沙门氏菌检验详细流程
简述沙门氏菌的检验流程
简述沙门氏菌的检验流程
当然可以，让我用更简单的话说说怎么检查沙门氏菌吧：
唤醒细菌：首先，从食物或者其他样本里取一点点（比如一小块肉或者一些蔬菜），放到一种能让细菌“醒过来”和长大的特殊水里。
然后，让它们在适合的温度下美美地“睡”上一晚。
帮好菌壮大多起来：第二天，从第一步得到的溶液里取点液体，转移到两种特别设计的“营养餐”里，一种是让沙门氏菌特别喜欢的，另一种是考验它们的。
接着，再让它们各自在一个暖暖的地方长一长。
找不同：等细菌长得差不多了，挑一点出来涂在几种颜色不一样的“细菌专属培养皿”上，这些盘子能帮助我们看清楚哪些是沙门氏菌。
确认身份：在培养皿上，我们会看到各种小点点，这些是细菌长出来的。
挑几个可疑的小点，做些小实验，看看它们的行为像不像沙门氏菌，甚至用专门的“血液测试”来确认是不是真的沙门氏菌家族的。
高科技快速验证（如果需要）：有时候，为了更快更准，我们会用一种叫做PCR的技术，直接检查细菌的DNA，就像用指纹一样确定它们的身份。
整个过程就像是在众多的细菌中找出沙门氏菌这个“嫌疑犯”，确保我们的食物安全，或者帮助医生诊断疾病。
沙门氏菌的检验过程
沙门氏菌的检验因沙门氏菌是最常见的食源性细菌病原体，因此在本节中重点介绍沙门氏菌的检验。
沙门氏菌是食物传播病原菌中研究最活跃的细菌。
从食品中分离和鉴定沙门氏菌，当前通用的方法学分5个步骤：1.前增菌-第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
2.选择性增菌-在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增菌的一个步骤。
此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。
3.选择性平板分离-这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。
4.生物化学筛选-排除大多数非沙门氏菌。
也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。
5.血清学技术提供了培养物菌种的鉴定。
这五个步骤代表理想状况。
不过一个有经验的检验员，可能在一个或几个步骤中看出特性和差别。
目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。
三、从食品中分离沙门氏菌样品的制备下面的方法是以25g样品为检测单位，样品：肉汤为1∶9的比例。
除非另有说明，根据混合程度，加足够的肉汤保持1∶9的比例。
对不需准确称量检测的样品，例如：田鸡腿，可参看特定方法说明。
1、干蛋黄、干蛋白、干全蛋、液奶（去脂牛奶，含2%脂肪牛奶，全脂奶，和脱脂奶）、粉状调制食品（蛋糕，甜饼，炸面圈，饼干和面包）、婴儿食品、口食或软管进食含蛋的食品：检验前的冷冻样品最好不要解冻。
如果冷冻样品必须软化以获取待检测部分，则尽可能迅速的解冻所需部分，使竞争菌数少增加或降低沙门氏菌的可能损伤。
解冻需在45℃以下，有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行15min或在2�5℃，18小时内解冻。
无菌操作称取25g样品，放入灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500mL）或其他合适的容器内。
非粉状的样品，加入225mL灭菌乳糖肉汤。
如果制品是粉状，加入约15mL灭菌乳糖肉汤，用灭菌玻璃棒，匙或灭菌压舌器搅拌，使成均匀悬液。
沙门氏菌检验详细流程图
1 mL+SC10 mL 36 ℃±1 ℃，18 h～24 h
BS
XLD（或HE、科玛嘉显色培养基）
36 ℃±1 ℃，40 h～48 h
36 ℃±1 ℃，18 h～24 h
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA， 靛基质， 尿素 (pH 7.2)， KCN
商 品 化 生 化 H2S+靛基质- 尿素- H2S+靛基质+ 尿 H2S-靛基质-尿素 反应结果与左
为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使用 两种以上选择性分离培养基。
进口-SS 进口-SS 国产-SS 进口-HE 国产-HE 进口-XLD 国产-XLD 进口-BS 国产-BS CHRO显色 国产-DHL 国产-WS TSA（对照）
65.3 81.0 52.0 83.2 80.0 83.0 86.2 106.6 77.7 68.4 98.4 71.6 100.0
初筛微生 物
沙门氏菌
柠檬酸杆 菌属
变形杆菌
菌落颜色
紫色(直径约 1mm)
蓝色(直径约 1mm)
无色或被抑 制
特异性 灵敏度
89％ 100%
---
---
(铜绿假单胞菌也呈紫红色， 可以通过前增菌排除。所以推 荐在检测中的前增菌用TTB。 粉红色、深红色、干燥菌落、 边缘锯齿状等 均非沙门氏菌菌 落。）
被分成2500多个血清型。
Vi抗原 O抗原 H抗原
沙门氏菌命名与书写方式
目前的命名方法规定：
肠道沙门菌肠道亚种（亚种Ⅰ）给予专用名，并采用 标本分离地址的地名。菌名的第一个字母需大写，且 亚种Ⅰ的所用菌名不能用斜体。例如：肠道沙门菌鼠 伤寒血清型应书写为Salmonella enterica subsp.enterica serotype Typhimurium，但在实际工作中，可简写为S. Typhimurium。
