纸层析法分离氨基酸实验报告材料

合集下载

层析法_实验报告

一、实验目的1. 了解层析法的原理和操作步骤。

2. 掌握利用层析法分离氨基酸的方法。

3. 熟悉层析实验中各种试剂和仪器的使用。

二、实验原理层析法是一种利用混合物中各组分在两相中分配系数不同，通过流动相的移动使各组分在固定相上形成不同的浓度梯度，从而实现分离的方法。

在本实验中，我们使用纸层析法分离氨基酸混合物。

纸层析法的基本原理是：滤纸作为固定相，氨基酸混合物作为样品，展开剂作为流动相。

样品点在滤纸一端，展开剂在滤纸上扩散，使氨基酸在固定相和流动相之间进行分配，从而实现分离。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：氨基酸混合物、滤纸、展开剂、显色剂等。

2. 实验仪器：层析槽、滴管、铅笔、剪刀、尺子、显微镜等。

四、实验步骤1. 准备层析槽：将滤纸剪成长约10cm、宽约2cm的条状，对折成V形，并将两端用剪刀剪去一小段，使其呈三角形状。

2. 准备样品：取一定量的氨基酸混合物，用少量蒸馏水溶解，配制成一定浓度的溶液。

3. 点样：用滴管将样品溶液滴在滤纸的三角顶端，使样品点直径约为1mm。

4. 展开层析：将点好的滤纸放入层析槽中，加入适量展开剂，使展开剂液面低于样品点。

静置一段时间，待展开剂液面接近滤纸底部时取出滤纸。

5. 显色：将层析后的滤纸晾干，用显色剂进行显色。

6. 观察结果：将显色后的滤纸放在显微镜下观察，记录各氨基酸的层析点位置。

五、实验结果与分析1. 实验结果：通过观察显微镜下的显色结果，可以看到氨基酸混合物在滤纸上分离成几个不同的层析点。

2. 结果分析：（1）各氨基酸的层析点位置与已知标准样品的层析点位置进行对比，可以鉴定出氨基酸的种类。

（2）根据各氨基酸层析点的Rf值（层析比移值），可以计算各氨基酸在混合物中的含量。

（3）通过改变展开剂和层析条件，可以进一步优化层析效果，提高分离纯度。

六、实验总结本实验通过层析法成功分离了氨基酸混合物，验证了层析法的原理和操作步骤。

在实验过程中，需要注意以下几点：1. 点样时样品点直径要适中，不宜过大或过小。

(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)

(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)实验报告：纸层析法分离氨基酸实验目的通过纸层析法分离并鉴定氨基酸的类型及其浓度。

实验原理纸层析法是一种简单的分离技术，它的分离原理就是根据溶液成分在固定相上的不同运移速度而分离出各种化合物的方法。

氨基酸属于碱性氨基酸、酸性氨基酸和非极性氨基酸三类，它们在纸层析上的运移速度不同，可以通过将样品施加到起始线处，用溶剂上升将样品分离成单独的氨基酸，从而鉴定氨基酸的类型和浓度。

实验步骤1.准备好样品；2.准备纸层析板和移层溶剂；3.在纸层析板上留下起始线处，将样品点于起始线上；4.将纸层析板浸泡在移层溶剂中，注意不要使样品触及移层溶剂；5.待溶剂上升至足够高处后将纸层析板取出晾干；6.可选择用氨基酸定性试剂对氨基酸进行鉴定。

实验结果经过实验，分离出了6种氨基酸，它们是： 1. 苯丙氨酸 2. 丝氨酸3. 脯氨酸4. 缬氨酸5. 赖氨酸6. 天冬氨酸结论纸层析法是一种常用的分离技术，适用于分离和鉴定氨基酸等化合物。

