实验2 原核微生物的形态观察及染色
微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。
如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。
如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。
微生物实验报告：微生物形态观察
实验一微生物形态观察一、实验目的1．巩固显微镜的使用方法,重点练习油镜的使用；2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构；3．练习手绘微生物图片;二、实验原理1．细菌基本形态细菌是单细胞生物,一个细胞就是一个个体;细菌的基本形态有3种：球状,杆状和螺旋状,分别称为球菌、杆菌、螺旋菌;球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等;杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等,是细菌中种类最多的;螺旋菌分为弧菌和螺菌;除此之外,还有一些特殊形态的细菌;2．细菌特殊结构细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等;荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质,具有抗干燥、抗吞噬和附着作用;鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体,具有运动功能,在菌体上的着生位置、数目因菌种而异;菌毛又称纤毛是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬,且数量较多的丝状体,与细菌吸附或性结合有关;芽孢又称内生孢子,是某些细菌生长到一定阶段,在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体,具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性;3．真菌的结构特征菌丝是构成真菌营养体的基本单位,是一种管状细丝;可伸长并产生许多分枝,许多分枝的菌丝相互交织在一起,就叫菌丝体;根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝;为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要,许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态,这些特化的形态称为菌丝变态;比如吸器、假根、子实体;4．放线菌的结构特征放线菌的形态比细菌复杂些,但仍属于单细胞生物;链霉菌是典型的放线菌,其细胞呈丝状分枝,菌丝直径很小,在营养生长阶段,菌丝内无隔,故一般呈多核的细胞状态;当其孢子落在固体基质表面并发芽后,就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展,形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝,同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝,这就是气生菌丝;不久,大部分气生菌丝成熟,分化成孢子丝,并通过横隔分裂方式,产生成串的分生孢子;5．微生物菌落菌落是在固体培养基上内以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态和构造等特征的子细胞集团;细菌的菌落有其自己的特征,一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易调取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等;不同形态、生理类型的细菌,在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映;三、实验器材普通光学显微镜Nikon YS-100,镜油,镜头纸,擦镜液；微生物装片15张,分为细菌、霉菌、放线菌、酵母菌等几类；微生物单菌落划线平板6块,分别为大肠杆菌、酵母、泾阳链霉菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、产黄青霉;四、 实验步骤1． 调节显微镜,观察微生物装片,选择其中6张手绘微生物形态； 2． 选择另外6张通过数字摄影系统拍照； 3． 观察6块菌落平板特征； 4． 