沙门氏菌的检验流程及每一步检验过程的作用
沙门氏菌的检验流程及每一步检验过程的作用下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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沙门氏菌检测操作规程
沙门氏菌检测操作规程1 原理沙门氏菌的检测需要四个连续的阶段见下图：1.1 用非选择性液体培养基预增菌将试料接种到缓冲蛋白胨水（BPW），在36℃±1℃下培养16~20h。
（样品中可能存在少量的沙门氏菌却含大量的肠杆菌科的其他菌，所以选择性增菌是必须的；为了检测受伤的沙门氏菌，常须进行预增菌。
）1.2 在选择性液体培养基上增菌将1.1中的培养物接种到四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液和亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液中。
于TTB增菌液内42℃±1℃培养18h～24h；SC 增菌液内36℃±1℃培养18h～24h。
1.3 初步筛选将1.2的培养物接种到以下两个选择性培养基：亚硫酸铋（BS）琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂，于36℃±1℃分别培养40h～48h（BS 琼脂平板）或18h～24h（XLD 琼脂平板），根据菌落特性，辨别可疑沙门氏菌菌落。
1.4再次筛选挑出1.3中的可疑沙门氏菌菌落，在沙门氏菌显色培养基中培养再次筛选，再用合适的生化和血清学试剂进行鉴定。
2 试剂与仪器2.1所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基2.3.1缓冲蛋白胨水培养基（BPW）称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15 min，冷至常温。
2.3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。
将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。
2.3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液取SC培养基23g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装锥形瓶，冷至常温备用。
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式沙门氏菌是一种常见的细菌引起的食源性疾病，可能会导致严重的胃肠道感染。
为了保障食品安全，确保公众的健康，我们需要进行沙门氏菌的国标检验。
下面是一份生动、全面且有指导意义的文章，详细介绍了沙门氏菌检验的国标检验步骤和接种方式。
第一步：样品准备在进行沙门氏菌检验之前，我们首先需要准备样品。
常见的样品包括食品、水、动物排泄物等，可能携带沙门氏菌。
样品应该收集自具有代表性的地点，并采取无菌采样容器进行收集。
收集样品时要注意避免污染，并确保样品的数量足够进行检验。
第二步：样品处理样品处理的目的是将潜在的沙门氏菌分离出来，并进行后续的检测。
可以采用不同的方法进行样品处理，常见的方法包括富集培养和选择性培养。
富集培养是将样品放入富集培养基中，利用培养基中的营养物质以及特定条件促使沙门氏菌生长。
选择性培养则是利用培养基中的特殊抑制剂抑制其他细菌的生长，从而使沙门氏菌生长出来。
第三步：菌落鉴定在样品处理后，我们需要对培养基上的菌落进行鉴定，确认是否为沙门氏菌。
常见的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化鉴定和分子生物学鉴定。
形态学鉴定主要通过观察菌落的形状、颜色和大小等特征来判断细菌的种类。
生理生化鉴定则是通过检测菌落对特定物质的代谢情况来确定细菌的种类。
分子生物学鉴定是利用特定的DNA序列来识别沙门氏菌的基因，通常使用PCR技术进行检测。
第四步：抗菌药敏试验沙门氏菌的抗菌药敏性检测是为了确定对何种抗生素具有敏感性。
通过抗菌药敏试验，我们可以选择合适的药物来治疗感染。
可以使用各种常见的抗生素盘进行试验，然后观察沙门氏菌对不同抗生素的反应。
根据抗生素的抑菌效果，可确定沙门氏菌的耐药性情况。
第五步：结果分析与报告最后一步是对检验结果进行分析，并撰写检验报告。
检验结果要结合国家标准进行评估，确定样品是否合格。
如果样品中检测到沙门氏菌，还需要评估其数量以及对公众健康可能造成的风险。
在撰写报告时，需要详细记录样品的来源、处理方法、检验步骤和结果，以及相应的建议和措施。
沙门氏菌检验程序
沙门氏菌检验程序沙门氏菌是一种常见的致病微生物，能引起人类和动物的感染疾病。
因此，在食品、水源、环境等方面对沙门氏菌的检测尤其重要。
下面我们将介绍一下沙门氏菌检验的步骤和方法。
1. 样品采集对于食品、水源等样品的采集需要遵守严格的规定。
例如，食品样品需要在加工、贮存和分配之前采集，以确保沙门氏菌检验的准确性。
样品应当在采集之后尽快送到实验室进行检测。
2. 样品处理根据不同的样品类型和特性，采用不同的处理方法。
例如，对于牛奶、鸡蛋等液态食品，需要进行破坏性处理，以确保沙门氏菌的释放。
对于土壤、粪便等样品，需要进行外层细菌的去除处理。
