析缸
薄层色谱
装置图（二）
三、实验步骤
• ㈡、硅胶色谱柱的填装 1、将一小团脱脂棉放于色谱柱底部。 2、将硅胶慢慢倒入色谱柱中，轻轻 敲击柱子外侧。 3、打开活塞，将洗脱剂慢慢加入柱 子中流过柱体，直至整个柱床全部润湿。 关闭活塞备用。
四、注意事项
• 硅胶和CMC-Na要充分研匀，没有硅胶团和 气泡。 混合物的量要适中，不能铺的太厚。 装柱时硅胶一次性全部加入。 在洗脱剂没全部流过柱体时不能关闭活塞。
溶剂 石英砂或固定相
硅胶 砂芯或棉花
柱色谱装置
关于薄层色谱和柱色谱
• 相同点：薄层色谱和柱色谱都属于液–固吸附色谱，都是经 过在吸附剂和展开剂（洗脱剂）之间的多次吸附–溶解作用， 将混合物中各组分分离成孤立的样点，实现混合物的分离。 • 不同点： 薄层色谱：是将吸附剂涂布在玻璃板上，形成薄薄的 平面涂层。干燥后在涂层的一端点样，竖直放入一个 盛有少量展开剂的有盖容器中。展开剂接触到吸附剂 涂层，借毛细作用向上移动。 柱色谱：是将吸附剂装于柱中，当待分离的混合物溶 液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。 当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，往 下洗脱的速度也不同，从而达到分离的目的。