通过本次实验，我们了解了氨基酸在纸层析上的运移规律，并成功地分离出了样品中的6种氨基酸。

实验分析在实验中，我们使用纸层析法分离鉴定了氨基酸。

纸层析法是一种简便易行的分离方法，常用于生物学和化学研究中。

它的原理是利用固定相吸附和液态相洗脱分离成分，从而实现混合物分离和提纯的过程。

氨基酸是构成蛋白质的基本单位，其种类丰富，具有重要的生物学和化学意义。

氨基酸的分离和鉴定对于深入研究生命科学和化学领域的相关问题具有十分重要的意义。

在实验中，我们采用纸层析法将溶液中的氨基酸分离开来。

由于氨基酸的不同极性和分子大小不同，它们在纸层析中的运移速度存在较大差异，可以通过纸层析进行分离。

在实验中，我们通过将氨基酸样品点于纸层析板上的起始线处，并将其浸泡于移层溶剂中，利用溶剂的上升，将氨基酸分离开来。

实验不足与改进在实验过程中，我们虽然成功地分离出了样品中的氨基酸，但存在一定的不足。

氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告

氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究生物化学和生物学具有重要意义。

而氨基酸的分离鉴定是了解其性质和结构的关键步骤之一。

本实验旨在通过纸层析法对混合氨基酸溶液进行分离和鉴定，以探究纸层析法在氨基酸分析中的应用。

实验步骤：1. 实验前准备：准备好混合氨基酸溶液、纸层析纸、色谱槽和色谱溶液。

2. 制备纸层析纸：将纸层析纸剪成适当大小的长方形，用铅笔在距离底部1.5cm处画一条水平线，再在该线上距离左边1cm处画一个小点。

3. 装置纸层析槽：将纸层析纸的底端浸入色谱槽中，确保纸层析纸上方的溶液不超过纸层析纸的底端。

4. 样品加载：用微量吸管将混合氨基酸溶液滴在纸层析纸上的小点上，尽量避免溶液滴到纸层析纸以下的溶液中。

5. 开始分离：将色谱槽盖好，待溶液上升至纸层析纸的顶端时，取出纸层析纸，迅速标记各个斑点的位置。

6. 斑点分析：将纸层析纸放入紫外灯下观察，记录各个斑点的颜色和位置。

结果与讨论：通过纸层析法，我们成功地将混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。

在紫外灯下观察，我们可以清晰地看到在纸层析纸上出现了多个斑点。

根据斑点的颜色和位置，我们可以初步判断其中的化合物。

在本次实验中，我们使用的混合氨基酸溶液包含了苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸三种氨基酸。

根据实验结果，我们可以看到在纸层析纸上出现了三个主要的斑点。

根据颜色和位置的初步判断，我们可以推测第一个斑点为苏氨酸，第二个斑点为甘氨酸，第三个斑点为丙氨酸。

然而，仅凭颜色和位置的初步判断还不足以确定化合物的身份。

为了进一步确认各个斑点的化合物，我们可以利用已知标准物质进行对照。

通过比较已知标准物质的斑点与实验样品的斑点，我们可以准确地鉴定各个斑点所代表的氨基酸。

结论：通过纸层析法，我们成功地对混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。

根据初步判断，我们可以推测出混合溶液中的苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸的存在。

氨基酸纸上层析实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除氨基酸纸上层析实验报告篇一：实验六氨基酸的纸层析法氨基酸的纸层析法一．目的了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。

二、原理以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。

纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。

展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。

有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。

将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。

在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、ph 值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。

用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。

这种方法称为双向层析法。

本试验主要介绍的是单向层析法。

其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。

三、实验仪器1、新华滤纸2、层析缸3、细线4、点样管5、橡皮筋6、电吹风7、喷雾器四、实验试剂1、混合氨基酸（精氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸）2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v）3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml 无水丙酮，贮于棕色瓶中五、实验步骤1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画一圆点（原点）。

2、取毛细管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在原点处点样，样点直径不宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干，点2~3次为佳。

3、点样后将滤纸放入层析缸中展层，注意点样线要高于层析液面，滤纸不要贴在层析缸璧上，当展层至另一端1~2cm处时，停止展层（大约2~3小时）。

氨基酸纸层析实验报告

氨基酸纸层析实验报告
目录
1. 概述
1.1 氨基酸层析原理
1.1.1 纸层析技术
1.1.2 氨基酸分离原理
1.2 实验材料和仪器
1.3 实验步骤
1.4 结果与分析
1.5 实验应用和意义
概述
在本实验中，我们将探讨氨基酸纸层析实验，通过这项实验来了解氨
基酸的分离原理以及纸层析技术的应用。

氨基酸层析原理
纸层析技术
纸层析技术是一种常用于分离物质混合物的方法，基于不同物质在纸
上移动的速度不同而实现分离的原理。

氨基酸分离原理
氨基酸具有不同的疏水性和亲水性，因此在纸层析过程中会根据它们
与试剂液之间的相亲和力不同而移动的速度有所不同，从而实现分离。

实验材料和仪器
本次实验所需材料包括：氨基酸样品、纸层析试纸、显色剂等。

实验
所用仪器主要有吸管、显微镜等。

实验步骤
1. 在纸层析试纸上加载混合的氨基酸样品。

2. 将试纸放入显色剂中进行显色反应。

3. 观察试纸上氨基酸斑点的分离情况。

结果与分析
根据实验结果可以得出各个氨基酸在纸层析试纸上的分离情况，进而分析其性质和相互作用。

实验应用和意义
氨基酸纸层析实验在生物化学和医学领域有着重要的应用价值，可以帮助科研人员了解氨基酸之间的关系和性质，为后续的实验研究提供参考依据。

氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)

氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告一、实验目的通过纸层析法将混合氨基酸分离并鉴定其种类及含量。

二、实验原理纸层析法的原理是根据化合物的物理化学性质在纸质或硅胶薄层中移动的速度不同，从而实现对混合物中各种物质的准确分离。

对于氨基酸而言，其分子结构均包含有羧基和氨基，因此都是具有弱酸和弱碱性的。

通过没食子酸和氯化钠的混合缓冲液，可使氨基酸在纸层析板上逐渐向上移动，从而实现了混合氨基酸的分离。

三、实验步骤1. 准备滤纸、混合氨基酸标准溶液、混合缓冲液、酸性洗涤液、碱性洗涤液及定量分装棒。

2. 在滤纸的底端画一个以棕色标识的线，表示样品的注入位置。

3. 用定量分装棒把混合溶液从注入位置滴入滤纸中，约需滴入 5 μl。

4. 将悬浊液放在平台上，加入具有吸附性但不溶于缓冲液的薄层纸片，等待它变成透明状态。

5. 将滤纸放入盒中，使其完全覆盖盒底，并加入混合缓冲液。

6. 等待溶液上升至顶端时立即取出滤纸，并在溶液升至预定高度后标注液位高度。

7. 筛选并选择相应的染色剂将其喷在纸层析板上，以便于观察分离效果。

四、实验分析通过对实验纸层析图的分析，可以确定混合溶液中所含有的氨基酸种类及各种氨基酸的比例。

在该纸层析图上，靠近底部的区域标示着杂质的位置，应当忽略不计。

通过纸层析图，我们得到了以下氨基酸的分离和鉴定结果：1. Alanine（6μg）2. Leucine（4μg）3. Isoleucine（3μg）4. Phenylalanine（1μg）5. Tyrosine（1μg）六、实验结论通过实验结果表明，纸层析法能够成功地将混合溶液中的氨基酸分离，并且通过染色剂的辅助，可以更加清晰地看到氨基酸的分散情况。

此外，通过对实验结果的分析，我们可以得出混合溶液中所含有的各种氨基酸的种类及含量，为进一步的实验提供了帮助和指导。

实验一纸层析法分离鉴定氨基酸

和有机溶剂之间的分配情况。
【三、器材与试剂】
【三、器材与试剂】器材： 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸(新华一号) 试剂： 1、扩展剂（正丁醇：水：冰醋酸= 4：3：1） 2、显色剂 0.1％茚三酮正丁醇溶液。 3、氨基酸溶液 0.5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液
显色：用喷雾器均匀喷上0。1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
计算Rf值
【五、实验结果与分析】
【六、注意事项】
【七、思考题】
1、实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？ 2、Rf值的含义、影响因素？
下次实验：实验二蛋白质和氨基酸的颜色反应
值日生值日
18
小实验
当滤纸接触到溶剂时，溶液将上升。滤纸上的小圆点是4种不同的氨基酸的混合物。看看接下来会发生什么事情…
18
可以看出1号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。而4号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。
这就是纸色谱法。对照上图，可知道1-4号的各代表什么氨基酸。纸色谱法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。
实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
【一、实验目的】
【二、实验原理】
层析技术是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。可分离物质糖类、有机酸、氨基酸、核苷等
18
固定相在层析中起分离作用而不随层析过程移动的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的水。固定相被看成是样品移动的阻力。

实验一纸层析法分离氨基酸

实验一纸层析法分离氨基酸一、实验目的1．掌握纸层析的基本技术2．学习用纸层析法分离、鉴定氨基酸二、实验原理纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析法：利用不同物质在同一推动剂中具有不同的分配系数、经层析而达到分离的目的。

在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数，若以K表示分配系数：层析溶剂(亦称展层剂或推动剂)是选用特定的有机溶剂和水组成的。

滤纸纤维素与水有较强的亲和力(葡萄糖基的-OH基能与H2O通过氢键相互作用)，能吸附很多水分(可达22%滤纸重，其中约有6%的水与纤维素结合成复合物)，这部分被吸附的水因扩散作用降低而形成固定相。

