氨基酸的分离与鉴定
实验氨基酸分离鉴定
——纸层析法
一、实验目的
通过氨基酸的分离,学习纸 层析法的基本原理及操作技 术.
二、实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层 析法.利用不同物质在两种互不相溶的溶剂中的分 配系数不同而得到分离.
展层剂由有机溶剂与水组成.在纸上,水被吸附 在纤维素的纤维之间形成固定相,当有机相沿纸流 动经过层析斑点时,层析点上的溶质就在有机相和 水相之间进行分配.当有机相不断流动时,溶质就沿 着有机相流动方向移动,不断进行分配,溶质中各组 分的分配系数不同,移动速率不同,因而彼此分开.
四、试剂
1、扩展剂：按体积4:1:3的正丁醇：冰醋酸：水
混合后倒入分液漏斗中,充分振荡,静置后分层
排出水相
80 ml /组
2、平衡剂：取漏斗中的扩展剂5ml 于烧杯中作 平衡剂.
3、氨基酸：0.5%赖、脯、缬、苯丙、亮氨酸溶 液及各组分的混合氨基酸各5ml.
五、操作
1、取层析滤纸一张,在纸的一端距边缘23cm处用铅笔画一条直线,在此线上每间 隔2cm作一记号〔即原点〕如图.
物质结构与性质
物质的极性大小决定了物质在水和有机 相之间的分配情况,其极性的大小主要取 决于物质所具有的极性基团的性质和数 量,在极性基团不改变情况下,非极性基团 成分越多,则分子极性越低等.
展层方式
上行法 下行法 环形法 <辐射法〕
三、器材
层析缸、毛细管〔用钢笔代 替〕、喷雾器、培养皿、层 析滤纸〔新华一号〕
图1-2 滤纸缝合示意图
5、显色：用喷雾器均匀喷上0.1% 的茚三酮 正丁醇溶液,干燥.
6、计算：用铅笔描出各层析斑点的轮廓,并 计算各氨基酸的Rf 值.
图谱示
化学方法：显色剂不与滤纸起反应,挥发 性小,易于去除,含水量少.
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究生物化学和生物学具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定是了解其性质和结构的关键步骤之一。
本实验旨在通过纸层析法对混合氨基酸溶液进行分离和鉴定，以探究纸层析法在氨基酸分析中的应用。
实验步骤：1. 实验前准备：准备好混合氨基酸溶液、纸层析纸、色谱槽和色谱溶液。
2. 制备纸层析纸：将纸层析纸剪成适当大小的长方形，用铅笔在距离底部1.5cm处画一条水平线，再在该线上距离左边1cm处画一个小点。
3. 装置纸层析槽：将纸层析纸的底端浸入色谱槽中，确保纸层析纸上方的溶液不超过纸层析纸的底端。
4. 样品加载：用微量吸管将混合氨基酸溶液滴在纸层析纸上的小点上，尽量避免溶液滴到纸层析纸以下的溶液中。
5. 开始分离：将色谱槽盖好，待溶液上升至纸层析纸的顶端时，取出纸层析纸，迅速标记各个斑点的位置。
6. 斑点分析：将纸层析纸放入紫外灯下观察，记录各个斑点的颜色和位置。
结果与讨论：通过纸层析法，我们成功地将混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
在紫外灯下观察，我们可以清晰地看到在纸层析纸上出现了多个斑点。
根据斑点的颜色和位置，我们可以初步判断其中的化合物。
在本次实验中，我们使用的混合氨基酸溶液包含了苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸三种氨基酸。
根据实验结果，我们可以看到在纸层析纸上出现了三个主要的斑点。
根据颜色和位置的初步判断，我们可以推测第一个斑点为苏氨酸，第二个斑点为甘氨酸，第三个斑点为丙氨酸。
然而，仅凭颜色和位置的初步判断还不足以确定化合物的身份。
为了进一步确认各个斑点的化合物，我们可以利用已知标准物质进行对照。
通过比较已知标准物质的斑点与实验样品的斑点，我们可以准确地鉴定各个斑点所代表的氨基酸。
结论：通过纸层析法，我们成功地对混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
