虫草素
虫草素
1.前言蛹虫草为我国传统药用大型真菌，其药用活性成分主要为虫草素。
其作为冬虫夏草的替代品之一，虫草素含量较冬虫夏草高约3到6倍。
据研究，虫草素有着重要的药用功效和生化用途，因为具有较大的开发利用前景。
虫草素的分子式为C10H13O3N5，分子量为251.24，且能溶于水及热乙醇、甲醇，不溶于苯、乙醚、氯仿。
目前虫草素纯品在国际市场上的价格约为1500美元/g，其经济效益非常可观，故其提取、分离、纯化的方法很值得研究。
2 人工蛹虫草及虫草素介绍2.1人工蛹虫草蛹虫草是一种具有滋补作用的中药和营养品，其所含的虫草素、虫草多糖具有独特的药理及保健作用。
蛹虫草人工栽培成功以来药理和毒理等方面的研究得到了广泛的进展。
研究表明人工蛹虫草和冬虫夏草有着极相似的作用，无毒副作用。
近年来，随着人们对人工蛹虫草的滋补保健功效和多种药用价值的认识，其开发利用研究倍受关注，并在药理、有效成分等方面取得了很大的进展。
2.2虫草素虫草素具有抗病毒、抑菌、明显抑制肿瘤生长，与环磷酰胺有明显的协同作用，并有降血糖的作用。
虫草素的分子式为C10H13O3N5，分子量为251.24，且能溶于水及热乙醇、甲醇，不溶于苯、乙醚、氯仿，紫外光的最大吸收波长为259nm。
2.3 虫草素的结构Cuningham[1]等首次从蛹虫草中分离出虫草素，采用紫外光谱特征进行鉴定，确定最大吸收波长。
同时，用其半宽度、波峰与波谷的比值确定为核苷类化合物。
Frederiksen[2]等从蛹虫草培养基中分离出虫草素采用红外光谱进行了分析确定。
陈顺志[3]等也才用了紫外和红外光谱对从蛹虫草固体培养基分离出的新化合物进行了结构鉴定，结果与虫草素的文献报道一致。
同时，还应用了超导核磁共振法进行了分析，进一步确定其为虫草素结构如下：O N NN N NH 2H H OH HHCH 2HHO3 虫草素的提取技术3.1 水提法钟艳梅[4]等以人工蛹虫草固体培养残基为原料，采用索氏提取法提取：准确称取处理好的样品各10g ，共4分，分别加入水、75%乙醇、95%乙醇、和无水乙醇做提取剂，在沸水浴中抽提8小时，收集提取液，除杂、浓缩，离子交换柱分离，收集洗脱液，分别用红紫酸胺反应定性定量鉴定虫草素的含量。
2023年虫草素行业前景：虫草素产业逐年下降
2023年虫草素行业前景：虫草素产业逐年下降网讯，虫草素含量实现批量化生产，我国虫草素市场有待发掘。
当前，虫草素具有自然的生物活性和独特的药理作用，引起了国内外广阔专家的高度重视，目前，已有不少以虫草素为主的药品、保健品等投放市场。
以下对2023年虫草素行业前景分析。
2022-2027年中国虫草素行业市场供需及重点企业投资评估讨论分析报告指出，2022年上半年，我国冬虫夏草出口地包括中国香港、日本、中国澳门、新加坡以及泰国。
从出口量来看，2022年上半年，我国冬虫夏草产品主要出口至中国香港，出口量为355千克，占总出口量的87.65%。
人工虫草将肯定程度上缓解自然虫草资源下降的压力。
随着科技的进步，太极集团冬虫夏草野生抚育讨论及产业化示范过程取得了突破性进展;东阳光药已经把握了稳定的“冬虫夏草”繁育工艺。
由此可见，将来冬虫夏草行业前景可期。
作为国内第一家虫草素产业化胜利的企业，我们始终瞄准产业前沿，紧跟时代科技前进的步伐，树立忧患意识。
目前，在全球范围内，除美国已批准虫草素作为治疗白血病新药外，其它地区还没有以虫草素为原料的新药上市。
现从两大作用来分析2023年虫草素行业前景。
1、抗肿瘤作用虫草素能够有效抑制小鼠S180瘤、口内鳞状瘤、黑色素瘤及人宫颈癌细胞增殖，并能治疗白血病。
虫草素有一个游离的羟基，可渗入到肿瘤细胞DNA中发生作用;虫草素能够抑制核苷或核苷酸的磷酸化，生成二磷酸盐和三磷酸盐的衍生物，抑制肿瘤细胞核酸的合成;虫草素可能阻断次黄嘌呤核苷酸氨基化成鸟苷酸;虫草素能够掺入RNA中。
究其根本，虫草素的抗肿瘤作用与其抑制DNA和RNA的合成有关。
