实验七 氨基酸的分离鉴定
实验氨基酸分离鉴定
——纸层析法
一、实验目的
通过氨基酸的分离,学习纸 层析法的基本原理及操作技 术.
二、实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层 析法.利用不同物质在两种互不相溶的溶剂中的分 配系数不同而得到分离.
展层剂由有机溶剂与水组成.在纸上,水被吸附 在纤维素的纤维之间形成固定相,当有机相沿纸流 动经过层析斑点时,层析点上的溶质就在有机相和 水相之间进行分配.当有机相不断流动时,溶质就沿 着有机相流动方向移动,不断进行分配,溶质中各组 分的分配系数不同,移动速率不同,因而彼此分开.
四、试剂
1、扩展剂：按体积4:1:3的正丁醇：冰醋酸：水
混合后倒入分液漏斗中,充分振荡,静置后分层
排出水相
80 ml /组
2、平衡剂：取漏斗中的扩展剂5ml 于烧杯中作 平衡剂.
3、氨基酸：0.5%赖、脯、缬、苯丙、亮氨酸溶 液及各组分的混合氨基酸各5ml.
五、操作
1、取层析滤纸一张,在纸的一端距边缘23cm处用铅笔画一条直线,在此线上每间 隔2cm作一记号〔即原点〕如图.
物质结构与性质
物质的极性大小决定了物质在水和有机 相之间的分配情况,其极性的大小主要取 决于物质所具有的极性基团的性质和数 量,在极性基团不改变情况下,非极性基团 成分越多,则分子极性越低等.
展层方式
上行法 下行法 环形法 <辐射法〕
三、器材
层析缸、毛细管〔用钢笔代 替〕、喷雾器、培养皿、层 析滤纸〔新华一号〕
图1-2 滤纸缝合示意图
5、显色：用喷雾器均匀喷上0.1% 的茚三酮 正丁醇溶液,干燥.
6、计算：用铅笔描出各层析斑点的轮廓,并 计算各氨基酸的Rf 值.
图谱示
化学方法：显色剂不与滤纸起反应,挥发 性小,易于去除,含水量少.
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究生物化学和生物学具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定是了解其性质和结构的关键步骤之一。
本实验旨在通过纸层析法对混合氨基酸溶液进行分离和鉴定，以探究纸层析法在氨基酸分析中的应用。
实验步骤：1. 实验前准备：准备好混合氨基酸溶液、纸层析纸、色谱槽和色谱溶液。
2. 制备纸层析纸：将纸层析纸剪成适当大小的长方形，用铅笔在距离底部1.5cm处画一条水平线，再在该线上距离左边1cm处画一个小点。
3. 装置纸层析槽：将纸层析纸的底端浸入色谱槽中，确保纸层析纸上方的溶液不超过纸层析纸的底端。
4. 样品加载：用微量吸管将混合氨基酸溶液滴在纸层析纸上的小点上，尽量避免溶液滴到纸层析纸以下的溶液中。
5. 开始分离：将色谱槽盖好，待溶液上升至纸层析纸的顶端时，取出纸层析纸，迅速标记各个斑点的位置。
6. 斑点分析：将纸层析纸放入紫外灯下观察，记录各个斑点的颜色和位置。
结果与讨论：通过纸层析法，我们成功地将混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
在紫外灯下观察，我们可以清晰地看到在纸层析纸上出现了多个斑点。
根据斑点的颜色和位置，我们可以初步判断其中的化合物。
在本次实验中，我们使用的混合氨基酸溶液包含了苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸三种氨基酸。
根据实验结果，我们可以看到在纸层析纸上出现了三个主要的斑点。
根据颜色和位置的初步判断，我们可以推测第一个斑点为苏氨酸，第二个斑点为甘氨酸，第三个斑点为丙氨酸。
然而，仅凭颜色和位置的初步判断还不足以确定化合物的身份。
为了进一步确认各个斑点的化合物，我们可以利用已知标准物质进行对照。
通过比较已知标准物质的斑点与实验样品的斑点，我们可以准确地鉴定各个斑点所代表的氨基酸。
结论：通过纸层析法，我们成功地对混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
根据初步判断，我们可以推测出混合溶液中的苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸的存在。
氨基酸的分离鉴定纸层析法
氨基酸的分离鉴定纸层析法引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于生物体的正常生理功能至关重要。
因此，准确地分离鉴定氨基酸成分对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
纸层析法是一种简单而有效的分离和鉴定氨基酸的方法。
本文将介绍氨基酸的分离鉴定纸层析法并探讨其应用。
