益智仁水提物的镇静催眠作用及对大鼠学习记忆影响的实验研究

益智仁水提物的镇静催眠作用及对大鼠学习记忆影响的实验研究
【摘要】目的：观察益智仁水提物的镇静催眠作用及对大鼠学习记忆的影响。

方法：用自主活动计数器记录给药后小鼠的自主活动及本品与戊巴比妥钠合用对小鼠睡眠时间的影响，采用东莨菪碱造模，观察服用益智仁水提物的实验大鼠的学习记忆能力。

结果：益智仁水提物能抑制小鼠的自发活动，与镇静药戊巴比妥钠有协同作用。

益智仁水提物降低大鼠脑中胆碱酯酶含量，Y迷宫行为实验各组大鼠达标所需的训练次数减少。

结论：益智仁水提物有一定的镇静安眠及对学习记忆改善的作用。

【Abstract】Objective: To study the effect of the water extracts of Alpinia oxyphylla Miq. on sedative and impove learning in mice. Methods: Tests of independence activity and sodium pentobarbital-induced sleep were employed. The learning and memory ability of mice was performed in Y-maze. Results: The extract could reduce the number of independence activities of mice, obviously increase the number of mice falling asleep and sleep time ,compared with those of negative group. After administrated with extract of Alpinia oxyphylla Miq ,mice made less mistakes in Y-maze. Conclusion: The water extract of Alpinia oxyphylla Miq. has obvious sedative and it plays a role in ameliorating scopolamine induced learning and memory impairments.
中药益智仁是姜科多年生植物益智的干燥成熟果实，具有暖肾固精、缩尿、温脾止泻之功效。

近年来随着对益智仁研究的深入，又陆续发现它有许多新的药理作用。

本课题主要研究益智仁神经方面活性，实验的设计是针对益智仁水提物在抑制小鼠自主活动，以及在提高大鼠的学习记忆能力上的活性观察。

本实验采用对小鼠分组，不同剂量的口腔灌胃的方式分别观察：益智仁水提物对小鼠自主运动的影响；对睡眠引诱剂所致睡眠时间延长的影响；对睡眠引诱剂剂量的影响。

同时，通过由东莨菪碱造成大鼠记忆障碍模型，通过行为实验观察益智仁水提取物对大鼠学习记忆的影响，并以乙酰胆碱酯酶活力和海马脑蛋白含量为指标，进一步探讨了益智仁水提取物对改善学习记忆障碍的作用。

1材料与方法
1.1 益智仁水提物，益智仁经破碎，水煎，过滤，浓缩到适当浓度而成；安定，北京紫竹药业公司生产，批号：20100421-4；戊巴比妥钠，江苏盐城制药厂生产，批号：20091117
1.2 动物：选用健康成年昆明种小鼠作镇静活性实验，200只，体重18-22克，购于北京实验动物中心；选用健康成年SD大鼠做改善记忆活性实验研究，60只，体重200~250克，购于北京实验动物中心。

1.3 方法
（1）对自发活动的影响小鼠50只雌雄各半，随机分成5组。

益智仁水提物分高、中、低剂量组，分别给予相当于原生药的200 mg/kg，100 mg/kg，50 mg/kg 益智仁，阳性组口服安定2mg/kg，空白组给予同体积生理盐水。

给药后30min，将小鼠放入XZ-4型自发活动计数器内适应5min，然后记录5min内小鼠的活动次数。

（2）对戊巴比妥钠睡眠时间的影响小鼠75只，雌雄兼用，随机分成5组。

益智仁高、中、低剂量组分别给予200 mg/kg，100 mg/kg，50 mg/kg益智仁，阳性组口服安定2.5 mg/kg,空白组给予同容积生理盐水。

给药后30min，每组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg。

记录小鼠的睡眠时间(以翻正反射消失为入睡时间，从翻正反射消失至恢复时间为睡眠持续时)。

（3）对戊巴比妥钠阈下睡眠剂量影响小鼠分组及给药同2，给药后30 min，各组动物腹腔注射戊巴比妥钠30 mg/kg，观察给戊巴比妥钠后30min内各组发生睡眠的动物数(以翻正反射消失1min以上为指标)。

（4）对改善记忆力的影响
大鼠适应环境两天后，随机数字表法将其分成5组：对照组、模型组、益智仁低剂量组（100mg/Kg）、益智仁水提物中剂量组(200mg/Kg)、益智仁高剂量组（400mg/Kg），每组12只，雌雄各半。

