弯曲菌属和螺杆菌属
第十一章 弯曲菌属和螺杆菌属
采用C-13同位素呼吸试验检测的方法，患者只需要向特定 的一次性专用呼吸检测卡中轻吹一口气，就能检查出引起 胃肠病的病因“幽门螺杆菌”在患者体内的感染数量。通 过口服C-13尿素胶囊，进入胃部后，如果胃部存在幽门螺 杆菌，则此菌就会分解尿素酶水解尿素，尿素被水解后形 成CO₂（二氧化碳）随血液进入肺部并以气体排出，然后 检测患者呼出的气体中有没有被标记的C-13，如果有的话， 代表存在幽门螺杆菌。但需要注意的是，幽门螺杆菌正常 人体内都有，但是超过100dpm便易引起癌变。而且具有 传染性，是世界卫生组织指定的一类致癌源。
形小杆菌 • 暗视野或相差显微镜：投镖样或螺旋样运动
核酸检测
PCR方法检测粪便中弯曲菌核酸
（四）分离培养
• 关键：选择性培养基和孵育条件 • 常用培养基：改良的Skirrow’s 培养基、Campy-BAP等 • 培养条件：5%O2、10%CO2及85%N2 • 温度和时间：
空肠和大肠弯曲菌最适温度为42℃，一般72h后观察菌落； 胎儿弯曲菌最适温度是37℃，一般培养72h~7d观察菌落。 故临床标本需分别置于37℃和42℃中培养，以防漏检。 • 弯曲菌的菌落特征: 菌落细小，粉红灰色、灰白或黄灰色、轻微黏液样， 有些菌落沿接种线有拖尾样外观
• 弯曲菌能引起动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾 病。对人致病的有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等。 可根据生长温度、生化反应结果进行鉴定
• 螺杆菌属有20余种，其中幽门螺杆菌是引起胃部疾病的重要 病原体，可以产生大量高活性脲酶。通过快速测定脲酶的活 性或代谢产物可以帮助诊断幽门螺杆菌感染
第十一章 弯曲菌属检验 螺杆菌属检验
南昌大学第二附属医院 张黎明
第一节 弯曲菌属
一、分类
11第十一章 弯曲菌属检验、螺杆菌属检验 (1)
第十一章弯曲菌属检验、螺杆菌属检验一、名词解释1.Helicobacter pylori二、选择题【A1型题】1.弯曲菌属中引起腹泻的常见病原菌是A、空肠弯曲菌B、大肠弯曲菌C、胎儿弯曲菌D、粘膜弯曲菌E、猪肠弯曲菌2.大多数的弯曲菌生长时的最佳气体环境是A、5%氧气、10%二氧化碳及85%氮气B、普通大气C、20%氧气、10%二氧化碳及70%氮气D、10%二氧化碳E、5%氧气、20%二氧化碳及75%氮气3.主要引起肠外感染的细菌是A、空肠弯曲菌B、大肠弯曲菌C、胎儿弯曲菌D、粘膜弯曲菌E、猪肠弯曲菌4.与吉兰-巴雷综合症有关的细菌是A、空肠弯曲菌B、大肠弯曲菌C、胎儿弯曲菌D、粘膜弯曲菌E、猪肠弯曲菌5.空肠/大肠弯曲菌的最适生长温度是A、4℃B、25℃C、37℃D、42℃E、50℃6.可用于幽门螺杆菌快速诊断的方法是A、脲酶试验B、糖类发酵试验C、氧化酶试验D、DNA酶试验E、触酶试验7. 关于幽门螺杆菌的形态特征，错误的是A、菌体细长弯曲呈螺形、S形或海鸥形B、革兰染色阴性C、菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛D、在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆状或圆球状E、有芽胞位于次极端8.关于幽门螺杆菌的培养特性，错误的是A、微需氧B、相对湿度在98%以上为宜C、营养要求较高D、生长缓慢E、最适生长温度为25℃9.