虫草素可以作为抗肿瘤药物的帮助药物，提高抗肿瘤药物本身药效;最终，虫草素作为一种自然来源的抗肿瘤有效成分，平安性高。
2、降糖脂作用虫草素具有降糖降脂功效，对与血糖、血脂相关的疾病如糖尿病、高脂血症等也有肯定的调整作用。
虫草素具有降脂作用，其作用机制：①通过腺苷A1受体介导泌乳素的分泌来调整体重;②转化为虫草素单磷酸，激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)，促进脂质分解，抑制脂质合成;③降低脂滴相关基因Fsp27和Perilipin1 的表达，从而抑制脂肪滴合成，诱导脂肪滴降解;④促进褐色脂肪组织转化或白色脂肪组织褐变而增加能量消耗。
虫草素的研究进展-24
（虫草素）
（腺 苷） Cuningham et al., 1950, Nature; Radhi et al., 2021, Molecules
腺苷的作用
• 腺苷，是指由腺嘌呤的N-9与D-核糖的C-1通过β糖苷键连接而成的化合 物，化学式为C10H13N5O4，其磷酸酯为腺苷酸。
• 腺苷是用于合成三磷酸腺苷（ATP）、腺嘌呤、腺苷酸、阿糖腺苷的 重要中间体。
• 高速逆流色谱 快速、高效，成本高，规模化相对较难。
• 结晶法等 成本较低，操作简便，对多糖、色素等去除能力差。
4、虫草素的异源制备（合成生物学途径）
掌握两个概念 1）合成生物学
是指人们将“基因”连接成网络，让细胞来完成设计 人员设想（自然界中不存在的）的各种任务。
2）底盘细胞
是经过修饰改造的基因组简化、代谢能力强的一种可 工程化的细胞；是合成生物学的操控硬件平台，如同汽车 的底盘。
Xia et al., 2017, Cell Chem Bio
3′-AMP：腺苷-3′-单磷 酸； 2‘-C-3’-dA：2-羰基-3脱氧腺苷； PTN：喷司他丁； ADA：腺苷脱氨酶 (deaminase）； COR：虫草素 3‘-dI：3'-脱氧肌苷
从腺苷到虫草素的合成途径
Xia et al., 2017, Cell Chem Bio
从而，否定了之前的推测。
2017年，Xia等证明了以 腺苷为前体的虫草素三基 因合成途径。
Cns1：氧化还原酶(oxidoreductase)； Cns2：金属离子依赖的磷酸水解酶 (Phosphate hydrolase)； Cns3：ATP依赖的磷酸转移酶 (phosphotransferase)； Cns4：ATP结核盒型转运蛋白。
虫草素的作用与功效
虫草素的作用与功效虫草素是一种由虫草菌属真菌培养得到的生物活性物质，已被广泛应用于医药、保健、农业等领域。
它具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、免疫调节等多种功效。
接下来，我们来详细介绍虫草素的作用与功效。
一、抗菌作用虫草素具有广谱的抗菌活性，能抑制多种常见的病原菌。
研究表明，虫草素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、水蛭菌等革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较好的抑制作用。
虫草素的抗菌机制主要包括抑制细菌的蛋白质合成、破坏细菌膜结构和增加细菌对抗菌药物的敏感性等。
二、抗病毒作用虫草素对多种病毒具有抑制作用，包括流感病毒、乙肝病毒、艾滋病病毒等。
研究表明，虫草素可以抑制病毒的进入宿主细胞、病毒的复制和病毒颗粒的组装和释放等步骤，从而抑制病毒的感染和复制。
三、抗肿瘤作用虫草素具有明显的抗肿瘤活性，对多种肿瘤细胞系具有明显的细胞毒作用。
虫草素通过不同的机制起到抗肿瘤作用，包括诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤血管新生等。
此外，虫草素还可以增强化疗药物的疗效，减轻其对正常细胞的毒副作用。