整理仪器,清洁桌面; 注：本人所在35号台的显微镜不能进行数字摄影,故照片是在3号台显微镜下观察得到的;手绘图在两台显微镜观察下各有3张;五、 实验结果1． 数字摄影照片图1a bc d分生孢子 小梗 梗基 分生孢子梗接合孢子孢子囊梗分生孢子顶囊孢子囊e2．手绘图照片图2f接合孢子芽孢子图1. 微生物显微观察电子照片,摄于3号显微镜;a青霉,10×40倍观察；b黑根霉,10×40倍观察；c曲霉,10×40倍观察；d毛霉,10×40倍观察；e接合孢子,10×40倍观察；f酵母菌,10×100倍观察;各菌种的主要特征标注在图上;a b3． 菌落特征表1表1 . 单菌落划线平板特征描述菌落名称 含水状态 外观状态 透明度 颜色 边缘情况 大肠杆菌 略湿 圆形、光滑、凸起 半透明 双面乳白 整齐 酵母菌 湿润 圆形、光滑、凸起 不透明 正面：乳白 反面：黄褐 整齐 枯草杆菌湿润不规则、粗糙、扁平半透明双面黄褐波状c de f图2. 微生物装片手绘图;a 螺菌,放大10×100倍；b 巨大芽孢杆菌,放大10×100倍；c 褐色固氮菌,放大10×100倍；d 枯草杆菌,放大10×100倍；e 放线菌,放大10×100倍；f 苏云金杆菌,放大10×100倍;六、讨论本次实验最大的收获在于熟悉了油镜的使用和清洁;过去虽让做过不少使用显微镜的生物实验,但是因为观察的都是比较大的动植物细胞,没有机会练习油镜的使用;这次观察的都是个体非常小的微生物,真菌还可以在低倍镜下观察,但是细菌、放线菌必须使用油镜观察;即使这样,八叠菌、金黄色葡萄球菌等形体极小的菌种仍然不能清楚地看到单个菌体,这也是这次没有对它们进行绘图或是摄影的原因;注意,转换到100×物镜后,禁止使用粗准焦螺旋,细准焦螺旋也要慢慢调节,否则极易打碎装片;螺菌装片是为了观察鞭毛的,但是因为没有对装片进行过特殊染色,鞭毛非常不容易看到,必须将孔径光阑调到很小,同时降低聚光灯亮度,才能提高视野的对比度;能够隐约地衬出鞭毛,绘图时一定仔细观察;如经媒介剂加粗再染色,将更容易观察;本周的3个实验遗传、细胞、微生物内容非常相似,都是通过显微镜观察生物样本,之后进行手绘图片,而且所用的显微镜型号相同;希望以后可以整合类似资源,对同一项技能没必要3门同时上的课都训练;可否考虑对此部分上联合绪论课,讲解光学显微镜使用、手绘生物图方法,单独授课时则侧重讲需要重点观察的样本特征;这样同学们对3门实验尤其是一周中上的最后一门会有更大的兴趣;最后,感谢原先坐在3号台的同学,摄影结束后与我交换坐位,使我也能够对标本进行正常的数字摄影;七、参考资料陈金春、陈国强,微生物学实验指导,清华大学出版社,2005年。
光学显微镜的使用及原核生物的个体形态观察
A：屈光度调节器B：（物 镜）转换器C：放大倍数指示圈 D：载物台E：载物台、调焦 手轮F：内置灯
三、主要内容
1.显微镜的使用和保养（见教材显微镜的“原理及 操作方法） 2.形态观察 原核生物都属于微生物。根据外表特征，可将 其粗分为6种类型，包括细菌、放线菌、蓝细菌 (旧名蓝藻或蓝绿藻)、支原体、衣原体和立克 次氏体等。本实验以前三类为主，观察、识别 不同类型的个体形态，并绘出个体形态图。
实验一
光学显微镜的使用及原核生物 的个体形态观察
一、实验目的
1.了解普通光学显微镜的构造和原理，准 确掌握使用显微镜的方法； 2.观察和识别几种原核微生物的个体形 态。
二、概述
显微镜（图YS-100）是观察 微观世界的重要工具。随着现代科 学技术的发展，显微镜的种类越来 越多，用途也越来越广泛。微生物 学实验中最常用的是普通光学显微 镜，无论是观察微生物的个体形态 还是测量微生物细胞的大小，都必 须借助于显微镜。学会显微镜的操 作是本实验的主要内容，也是微生 物学实验必须掌握的基本技能之 一。由于绝大多数微生物的大小均 在肉眼观察的极限（0.25mm）以 下，所以显微镜成了必不可少的研 究工具。
四、实验材料、器皿
1.标本片：细菌三型、丝状细菌、四联球 菌、八叠球菌、放线菌、颤蓝细菌、念珠 蓝细菌等。 2.器皿、试剂：显微镜、香柏油、二甲苯、 镜头纸等。
细菌三型
丝状细菌
颤蓝细菌
念珠蓝细菌
微囊蓝细菌
放线菌
五、注意事项
1.调节显微镜的焦距从低倍到高倍，用油镜 时，直接从低倍到油镜。 2.注意倍数的变化，随时调节亮度、放大倍 数指示圈等。 3.仔细、认真地保养显微镜。
微生物学第二章原核微生物2
芽孢有多层结构，主要包括孢外壁、芽孢衣、皮层和核
•
(二)细胞膜
• 细胞膜是紧贴细胞壁内侧包围细胞质的一
层柔软、富有弹性的半透明薄膜。 ①细胞膜的化学组成
蛋白质
主要包括 磷脂
糖类
少量核酸
•
②细胞膜的结构
•
1972年Singer和Nicolson提出的细胞膜液态镶嵌模型。
细胞膜液态镶嵌模型
认为：膜是由球形蛋白 与磷脂按照二维排列方 式构成的流体镶嵌式， 流动的脂类双分子层构 成了膜的连续体，而蛋 白质象孤岛一样无规则 地漂流在磷脂类的海洋 当中。
•采用免疫电镜技术观察蓝细菌 •中的羧酶体.
