酯化酶常规测定
酯化力的测定 (2)
酯化力的测定方法(整理后的方法)1 原理 酯化酶是脂肪酶和酯酶的统称,它与短碳链香酯的生物合成有关.酯化过程是一个可逆反应,酯酶既能产酯,也能使酯分解殆尽。
因此,对大曲而言，酯化能力和酯分解能力的测定同样重要,以己酸乙酯计，酯化力是１ｇ干曲在30—32℃反应10０h 所产生的的己酸乙酯的m ｇ数.2 试剂和溶液2.1 20％乙醇溶液2.2 １%己酸的20%乙醇溶液准确吸取１ml 己酸(ＡR 级）于１０0ml 容量瓶中,用2０%乙醇稀释至刻度.2.3 0.１ｍol/l 氢氧化钠溶液的配制与标定称取4。
2g 氢氧化钠用煮沸冷却的蒸馏水溶解，并定容至1000m ｌ。
标定:准确称取在１20℃干燥至恒重的邻苯二甲酸氢钾０。
4—0.5g(精确至0.0002ｇ）,放入２50ml 三角瓶中,加入5０ｍl 蒸馏水，溶解后加入两滴1%酚酞指示剂，用氢氧化钠溶液滴定至微红色,3０s 不退色,记下消耗的氢氧化钠溶液的体积.根据公式计算其浓度。
2.4 1％酚酞指示剂 称取1.0g 酚酞溶解于1０0ml95%乙醇中。
3 测定方法3.1 气相色谱法（1） 酯化液制备 取1０0ml1％己酸乙醇溶液于2５0m ｌ蒸馏烧瓶中,加入相当于5g 干曲的曲量(曲粉量=%1001005水分-⨯g ），在３0—32℃保温酯化1００h 。
然后加水50ml ，加热蒸馏，接受馏出液1００ml 。
（2） 吸取馏出液适量，气相色谱测定。
3.2 传统滴定法（1） 取100ml 1%己酸乙醇溶液于250ｍl 蒸馏烧瓶中，加入相当于5g 干曲的曲量(曲粉量=%1001005水分-⨯ｇ),加盖摇匀后，放置1０分钟初测。
（3） 初测 吸取上述放置的上清液1ｍl 于250ｍｌ三角瓶中，加入20ｍl 蒸馏水,2滴酚酞指示剂,用氢氧化钠溶液滴定至微红色,30s 不退色,记下消耗的氢氧化钠溶液的体积Ｖ１。
（4） 酯化 将上述已吸取了上清液的蒸馏瓶，用防水纸包好,在30—32℃保温酯化100h 。
酯化液中酯类物质检测方法的探讨
酯化液中酯类物质检测方法的探讨高江婧;刘国英;周庆伍;李安军;汤有宏;万春环【摘要】The detection methods of esters in esterifying liquid were investigated and the method to measure the content of ethyl caproate and ethyl lactate in esterifying liquid accurately had been developed.The effects of adding lactic acid in esterifying liquid on the activity of esterifying enzyme were analyzed and the results suggested that the addition of lactic acid would result in rapid drop of esterifying liquid pH value because the dissociation constant of lactic acid was higher than other acid,and low pH value would further result in lower enzyme activity.Accordingly,the content of lactic acid in esterifying liquid should be reduced as possible during the preparation of esterifying liquid.%对酯化液中酯化物质成分的检测方法进行了试验研究,建立了对酯化液中己酸乙酯含量和乳酸乙酯含量较为准确的检测方法。
对酯化液中添加乳酸对酯化酶活性的影响进行了分析。
测定酯的含量的方法
测定酯的含量的方法酯是一种由酸和醇反应生成的有机化合物，具有特定的化学结构和性质。
测定酯的含量是分析和确定样品中酯的浓度的过程，可用于质量控制、化学分析及有机合成等领域。
下面将介绍几种常用的测试酯含量的方法。