根据初步判断，我们可以推测出混合溶液中的苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸的存在。
浙江大学生物化学实验甲 氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法
氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法
进行分离时由于被分离物质的组分在两相中的分布
不同，随着流动相的移动，物质将在两相间进行连
续的、动态的不断分配，从而造成不同组分移动的 速度也不相同。 易溶于流动相中的组分移动快，在固定相中溶解度 大的组分移动慢，于是得到分离。
氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法
物质分离后在滤纸上的位置可用比移值（Rf）来操作过程及注意事项参P36。
1.4、实验结果及处理
认真观察实验现象，计算各氨基酸的Rf值，并对层
析后氨基酸的显色情况进行分析。
氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法
1.1、原理
1、纸层析原理
纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。
分配层析是利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中 分配情况（溶解度）的不同来分离混合物的一种技 术。 层析时展层溶剂由有机溶剂组成，吸附在滤纸上的 一层水分子为层析的固定相，与固定相不相混溶的 有机溶剂为层析的流动相。
层，
展层完毕后，用茚三酮作为显色剂，即可得到氨基 酸样品的分离图谱。
氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法
2、茚三酮的显色原理 氨基酸 + 茚三酮 紫红色复合物
570nm处具特征光吸收，可 据此定量测定各种氨基酸
1.2、实验材料及试剂
实验材料：氨基酸及氨基酸的混合物。
实验试剂：试剂的配制及注意事项参P36。
展层溶剂前沿
样品层析斑点 Y
X
原点
展层后斑点中心与原点之间的距离（X） Rf = 原点与溶剂前缘间的距离（Y）
氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法
Rf值的主要决定因素是分配系数，不同物质的分配
系数不同， Rf值也不同。 对某种特定的化合物，在特定的展层系统中，一定 的温度下， Rf值是个常数。 但溶质和溶剂的性质、滤纸的性质、展层的温度等
氨基酸的分离鉴定纸层析法
氨基酸的分离鉴定纸层析法引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于生物体的正常生理功能至关重要。
因此，准确地分离鉴定氨基酸成分对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
纸层析法是一种简单而有效的分离和鉴定氨基酸的方法。
本文将介绍氨基酸的分离鉴定纸层析法并探讨其应用。
一、纸层析法的原理纸层析法是利用气相平衡原理进行物质分离的一种方法，其原理是根据物质在纸上各组分的相对亲疏性，通过运动距离的差异来分离物质。
在氨基酸的分离鉴定中，纸层析法通过将待测氨基酸溶液滴于纸上，然后将纸立起来，将纸的下端浸入相应的溶剂中，使得溶剂上升，通过毛细作用将氨基酸上提，最终实现氨基酸的分离和鉴定。
二、纸层析法的步骤1. 准备工作：制备纸层析板和显色剂。
2. 样品处理：将待测氨基酸溶解于适量的溶剂中，使其浓度适宜，然后滴于纸层析板上。
3. 运行纸层析：将纸层析板立起，纸的下端浸入相应的溶剂中，待溶剂上升到一定高度后，取出纸层析板。
4. 显色：将纸层析板放置于显色剂中，通过氨基酸与显色剂的反应，使得氨基酸在纸上显色。