关于幽门螺杆菌的生化反应特性，错误的是A、不能利用糖类B、产生的脲酶相当于普通变形杆菌的20～70倍C、对酸敏感D、氧化酶阴性E、生理浓度的胆盐可抑制幽门螺杆菌生长10.关于弯曲菌的生物学特性，错误的是A、革兰阴性，菌体弯曲B、两端单鞭毛或一端单鞭毛C、对热敏感D、全部对头孢噻吩耐药E、37℃均能生长【B型题】11～14题：A、4℃生长B、头孢噻吩耐药C、奈啶酸耐药D、马尿酸盐水解试验阳性E、脲酶阳性11.胎儿弯曲菌12.空肠弯曲菌13.空肠弯曲菌空肠亚种14.幽门螺杆菌【X型题】15.实验室为了分离弯曲菌，应至少同时放置几个温度条件下培养，才能不漏检A、4℃B、25℃C、37℃D、42℃E、56℃16. 幽门螺杆菌感染可引起以下哪些疾病A、胃炎B、胃癌C、消化性溃疡D、腹泻E、肝炎17.空肠弯曲菌下列哪些试验是阳性A、氧化酶试验B、马尿酸盐水解试验C、醋酸吲哚水解试验D、血浆凝固酶试验E、糖发酵试验三、问答题1.临床检查幽门螺杆菌感染有哪些手段？。
第16章 弯曲菌属与螺杆菌属
第十六章弯曲菌属与螺杆菌属一、选择题（一）、A1型题（标准型）1.引起牛的感染性不育的是A.胎儿弯曲菌胎儿亚种B.胎儿弯曲菌性病亚种C.空肠弯曲菌D.简明弯曲菌E.海鸥弯曲菌2.25℃生长,42℃不生长的是A.胎儿弯曲菌B.大肠弯曲菌C.猪肠弯曲菌D.空肠弯曲菌E.简明弯曲菌3.HP定植的最佳部位是A.胃体B.胃窦C.十二指肠D.喷门E.幽门4.诊断HP的无创伤性检查方法是A.快速脲酶试验B.分离培养C.碳标记尿素呼吸试验D.病理组织活检E.直接镜检5.可鉴别大肠弯曲菌与胎儿弯曲菌的是A.生长温度差异B.革兰染色镜检C.营养要求不同D.菌落特征E.生长所需气体环境的不同6.微需氧菌的培养条件为A.3%O2,17%CO2,80%N2B.5%O2,10%CO2,85%N2C.10%O2,15%CO2,75%N2D.15%O2,5%CO2,80%N2E.10%O2,5%CO2,85%N27.与胃癌密切相关的是A.嗜肺军团菌B.空肠弯曲菌C.恶臭假单胞菌D.幽门螺杆菌E.流感嗜血杆菌8.弯曲菌属中引起腹泻的常见病原菌是A.胎儿弯曲菌B.大肠弯曲菌C.简明弯曲菌D.海鸥弯曲菌E.空肠弯曲菌9.马尿酸水解试验阳性的是A.胎儿弯曲菌胎儿亚种B.胎儿弯曲菌性病亚种C.痰液弯曲菌痰液亚种D.空肠弯曲菌空肠亚种E.空肠弯曲菌多依尔亚种10.在25℃,42℃都能生长的是A.胎儿弯曲菌B.猪肠弯曲菌C.空肠弯曲菌D.黏膜弯曲菌E.直线弯曲菌11.HP与空肠弯曲菌的鉴别可用A.快速脲酶试验B.氧化酶试验C.触酶试验D.γ-谷氨酰转肽酶试验E.精氨酸胺肽酶试验(二)、A1 型题(否定型)1.HP的生物学性状不包括A.微需氧菌B.生长缓慢C.营养要求较高D.对温度要求较高E.生化反应活跃2.HP的快速诊断方法不包括的是A.分离培养B.血清学试验C.快速脲酶试验D.直接镜检E.碳标记呼吸试验3.HP的生化鉴定试验错误的是A.快速脲酶试验阳性B.氧化酶阳性C.触酶阴性D.硝还阴性E.马尿酸水解试验阴性（三）、B1型题（配伍题）问题1～3A.CAMP 试验B.Ascoli试验C.霍乱红试验D.Elek平板毒力试验E.快速脲酶试验1.可用于HP快速诊断的是2.炭疽芽孢杆菌的初步鉴定试验为3.可用于弧菌属细菌初步鉴定的是二、填空题1.与HP毒力密切相关的两种物质是__________和___________。