一、重量法重量法是一种简单、快速测定酯含量的方法。
首先，取一定质量的待测样品，将其完全挥发，得到样品的残留物质量。
然后，通过比较挥发前后的质量差异，可以得到酯的质量含量。
二、滴定法滴定法是一种常用的测定酯含量的方法，可以准确地测量酯的浓度。
该方法主要基于酸与酯反应生成酸酐的化学反应。
首先，将待测样品溶解在适当的溶剂中，然后加入适当浓度的酸溶液。
酸与酯反应生成酸酐，酸酐与酸碱指示剂反应，使溶液的颜色发生变化。
根据酸消耗的量和变化的颜色，可以确定酯的浓度。
三、气相色谱法气相色谱法是一种精确测定酯含量的方法，可以用于复杂混合物中的酯的分离和定量。
该方法主要基于酯在气相色谱仪中的不同保留时间，通过比较样品峰面积与标准品峰面积的比值，可以确定酯的浓度。
四、红外光谱法红外光谱法是一种常用的测定酯含量的无损分析方法。
该方法主要基于酯分子中的共振吸收，通过记录和分析样品的红外光谱图，可以确定酯的含量。
红外光谱法具有操作简单、快速、准确性高等优点，广泛应用于酯的含量分析。
总结起来，测定酯的含量的方法有重量法、滴定法、气相色谱法和红外光谱法等。
不同的方法适用于不同的具体情况，选择合适的方法可以有效地测定酯的含量。
在实际应用中，可以根据样品的性质、需要测量的酯的种类和浓度范围等因素综合考虑，选择最适合的方法进行酯含量的测定。
脂肪酶酶活测定方法
脂肪酶是一种特殊的水解酶，广泛地存在于动物组织、植物种子和微生物体中，是能水解甘油三酯或脂肪酸酯产生单或双甘油酯和游离脂肪酸，将天然油脂水解为脂肪酸及甘油，同时也能催化酯合成和酯交换的酶。
其在轻工、化工、医药、食品等行业有广泛的用途。
近年来，随着非水酶学和界面酶学的不断深入，脂肪酶应用也不断地扩展，被广泛应用于酯合成、手性化合物的拆分、化工合成中间体的选择性基团保护、高聚物的合成、肽合成等方面，应用前景广阔。
脂肪酶在微生物中有广泛的分布。
脂肪酶催化的反应是:甘油三酸酯+水→甘油二酸酯+游离脂肪酸→甘油酸酯+游离脂肪酸→甘油+游离脂肪酸。
脂肪酶只能在异相系统，即在油-水界面上作用，对水溶性底物无作用，这一点在有机合成中合成手性中间体方面具有很多的优越性。
1 滴定法（参照国家标准，适用于脂肪酶制剂）1.1 脂肪酶活力定义为1g固体酶粉（或1mL液体酶），在一定温度的pH条件下，1min水解底物产生1μmol的可滴定的脂肪酸，即为一个酶活力单位，以u/g（u/mL）表示。
1.2 测定原理脂肪酶在一定条件下，能使甘油三酯水解成脂肪酸、甘油二酯、甘油单酯和甘油，所释放的脂肪酸可用标准碱溶液进行中和滴定，用pH计或酚酞指示反应终点，根据消耗的减量，计算其酶活力。
反应式为：RCOOH+NaOH→RCOONa+H2O。
1.3 仪器设备恒温水浴箱，移液枪，高速匀浆机，pH计，电磁搅拌器1.4 试剂溶液95％酒精4%聚乙烯醇（PVA，聚合度1750±50）：称取4g PVA，加蒸馏水80mL，沸水中加热，并不断搅拌，使其完全溶解，慢速搅拌，以免产生过多气泡，冷却后定容至100mL，用双层纱布过滤后备用。
橄榄油(分析纯)底物溶液：按4%聚乙烯醇：橄榄油=3:1比例混合，用高速匀浆机处理6min（分两次处理，间隔5min，每次处理3min）。
黄水酯化液酶法制备技术研究
己酸 1 494.7
118
第9卷 第2期 2009 年4月
中国食品学报
Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology
Vol． 9 No． 2 Apr． 2 0 0 9
黄水酯化液酶法制备技术研究
刘 宾 陈义伦 于忠良 （山东农业大学食品科学与工程学院 山东泰安 271018）
中国食品学报
是因为提高底物浓度， 可以增加酶分子与底物作 用的机会，加快反应速率，但乙醇为极性溶剂，当 其浓度过大时影响酯化酶的催化活性， 造成总酯 含量减少。 不添加酯化酶的对照组放置 7 d 后，各 对照之间总酯含量的变化不明显。 2.3 己酸添加量对酯化液制备的影响
取乙醇含量为 10 mL/100 mL 的反应液，分别 添加己酸 0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%， 再添加 5% 的酯化酶。 以不添加酯化酶的一组作对照，在 35 ℃下酯化 7 d，每隔 8 h 摇匀 1 次。 反应结束后测定 试样和对照总酯的含量，作图 3。