5. 结果鉴定：根据显色的位置、颜色和强度等特征，对氨基酸进行鉴定和定量分析。
三、纸层析法的应用1. 氨基酸组成分析：纸层析法可用于分析蛋白质中氨基酸的组成，从而揭示蛋白质的结构和功能。
2. 质量控制：纸层析法可用于对食品、药品等中氨基酸含量的快速检测，保证产品质量和安全性。
3. 生物体内氨基酸代谢研究：纸层析法可用于研究生物体内氨基酸的代谢途径和代谢产物。
四、纸层析法的优缺点纸层析法作为一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法，具有以下优点：1. 简单易行：操作简单，不需要复杂的仪器设备，成本低廉。
2. 分离效果好：对于氨基酸的分离效果较好，可以得到较为准确的结果。
3. 易于观察：通过显色剂的反应，可以直观地观察到氨基酸在纸上的分离和鉴定结果。
然而，纸层析法也存在一些缺点：1. 分离效果有限：对于某些结构相似的氨基酸，纸层析法的分离效果不佳，难以实现准确鉴定。
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告一、实验目的通过纸层析法将混合氨基酸分离并鉴定其种类及含量。
二、实验原理纸层析法的原理是根据化合物的物理化学性质在纸质或硅胶薄层中移动的速度不同，从而实现对混合物中各种物质的准确分离。
对于氨基酸而言，其分子结构均包含有羧基和氨基，因此都是具有弱酸和弱碱性的。
通过没食子酸和氯化钠的混合缓冲液，可使氨基酸在纸层析板上逐渐向上移动，从而实现了混合氨基酸的分离。
三、实验步骤1. 准备滤纸、混合氨基酸标准溶液、混合缓冲液、酸性洗涤液、碱性洗涤液及定量分装棒。
2. 在滤纸的底端画一个以棕色标识的线，表示样品的注入位置。
3. 用定量分装棒把混合溶液从注入位置滴入滤纸中，约需滴入 5 μl。
4. 将悬浊液放在平台上，加入具有吸附性但不溶于缓冲液的薄层纸片，等待它变成透明状态。
5. 将滤纸放入盒中，使其完全覆盖盒底，并加入混合缓冲液。
6. 等待溶液上升至顶端时立即取出滤纸，并在溶液升至预定高度后标注液位高度。
7. 筛选并选择相应的染色剂将其喷在纸层析板上，以便于观察分离效果。
四、实验分析通过对实验纸层析图的分析，可以确定混合溶液中所含有的氨基酸种类及各种氨基酸的比例。
在该纸层析图上，靠近底部的区域标示着杂质的位置，应当忽略不计。
通过纸层析图，我们得到了以下氨基酸的分离和鉴定结果：1. Alanine（6μg）2. Leucine（4μg）3. Isoleucine（3μg）4. Phenylalanine（1μg）5. Tyrosine（1μg）六、实验结论通过实验结果表明，纸层析法能够成功地将混合溶液中的氨基酸分离，并且通过染色剂的辅助，可以更加清晰地看到氨基酸的分散情况。
此外，通过对实验结果的分析，我们可以得出混合溶液中所含有的各种氨基酸的种类及含量，为进一步的实验提供了帮助和指导。
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告一、实验目的1、掌握纸层析法分离和鉴定氨基酸的基本原理和操作方法。
2、学习如何根据氨基酸在层析纸上的迁移率（Rf 值）来鉴定氨基酸。
二、实验原理纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
滤纸纤维上的羟基具有亲水性，能吸附一层水作为固定相，而有机溶剂作为流动相。
当有机相沿滤纸经过样品点时，样品点中的溶质在水和有机相之间进行分配。
由于不同的氨基酸在两相中的分配系数不同，导致它们在滤纸上的迁移率不同，从而实现分离和鉴定。
Rf 值（比移值）是氨基酸在层析中的特征值，计算公式为：Rf ＝溶质移动的距离／溶剂移动的距离。
三、实验材料与仪器1、实验材料标准氨基酸溶液：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。
混合氨基酸溶液。