四、抗氧化作用虫草素具有较强的抗氧化活性，可以清除体内的自由基，减轻氧化应激对细胞的损伤，抑制脂质过氧化反应的发生，起到保护细胞和组织的作用。
虫草素的抗氧化作用有助于延缓衰老、减轻心血管疾病、保护肝脏等。
五、抗衰老作用虫草素具有抗衰老作用，可以延缓细胞的衰老进程。
研究表明，虫草素可以调节细胞的内源性抗氧化酶的活性，提高细胞的抗氧化能力，延长细胞寿命。
此外，虫草素还可以减少衰老相关蛋白的生成，维持细胞的功能和活力。
六、免疫调节作用虫草素能够调节免疫系统的功能，增强机体的免疫力。
虫草素可以提高巨噬细胞的吞噬活性、激活T淋巴细胞和B淋巴细胞、促进细胞因子的产生等，从而增强机体的免疫应答和抗病能力。
虫草素的免疫调节作用有助于预防和治疗多种免疫相关疾病。
七、其他功效除了以上主要的作用与功效，虫草素还具有多种其他的功效。
虫草素可以提高机体的抑郁和焦虑状态，改善睡眠质量。
虫草素在畜禽生产上的应用
虫草素是一种天然的植物提取物，被广泛应用于畜禽生产中的饲料添加剂和抗生素替代品。
以下是虫草素在畜禽生产上的一些应用：
1.饲料添加剂：虫草素可以作为一种饲料添加剂，用于提高畜禽的生长性能和免疫力。
它可以促进畜禽的食欲和消化吸收，改善饲料转化率，增加体重增长速度，并提高肉质品质。
2.抗菌作用：虫草素具有一定的抗菌活性，可以抑制一些畜禽常见的致病菌和寄生虫，
如大肠杆菌、沙门氏菌、球虫等。
因此，在畜禽生产中，虫草素可以作为一种天然的抗菌剂，减少疾病的发生和传播。
3.免疫调节：虫草素可以调节畜禽的免疫系统，增强机体对病原微生物的抵抗能力。
它可以增加白细胞数量和活性，促进抗体产生，提高免疫球蛋白水平，从而降低畜禽的感染风险和死亡率。
4.抗应激作用：畜禽在生长过程中常常受到各种应激因素的影响，如疾病、环境变化、
运输等。
虫草素具有一定的抗应激作用，可以减轻畜禽的应激反应和损伤，提高其适应能力和生产性能。
5.环境友好：相比传统的抗生素使用，虫草素是一种天然的、环境友好的替代品。
它
不会对环境产生污染，也不会导致抗生素耐药性的问题。
需要注意的是，虫草素的使用应遵循相关的法规和建议，确保其安全有效。
具体的使用方法和剂量应根据不同畜禽种类、生长阶段和生产环境来确定，并在兽医或专业人士的指导下进行。
此外，虫草素只是畜禽生产中的一种辅助措施，综合管理和健康饲养仍然是保持畜禽健康和生产的关键。
虫草素介绍
虫草素介绍1虫草素简介虫草素（cordycepin ）C 10H 13N 5O 3⏹虫草素是具有多种功效的天然活性物质。
别名：虫草菌素、冬虫夏草素、3'-脱氧腺苷来源：冬虫夏草和蛹虫草中提取；人工合成；生物工程。
溶解性：既可以溶于水，也可以溶于甲醇和热乙醇，但不溶于苯、乙醚、氯仿。
良好的透皮性。
虫草种类繁多，世界上有507种虫草，中国境内有108种冬虫夏草蛹虫草虫草是虫、菌结合的药用真菌，现代珍稀中草药。
虫草的核心物质是虫草素。
【虫草】与人参、鹿茸并称为中药宝库中的三大补药。
在《本草从新》中记载有"甘平保肺、益肾、补精髓、止血化痰"等疗效。
因为虫草入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，是唯一能同时平衡和调节阴阳的中药。
2虫草素在护肤领域的功效3虫草素的药理作用虫草素C10H13N5O 3体液免疫，细胞免疫；机体免疫炎症；皮肤炎症改善新陈代谢和微循环；减少色素沉积预防和治疗皮肤过氧化与光老化核苷类抗生素，抵抗病菌病毒促进脂肪分解，抑制脂肪合成功效抗菌抗病毒、抗白血病健康睡眠，舒缓抑郁抗炎、增强免疫力防癌抗癌治癌降糖降脂调节呼吸系统增强肺脏功能其他（内脏保护、补益气血等）保护心脑血管、心脏、肝脏和肾脏，预防动脉粥样硬化、心肌梗死、脑卒中、血栓等；调理气血；生育功能调节；抗疲劳；阴阳同补、双向调节平衡天然核苷类抗生素，可抵抗多种病毒病菌；抑制了白血病细胞RNA的合成高效低毒抗炎，疼痛和炎症相关疾病；体液免疫和细胞免疫，双向免疫调节。