1 材料与方法
1.1 试验材料 黄水、酒尾，由山东泰山生力源集团有限公司
提供；复合酶制剂，由山东梁山徐坊大曲有限公司 提供；无水乙醇、己酸、氢氧化钠、硫酸等均为分析 纯试剂。
收稿日期： 2008-04-28 作者简介： 刘宾，男，1983 年出生，硕士生 通讯作者： 陈义伦
1.2 主要试验仪器 HP4890D 气 相 色 谱 仪 ， 美 国 安 捷 伦 公 司 ；
酯化酶活力测定报告(一)
酯化酶活力测定报告(一)酯化酶活力测定报告引言•酯化酶是一类重要的生物催化剂，对于工业生产和生命科学研究具有重要意义。
•酯化酶的活力测定是评估其催化效率和稳定性的重要指标。
实验目的1.测定目标酯化酶样品的活力水平。
2.对比不同条件下酯化酶的活力差异。
实验材料和方法•酯化酶样品•目标底物（酸和醇）•实验仪器（如比色计、高效液相色谱仪等）实验步骤1.准备反应体系，包括目标底物和酯化酶样品。
2.设置不同条件的对照组和实验组，如pH值、温度、底物浓度等。
3.按照设定的条件进行酯化反应。
4.根据实验设计，定期取样测试反应体系中产物的浓度。
5.使用合适的分析方法，如比色法、高效液相色谱法等，测定产物浓度的变化。
6.记录测定结果，并将酯化酶活力计算公式应用于实验数据。
结果分析•统计实验数据，绘制曲线或表格，展示酯化酶活力在不同条件下的变化趋势。
•分析不同条件间的差异，探讨可能影响酯化酶活力的因素。
结论•酯化酶的活力受到多种因素的影响，如pH值、温度和底物浓度等。
•通过合理设计实验条件，并测定酯化酶活力的变化，可以评估其在不同环境中的催化效率和稳定性。
讨论与展望•本实验中仅针对酯化酶活力进行测定，未对其催化机制进行深入研究。
•进一步研究可以探究如何通过改变酶的结构或引入辅助剂来提高酯化酶的催化效率。
•酯化酶活力测定的结果还可与其他测定方法进行比较，以验证实验数据的可靠性。
参考文献•作者1, 作者2. (2000). 酯化酶活力测定方法研究. 化学进展, 20(2): .•作者3, 作者4. (2015). 酯化酶的应用与发展. 生物技术导刊, 35(4): 67-78.酯化酶活力测定报告（续）实验设计•在本实验中，我们选择了一种酯化酶作为研究对象，通过测定其活力水平来评估其催化效率和稳定性。
•我们设计了不同条件的对照组和实验组，包括pH值、温度和底物浓度等因素。
•通过定期取样并测定反应体系中产物的浓度变化，我们可以得到不同条件下酯化酶活力的数据。
酯化酶_菌株_应用于白酒酿造过程的探讨
酯化酶（菌株）应用于白酒酿造过程的探讨刘宇驰，卓毓崇，云敏，程松海（四川古蔺郎酒集团技术中心，四川古蔺646523）摘要：酯化菌株及其代谢产酯化酶的种类很多，不仅要了解其酯化力，还要注意其相对较优的专一性能红曲酯化菌株及其酯化酶制剂在白酒酿造过程中的应用效果。
底物含量、培养基、红曲种类、培养条件等对己酸乙酯的生成均有影响。
在生产应用时要对酯化菌株及代谢的酯化酶性质及生产需要进行细致的研究，并经生产实践的检验，掌握其正确的应用方法。
（陶然）关键词：白酒生产；提高质量；酯化菌株；酯化酶中图分类号：TS262.3；TS261.4；Q814文献标识码：B文章编号：1001－9286（2009）07－0059－04Investigation on the Application of Esterified Enzyme Strains in Liquor ProductionLIU Yu-chi,ZHUO Yu-chong,YUN Min and CHENG Song-hai (Technical Center of Gulin Langjiu Group,Gulin,Sichuan 646523,China)Abstract :There are many esterified strains and the corresponding esterified enzymes.In practice,we should know clearly the esterifying power of each strains and notice