一、纸层析法的原理纸层析法是利用气相平衡原理进行物质分离的一种方法，其原理是根据物质在纸上各组分的相对亲疏性，通过运动距离的差异来分离物质。
在氨基酸的分离鉴定中，纸层析法通过将待测氨基酸溶液滴于纸上，然后将纸立起来，将纸的下端浸入相应的溶剂中，使得溶剂上升，通过毛细作用将氨基酸上提，最终实现氨基酸的分离和鉴定。
二、纸层析法的步骤1. 准备工作：制备纸层析板和显色剂。
2. 样品处理：将待测氨基酸溶解于适量的溶剂中，使其浓度适宜，然后滴于纸层析板上。
3. 运行纸层析：将纸层析板立起，纸的下端浸入相应的溶剂中，待溶剂上升到一定高度后，取出纸层析板。
4. 显色：将纸层析板放置于显色剂中，通过氨基酸与显色剂的反应，使得氨基酸在纸上显色。
5. 结果鉴定：根据显色的位置、颜色和强度等特征，对氨基酸进行鉴定和定量分析。
三、纸层析法的应用1. 氨基酸组成分析：纸层析法可用于分析蛋白质中氨基酸的组成，从而揭示蛋白质的结构和功能。
2. 质量控制：纸层析法可用于对食品、药品等中氨基酸含量的快速检测，保证产品质量和安全性。
3. 生物体内氨基酸代谢研究：纸层析法可用于研究生物体内氨基酸的代谢途径和代谢产物。
四、纸层析法的优缺点纸层析法作为一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法，具有以下优点：1. 简单易行：操作简单，不需要复杂的仪器设备，成本低廉。
2. 分离效果好：对于氨基酸的分离效果较好，可以得到较为准确的结果。
3. 易于观察：通过显色剂的反应，可以直观地观察到氨基酸在纸上的分离和鉴定结果。
然而，纸层析法也存在一些缺点：1. 分离效果有限：对于某些结构相似的氨基酸，纸层析法的分离效果不佳，难以实现准确鉴定。
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定则是研究蛋白质的前提和基础。
本次实验使用纸层析法对氨基酸进行了分离鉴定。
首先，我们需要了解一下纸层析法的原理。
纸层析法是一种基于分子大小和亲水性的分离技术，常用于生化分析中。
其原理是通过纸张上固定的固定相（通常是硅胶或纤维素）与待分离物质之间的相互作用来实现分离。
待分离物质在移动相（溶液）的推动下，根据其与固定相的亲水性和大小的差异，以不同的速度在纸上移动，从而实现分离。
在实验中，我们使用了两种氨基酸溶液进行分离鉴定。
首先，我们需要准备好实验所需的材料和试剂，包括纸层析纸、氨基酸溶液、显色剂等。
然后，将纸层析纸剪成适当大小的条状，用铅笔在纸上标记出起点线和终点线。
接下来，我们将纸层析纸的一端浸入移动相（溶液）中，使其吸满溶液后取出，待溶液在纸上上升到起点线时立即停止。
然后，将氨基酸溶液滴在起点线上，待其渗透进纸层析纸后将纸张平放在容器中，盖上盖子，保持相对湿润的环境。
随着时间的推移，溶液将在纸上上升，并逐渐分离成不同的组分。
不同的氨基酸在纸上的迁移速度受到其亲水性和分子大小的影响。
亲水性较强的氨基酸会更容易被纸上的固定相吸附，从而迁移速度较慢，而亲水性较弱的氨基酸则会迁移得更快。
当溶液上升到终点线时，我们将纸张取出，用显色剂处理。
显色剂可以与氨基酸发生反应，产生可见的色带。
通过比较色带的位置和颜色，我们可以确定不同氨基酸的迁移速度和存在量。
实验结果显示，我们成功地将两种氨基酸分离开来，并且确定了它们的相对迁移速度。
这为进一步的氨基酸分析和蛋白质研究提供了基础数据。
同时，我们还发现，在纸层析过程中，一些氨基酸可能会发生相互作用，导致它们的迁移速度发生变化。
这提示我们在进行氨基酸分析时需要考虑到可能的相互作用因素。
总结起来，纸层析法是一种简单、经济且有效的氨基酸分离鉴定方法。
通过该方法，我们可以快速地分离出不同的氨基酸，并确定它们的相对迁移速度。
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告一、实验目的通过纸层析法将混合氨基酸分离并鉴定其种类及含量。
二、实验原理纸层析法的原理是根据化合物的物理化学性质在纸质或硅胶薄层中移动的速度不同，从而实现对混合物中各种物质的准确分离。
对于氨基酸而言，其分子结构均包含有羧基和氨基，因此都是具有弱酸和弱碱性的。
通过没食子酸和氯化钠的混合缓冲液，可使氨基酸在纸层析板上逐渐向上移动，从而实现了混合氨基酸的分离。
三、实验步骤1. 准备滤纸、混合氨基酸标准溶液、混合缓冲液、酸性洗涤液、碱性洗涤液及定量分装棒。
2. 在滤纸的底端画一个以棕色标识的线，表示样品的注入位置。
3. 用定量分装棒把混合溶液从注入位置滴入滤纸中，约需滴入 5 μl。
4. 将悬浊液放在平台上，加入具有吸附性但不溶于缓冲液的薄层纸片，等待它变成透明状态。
5. 将滤纸放入盒中，使其完全覆盖盒底，并加入混合缓冲液。