第八章 螺形菌
其致病因素与肠毒素、内毒素、细胞毒素、 侵袭力有关 感染后能产生特异性血清抗体
螺杆菌属
（Helicobacter）
最适温度：37℃ 不能生长：42 ℃，25 ℃
幽门螺杆菌
（H.pylori，HP）
与萎缩性胃炎、胃、十二指肠溃疡和胃癌 等疾病相关 HP感染非常普遍，平均世界人口的50％被 感染 1982年，由澳大利亚学者巴里•马歇尔 (Barry J. Marshall)和罗宾•沃伦(J. Robin Warren)首次发现 2005年度诺贝尔医学奖
微生物学检查法
防治原则
加强水源管理；培养良好个人卫生习惯 疫苗预防
O1群霍乱弧菌死菌苗 口服疫苗
治疗
及时补充液体和电解质 抗生素的使用
副溶血性弧菌
根据菌体O抗原不同，现已有13个血清群 嗜盐（halophilic），培养以含3.5%～8% NaCl为 宜；神奈川现象（Kanagawa phenomenon,KP） 主要引起食物中毒 传播途径：烹饪不当的海产品、盐腌制品或生熟 不分所传播 潜伏期5~72小时，可从自限性腹泻至中度霍乱样 病症 治疗可用抗菌药物 严重病例需输液和补充电解质
霍乱弧菌
（V. cholerae）
烈性传染病霍乱的病原体 O1群霍乱弧菌(V.cholerae O1)古典生物型 ： 1817~1923，第1－6次世界霍乱大流行 O1群霍乱弧菌El Tor生物型 ： 1961~，第7次世界霍乱大流行 O139血清群霍乱弧菌(V.cholerae O139)，又称 孟加拉型霍乱弧菌（V.cholerae Bengal）： 1992.10，有可能成为引起第8次世界霍乱大流 行的新菌株
（Ｖ．parahemolyticus）
弯曲菌属
07.螺形菌
第二节 副溶血性弧菌
副溶血性弧菌是一种嗜盐性细菌，存在 于近海岸的海水和鱼、贝类海产品中，具有 致病性的菌株能引起人类食物中毒，是我国 沿海地区最常见的一种食物中毒
1、G－ 菌，常呈弧状、杆状、丝状等多 形性，菌体一端有单鞭毛，营养要求不高， 故在外界可长期生存。本菌特点嗜盐，在含 3.5%-4.5%NaCl的培养基中最易生长，在无 盐蛋白胨水中生长很差，甚至不生长。生长 的pH范围是7.0-9.5，最适pH为7.7
2、绝大多数致病性副溶血性弧菌能产
生溶血毒素使人或家兔的红细胞溶解。其溶
血能力与该菌的致病力呈平行关系，而大多
数非致病性菌株则无此毒素。该毒素也具有
肠道毒性
3、副溶血性弧菌引起的食物中毒 经海产品及盐淹渍后，经2-26h潜伏期后
发病 主要症状是腹痛、腹泻，呕吐及发热，粪便为水样 或糊状，少数有血水样便或粘液血便。多发于夏秋季， 病程较短，一般恢复较快
90%以上。
幽门螺杆菌与萎缩性胃炎、胃、十二指肠溃疡和胃癌等
疾病相关。
一、生物学特性
形态结构 G-,细长弯曲呈螺形。一 端或两端有多根带鞘鞭毛， 运动活泼有动力。鞭毛在定 居中起锚住作用。
培养特性
1. HP为微需氧菌，最适温度为37℃
2. HP对湿度(85%以上)要求较高，营养要求较高
需含血液才能生长，常用血琼脂培养基，经
72h才长出菌落
3. HP的菌落形态为圆形孤立的小菌落，无色半 透明呈露滴状
生化反应
• HP生化反应不活跃，不能利用糖类。
• HP具有大量高活力的胞外脲酶，故脲酶活性的
测定可作为HP的快速诊断方法。
• 还能产生氧化酶、触酶、碱性磷酸酶、α-谷
氨酰转肽酶、亮氨酸胺肽酶和DNA酶等。
微生物学检验弯曲菌属和幽门螺杆菌及检验PPT课件