the use effects of monascus esterified strains and its esterified zymin in liquor-making.The formation of ethyl caproate is influenced by the substrate content,the culture medium,the species of monascus,and the culture conditions.Accordingly,careful and detailed re-search on esterified strains and the corresponding esterified enzymes is required for technicians to get over the appropriate application methods.(Tran.by YUE Yang)Key words :liquor production;quality improvement;esterified strains;esterified enzyme收稿日期：2009－05－12作者简介：刘宇驰（1965-），男，四川泸州人，郎酒厂厂长，高级工程师，发表论文多篇。
脂肪酶测定标准操作规程
血清脂肪酶测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清脂肪酶(缩写LPS)测定；组合项目申请：胰腺炎检测。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定1天，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。
-20℃可保存数月；-70℃至少可保存半年；应避免标本反复冻溶。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
抽血前3天内避免高脂饮食，24小时内不饮酒。
2.3.2如果使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
EDTA、草酸盐、氟化钠、枸橼酸对酶有抑制作用。
2.1.5 抽血前最好停用影响血脂的药物（如调脂药、避孕药、某些降压药、激素等）数天或数周，否则应记录用药情况。
3 方法原理采用1,2-邻-二月桂宗甘油－3-戌二酸－(6'-甲基试卤灵）-酯作为底物，OH－脂肪酶1,2-邻-二月桂宗甘油－3-戌二酸－(6'-甲基试卤灵)-酯 ----------1,2-邻-二月桂宗甘油 + 戌二酸 + 甲基试卤灵在570nm波长下，根据产物红色的甲基试卤灵生成速率测定脂肪酶的活性。
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酯化酶常规测定
一、水分、酸度测定同大曲测定方法
二、大曲酯化力的测定
1 酯化液制备
吸取己酸-乙醇溶液100mL ，于250ml 蒸馏烧瓶中，加入相当于绝干样品5g （准确至0.001g ）的大曲粉，在30℃～32℃恒温箱中酯化100h,取出后加水50mL,加热蒸馏，接收馏出液100ml ，作为酯化力含量的测定液。
2 己酸乙酯含量的测定
吸取50ml 馏出液,加入酚酞指示剂3滴，用0.1mol/L 氢氧化钠标准溶液中和至微红色出现，准确加入氢氧化钠标准溶液25mL ，沸水浴中回流30min （或室温暗处放置皂化24h ），冷却后用0.1mol/L 硫酸标准溶液滴定到微红色消失为终点。
3 结果计算
大曲酯化力的计算按式（7）计算：
1122()14450
100
c v c v X m -⨯=⨯…………………………………………………………………（7） 式中：
X ——酯化力,单位为（mg/g·100h ）；
c 1——NaOH 标准溶液的浓度（mol/L ）；
v 1——测定时加入NaOH 标准溶液的体积（mL ）；
c 2——H 2SO 4标准溶液的浓度（mol/L ）；
v 2——滴定消耗H2SO4标准溶液的体积（mL ）；
m ——绝干曲粉质量（g ），称量的曲粉重量扣除水分；
144——己酸乙酯的换算系数。