给药方法：益智仁低、中、高剂量组，每天分别灌胃100mg/Kg、200mg/Kg, 400mg/Kg益智仁水提物，对照组和模型组灌胃等量的生理盐水，连续给药25天。

实验过程中各组均自由饮食饮水，在温度（22±2）℃条件下饲养。

Y迷宫学习记忆行为训练：末次给药1小时后开始Y迷宫学习记忆行为训练。

训练前15min模型组及益智仁低、中、高剂量组腹腔注射东莨菪碱1mg/Kg 对照组腹腔注射等体积生理盐水。

行为实验在三等份辐射式迷宫中进行。

迷宫每个臂的顶端都装有一15W的指示灯，臂底为平行相间的铜棒。

灯亮臂为安全区，其余两黑暗臂底通电。

每只大鼠适应环境5分钟后，接通电源，随机变换安全区的位置。

安全区灯亮2秒后，如动物仍停留在黑暗臂或跑向另一黑暗臂内，足底即遭到电击，直到跑到安全区即完成一次学习任务。

间隔30秒开始下次训练。

如动物由起始臂直接跑向安全区，即为正确反应。

每只动物每天训练20次，连续训练7天，以正确反应率达到90%作为学会的标准，以达到学会标准所需的训练次数作为学习成绩的指标，进行统计学处理。

大鼠海马乙酰胆碱酯酶活性及脑蛋白含量测定：行为实验结束后，立即断头处死动物，在冰块上快速分离双侧海马，准确称重，按重量体积比加9倍生理盐水制成10%脑组织匀浆，2000r/min离心10min，取上清液进行乙酰胆碱酯酶活性测定，测定按说明书方法进行，同时用双缩脲蛋白测定试剂盒测定海马脑蛋白含量。

计算海马匀浆内乙酰胆碱酯酶活性，脑中乙酰胆碱酯酶活力单位定义：每毫克组织蛋白在37℃和底物作用20min，分解1umol乙酰胆碱为1U。

主要观察指标：（1）Y迷宫行为实验各组大鼠达标所需的训练次数。

（2）海马乙酰胆碱酯酶活力及海马脑蛋白含量。

统计学分析：应用SPSS 10.0软件，组间比较采用T检验，p＜0.05表示有统计学差异。

2结果
2.1对小鼠自主活动的影响
2.2对巴比妥钠睡眠时间的影响
2.3对戊巴比妥钠阈下睡眠剂量影响
2.4改善记忆力实验
与对照组比较：a P＜0.05；b P＜0.01；与模型组比较：c P＜0.05；d P＜0.01
3讨论
3.1通过以上研究发现：益智仁水提物能明显抑制小鼠自发活动，可明显延长小鼠戊巴比妥钠睡眠时间，增加戊巴比妥钠阈下睡眠剂量引起入睡的小鼠数，即对小鼠睡眠的影响与戊巴比妥钠有协同作用。

提示益智仁水提物有镇静、催眠作用。

3.2益智仁高、中、低剂量组达标所需训练次数显著低于模型组（P＜0.01）；模型组大鼠达标所需训练次数显著高于对照组（P＜0.01）。

益智仁低剂量组和中剂量组海马乙酰胆碱酯酶活力显著低于模型组（P＜0.05）；模型组海马乙酰胆碱酯酶活力显著高于对照组（P＜0.05）。

与模型组相比，益智仁低剂量组、中剂量组脑蛋白含量显著增高（P＜0.05）；与对照组相比，模型组大鼠海马脑蛋白含量显著降低（P＜0.05）。

随着人的寿命普遍延长，但步入老年之后的许多问题又造成生活质量的降低，其中失眠和老年的退行性记忆丧失尤为显著。

近年来由于中药在老年人的益智保健方面具有多途径、多靶点的特点，所以在健脑的保健品开发中应用的非常广泛。

益智仁为我国四大南药之一，随着近年来的不断研究，益智仁在脑保健方面的运用越来越多，本课题的研究为益智仁脑保健品的开发，打下一定的基础。

参考文献
[1] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社1996. 597
[2] 冯淑香,刘耀明,董军兴.中药益智仁化学成分与药理研究进展[J].现代中药研究与实践,2003,17(5):58-61.
[3] 邓慧玲，姜波，刘玉欣，安利佳. 几种中药提取物对小鼠学习记忆影响的比较研究[J].时珍国医国药,2007,18(1):135-136.
注：“本文中所涉及到的图表、公式、注解等请以PDF格式阅读”。