纯天然的睡眠天使，宁心安神直接作用于癌细胞；提高人体免疫功能预防和缓解肥胖和血脂相关疾病促进新陈代谢，排毒养颜，抗衰老滋肺，化痰，调理久咳、支气管炎等促进新陈代谢增强排毒能力虫草素功效4虫草素的应用面部护肤品：美白淡斑、修复炎症、补充能量、增强代谢、紧致提拉、改善痤疮等。
眼部：改善黑眼圈、缓解脂肪粒等。
身体局部：紧致提拉、色素减退等。
个人护理品免疫抑制剂、抗病毒制剂、抗癌、降脂药等的开发；医药冷敷贴，凝胶剂，膏剂等。
虫草素
虫草素培养条件优化试验虫草素(Codycepin)又名虫草菌素、蛹虫草菌素。
虫草素的生物活性及其药理作用: 增强人体免疫功能及抗癌作用、抗菌抗病毒作用、促进新陈代谢。
提取和纯化虫草素的活性物质大都来自于蛹虫草,目前从蛹虫草人工培养液及菌丝体中都分离出了虫草素。
国内也有化学合成的方法，但其中有除不尽的杂质。
李楠等对冬虫夏草及蛹虫草中的虫草素含量作了比较, 发现蛹虫草及冬虫夏草都含有虫草素, 前者含量是后者的2倍。
1材料与方法1.1.1试剂培养基配方：白砂糖15g/L 花生仁5 g/L 干酵母10 g/L 磷酸二氢钾1 g/L 硫酸镁0.5 g/L消泡剂0.2 g/L供试菌株：蛹虫草Cordyceps militaris 菌株M1，由浙江经贸职业技术学院提供。
1.1.2主要仪器：高效液相色谱仪：大连伊利特分析仪器有限公司；全温振荡培养箱：上海智诚分析仪器制造有限公司1.2.1 试验方法：按基础培养基配方，初始pH 为7.0，培养温度为26℃，转速为180r/min，培养时间为8d，以10g/L 蛋白胨为氮源，以葡萄糖、蔗糖、D-果糖、乳糖、麦芽糖、淀粉和纤维素为碳源，碳原子含量为600mmol/L，进行不同碳源对菌丝产虫草素影响试验；用选出的碳源，设置其浓度为5、10、15、20、25、30、35、40g/L 进行不同浓度碳源对菌丝产虫草素影响试验；用选出的碳源及浓度，以蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、NaNO3、尿素、NH4NO3、NH4Cl 为氮源。
氮原子含量为40mmol/L，。
进行不同氮源对菌丝产虫草素影响试验；用选出的氮源，设置其浓度为2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5g/L进行不同浓度氮源对菌丝产虫草素影响试验。
按基础培养基配方，以上述试验选出的适宜碳氮源及浓度，培养温度为26℃，转速为180r/min，培养时间为8d，设置培养液的初始pH 为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 和10.0 进行不同初始pH 值对菌丝产虫草素影响试验；用选出的pH，转速为180r/min，培养时间为8d，设置培养温度为16、20、24、28、32℃进行不同培养温度对菌丝产虫草素影响试验；用选出的pH 和养温度，培养时间为8d，设置摇床转速为105、130、155、180、205r/min 进行不同转速对菌丝产虫草素影响试验；用选出的初始pH、培养温度、摇床转速，设置培养时间为4、5、6、7、8、9、10、11d 进行培养时间对菌丝产虫草素的影响试验。
虫草素提取工艺的优化
虫草素提取工艺的优化
虫草素是一种天然的生物活性物质，具有广泛的药用价值。
虫草素的提取工艺对于其药用价值的发挥具有重要的影响。
本文将从虫草素提取工艺的优化方面进行探讨。
虫草素的提取工艺主要包括原料处理、提取溶剂的选择、提取时间、提取温度、提取压力等方面。
其中，原料处理是提取工艺的关键环节。
在原料处理过程中，应注意去除杂质和不良部分，保证原料的纯度和质量。
此外，还应注意原料的粉碎程度，以便提高提取效率。
提取溶剂的选择也是提取工艺的重要环节。
常用的提取溶剂包括乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等。