反之，展层剂中的有机溶剂与滤纸的亲和力很弱，可在滤纸的毛细管中自由流动而形成流动相。

层析时，点有样品的滤纸一端浸入展层剂中，有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处，使其的溶质依据自身的分配系数在这两相间不断进行分配，即随着有机溶剂不断向前移动，溶质被携带到新的无溶质区并继续在两相间发生可逆的重新分配，结果使溶质离开原点不断向前移动。

由于溶质中各组分的分配系数不同，导致前行中出现移动速率差异，因而通过一定时间的层析，样品中的不同组分即可实现分离。

层析中某物质的移动速率以R f值表示：各种化合物在恒定条件下，层析时都有其一定的R f值，借此可达到定性、鉴别的目的。

应当注意的是，溶质的结构与极性、溶剂系统的物质组成与比例、pH值、滤纸质地以及层析温度和时间等因素都会影响R f值。

三、实验器材1．实验仪器培养皿、毛细管、滤纸、喷壶、电吹风2．试剂（1）6mol／L HCl（2）若干种氨基酸标准液(l mg/mL)，混合样液（3）展层剂：正丁醇：80％甲酸：水＝15：3：2 (V/V)（4）0.5％茚三酮溶液四、实验步骤1、每人取圆形滤纸一张，将滤纸沿直径对折两次后展开。

2、在折出的四条半径上，离圆心约0.5cm处用铅笔标记出点样点。

3、用毛细管吸取氨基酸样品，置于点样点处，待自然晾干后，重复点样三次。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

纸层析法分离氨基酸
一、前言
纸层析法
纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一种分离技术。

本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。

现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。

它是一种以纸为载体的色谱法。

固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。

将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。

当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。

将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。

根据组分移动距离(Rf值)与已知样比较，进行定性。

用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量(如光度法、比色法等)。

纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定;也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有
机溶溶剂是流动相。

在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。

但不如GC、HPLC应用普遍。

做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液(石油醚)混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。

由此观查出各种色素的相对含量和种类。

纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢;含量较多者色素带也较宽。

最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。

氨基酸
氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食品、医药、添加剂及化妆品行业。

随着生物工程技术产业的发展逐渐成为2l世纪全球的主要产业之一，氨基酸的需求量越来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。

目前全世界氨基酸每年的产量为100万吨，而需求总量是800万吨。

我国自20世纪60年代起，氨基酸的应用在食品工业占61,，在饮料工业占30,，医药、日用化工、农业、冶金、环保、轻工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。

氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用:
（1）在食品行业的应用
（2）在医药工业的应用
（3）在饲料添加剂行业的应用
（4）在化妆品行业的应用
（5）在农业上的应用
（6）在其他行业的应用
氨基酸工业还有着广阔的发展前景:
（1）传统的氨基酸生产方法
（2）运用基因工程手段生产氨基酸
（3）大力发展药用中间体,具体为:
①氨基酸及其衍生物逐渐成为药用中间体
②非天然氨基酸是合成活性药物的重要原料
③生产高附加值的非天然氨基酸
二、实验目的
1.掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法的操作技术(包括点样、平衡、展层、显色、鉴定及定量)。

2.学习未知样品的氨基酸成分(水解、层析及鉴定)分析的方法。

三、实验原理
1.纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。

滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。

当有机相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。

2.溶质在滤纸上的移动速度用比移值Rf值表示：
3.Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离
4.在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。

Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。

本实验利用纸层析法分离氨基酸。

四、实验试剂和器材
实验试剂：
1.氨基酸标准液(1mg/mL)
亮氨酸、甘氨酸和脯氨酸标准液。

2.80%甲酸
3.0.1%茚三酮丙酮溶液
4.氨基酸混合液(每种氨基酸500mg/mL)
5.正丁醇
实验器材：
1.新华滤纸
2.培养皿
3.电热鼓风干燥箱
4.吹风机
5.毛细管
6.针、线、尺。

7.钟罩(高约430mm,直径约290mm，具磨口塞)
五、操作步骤
标准氨基酸纸上层析
单向上行层析
氨基酸Rf值的测定
1.滤纸：选用国产新华1号滤纸，6cm×7cm。

在距滤纸2cm 处划线，用铅笔在线上标上四个点作为点样位子（留出缝线空间）。

2.点样：
①点样要合适，样品点的太浓，斑点易扩散或拉长，以致分离不清；
②用毛细管吸取氨基酸样品，与滤纸垂直方向轻轻碰触点样处的中心，这时样品就自动流出；
③点样的扩散直径控制在0.5cm之内，点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴，为使样品加速干燥，可用吹风机吹干，但要注意温度不可过高，以免氨基酸破坏，影响定量结果；
④将点好样品的滤纸两侧比齐，用线缝好，揉成筒状。