展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝ 4:1:5（体积比）。
显色剂：025%茚三酮溶液。
2、实验仪器层析缸。
毛细管。
喷雾器。
烘箱。
直尺。
四、实验步骤1、准备滤纸选用一张大小合适的滤纸，在距底边 2cm 处用铅笔轻轻画一条横线，作为起始线。
2、点样用毛细管分别吸取标准氨基酸溶液和混合氨基酸溶液，在起始线上轻轻点样，每个点的直径不超过 2mm，点样后自然风干。
3、层析将滤纸垂直放入装有展开剂的层析缸中，滤纸下端浸入展开剂约1cm，注意滤纸不要与缸壁接触，盖上盖子，进行层析。
当展开剂前沿上升至距滤纸顶端约 1cm 时，取出滤纸，用铅笔标记展开剂前沿的位置，自然风干。
4、显色用喷雾器将显色剂均匀地喷在滤纸上，放入烘箱中，在 80℃左右烘 5 10 分钟，直至斑点显色清晰。
五、实验结果与分析1、测量并计算 Rf 值用直尺分别测量标准氨基酸和混合氨基酸斑点中心到起始线的距离（a）以及展开剂前沿到起始线的距离（b），计算 Rf 值。
2、结果分析根据计算得到的 Rf 值，对照标准氨基酸的 Rf 值，鉴定混合氨基酸溶液中的成分。
六、注意事项1、点样时要避免毛细管的尖端刺破滤纸，且点样量要适中，过多会导致斑点扩散，影响分离效果。
氨基酸的分离鉴定——纸层析
氨基酸的分离鉴定——纸层析氨基酸是构成蛋白质的基本单元，其在生物体内的作用极为重要。
因此对氨基酸的分离和鉴定具有重要的研究意义。
纸层析是一种常用于分离和鉴定氨基酸的方法。
其原理是利用氨基酸在纸层析板上的运动速度不同，根据氨基酸之间的相互作用，分离出各种氨基酸。
实验步骤：1. 纸层析板的制备将一张高分子量纸，如Whatman No.1滤纸，剪成所需要的大小，并用铅笔在纸上画出氨基酸移行的标线。
2. 氨基酸样品的制备将所需的氨基酸样品溶解在适量的水中，浓度应为0.2-2%。
3. 样品的上样将氨基酸溶液利用微量注射器沿着标线往上移行。
在上样后，将纸层析板放在带有盖子的玻璃罩中，罩中放置一些饱和度为70%的异丙醇-水溶液，保持相对湿度为70%，使其充分展开。
5. 鉴定氨基酸将经过分离的氨基酸溶液阴性反应的氨基酸用二乙酰胺-丙酮混合溶液鉴定。
将0.2ml 二乙酰胺-丙酮混合溶液加入几滴氨基酸样品中，加热60℃-80℃，5分钟。
加入0.1ml氯仿，振荡混合，分离出上清液，上清液加入干燥瓶中，用喷雾器喷洒Ninhydrin试剂，加热于热水中1分钟，在冷水中快速降温附着氨基酸的部位呈现紫色。
注：二乙酰胺-丙酮混合溶液的组成为45%二乙酰胺，45％丙酮和10%水。
6. 结果的解释根据氨基酸在纸层析板上的运动速度和比色反应的颜色，确定样品中的氨基酸种类及含量。
优点：纸层析方法简便易行，无需昂贵的仪器设备，适用于小样品分析，能分离不同种类的氨基酸，并且结果清晰，操作简单。
限制：纸层析分离结果受到氢键作用和酸碱度等因素的影响，需要控制好上样的数量和浓度。
此外，纸层析无法分离胶原氨基酸和类似结构的氨基酸，且鉴定结果在颜色和色谱图谱方面有些模糊。
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定纸层析法——氨基酸的分离与鉴定⼀、实验⽬的1、了解纸层析法的使⽤原理。
2、掌握⽤纸层析法分离蛋⽩质的操作步骤。
⼆、实验原理1、纸层析法是以滤纸作为惰性⽀持物的分配层析⽅法，滤纸上的纤维具有羟基，是亲⽔基团，滤纸吸附⽔作为固定相，其上流经的有机溶剂即展层剂作为流动相。
当展层剂流经固定相时，固定相上的样品由于亲⽔、疏⽔能⼒不同，在两相之间不断分配，疏⽔能⼒强的多溶于流动相，随流动相移动距离较远，亲⽔能⼒强的移动距离则较近。
2、所有的氨基酸的α碳上均连接⼀个氢原⼦和两个亲⽔基团羧基（—COOH）与氨基（—NH2），唯⼀的不同则在于R基团。
因此R基团在氨基酸的亲⽔疏⽔能⼒对⽐中起到了决定性的作⽤。