不同的提取溶剂对虫草素的提取效率和纯度有着不同的影响。
因此，在选择提取溶剂时，应根据实际情况进行选择。
提取时间、提取温度、提取压力等因素也对虫草素的提取效率和纯度有着重要的影响。
在提取时间方面，应根据实际情况进行调整，以保证提取效率和纯度的最大化。
在提取温度方面，应注意控制温度，避免过高或过低的温度对虫草素的影响。
在提取压力方面，应根据实际情况进行调整，以保证提取效率和纯度的最大化。
虫草素的提取工艺是一个复杂的过程，需要综合考虑多个因素。
在实际操作中，应根据实际情况进行调整，以保证提取效率和纯度的最大化。
通过对虫草素提取工艺的优化，可以提高虫草素的药用价
值，为人类健康事业做出更大的贡献。
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一、2010版中国药典标准-冬虫夏草冬虫夏草：为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps.sinensis(Berk.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体。
夏初子座出土、孢子未发散时挖取，晒至六七成干，除去似纤维状的附着物及杂质，晒干或低温干燥。
【性状】本品由虫体与从虫头部长出的真菌子座相连而成。
虫体似蚕，长3～5cm，直径0.3～0.8cm；表面深黄色至黄棕色，有环纹20～30个，近头部的环纹较细；头部红棕色；足8对，中部4对较明显；质脆，易折断，断面略平坦，淡黄白色。
子座细长圆柱形，长4～7cm，直径约0.3cm；表面深棕色至棕褐色，有细纵皱纹，上部稍膨大；质柔韧，断面类白色。
气微腥，味微苦。
【含量测定】照《高效液相色谱法检验标准操作程序》测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液(pH6.5)[取0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5mL，混合(pH6.5)]～甲醇(85：15)为流动相；检测波长为260nm。
理论板数按腺苷峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备取腺苷对照品适量，精密称定，加90%甲醇制成每1mL 含20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入90%甲醇10ml，密塞，摇匀，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l0μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品含腺苷(C10H13N5O4)不得少于0.010%。
二、来源获取虫草素的办法不外乎三条途径：从天然虫草中提取、人工合成和通过生物工程的方法从北虫草组织液中提取。
化学合成目前处于探索阶段，国外有报道虫草素能够人工合成，但过程复杂且产量极低，因此如何提高蛹虫草中虫草素的含量并实现虫草素的工业化生产,是目前国内外研究的主要方向。
天然虫草资源稀缺，价格昂贵，含量甚微，很难成为主要原料。
人工合成虫草素虽然在上个世纪六十年代我国曾有报道，但由于合成的起始原料较贵或设备投入巨大或产业化工艺缺失或总收率太低或合成工艺技术无法重复，迄今难以实现产业化。
因此，通过生物工程的方法，从人工培育的虫草子实体中提取虫草素，是实现虫草素作为治疗药物产业化生产的最可行的途径。
三、提取及纯化工艺溶解性：虫草素溶于水、热乙醇、甲醇，所以一般采用水、乙醇或甲醇等作为溶剂提取虫草素。
热稳定性：较差。
1、虫草素的提取方法目前常用的有4种提取方法：浸提法、超声法、索氏提取法和回流法。