6. 等待溶液上升至顶端时立即取出滤纸，并在溶液升至预定高度后标注液位高度。
7. 筛选并选择相应的染色剂将其喷在纸层析板上，以便于观察分离效果。
四、实验分析通过对实验纸层析图的分析，可以确定混合溶液中所含有的氨基酸种类及各种氨基酸的比例。
在该纸层析图上，靠近底部的区域标示着杂质的位置，应当忽略不计。
通过纸层析图，我们得到了以下氨基酸的分离和鉴定结果：1. Alanine（6μg）2. Leucine（4μg）3. Isoleucine（3μg）4. Phenylalanine（1μg）5. Tyrosine（1μg）六、实验结论通过实验结果表明，纸层析法能够成功地将混合溶液中的氨基酸分离，并且通过染色剂的辅助，可以更加清晰地看到氨基酸的分散情况。
此外，通过对实验结果的分析，我们可以得出混合溶液中所含有的各种氨基酸的种类及含量，为进一步的实验提供了帮助和指导。
实验七 氨基酸的分离鉴定
实验七氨基酸的分离鉴定——纸层析法一、目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法。
惰性支持物是新华一号滤纸，其上含有很多的羟基，与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物。
水相因此称为静止相（固定相），有机溶剂称为流动相。
展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成，它们互相混合时便分成两相：一相是以水饱和了的有机相，另一相是以有机溶剂饱和了的水相。
分配系数(α)＝溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
当用滤纸进行分配层析时，流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使氨基酸在两相之间不断分配而得以分离。
不同的氨基酸在一定的条件下，有其一定的Rf值，故可根据Rf值定性鉴定氨基酸，但通常用已知的标准氨基酸层析作对照，本实验就是如此。
●纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
●层析溶剂由有机溶剂和水组成●物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移值）来表示的：Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、材料与方法（1）、材料：层析缸；毛细管；喷雾器；培养皿；层析滤纸；正丁醇；冰醋酸；分液漏斗；烧杯；培养皿；赖氨酸；脯氨酸；氨酸；苯丙氨酸；亮氨酸；茚三酮（2）操作步骤1. 配置层析液置于密闭的层析缸中。
2．准备滤纸：取层析滤纸一张。
在纸的一端距边缘2cm处用铅笔划一直线，在直线上每间隔2cm做一记号，标出5个原点。
3．点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5个原点上，用量10～20μl，每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm，边点样边用电吹风吹干，越小越好。
干后再点一次。
4．扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告嘿，大家好！今天咱们聊聊一个特别有趣的实验，那就是氨基酸的分离鉴定纸层析法。
听起来高大上吧？别急，咱们一步一步来，轻松愉快地聊聊这玩意儿。
什么是氨基酸呢？简单来说，氨基酸就像是构成蛋白质的小积木，是咱们身体里不可或缺的营养成分。
它们在咱们的饮食中扮演着超级重要的角色，没了它们，咱们可真是没法“搭建”身体啦。
那这个实验就是要从一堆混合的氨基酸中，把它们一个个分开来，看看每种氨基酸都长啥样。
这就好比一群朋友在聚会上，咱们要找出每一个人的名字和特点。
纸层析法，乍一听是不是觉得有点复杂？它就像一场化学界的“寻宝游戏”。
我们准备一些特殊的纸，涂上一层薄薄的吸附剂，然后把混合好的氨基酸样品放在纸上，接着让溶剂在纸上慢慢爬。
这就像在纸上画一幅画，溶剂就像水彩笔，慢慢把氨基酸分开。
哎呀，那个过程可是精彩极了，等溶剂跑到纸的顶端，咱们就能看到不同的颜色带，像极了彩虹，五颜六色的，真让人眼前一亮。
在实验开始之前，咱们得先准备一些材料。
准备好氨基酸混合物、溶剂、吸附剂，当然还有那张神奇的层析纸。
哎呀，别忘了安全第一哦，实验室里的化学品可得小心翼翼。
准备好一切后，咱们就可以开始“探险”了。
把样品点在纸上，别点得太多，得掌握好量，太多可就闹笑话。
点好后，咱们把纸条放进装有溶剂的容器里，让它们开始亲密接触。
