1.沙门氏菌及检验

沙门氏菌及检验
概况
沙门氏菌引起人类的伤寒、副伤寒和食物中毒。并引起动 物的沙门氏菌病。可由不同的方式污染食品。是重要的肠道致 病菌。沙门氏菌的分布极广，种类繁多。是肠杆菌科中最复杂 的菌属。按Kanffman-White的分类标准有2200种以上的血 清型，目前公认的分类方法是将沙门氏菌分为6个亚属（亚属 Ⅰ—Ⅵ）其中亚属Ⅲ再分为Ⅲa和Ⅲb）绝大多数（>99%）沙 门氏菌亚属Ⅰ中的菌种，其余的亚属通常从冷血动物和环境中 分离，偶尔引起人类致病。沙门氏菌主要通过污染食品和水源 经口感染。引起沙门氏菌食源性疾病的主要食品是动物性食品 如生肉、牛排、禽肉、动物内脏等，乳类和乳制品、蛋及蛋制 品也可传播。从业人员的带菌在引起食物中毒中也不容忽视。 引起食物中毒的菌型很多，主要有鼠伤寒、肠炎、猪霍乱汤卜 逊及丙型副伤寒沙门菌。国外，以鼠伤寒沙门菌占第一位。我 国鼠伤寒所致的食物中毒占29.5％，具第一位。
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五、 血清学凝集试验
六、噬菌体裂解试验
• 噬菌体是寄生于细菌的病毒，它们随同细菌分 布于自然界中，噬菌体对于它们的 宿主细菌 具有一定的特异性。故可利用噬菌体来鉴定某 些细菌且对于某种菌作为一个 必要的鉴定项 目。噬菌体对于它们的宿主细菌还具有型的特 异性，因此可用于细菌的分型。应用肠杆菌科 噬菌体诊断法来检验食品及食物中毒中的沙门 氏菌，志贺氏菌性大肠埃希菌，也适用于食品 从业人员的带菌检验。
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9、葡萄糖铵利用试验：
• 当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源且不需要尼 克酸和氨基酸作为生长因子时可以在该培养基上生 长。细菌生长时分解葡萄糖使培养基变酸。 取培养物表面在盐水管内做成极稀的悬液。肉 眼观察不见浑浊，以每一接种环内含菌数20-100之 间为宜，将接种环重新灭菌后挑取菌液接种。同时 再以同法接种普通斜面一支作对照37℃培养24小时。 本试验要求比较严格，阳性者葡萄糖铵斜面上有正 常大小的菌落生长，阴性者不生长，但对照上生长 良好。如在葡萄糖铵斜面上生长极微小的菌落可视 为阴性结果，大肠埃希菌阳性，志贺氏阴性，可用 此试验予以鉴别。 •
2、综合半固体：
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包括三项靛基质、尿素和动力。穿刺接种，37℃培养1—2天
⑴ 靛基质于上层滴加靛基质试剂（4－5滴），出现红色环为阳性， 黄色为阴性。其原理是细菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲 哚）与对二甲氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚的红色。 ⑵ 尿素：如被测细菌有尿素酶，可分解培养基中的尿素，产生大量 的氨使培养基变碱，而使培养基变红色（培养基内有酚红指示剂碱性 时为玫红色） ⑶ 动力的观察：如被测细菌有鞭毛即有动力，沿穿刺线扩散生长， 即动力阳性。 靛基质和尿素试验均属氨基酸和蛋白质代谢试验
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8、枸橼酸盐利用试验：
• 当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源同时 利用其作为唯一碳源时可在枸橼酸盐培养基 上生长，分解枸橼酸钠生成碳酸钠使培养基 变碱。 将琼脂培养物做成盐水悬液接种一环于 斜面上，37℃培养4天，每天观察结果一次， 阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转 为兰色。沙门氏菌为阳性，志贺氏菌阴性。
• 肠杆菌科中沙门氏菌、志贺氏菌为阴性。在鉴 定上有重要价值。
4、氨基酸脱羧酶试验：
• 属氨基酸代谢试验 细菌分解氨基酸使其脱掉 羧基，生成胺和CO2的反应叫脱羧反应。细 菌所产生的酶叫脱羧酶，氨基酸经脱羧产生 的胺均可使培养基变碱可用指示剂显示出来。 于被检测菌斜面上挑取培养物接种到氨基酸 培养基及对照培养基（无氨基酸）。37℃培 养1-2天。每天检查一次结果，黄色为阴性 （仅发酵葡萄糖）对照为黄色（发酵葡萄糖 产酸）氨基酸管从黄色变紫色为阳性。
一、形DHL琼脂)上典型特征
沙门氏菌在SS琼脂上典型 特征
沙门氏菌在HE琼脂上典型 特征
三、检验程序
四、生化试验及亚属的鉴定
沙门氏菌和志贺 氏菌主要生化试验原 理、试验方法、结果 观察
1、三糖铁琼脂：
• 肠道致病菌检查作初步筛检用，底 层穿刺、斜面划线接种。37℃培养 24h。底层产酸表示葡萄糖发酵（变黄 色），斜面产酸表示乳糖或蔗糖发酵， 中段变黑表示产硫化氢。
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7、ONPG （β-半乳糖苷酶试验）
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10、七叶苷水解试验 （糖代谢试验）
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细菌水解七叶苷生成葡萄糖和七叶素。 七叶素 与 培养基内枸橼酸铁试剂的二 价铁离子起反应生成黑色的化合物。
自琼脂培养物接种与七叶苷培养基内， 培养过夜观察结果。阳性 反应时培养 基变为棕黑色，志贺菌为阴性。
11、氧化酶试验：
• 氧化酶或称细胞色素氧化酶，是细胞色素呼 吸酶系统的终末呼吸酶，此酶并不直接与氧 化酶试剂起反应，而是首先使细胞色素C氧 化，然后此氧化型的细胞色素C使对苯二胺 氧化，产生颜色反应。 取洁净滤纸一角沾取试验菌少许，加试 剂1滴，阳性者立刻呈粉红色，5-10秒内呈 现紫色反应为氧化酶阳性。沙门菌、志贺菌 阴性，弧菌属细菌阳性。
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3、氰化钾试验：
• 即抑菌试验，氰化钾可以抑制某些细 菌的呼吸酶系统，呼吸酶以铁卟啉为 辅基，氰化钾能和铁卟啉结合，而使 这些酶失去活性，使细菌的生长受到 抑制。
3、氰化钾试验：
• 取37℃24h的肉汤培养物一接种环至氰化钾培 养基内，同时接种一环到不含氰化钾的同样培 养基中作为对照。37℃培养连续观察两天如 有细菌生长培养基浑浊即为阳性。细菌不生长 为阴性，对照应有菌生长。
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5、丙二酸盐：
• 属碳源利用试验。当细菌可以利用丙 二酸钠唯一碳源时，丙二酸钠被分解 生成碳酸钠。使培养基变碱。
用新鲜斜面培养物接种，37℃培养48 小时阳性者由绿色变为兰色。
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6、糖类分解试验 （糖发酵试验）：
• • 属 糖类代谢试验 细菌分解糖类系依靠细菌细胞所产生的 各种酶类的作用，而这些酶类随细菌的种类 不同而各不相同。故可利用此来鉴别细菌， 糖发酵试验培养基常用的指示剂为溴甲酚紫 或溴麝香草酚兰。 最常用的是液体糖发酵管。如细菌利用 该糖类使其发酵产酸，培养基由紫色变为黄 色或绿色变为黄色为阳性。