• 专性需氧 • 营养要求不高 • 氧化酶：＋ • O/F：O • Mac生长：＋ • 产生水溶性色素
2021/3/12
铜绿假单胞菌－－形态染色
• 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单 或丛鞭毛
2021/3/12
铜绿假单胞菌－－培养特性
• 专性需氧、营养要求不高 • 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 • 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素，
Campy-BAP） • 两种类型菌落：扁平湿润边缘不整齐，
沿穿刺线扩散生长；圆形、突起、湿润 、黏液样外观
2021/3/12
生化反应
• 氧化酶阳性 • 触酶阳性 • 不分解和不发酵糖 • 不分解尿素
2021/3/12
临床意义
• 传播方式：经口感染 • 致病物质：产生肠毒素、细胞毒素、内
毒素等致病物质 • 空肠弯曲菌可引起急性肠炎、格林巴利
标本
分离培养 （血平板、麦毛染色
2021/3/12
氧化酶
O/F 硝酸盐还原
KIA斜面底层不变色 其他生化反应
测验1
• 关于铜绿假单胞菌，错误的是 A 革兰阴性杆菌 B 氧化酶－、触酶－ C 硝酸盐还原－ D 产生水溶性蓝绿色素 E 菌落有金属光泽
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可疑菌落（性状、色素）
初步鉴定 最后鉴定
色素鉴定 生化反应 42℃生长 分型
O/F：O 枸櫞酸盐利用＋ 精氨酸双水解＋ 乙酰胺酶＋ 明胶液化＋
铜绿假单胞菌－－检验方法
• 显微镜检查：标本直接涂片革兰染色镜 检；鞭毛染色镜检
• 培养：标本接种血平板、Mac平板分离 培养，血标本先增菌，再转种
2021/3/12
2021/3/12
弯曲菌与螺杆菌
诺贝尔生理学和医学奖
1983年Marshall和Warren首先用微需氧技 术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃粘膜 分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染 胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡， 获得了2005年诺贝尔生理学和医学奖
一、分类
• 最初因形态、分离培养方法与弯曲菌属细菌相似， 又仅从胃标本中分离到，被称作胃弯曲菌样细菌
• 目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及ELISA 等，而以ELISA应用最为广泛，现有商品化的 ELISA、胶乳凝集试验试剂盒
• 用于检测患者血清中HP的菌体抗体或脲酶抗体
(六) 13C或14C标记尿素呼吸试 验
• 基本方法是患者禁食一夜，进食用13C或 14C标记的尿素， HP产生的脲酶分解尿素 释放带有同位素的CO2 ，因此可测定患者 呼气中释放带有同位素的CO2量，如CO2 含量超过标准，提示有HP存在。
• 该方法敏感性与特异性均很好， 只是需要 特殊的同位素测定仪。
小结
微氧环境， 营养要求较高。
弯曲菌：动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染 等疾病。 对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲 菌等。