此时，你就得耐心等待，静静看着溶剂爬升。
这个过程有点像看电影，心里总有些小期待，究竟哪种氨基酸会最先出来，哪个又会拖拖拉拉。
等到溶剂爬到纸的顶端，咱们小心翼翼地把纸拿出来，哇，简直像一幅美丽的艺术作品！不同的氨基酸形成了不同的斑点，有些淡淡的，有些鲜艳的，就像小精灵在纸上跳舞。
咱们得计算一下每种氨基酸的Rf值，这个值可以帮助咱们确定它们的身份。
Rf值计算起来其实也不复杂，记住，Rf值就是迁移距离除以溶剂前沿的距离。
简单吧？计算的时候得集中精神，别让自己的小脑袋跑偏了。
在整个过程中，最有趣的莫过于跟同学们讨论结果了。
实验七氨基酸的分离鉴定
实验七氨基酸的分离鉴定(总6页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除实验七氨基酸的分离鉴定——纸层析法一、目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法。
惰性支持物是新华一号滤纸，其上含有很多的羟基，与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物。
水相因此称为静止相（固定相），有机溶剂称为流动相。
展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成，它们互相混合时便分成两相：一相是以水饱和了的有机相，另一相是以有机溶剂饱和了的水相。
分配系数(α)＝溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
当用滤纸进行分配层析时，流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使氨基酸在两相之间不断分配而得以分离。
不同的氨基酸在一定的条件下，有其一定的Rf值，故可根据Rf值定性鉴定氨基酸，但通常用已知的标准氨基酸层析作对照，本实验就是如此。
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
层析溶剂由有机溶剂和水组成物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移值）来表示的：Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、材料与方法（1）、材料：层析缸；毛细管；喷雾器；培养皿；层析滤纸；正丁醇；冰醋酸；分液漏斗；烧杯；培养皿；赖氨酸；脯氨酸；氨酸；苯丙氨酸；亮氨酸；茚三酮（2）操作步骤1. 配置层析液置于密闭的层析缸中。
2．准备滤纸：取层析滤纸一张。
在纸的一端距边缘2cm处用铅笔划一直线，在直线上每间隔2cm做一记号，标出5个原点。
3．点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5个原点上，用量10～20μl，每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm，边点样边用电吹风吹干，越小越好。
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（二）实验器具
锥形瓶 、碱式滴定管、移液管洗耳球、天平
容量瓶、试剂瓶、量筒、玻棒与烧杯
实用文档
10
四、操作步骤
1、取5只50ml锥形瓶，按下表加入试剂。
锥形瓶编号 1
2
3
4
试剂
0.1mol/L甘氨酸溶液 0 /mL
1
1
0
中性甲醛溶液/mL 1
1
1
1
水/mL
3
2
2
2
0.5%酚酞酒精溶液 （滴）
4
4
4
一次。尽量点成圆形，并在各点表上样品名。
3 手通过纸将滤纸卷成圆筒形，并用针缝，共3针。每缝一针打
个结，第三针的线留长一点。
4 将缝好的纸（装入）垂直放入装有扩展剂的层析缸内（点样的
一端朝下，滤纸不应碰到缸壁）
5 约2个小时后，将滤纸取出，拆掉线后，放入烘干机内烘干，约 10分 钟后取出即显色。
6 画出溶液前沿线，确立个实层用析文点档中心，计算各氨基酸的Rf值
实用文档
8
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴 定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨 基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基 酸的含量。 脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致 滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结 果偏高。