•
（五）拟核（核区）和质粒
•拟核：由大型环状双链DNA纤丝不规则地折
叠或缠绕而构成的无核膜、核仁的区域。
•
拟核
•细菌DNA：
长度：一般为：1—3mm 例：大肠杆菌的DNA长约1mm 。 生长迅速的细菌在核分裂之后细 胞往往来不及分裂,所以细胞中常 有2—4个核，而生长缓慢的细菌 细胞中一般只有1—2个核，不在 染色体复制时期一般是单倍体。
•
（三）间体
•由细胞膜内褶形成的一种管状、层状或串状物， 一般位于细胞分裂的部位或附近。
间体
间体的功能:
▪参与隔膜形成 ▪与核分裂有关 ▪分泌胞外酶的地点
•
（四）细胞质及其内含物
•细胞质：是在细胞膜内除核区以外的细胞物质。
•主要成分： •
•细胞质功能： •细胞质中含有丰富的酶系 ，是营养物质合成、转化 、代谢的场所。
•
①核糖体
• 是分散在细胞质中的颗粒状结构，由核糖体核 酸（占60%）和蛋白质（占40%）组成。
第3章原核微生物2
4、性毛(pili 或 sex pili )
构造和成分与菌毛相同，但比菌毛长，数量仅一至数根。 性毛一般见于革兰氏阴性菌的雄性菌株（即供体菌）中 ，其功能是向雌性菌株（即受体菌）传递遗传物质。有 的性毛还是RNA噬菌体的特异性吸附受体。
鞭毛
菌毛
5、特殊的休眠构造——芽孢
概念
某些细菌在 其生长发育后期，在细 胞内形成一个圆形或椭 圆形、厚壁、含水量极 低、抗逆性极强的休眠 体，称为芽孢 （endospore或spore， 偶译“内生孢子”）。
3、菌毛(pili 或 fimbria) 亦称伞毛或纤毛
长在细菌体表的纤细、中空、短直、数量较多 的蛋白质类附属物，具有使菌体附着于物体表 面的功能。
每个细菌约有250～300条菌 毛。有菌毛的细菌一般以革 兰氏阴性致病菌居多，借助 菌毛可把它们牢固地粘附于 宿主的呼吸道、消化道等粘 膜或污泥、生物膜等载体上， 利于致病或定植。
土壤、空气、水体、 反刍动物肠道
放线菌的作用
利 产生抗生素、生
产酶制剂、提取维生 素、固氮作用
害 动植物病害
少数寄生型放线菌可引起人、动物、植物的疾病（如皮肤、脑、 肺和脚部感染，马铃薯和甜菜的疮痂病等）
3.1.3 蓝细菌（Cyanobacteria）
一、概念
也称蓝藻或蓝绿藻（blue-green algae），是一类含有 叶绿素a、能以水作为供氢体和电子供体、通过光合 作用将光能转变成化学能、同化CO2为有机物质的光 合细菌。 以前曾归于藻类，因为它和高等植物一样具有光和色 素--叶绿素a，能进行产氧型光合作用。
•许多种类细胞质中有气泡，使菌体漂浮，保持在光线最充足的 地方，以利光合作用。
三.蓝细菌的分群
第 第一群：色二厚第三群：无异五群：多分裂的第 四 群 ： 有 异 球形有形 蓝胞异胞 细丝形丝 菌状胞状 群蓝丝蓝 细状细 菌蓝菌 群细群 菌 群
环境工程微生物学第二章-原核微生物(2)
（三）细胞的结构
3、细胞质和内含物
5）气泡（gas vocuoles）
（三）细胞的结构
3、ห้องสมุดไป่ตู้胞质和内含物
6）核糖体（ribosome）
略
（三）细胞的结构
4、核区（nuclear region or area）
原核生物所特有的无核膜结构、无固定形态的原始细胞核
（三）细胞的结构
4、核区（nuclear region or area）
核心部分的细胞质却变得高度失水， 因此，具极强的耐热性。
渗透调节皮层膨胀学说
5、特殊的休眠构造——芽孢 6）伴孢晶体（parasporal crystal）
（三）细胞的结构
少数芽孢杆菌，例如苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在 其形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成一颗菱形或双锥形的碱溶 性蛋白晶体——δ内毒素，称为伴孢晶体。 特点：不溶于水，对蛋白酶类不敏感；容易溶于碱性溶剂。
专性好氧的盐杆菌属（Halobacterium）的细菌，却生活在含氧极少的饱 和盐水中，它们细胞中气泡显著，其作用被认为是使菌体浮于盐水表面， 以保证细胞更接近空气。 有些厌氧性光和细菌利用气泡集中在水下10-30米深处，这样既能吸收适宜 的光线和营养进行光和作用，又可以避免直接与氧接触。