幽门螺杆菌：引起胃炎的病原体，可以产生大量脲 酶。通过快速测定脲酶的活性或代谢产物可以临 床诊断
• 由于此菌在胃窦部多见，且形态、培养及某些生化 特性与弯曲菌属相似， DNA G+Gmol%也在弯曲菌 属范围内，故命名为幽门弯曲菌(campylobacter pylori)
• 1989年Goodwin等根据该菌的超微结构、形态、菌 体脂肪酸组成、生长特征和酶的活力、 16S rRNA 序列等，提出该菌不应归于弯曲菌属，后称为幽门 螺杆菌(Helicobacter pylori, HP)
致病菌检验6——革兰氏阴性微需氧和厌氧菌
空肠弯曲菌通常对红霉素敏感，耐药率小于5％；而80 ％以上的大肠弯曲菌对红霉素耐药。胎儿弯曲菌引起 的全身感染可用红霉素、氨苄西林、氨基糖苷类和氯 霉素治疗。
第2节 螺杆菌属 Helicobacter
螺杆菌属（Hilicobacter）是一群氧化酶和触酶阳性、微 需氧、37℃生长、25℃和42℃均生长不良的革兰阴性弯 曲菌。
三 生化特性
氧化酶和触酶阳性，可还原硝酸盐，不分解、不发酵各种糖类，不分解尿素。
四 抵抗力
本属细菌抵抗力弱，对一般消毒剂敏感，但耐寒， 在4℃冰箱或水中可存活4周。
五 毒力
本菌具有粘附定居和入侵上皮细胞的能力，通过产生 的肠毒素、细胞毒素和内毒素等多种毒力因子致病， 病变部位通常在空肠和回肠，也可蔓延至结肠。
复习思考题
1. 弯曲杆菌的微生物学检查。 2. 幽门螺杆菌的致病因子和微生物学检查
幽门螺杆菌
一、形态与染色
革兰氏阴性、无芽孢、呈螺旋 状弯曲，杆状，尤其在胃粘膜 环境中，幽门螺杆菌具典型螺 旋形或弯曲形，但在陈旧培养 物中菌体可呈圆球状；多数细 菌具有位于菌体一端的多根带 鞘鞭毛，运动活泼。
二 培养特性
微需氧，有氧及无氧环境均不生长，潮湿，37℃，5-10 ％O2、5-12％CO2生长良好，5-10％H2可刺激其生长； 最适温度35-37℃，30和42℃均生长不良，此点可与其 他弯曲菌区别，生长pH5.5-8.5。 普通培养基不生长，需补充血、血清、淀粉、活性炭等。 常用心脑浸出液琼脂、布氏琼脂、哥伦比亚琼脂等。 选择性培养基：改良的Skirrow琼脂培养基加入万古霉 素、两性霉素和头孢磺啶。 血平板：经3-5d形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶 血环，革兰氏染色浅。
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培养法（不敏感） 不分解糖类，高尿酶、触酶活性 初步鉴定： 染色，菌落 生长温度： 氧化酶：+ 尿酶：++++ 萘定酸： R ; 头孢噻吩: S 种间鉴定: 马尿酸， 硝酸盐， 氨基酸胺肽酶等
•
药物敏感性： 抗生素： 铋剂：
Gram-negative, very slender, curved rods, which can be S, seagull or spiral shaped.
Very slender, curved rods, which can be S, seagull or spiral shaped. They have a characteristic corkscrew-like darting (to and fro) motility.
