肾功能不全试验的实验报告

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实验步骤
酚红排泄率测定： 1)两组家兔分别耳缘静脉注射o．6％酚
红溶液(1ml／kg)，接着从颈外静脉插管 处注射20％葡萄糖溶液(30ml／kg)。收 集从开始注射酚红起15min或30min的尿 液。换算成单位时间的尿量(ml／min)。
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实验步骤
将收集的尿液倒入500ml量筒内，加10 ％NaOH lOml，用自来水补充至500ml 处，混匀后，取出适当量放入与比色管 口径相同的试管中与标准比色管比较， 得出15min或30min内肾脏酚红排泄率。
家兔急性 肾功能不全
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实验目的
复制急性中毒性肾衰动物模型，通过对 肾功能指标的检测及肾脏形态学改变的 观察，了解中毒家兔肾功能的改变。判 断、分析致病因素及导致急性肾衰的可 能发病机制。
实验原理
肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一 是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、肾小 球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄 体内代谢物质以维持机体内环境的稳定。 当肾血流量减少，肾小球滤过率下降或肾 小管排泌重吸收功能障碍时，肾的泌尿功 能受到影响，从而导致肾功能不全。
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实验步骤
尿肌酐/血肌酐的意义：器质性肾衰时比 值＜20；功能性肾衰时比值＞40。
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内生肌酐清除率(Ccr)：
能较准确的反映肾小球滤过率(GFR)
Ccr=[Cr]尿×尿量（ml/min）/[Cr]血
为此，实验步骤收集尿液必须采集有“记录单
位时间的尿量”的尿液样品做尿肌酐[Cr]尿测定 ，才能与血肌酐[Cr]血比，计算出GFR。肌酐能 自由从肾小球滤过，在肾小管中很少被重吸收
测定管 0.1 _
_ 2 0.5
标准管 _ 0.1
_ 2 0.5
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空白管 _ _
0.1 2 0.5
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实验步骤
混匀，放10min后加蒸馏水6。0ml，摇匀 ，以530nm波长比色，空白管调零，读 OD值。计算：
[Cr]u(mg%)=OD测/OD标 ×0.05步骤
复制肾功能衰竭模型：于实验前一天， 取两只家兔，称重，一只皮下或肌肉注 射1％HgCl2(o．8～1．0ml／kg)造成急 性肾功能衰竭，为实验组兔；另一只皮 下或肌肉注射等量的生理盐水(1．0ml／ kg)作为对照组兔。
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实验步骤
观察：24h后，比较两组动物的一般状态 、活动情况与尿量。
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表1 血清肌酐测定
单位（ml）
肌酐标准应 用液
（0.05mg/m l） 血清
蒸馏水
碱性苦味酸
标准管 0.20
测定管 _
_
0.20
_
_
2.0
2.0
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空白管 _
_ 0.20 2.0
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实验步骤
混匀，37OC水浴30 min，以510nm波长比 色，空白管调零，读OD值，然后，各管加 50%醋酸液两滴，放置6min后，在测OD’ 值。计算：
[Cr]p(mg%)=OD测－OD’测/ OD标－OD’标 ×0.01/0.2×100
正常值:0.7～0.8mg%(1mg%=88.4mol/L) 。
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表2 尿肌酐测定
单位（ml）
尿液（原尿或1： 50稀释）
尿肌酐标准应 用液
（0.5mg/ml） 蒸馏水
碱性苦味酸
12．5%NaoH
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ARF发病机制的中心环节是GFR的降低。 肾血流量减少，肾小管阻塞、肾小管原尿回 漏或肾细胞损伤等均可导致GFR的降低。
本实验通过皮下注射1％HgCl2造成家兔 急性肾小管性坏死。
通过本实验学习复制急性中毒性肾衰动
物模型；观察肾衰家兔的一般状态、酚红排
泄率、肌酐清除率等变化；观察急性肾衰时
肾脏大体形态；根据实验指标，判断、分析
急性肾衰的发病机制及病理生理变化；对急
性肾衰的病因、发病机制和功能代谢变化加
深理解。
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实验对象
家兔2—3kg。
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实验药品与器材
1％HgCl2、生理盐水、25％氨基甲酸乙 酯、0．6％酚红、20％葡萄糖、10％ NaOH、手术器械一套，注射器、试管、 加样器、721分光光度计、水浴锅、离心 机。
家兔称重，耳缘静脉注射25％氨基甲酸 乙酯4．0ml／kg，待动物麻醉后，固定 于兔台。
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角 膜 反 射
夹 肢 反 射
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实验步骤
家兔心脏采血3~5ml置于一干燥管中（不 抗凝），放置10min后，3000r/min离心 15min，小心吸取血清置于另一干燥管中 ，备测血肌酐
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实验步骤
肾脏酚红排泄率：是反映肾血流量与肾 小管排泌功能的指标。正常情况下从静 脉注入酚红后15min或30min，肾脏酚红 排泄率分别＞30%与＞45%。
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实验步骤
血清和尿液肌酐含量测定——苦味酸沉定 蛋白法
原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿 中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐， 使溶液呈色后进行比色测定；然后加醋酸 ，在酸性环境中，黄红色的苦味酸肌酐被 清除，非肌酐物质（假肌酐）呈色，两者 比色之差为血及尿中肌酐。按表1、表2的 操作步骤测定血清及尿液肌酐。
下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约1． 5cm处做切口，长约4cm，暴露膀胱，用 注射器收集2ml尿液于试管中，做尿肌酐 检查。
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实验步骤
在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离 之。在近膀胱端结扎输尿管，稍等片 刻 ，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口， 向肾脏方向插入一细塑料管(塑料管事先 用肝素冲洗或充满肝素)，结扎并固定， 用于收集尿液。
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实验步骤
如果心脏采血失败，则颈总动脉采血 颈部正中剪毛，切开皮肤，分离左侧颈
总动脉，在动脉下穿两根丝线，用一根 丝线结扎动脉的远心端，近心端用动脉 夹夹闭，在结扎线下方的动脉壁上剪一 小斜口，然后向心脏方向插入动脉导管 放血3ml备测血肌酐
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实验步骤
分离右侧颈外静脉，插管用于输液。输 液速度一定要慢
，但有少量是由近曲小管分泌。内生肌酐在血
浆中的浓度相当低，近曲小管分泌的肌酐量可
忽略不计，因此Ccr与菊粉清除率相近，可以代 表肾小球滤过率。
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实验步骤
肾形态学观察：处死家兔，取出肾脏，称 肾重量，计算肾体比，比较两组家兔肾 脏外形，纵向剖开肾脏，观察皮髓质条 纹、色泽等。