（1）索氏提取法提取虫草素时，水作溶剂得率最大：钟艳梅采用索氏提取法提取虫草素，并比较了不同提取溶剂：蒸馏水、无水乙醇、浓度95％乙醇，浓度75％乙醇，发现用索氏提取法提取时，若采用水作提取溶剂，虫草素得率最大。
（2）超声波提取法最佳张嘉等用正交试验法研究了对虫草素的提取过程，分别采用了水热回流法、醇热回流法、超声波水提法，超声波醇提法。
其研究结果表明，乙醇超声波提取法的得率最高，并确定其最佳提取工艺如下：浓度75%乙醇超声波提取3次，每次40 min，料液比1：20。
凌建亚研究了上述4种方法对虫草素提取的影响，试验发现浸提法耗时过长，而且提取效果一般，不利于下一步试验进行。
如果分别调整回流法、索氏提取法、超声法的作用时间，均可获得相近的提取结果，研究发现，采用超声波法提取过程更简便，其受试验环境、仪器及人员条件等因素的影响较小。
另外，可减少回流前后称重补足溶剂定溶所带来的误差，因此，采用超声波法提取虫草素为佳。
陈尚卫等比较了超声波法和回流法提取虫草素，认为两者结果相近，但超声波法操作更简便,回流法则需要较高的温度，但虫草素的热稳定性较差。
2、虫草素的富集纯化工艺（1）离子交换树脂法实例：Cunningham首先报道了从虫草菌的培养液中分离虫草素，以培养滤液经Dowex-I-Cl-l离子交换树脂柱和活性炭柱层析，得到虫草素单体。
Suhadolnic[5]等则采用Dowex-I-OH-1树脂从蛹虫草的培养滤液中分离得到虫草素。
参考方法：潘中华等将北虫草子实体经过粉碎、脱脂、过滤、烘干、水浴、沉淀、过滤、离心沉淀、除色素、浓缩、过树脂柱等步骤的处理，最后析出结晶得到虫草素晶体。
其离子交换树脂柱采用的是732-阳离子交换树脂。
树脂经2N NaOH震荡2 h而后用蒸馏水冲洗至中性，再用2 N HC1震荡2 h，蒸馏水冲洗至中性，重复一次预处理树脂过程；装好柱后用pH值3.5的HCl 3倍柱体积过柱，至pH值不变时停止，尔后加样；样品完全进柱后，用pH值3.5的HCl平衡液固定被树脂吸附的虫草素，用双蒸水过柱除杂，在洗脱时用0.15 mol/L的NH3·H2O以1滴/s加到层析柱内，10 ml试管收集洗脱液，6 ml/支，连续收集60支；收集液用红紫酸胺反应定性定量鉴定虫草素含量后放入冰箱中，在温度低于40℃时结晶析出虫草素晶体。
钟艳梅等利用蛹虫草固体培养残基经过粉碎过筛、脱脂、索氏抽提或水浴浸提、除杂、浓缩、离子交换柱分离，最后收集获得虫草素晶体。
陈星以蛹虫草固体干燥培养基为原料，通过粉碎、热浸、低度醇液提取、过滤，调pH值至8-9，流经717、732离子交换树脂时虫草素不交换，这样无关的有机或无机阴阳离子都被吸附。
再调节pH值至l1，流经717离子交换树脂时，由于虫草素带负电荷而被吸附在柱上面，后采用常规方法，用纯水或蒸馏水洗脱，加热，浓缩(或真空干燥)，在4℃下静置后出现絮状沉淀，经滤纸过滤得白色块状虫草素晶体，向50～95 ℃（最佳温度为60～90℃）热水中逐步加入虫草素粗品，使之饱和为止；过滤除杂，将饱和液冷却至结晶，如此反复数次即可得到纯度很高的晶体。
该法打破了常规方法，获取了纯度较高的虫草素，且简便可行，有较高的工业应用价值。
潘中华等人主要对蚕蛹虫草中虫草素(3’-脱氧腺嘌呤核苷、学名3’-Deoxyadenosine)进行纯化及纯度鉴定。
结果表明:经过对蚕蛹虫草子实体及菌丝的粉碎、石油醚脱脂、80℃水浴10小时、调节等电点沉淀、732-NH_4离子交换树脂的分离、浓缩、5℃下低温结晶,可得到一定纯度的虫草素晶体。
（2）硅胶柱层析姜泓等利用硅胶柱色谱法，经制备液相、薄层、凝胶柱层析等过程，从人工培养的蛹虫草子实体的醇提取物中分离得到了虫草素。
陈伟等以菌丝体的醇提液为样品，经过硅胶柱层析，采用10倍体积的洗脱剂以0.8mL/min流速洗脱，手动进样2mL，流速为0.8 mL/min洗脱样品，自动收集器收集样品后，经检测，虫草素得率从1.40‰提高到20.89‰ 。
并确定了硅胶柱层析最佳溶剂系统为氯仿：乙酸乙酯：异丙醇：水=400：100：300：24，每10mL流动相中加2滴氨水。