Very slender, curved rods, which can be S, seagull or spiral shaped. In older cultures the cells become coccoid.
enteric pathogen worldwide, characterized susequantly)
C. jejuni subsp. doylei
C. jejuni subsp. fetus
---continued
大肠弯曲菌（C . coli） 胎儿弯曲菌（C . fetus）
C. fetus subsp. fetus (major veterinary pathogen) C. fetus subsp. venerealis (Infrequent septicemia)
Butzler Medium: Skirrow Medium: 非肠道标本（主要分离C. fetus） 血液标本 环境 微需氧菌，capnophilic，氧浓度范围：5 ~ 10%（v/v） 最佳气体环境：氧： 5 ~ 10% ；CO2 : 10%；氮气：85% 实验室设备： 专门CO2 孵箱；烛缸 生长温度： C. jejuni, C. coli: themophlic, 最适生长温度42~430，比370C 生长好。250C不生长。 C. fetus最适生长温度370C ，比250C 生长好, 420C不生长
弯曲菌属和螺杆菌属 （Campylobacter and Helicobacter）
•分类
新伯杰分类：薄壁菌门，群2（需氧/微需氧，有动 力，螺型/类弧形革兰阴性细菌）
弯曲杆菌属（Campylobacter） 空肠弯曲菌（C . jejuni） 三个亚种：C. jejuni subsp. jejuni (major human
•重要性：
C. jejuni:
弯曲菌病; 格林-巴力综合症（Guillain-Barre syndrome,GBS） C. fetus ssp. fetus: H. pylori:
弯曲菌属（Campylobacter） •生长特性：
培养基： 肠道标本（主要Fra bibliotek离C. jejuni ssp.） 弯曲菌选择培养基（Campy-BAP） 组成：Brucella agar 含亚硫酸钠 10%羊血 抗生素:Vancomycin 甲氧卞氨黄胺嘧啶（Trimethojprim） 多粘菌素（polymyxin B） 头孢噻吩（cephalothin） 二性霉素B
---continued 敏感性： 萘啶酸 头孢噻吩
C. jejun
C. coli
C. fetus
S R
S R
R S
•药物敏感性
红霉素为严重或复杂的肠炎首选；阿齐霉素近 来临床实验表明较好疗效； 对氨基糖甙类、大环内酯类较敏感；氯霉素、 四环素也敏感；对黄胺、多数头孢菌素类天然耐药； 对氟奎酮类曾经高度敏感，但80年代中期开始 出现耐药
•实验室检验：
直接检查（非培养） 显微镜检查 研磨活检组织相差显微镜：螺旋状活泼运动 染色镜检：gram, 银染， 姬姆萨 ，美兰 免疫组化： 快速尿酶实验：CLO-test ,二氧化碳呼吸实验 PCR 血清学：IgG ,slow decline of antibody after eradication
螺杆菌菌属（Helicobacter）
幽门螺杆菌（H . pylori） H. cinaedi and H. fennelliae
16SrRNA分型： Campylobacter,Helicobacter,Wolinella, Arcobacter and Flexispira 属于一个完全不同于一般革兰阴性杆菌 的系统发生群 传统分型：
Colonies are flat, droplet-like, glistening and tend to spread along the direction of the steak on moist agar.;small colony,translucent, round, litter convex; The colonies have a very characteristic odour.
染色： 细、螺旋型，弯曲杆状，可见“gull-winged”； 陈旧培养物中可呈球状。 暗视野显微镜特征：快速飞镖式或螺旋式运动 菌落形态：两种菌落形态 A. singled B. connected
•实验室鉴定：
氧化酶、触酶阳性；部分解糖类 初步鉴定： 细胞形态，菌落形态 氧化酶 + 420C生长 相差显微镜：快速飞镖式或螺旋式运动 种间鉴定： C. jejuni C. coli C. fetus 马尿酸 + + 醋酸吲哚 + + 生长温度 42 + + 25 +
螺杆菌属（H . pylori）
•生长特性：
培养基：营养要求较高，须加入血液或血清； 常用培养基： 环境 微需氧，对气体要求同弯曲菌属。 最适生长温度：370C； 250C、 420C不生长 适度要求高 生长缓慢
染色 除具弯曲菌属形态，常可见直杆菌 丛单端鞭毛——螺旋式运动 菌落形态：