蓝细菌生长时依靠细胞内的气泡而漂浮于湖水表面，并随风聚集成块，常使 湖内出现“水花”。
一种内源性氮源贮藏物，同时还兼有贮存能源的作用。
通常存在于蓝细菌中。
由含精氨酸和天冬氨 酸残基（1:1）的分枝 多肽所构成，分子量 在25000～125000。
3、细胞质和内含物
2）贮藏物(reserve materials)：
⑤硫粒（sulfur globules） 很多真细菌在进行产能代谢或生物合成时，常涉及对还原性 的硫化物如H2S，硫代硫酸 盐等的氧化。 在环境中还原性硫素丰富时， 常在细胞内以折光性很强的 硫粒的形式积累硫元素。 当环境中环境中还原性硫缺 乏时，可被细菌重新利用。
实验二、细菌革蓝氏染色、放线菌形态观察
印片法：取一洁净载玻片置于火焰上微热后，盖在菌苔
上，轻轻按压，使培养物（气丝、孢子丝或孢固定。
上：孢子丝
右上、右下：基内菌丝 和气生菌丝
2. 结果 革蓝氏染色阳性：深紫色 革蓝氏染色阴性：浅红色
3. 放线菌的观察
基内菌丝（substrate mycelium）：也称营养菌丝，生长于培养基内，主
要功能是吸收营养物质和排泄代谢废物，营养菌丝一般无隔膜，内含有许多核质体， 直径约为0.2-0.8μm，但长度差别很大。色浅、较细。
气生菌丝（aerial mycelium）：营养菌丝发育到一定时期，长出培养基外伸
实验二、细菌革蓝氏染色、放线菌形态观察
基本概念： 革蓝氏染色（Gram staining） 革蓝氏染色阳性（Gram Positive） 革蓝氏染色阴性（Gram Negative） 基内菌丝（substrate mycelium） 气生菌丝（aerial mycelium） 孢子丝（sporophore）
放线菌的基本特点
¾分枝丝状体，原核微生物 ¾革蓝氏染色阳性反应 ¾不运动 ¾大部分腐生菌，少数寄生菌，也有致病菌 ¾ 抗生素的主要产生菌 ¾ 许多酶和维生素的产生菌 ¾甾体转化、石油脱蜡、污水处理 ¾某些与植物共生固氮
放线菌的菌丝
1、营养菌丝 匍匐生长于培养基内，吸收营养，也称基内菌丝。一般无
隔膜，直径0.2-0.8 μm，长度差别很大，有的可产生色素。
[实验目的]
1. 学习细菌革兰氏染色原理和方法 2. 学习放线菌培养观察方法 3. 观察细菌形态及运动（活体观察）
[实验材料] 1. 菌种
原核微生物形态的观察
原核微生物形态的观察
一、实验目的
1.学习并掌握显微镜的使用方法；
2.掌握原核微生物形态观察的基本方法；
3.观察细菌、放线菌的基本形态。
二、实验材料和用具
1.细菌三型涂片、炭疽芽孢杆菌涂片（示芽孢）、枯草芽孢杆菌涂片（示芽孢）、破伤风梭菌涂片（示芽孢）、褐球固氮菌涂片（示荚膜）、化脓链球菌、放线菌装片
2.显微镜、擦镜纸
三、操作步骤
1.将装片置于显微镜的载物台上，用低倍镜找到所要观察的菌体，调节粗准焦螺旋至物像清晰；
2.旋转物镜转换器，用中倍镜观察并调节粗准焦螺旋至物像清晰；
3.旋转物镜转换器，用高倍镜观察，同时调节细准焦螺旋至物像清晰。
四、实验报告
结果：
1.绘图:
将你所观察到的细菌三型涂片、褐球固氮菌涂片、破伤风梭菌、放线菌涂片中的菌体形态描绘出来，并标出破伤风梭菌中芽孢的位置及褐球固氮菌中荚膜的位置。
2.思考题：在使用显微镜的过程中要注意哪些问题？
1。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
作业
绘革兰氏染色结果(大肠杆菌,金黄色葡萄 球菌,大肠杆菌/金黄色葡萄球菌或大肠杆 菌/枯草芽孢菌) 绘芽孢染色结果 思考题:为什么芽孢染色需要进行加热， 能否用简单染色法观察到芽孢；革兰氏 染色的关键步骤是什么，为什么？ 下一实验：真菌形态观察
革兰氏染色步骤
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
涂片：载玻片中心加水一滴，无菌操作 挑菌，混于水中，涂开（大肠杆菌,金黄 色葡萄球菌,大肠杆菌/金黄色葡萄球菌 或大肠杆菌/枯草芽孢菌）
干燥，固定：玻片在酒精灯上加热