此法可作为大量制备高纯度虫草素的产业技术。
（3）超临界流体萃取陈顺志以北虫草人工培养后的发酵物为原料，采用超临界萃取技术提取其核苷类有效成分，并以乙醇等作为夹带剂减压分离获取核苷类多组分及单体。
该法采用蛹虫草人工培养后的固体或半固体培养基为原料，在提取过程中，将虫草培养物粉碎后加入萃取釜中，在高压条件下以CO2液体作为溶剂，提取其有效成分。
在CO2流动过程中，分离釜中的压力、温度不同，使所需成分析出，结合I、Ⅱ、Ⅲ分离釜或分馏塔可使某一成分析出。
在减压下CO2液体挥发后即可得到脱氧核苷组分或单体。
后采用活性炭吸附，经有机溶剂去杂、重结晶或离子交换树脂去杂、冷冻干燥或真空干燥后得到粉状虫草素。
（4）多种方法联合使用Cunningham采用离子交换树脂柱和活性炭柱层析，得到虫草素晶体。
徐文豪采用离子交换树脂、大孔吸附树脂处理和多次硅胶柱层析及薄层分离法得到了核苷类物质。
虫草素也为核苷类物质，所以该法也可应用于虫草素的分离。
四、检测方法（1）高效液相色谱法（HPLC）张红霞等采用高效液相色谱法同时检测了5株北虫草菌株发酵液中的虫草素含量，设定的色谱条件：色谱柱为Kromasil 100-5C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相为水-甲醇=85-15，流速0.8 mL/min，检测波长260 nm，进样量10μL，温度30℃。
以虫草素标准品作标准曲线，虫草素的线性范围为0.49～98μg/mL。
虫草素的保留时间为11.443 min，回收率为103.22％，RSD=4-4%。
吴畏等采用HPLC检测北冬虫夏草子实体中的虫草素含量，色谱柱Kromasil ODS C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm ）；流动相为甲醇-水=15-85，流速0.8 mL/min，检测波长260 nm，进样量2μL，温度30℃。
结果表明，所做的样品子实体中虫草素的含量为2.82%。
温鲁等采用HPLC法测虫草培养基中虫草素的含量，色谱柱为Waters Nova-Pak C18柱（3.9 mm×300 mm，4μm）；流动相为水-甲醇-醋酸（185：14：1）；流速1.0mL/min，检测波长260nm。
结果显示，分别测得的3份培养基粉末中虫草素的含量依次为4.26、0.72、3.79 mg/g。
（2）毛细管区带电泳（CZE）法凌健亚等用CZE法测定了一株虫草属真菌培养基中的虫草素和腺苷酸含量。
结果显示，使用长41 cm，直径为45μm的无覆盖层的硅胶毛细管拄，用浓度为0.05 mol/L或0.025 mol/L硼酸缓冲液时获得了很好的分离结果，但用0.025 mol/L的硼酸缓冲液更好，因为低的离子化强度能使运行时间更短。
最适操作温度为20℃，工作电压为20KV，pH值为9.4。
该条件下虫草素的峰面积为6404（RSD=3.40%），腺苷酸的峰面积为20525（RSD=1.31%），它们的迁移时间分别为虫草素2.057 min（RSD=2.64%），腺苷酸2.881 min （RSD=1.27%）。
回收率分别为虫草素97.2%，腺苷酸97.6%。
从结果来看，目前的研究应用CZE法定量分析虫草素和腺苷酸是可行的。
（3）毛细管电泳技术（CE）Yerra等研究后认为，CE法是一种快速简便的虫草素测定方法。
紫外254 nm处检测，最适条件为硼酸缓冲液浓度20 mmol/L，缓冲液中含有28.6%甲醇，pH值9.5，分离电压20 KV，温度25℃。
并且与HPLC对比，认为CE较之HPLC的优势在于分析时间更短，运行成本更低廉。
（4）薄层层析法(TLC)雷帮星等将待虫草素待测样品与标准品点于已活化的薄层板上（110℃活化0.5h），待溶剂挥干后，在展开剂（氧仿:乙酸乙酯:异丙醇:水=8:2:6:0.3）中展开。