实用文档
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三、材料、试剂与器具
（一）试剂
实验七 氨基酸的分离鉴定
——纸层析法
实用文档
1
一 目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法
二 原理 纸层析法是利用各物质不同的分配系数，使混合物随流动相时而得
到分离的方法。 纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的。滤纸纤维与水亲和力较强，
而与有机溶剂亲和力弱，所以纸层析以滤纸纤维和结合水为固定相， 以有机溶剂为流动相。当有机相沿滤纸流动经过样品点时，样品点上 的溶液在水相和有机相之间进行分配，样品移动速率与样品的质被分离后在纸层析图上的位置用Rf值表示 Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿距离 在一定条件下某种物质的Rf值是常数
5
实验结果:
丙氨酸 苯丙氨酸 天冬氨酸
L/㎝ d/㎝ Rf
原点到溶剂前沿距离为L，原点到层析点中心距离为d
实用文档
6
氨基酸的定量分析 —甲醛滴定法
一、目的：
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
实用文档
7
二、实验原理
水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱 滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合 ，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍 生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定 N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
4
未知浓度的
0
0
0
1
氨基酸混合溶液/mL
实用文档
5
0 1 2 4 1
11
2、用0.0200mol/L NaOH溶液滴定至溶液变微红色 注意：滴定管中溶液的初始位置和滴定结束时的位置； 滴定管的使用方法
3、用0.0200mol/L NaOH溶液滴定至溶液变微红色
4、记录每次滴定所用的0.0200mol/L NaOH溶液 的
实用文档
14
思考题
1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么？ 2、根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的
优缺点。 3、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—N+H3基 上
的H+，不能用一般的酸碱指示剂？
实用文档
15
体积
实用文档
12
五、计算
VNaoH*0.0200mol/L
标准甘氨酸氨基氮的回收率=
*14.008
理论计算值
理论计算值:取用氨基酸的体积乘以浓度,再乘以14.008 VNaoH 两次测定所用氨基酸的体积的平均值
实用文档
13
每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为
式中：V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml）； V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）； MNaOH 标准NaOH溶液的摩尔浓度
实用文档
2
溶剂
溶液前沿层析 前沿
点
苯丙
氨酸
酸
原点 氨酸
实用文档
丙氨 天冬
3
一 器材 1 层析缸 4 培养皿
2 毛细管 3 喷雾器 5 层析滤纸
实用文档
4
四 操作步骤
1 取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2-3㎝处用铅笔划一条直
线，在直线上约每隔3-4㎝做一次记号，共记四次。
2 用毛细管将各种氨基酸样品分别点在4个记号点上，干后再点
1、0.5%酚酞酒精溶液
称0.5g酚酞溶于100ml50%酒精中。
2、0.1mol/L甘氨酸溶液
取3.75g甘氨酸溶于500ml蒸馏水。
3、标准0.0200mol/L 氢氧化钠溶液
4、中性甲醛溶液
取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.01mol/LNaOH
溶液，
使溶液呈微红色，临用前中和。