3. 培养培养基选择含有适当氧气和营养物质的培养基，如SS（Salmonella-Shigella）培养基、XLD（Xylose-Lysine-Desoxycholate）培养基等。
将样品分别接种到不同的培养基上。
4. 培养将分别接种的培养基放入恒温箱中进行培养。
将温度设定为37°C至42°C，进行18小时至24小时的培养。
在培养过程中观察样品的生长和变化。
5. 分离取出培养好的样品进行观察。
将预处理样品浸泡在缓冲液中，将溶液过滤。
过滤的溶液留下来，转移到盘子上。
用肉眼观察菌落的形态，观察不同菌落的特点。
根据菌落的特点进行分离。
6. 鉴定在鉴定步骤中，需要进行各种化学试剂处理，如氧化氢酶测试、葡萄糖测试等。
同时需要使用专业仪器，如API试剂盒、ELISA试剂盒等。
通过这些鉴定手段，确定检测出的菌落是否为沙门氏菌。
7. 结论最后，根据检测结果得出客观和准确的结论，以便针对食品、水源或环境污染等问题采取相应的措施。
总之，沙门氏菌的检验程序是一个非常复杂和严谨的过程，需要专业的实验室和技术人员进行操作。
我们应当高度重视沙门氏菌检验的重要性，以确保我们的食品质量和健康安全。
沙门氏菌检验
食品安全检验技术（微生物部分）
沙门氏菌检验
（4）三糖铁琼脂培养基中亦
含有硫代硫酸钠作为产生硫 化氢之基质，且含硫酸亚铁 作为检测此无色产物之指示 剂，经接种培养后，若微生
物有硫化氢产生，会与亚铁
离子作用生成不溶性硫化亚 铁之沉淀，进而使培养基变 黑。 培养基变黑
食品安全检验技术（微生物部分）
沙门氏菌检验
沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试 验培养基内的反应结果
食品安全检验技术（微生物部分）
沙门氏菌检验
沙门氏菌属生化反应有尽有初步鉴别表
食品安全检验技术（微生物部分）
沙门氏菌检验
丙二酸盐试验 阳性（兰） 阴性（不变）
ONPG试验 阳性（黄） 空白
食品安全检验技术（微生物部分）
沙门氏菌检验
第一天 前增菌培养
食品安全检验技术（微生物部分）
沙门氏菌检验
（3）斜面碱性（红色-）底部碱性（红色-）或无变化（橘 红色）：表示无糖类发酵。而蛋白质则于有氧或厌氧条件
下进行代谢产生氨，而使培养基呈碱性反应，如有氧与厌
氧均发生蛋白质分解，则斜面与底部均呈碱性反应。 为使结果准确，应于接种培养18-24小时内观察结果，以 确保糖类尚未用尽，且蛋白质分解之碱性终产物尚未产生。
食品安全检验技术（微生物部分）
沙门氏菌检验
• 第二天 增菌培养
食品安全检验技术（微生物部分）
沙门氏菌检验
• 第三天 接种BS和沙门氏显色平板进行分 离培养
食品安全检验技术（微生物部分）
沙门氏菌检验 第四天 观察分离结果、生化试验
从平板上挑取可疑菌落接种到：三糖铁琼脂和赖氨素 脱羧酶试验管及对照，并同时在营养琼脂平板上划线分离 培养。
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沙门菌种和亚种的鉴别
肠道沙门菌
项目
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
卫矛醇
＋
＋
－
－
山梨醇
＋
＋
＋
＋
水杨苷
－
－
－
＋
ONPG
－
－
＋
－
丙二酸盐
－
＋
＋
－
KCN
－
－
－
＋
注：+为阳性 - 为阴性
邦戈尔沙门菌
Ⅵ
Ⅴ
－
＋
－
＋
－
－
－
＋
－
－
－
＋
沙门氏菌的血清分型
迄今为止沙门氏菌有
57个O抗原 116个H抗原 Vi抗原
国产BS
进口BS
菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色, 菌落周围培养基可呈黑色或
棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落, 周围培养基不变。
国产HE
进口HE
蓝绿色或蓝色, 多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色, 中心黑色或几乎全黑色。
进口XLD
国产XLD
菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心， 或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心
该表显示：只有在三糖铁斜面产酸、底层产酸；同时赖氨酸阴性的菌株可排 除。其他反应结果均有沙门菌属的可能，同时也均有不是沙门菌的可能。
TSI的反应
赖氨酸脱羧酶试验
沙门氏菌属生化反应初步鉴别表
反应 序号
A1
硫化氢 （H2S）
＋
靛基 质
－
pH7.2尿 素
－
氰化钾 （KCN）
－
A2
＋
＋
－
－
A3
－
－
－
－
注：＋阳性；－阴性；＋/－阳性或阴性。
沙门菌的分类
根据生化反应不同，分为2个种： 肠道沙门菌（Samonella enterica） ：
Ⅰ 肠道亚种（subsp. enterica ）
Ⅱ 萨拉姆亚种 （subsp. salamae ） Ⅲ 亚利桑那亚种（subsp. arizonae ） Ⅳ 豪顿亚种（subsp. houtenae ） Ⅵ 因迪卡亚种 （subsp. indica ）
被分成2500多个血清型。
Vi抗原 O抗原 H抗原
沙门氏菌命名与书写方式
目前的命名方法规定：