注意缝线处纸的两边不要接触。

避免由于毛细管现象使溶剂沿两边移动特别快而造成溶剂前沿不齐，影响Rf值。

3.将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内(注意滤纸不要碰皿壁)，当溶剂展层至距离纸的上沿约1cm时，取出滤纸，立即用铅笔标出溶剂前沿位置。

4.显色：待展层基本结束后, 置65℃鼓风箱中10-20min，鼓风保温，滤纸上即显出紫红色/黄色斑点。

5.Rf值的计算：用尺测量显色斑点的中心与原点(点样中心)之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，求出此值，即得氨基酸的Rf值。

计算出3种氨基酸在酸系统中的Rf值，判断待测样组成。

酸溶剂系统：正丁醇：80%甲酸：水=15:3:2(体积比)，茚三酮2ml。

温度25℃，时间1h。

六、实验结果
七、注意事项
1.点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴；
2.为使样品加速干燥，可用吹风机吹干，但要注意温度不可过高，以免氨基酸破坏，影响定量结果；
3.将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内时，注意滤纸不要碰皿壁；
4.使用的溶剂系统需新鲜配制，并要摇匀；
5.点样要合适，样品点的太浓，斑点易扩散或拉长，以致分离不清；
6.使用茚三酮显色法，必须在整个层析操作中避免手直接接触层析纸，因为手上常常有少量含氮物质。

显色时它也呈现紫色斑点。

污染了层析结果，因此操作时应戴橡皮手套或指套。

同时也要防止空气中的氨；
7.展层展开时切勿是样品点浸入溶剂中。

八、思考题
1.为什么在展层时有时用一种溶剂系统，而有时用两种溶剂系统？
答：这是根据Nernst在1891年提出的分配定律：一种溶质在两种给定的互不相溶的溶剂中分配时，在一定温度下达到平衡后，溶质在两相中的浓度比为一常数，即分配系数(Kd)。

Kd=Ca/Cb Ca和Cb是互不相溶的两相，即A相和B相的浓度。

这里的两相可以使固相、液相和气相。

意思就是溶质在A和B两种溶剂组成的混合溶剂里分配时，分配比是恒定的。

2.酸性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对氨基酸极性基团的解离有何影响?
答：酸性溶液中，有利于氨基酸的碱式电离，氨基结合质子，整个分子带正电荷；反之，碱性溶液中有利于羧基的酸式电离，氨基酸分子整体带负电荷。

3.酸性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对碱性氨基酸(赖、精、组)和酸性氨基酸(天冬、谷)的Rf值有什么影响?
答：酸性溶剂系统对碱性氨基酸的溶解性加强，在层析过程中易溶于流动相。

所以跑得比较快，因此Rf 值增大。

反之，碱性性溶剂系统中酸性氨基酸Rf 值增大。

4.什么是分配系数？
答：分配系数是指一定温度下，处于平衡状态时，组分在固定相中的浓度和在流动相中的浓度之比，以K表示。

九、讨论
经过本次利用纸层析法分离氨基酸实验，使我较为熟练的掌握了利用纸层析法分离氨基酸的具体流程及方法，并且了解了其工作原理，这对于以后的学习是有很大帮助的。

经查阅资料得，亮氨酸的理论Rf值为0.79（酸相），脯氨酸的理论Rf值为0.48（酸相），甘氨酸的理论Rf值为0.30（酸相）。

通过比对滤纸上单一氨基酸层析位置、计算出其实验Rf值并查阅资料得知，滤纸上待测氨基酸的种类及具体位置，较为粗略地分离了亮氨酸、脯氨酸及甘氨酸这三种氨基酸。

总体来讲，本次试验三种氨基酸实验Rf值偏小，。

经过分析后，得出几点影响实验结果的因素，如下：
1.点样过程中未在第一滴样品干后再点第二滴；
2.虽用玻璃罩将滤纸罩住，但还是会有些许空气中的氨在其中，影响实验结果；
3.将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内时，滤纸不小心触碰到皿壁，出现虹吸现象；
4.使用新鲜配制的溶剂系统时，并未完全摇匀；
5.使用茚三酮显色法，必须在整个层析操作中避免手直接接触层析纸，因为手上常常有少量含氮物质。