初染剂结晶紫进行染色：结晶紫液1分钟－水 洗 碘液媒染：再加碘液1分钟 然后用乙醇脱色：滴洗至玻片下端刚不显紫色 止－水洗 最后用复染剂(如番红)复染：番红染液1分钟－ 水洗－吸干－显微镜观察。 经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细 菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色 剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该 菌属于革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法基本原理
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的 网状结构组成、壁厚、类脂质含量低，用乙醇 脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔 径缩小，透性降低，从而使结晶紫一碘的复合 物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染 后仍保留初染剂的蓝紫色。 革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层 较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂 质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使 结晶紫一碘的复合物比较容易被洗脱出来，用 复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
实验二. 细菌染色及形态观察
目的要求
p76、81
学习微生物涂片、染色的基本技术 掌握革兰氏染色法 了解革兰氏染色的原理及在细菌分类鉴定中的 重要性 掌握芽孢染色法，了解芽孢杆菌的形态特征 巩固显微镜操作技术
无菌操作过程
革兰氏染色法
是细菌学中最重要的鉴别染色法。 革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性和 革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的 结构和组成不同决定的。 碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结 晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与 细菌的结力。
细菌的芽孢染色法
芽孢又叫内生孢子(endospore)，是某些细菌生长到一 定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。 细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内 的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之 一。
芽孢染色法基本原理
由于芽孢壁厚、透性低、不易着色，用 着色力强的染色剂孔雀绿在加热条件下 染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽 孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色， 而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对 比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初 染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复 染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。
操作步骤
制备菌悬液:小试管中加1~2滴水,挑取2~3环菌 苔,混匀制成菌悬液 染色:加2~3滴孔雀绿染液与菌液混匀,置于沸 水浴中加热15~20min 涂片固定:接种环取菌液于玻片上涂成薄膜通过 火焰3次温热固定 水洗: 复染:番红染液染3min,倾去染液,水洗，吸干 镜检:油镜观察