本实验采⽤丙氨酸，苯丙氨酸，天冬氨酸，其R基团分别是—CH3，—CH2—C6H5，—CH2—COOH，其亲⽔疏⽔能⼒迥异，能在滤纸上明显分开。
3、Rf值表⽰原点中⼼⾄显⾊斑点中⼼的距离与原点中⼼⾄流动相前沿的距离⽐。
在⼀定条件下，Rf值为定值，其影响的因素有物质本⾝的性质，溶剂的性质，PH值，温度，滤纸的性质等等，本实验不予探究。
在测量原点中⼼⾄显⾊斑点中⼼的距离时，由于斑点的形状不规范（近似圆形），所以，⼀般取斑点的重⼼，测量出重⼼与起点的距离即可。
4、显⾊原理：茚三酮在弱碱性溶液中与α—氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氧，脱羧反应，最后茚三酮与反应产物——氨和还原茚三酮发⽣作⽤⽣成紫⾊物质。
三、试剂（⼀）提前配制试剂8*10-3mol/L丙氨酸溶液：精确称取0.356g晶体，溶解后定容到500ml。
8*10-3mol/L苯丙氨酸溶液：精确称取0.661g晶体，溶解后定容到500ml。
8*10-3mol/L天冬氨酸溶液：精确称取0.532g晶体，溶解后定容到500ml。
（将上述三种溶液装于⼩瓶中实验时，每两组共⽤⼀组试剂）正丁醇88%甲酸蒸馏⽔茚三酮晶体注：实验时，以上试剂均为每两组同学共⽤⼀组试剂。
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实验一氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法
目的要求
（1）通过实验，了解氨基酸滤纸层析法的原理。
（2）掌握氨基酸滤纸层析的操作方法。
原理
滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析（它也并存着吸附和离子交换作用）。
滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
有机溶剂自上而下流动称为下行层析，自下而上流动称为上行层析。
流动相流经支持物时，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。
溶质在滤纸上的移动速率用R f值表示：
溶质结构、溶剂系统物质组成与比例、pH值、选用滤纸质地和温度等因素都会影响R f 值。
此外，样品中的盐分、其他杂质以及点样过多皆会影响样品的有效分离。
无色物质的纸层析图谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定。
氨基酸纸层析图谱常用的显色剂为茚三酮或吲哚醌，本实验采用茚三酮为显色剂。
本实验用单向上行层析法作标准氨基酸的标准曲线，用双向上行纸层析法作几种已知氨基酸的层析图谱。
然后将其中的谷氨酸和天冬氨酸加以定量测定。
试剂和器材
一、试剂
（1）8×10-3mol/L谷氨酸和8×10-3mol/L天冬氨酸混合液。
（2）谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸和丙氨酸混合液（已知氨基酸混合液）。
将以上氨基酸分别配制成8×10-3mol/L的浓度，然后混合之。
（3）茚三酮重结晶方法：茚三酮有时由于包装不好或放置不当常带微红色，需重结晶方可使用。
5g茚三酮溶于15mL热水，加入0.25g活性炭轻轻搅动，若溶液太浓不易操作，可酌量加5—10mL热水，加热30min后趁热过滤（用热滤漏斗，以免茚三酮遇冷结晶而损失），滤液置冰箱内过夜，次日晨即见黄白色结晶出现，过滤，再以1mL冷水洗涤结晶，置于干燥器中干燥，最后装入棕色瓶内保存。
（4）0.1%硫酸铜（CuSO4·5H2O）：75%乙醇=2 ：38
硫酸铜难溶于乙醇，将硫酸铜直接用75%乙醇溶解不能得到澄清溶液，如将硫酸铜溶液和乙醇混合后，放置过久则会有沉淀析出，因此，必须在临用前按比例混合。
正丁醇（需重蒸），95%乙醇，88%甲酸，12%氨水（因氨易挥发，稀释前需测出毕重）。
0.5%茚三酮丙酮溶液。
二、器材