肠道沙门菌肠道亚种（亚种Ⅰ）给予专用名，并采用 标本分离地址的地名。菌名的第一个字母需大写，且 亚种Ⅰ的所用菌名不能用斜体。例如：肠道沙门菌鼠 伤寒血清型应书写为Salmonella enterica subsp.enterica serotype Typhimurium，但在实际工作中，可简写为S. Typhimurium。
生化试验
自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型 或可疑菌落，分别接种三糖铁（TSI）琼脂、 赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板； 取菌落一部分于斜面划线后穿刺底层。
接种针在接种TSI后不要灭菌，直接接种赖 氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板， 于36 ℃培养18 ～24 h，必要时可延长至 48 h。
穿刺TSI方法
接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养 基的同时，可直接接种蛋白胨水 (供做靛基 质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰化钾 (KCN) 培养基，也可在初步判断结果后从营养琼 脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h, 必要时可延长至48 h。
将已挑菌落的平板储存于2 ℃～5 ℃或室温 至少保留24 h，以备必要时复查。
其他沙门氏菌均不给专用名，只在亚种数字名后直接 书写抗原式，比如S.Ⅴ 66:z35:-
新的血清型名称的批准必须有巴斯德研究所、德国汉 堡卫生研究所及美国CDC 3个实验室的一致同意。
沙门氏菌检验程序
前增菌
目的：修复损伤的细菌细胞；
方法：25 g（mL）样品＋225 mL BPW的无
菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min均 质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW的 无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态， 不需要均质，振荡混匀。 如使用均质袋，可直接 进行培养。于36 ℃±1 ℃ 培养8 h～18h。
初筛微生 物
沙门氏菌
柠檬酸杆 菌属
变形杆菌
菌落颜色
紫色(直径约 1mm)
蓝色(直径约 1mm)
无色或被抑 制
特异性 灵敏度
89％ 100%
---
---
(铜绿假单胞菌也呈紫红色， 可以通过前增菌排除。所以推 荐在检测中的前增菌用TTB。 粉红色、深红色、干燥菌落、 边缘锯齿状等 均非沙门氏菌菌 落。）
GB 4789.4-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
沙门菌概况
沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流 行时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon 氏对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙 门菌属。
沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它 是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴 性杆菌。血清型繁多，目前已发现的沙氏菌 有2500多个血清型和变种。我国发现的有 250多个血清型。
无菌均质袋
选择性增菌与分离
轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL, 转种 于10 mL TTB 内, 于42 ±1 ℃培养18 ～24 h。同 时, 另取1 mL, 转种于10 mL SC内, 于36 ±1 ℃培 养18 ～24 h。
分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一个BS琼 脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显 色培养基平板）。于36 ±1 ℃分别培养18 ～24 h (XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板) 或40 h～48 h (BS琼脂平板)，观察各个平板上生 长的菌落。
沙门氏菌属的三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验结果
斜面
三糖铁琼脂
底层
产气
硫化氢
赖氨酸脱羧酶试验培养基
初步判断
-
+
＋（－）
＋（－）
＋
可疑沙门氏菌属
-
+
＋（－）
＋（－）
－
可疑沙门氏菌属
+
+
＋（－）
＋（－）
＋
可疑沙门氏菌属
+
+
＋/－
＋/－
－
注：＋阳性，－阴性；＋（－）多数阳性, 少数阴性；＋/－阳性或阴性。
非沙门氏菌
为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使用 两种以上选择性分离培养基。
进口-SS 进口-SS 国产-SS 进口-HE 国产-HE 进口-XLD 国产-XLD 进口-BS 国产-BS CHRO显色 国产-DHL 国产-WS TSA（对照）
65. 77.7 68.4 98.4 71.6 100.0