新华中速薄层析滤纸，层析缸（高约430mm，直径约290mm，具有磨口盖子），鼓风恒温箱，国产72型分光光度计，水浴锅，喷雾器，电吹风机，点样架，点样管，加溶剂的漏斗，针、线和尺子，橡皮（或线）手套，结晶皿。
操作方法
一、滤纸的剪裁
选用国产新华1号滤纸，剪裁成28cm×28cm，在滤纸上距相邻的两边各2.0cm处用铅笔轻轻划两条线，在线的交点上，点样(图1.1)。
图1.1 滤纸的剪裁
二、点样
已知氨基酸混合液点样量30—40μL为宜。
将准备好的滤纸平放在干净的玻璃板上。
用定量点样毛细管准确吸取样品到一某一刻度，与滤纸垂直方向轻轻碰点样处，点子的扩散直径控制在0.5cm以内。
点样过程中必须在第一点样品干后再点第二滴。
为使样品加速干燥，可用电吹风机吹干，注意温度不宜过高，避免破坏氨基酸，影响定量结果。
将点好样品的滤纸两侧边缘比齐，用线缝好，揉成筒状(图 1.2)。
注意缝线处纸的两边不能接触，以免由于毛细管现象使溶剂沿两边移动特别快而造成溶剂前沿不齐，影响R f值。
图1.2 图1.3
三、展层
将圆筒状的滤纸放入结晶皿，注意滤纸不要与皿壁接触，皿周围放3个小烧杯，内盛平衡溶剂，盖好盖子，平衡1h后打开盖子少许，用移液管（管下端接触到结晶皿底部）加入层析溶剂（展层剂），取出移液管时勿使它碰纸。
当溶剂展层至距离纸的上沿约1cm时取出滤纸，立即用铅笔标出溶剂前缘位置，用吹风机凉风吹干。
进行双向层析时，先用一种溶剂展层后，晾干，将纸转900角，再用另一溶剂展层。
经第一相展层后，上端未经溶剂走过的滤纸（距纸边约1cm）与已被溶剂走过的部分形成一条分界线，进行第二相层析时，在分界线上影响斑点形状，因此在第二相层析时，先将第一相上端截去约2cm除去液边。
在截去
边缘以前，需将原点至溶剂前沿的距离量好，并记录下来。
双向层析溶剂系统：
第I相，正丁醇：12%氨水：95%乙醇=13 ：3 ：3（体积比，层析2次），
第II相，正丁醇：80%甲酸：水=15 ：3 ：2（体积比）。
第I相展层用12%氨水作平衡溶剂，第II相展层时，用该相溶剂平衡。
展层剂要新鲜配制并摇匀，每相用量18——20mL。
四、定性鉴定
把已经除去溶剂的层析滤纸用25mL0.5%茚三酮丙酮溶液在纸的一面均匀喷雾，待自然晾干后，用铅笔轻轻描出显色斑点的形状。
用一直尺量度每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，求其比值，即得该氨基酸的R f值。
应该注意的是，使用茚三酮显色法，在整个层析操作中，避免用手接触层析纸，因手上常有少量含氨物质，在显色时也得出紫色斑点，污染层析结果，因此，在操作过程中应戴手套或指套。
同时也要防止空气中氨的污染。
一种氨基酸在同样条件下，其R f值是一个常数，因此，将各显色斑点的R f值与标准氨基酸的R f值比较，即可得知该斑点是哪一种氨基酸。
对于双相层析R f值由两个数值组成，即要在第I相计量一次和在第II相计量一次，分别与标准氨基酸的R f值对比，即可初步肯定其为何种氨基酸。
参考表1.1的数据和图1.5中的氨基酸斑点位置，对所得的层析结果加以辨认，定性鉴定图谱中1，2，3，4，5号斑点为何种氨基酸。
图1.5 几种已知氨基酸的双向层析图谱
注意事项
（1）选用合适、洁净层析滤纸。
如滤纸不干净，可将滤纸浸于0.4mol/L HCL中20h，蒸馏水洗至中性，再依次用95%乙醇、无水乙醇及无水乙醚各浸洗一次。
吹风机吹去乙醚，400C烘干。
（2）点样斑点不能太大（其直径应小于0.5cm），防止氨基酸斑点不必要的重叠，吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。
（3）根据一定目的、要求，选择合适溶剂系统。
溶剂中，正丁醇需要重新蒸馏，甲酸和乙醇等均须AR。
第I相溶剂系统临用前配制，以免酯化，影响结果。
思考题
1．做好本实验的关键是什么？
2．实验操作过程，为何不能用手接触滤纸？
3．影响R f值的因素有哪些？。