鱼腥草多糖提取工艺及抗氧化活性研究
鱼腥草多糖提取工艺及抗氧化活性研究作者：来林康邓尚贵来源：《安徽农业科学》2014年第35期摘要 [目的]优化酸法提取鱼腥草多糖工艺并研究鱼腥草多糖抗氧化活性。
[方法]采用正交试验法优化酸法提取鱼腥草工艺；以不同自由基清除率为指标，研究鱼腥草多糖抗氧化活性。
[结果]鱼腥草多糖最佳提取工艺为：提取温度70 ℃、提取时间6 h、浸提1次、料液比1∶40 g/ml；羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基清除率分别为46.17%、57.50%、60.43%。
[结论]优化鱼腥草多糖提取工艺合理可行，鱼腥草多糖具有较好抗氧化活性。
关键词鱼腥草多糖；酸法提取；抗氧化活性中图分类号 S567文献标识码 A文章编号 0517-6611（2014）35-12646-04鱼腥草（Houttuynia cordata），又名折耳根，属于双子叶植物三白草科蕺菜属。
它是一种略带鱼腥味的草本植物，是我国传统的药食同源的食材之一[1]。
鱼腥草具有清热解毒、消肿排脓、利尿通淋的功效，主要用于肺脓疡、痰热咳嗽、热痢热淋、痛疮肿毒[2]，其主要成分为：鱼腥草多糖、黄酮类、生物碱、甾醇类、维生素等[3]。
多糖是指由单糖聚合而成的一类生物大分子，具有多种生物活性。
研究表明，鱼腥草多糖具有抗病毒作用：鱼腥草水提物对血热病毒（EHFV）有一定抑制作用[4]；鱼腥草是很好的免疫调节剂：它能增强白细胞的吞噬功能[5]；鱼腥草还具有较强的抗氧化活性[6]，国内外已将抗氧化检测用于抗衰老等保健食品的评价[7-8]。
鱼腥草多糖具有低毒低害、来源广泛的特点，已成为近年来的研究热点。
但目前鱼腥草多糖提取率不高，且没有具体提取工艺，难以推广。
笔者以新鲜鱼腥草作为提取原料，采用正交试验确定鱼腥草多糖提取最佳工艺，提高多糖提取率并对鱼腥草多糖抗氧化活性进行研究，以期为开发鱼腥草药物及功能性食品提供理论依据。
1 材料与方法1.1 材料供试原料：新鲜鱼腥草购于舟山临城菜场。
主要试剂：1，1-二苯基-2-苦基肼基（DPPH），美国sigma公司；邻二氮菲、磷酸缓冲液、邻苯二酚、乙醇（无水）、浓硫酸（98%）、盐酸、氯仿、正丁醇、苯酚、硫酸亚铁等，均为分析纯。
主要仪器与设备：CLF-30B超微粉碎机，新昌关红利数控制造厂；79HW-1恒温磁力搅拌器，金坛国旺实验仪器厂；CR21G冷冻离心机，日本日立；A-1502紫外分光光度计，上海谱元；PlusTM4.5Liter Casade冷冻干燥机，LABCONCO；CA-1111旋转蒸发仪，EYELA；常用仪器等。
1.2 试验方法1.2.1 鱼腥草粉末的制备。
鱼腥草经清水洗净，烘干并粉碎，过200目筛除杂，放入4 ℃冰箱冷藏备用。
1.2.2 鱼腥草多糖的制备。
取20 g鱼腥草粉末，加入10 ml HCl静置15 min，加水20倍量、30倍量、40倍量于70～90 ℃恒温搅拌提取4、5、6 h，抽滤，得滤液于4 ℃冰箱预冷。
取预冷液，加入Sevag试剂（V样品∶V氯仿∶V正丁醇=20∶4∶1）脱蛋白，静置，直至无杂蛋白，旋转蒸发，加入无水乙醇反复提纯，沉淀冷冻干燥得鱼腥草多糖粗品。
1.2.3 鱼腥草多糖含量测定。
试验采取苯酚-硫酸法测定鱼腥草多糖含量，参照2005版《中国药典》[1]执行。
1.2.4 单因素试验。
分别研究不同提取时间、提取温度、浸提次数、料液比对鱼腥草多糖提取率影响。
提取时间分别为1、3、5、7、9 h；提取温度分别为50、60、70、80、90 ℃；浸提次数分别为1、2、3、4、5次；料液比分别为1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50 g/ml。
1.2.5 正交试验法优化酸法提取鱼腥草多糖工艺。
在单因素试验研究基础上，对鱼腥草多糖提取工艺进行优化，采用 L9（34）正交表进行试验[9]。
以多糖提取率作为衡量指标。
1.2.6 抗氧化活性研究。
以羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH 自由基清除率为指标[10]研究鱼腥草多糖的抗氧化活性。
1.2.6.1 羟自由基清除率测定。
采用邻二氮菲法，取0.75 mmol/L邻二氮菲1.0 ml，pH 7.4的PBS 2.0 ml，蒸馏水1.0 ml，混合均匀，加入0.75 mmol/L 硫酸亚铁1.0 ml，0.12%双氧水1.0 ml（新鲜配制），振荡混匀，记作Ap；以1.0 ml 蒸馏水代替1.0 ml的0.12%的双氧水，其余条件同Ap处理记作Ab；以1.0ml样液代替1.0 ml蒸馏水，其余条件同Ap处理记作As。
Ap、Ab、As均在37 ℃水浴锅中保温60 min，然后蒸馏水调零，测定波长536 nm处吸光度，并计算羟自由基清除率。
羟自由基清除率/% =As-ApAb-Ap×1001.2.6.2 超氧阴离子自由基清除活性的测定。
取邻苯三酚0.1 ml并加入Tris-HCl（pH 8.2）缓冲溶液5 ml于试管中，加入样液0.25 ml，迅速混匀，25 ℃水浴保温15 min后使用1 cm比色皿，以蒸馏水做空白对照，在波长320 nm处时测吸光度Ai，并测定扣除本底自身的干扰，样液对超氧阴离子自由基清除率按下式计算：1.2.6.3DPPH 自由基清除活性的测定。
称取适量鱼腥草多糖溶于10 ml蒸馏水，溶解后分别取1 ml至反应体系，其中样品组为1 ml DPPH+1 ml样品；对照组1为1 ml 95%乙醇+1 ml样品；对照组2为1 ml蒸馏水+1 ml DPPH；调零组为95%乙醇。
混合均匀，避光反应30 min。
检测各组在波长535 nm处的吸光度，依次记为A1、A2、A3，计算清除率。
2 结果与分析2.1 单因素试验2.1.1 提取时间对鱼腥草多糖提取率及含量的影响。
由图1可知，在1～9 h，多糖提取率随提取时间增加而增加，这是由于酸提多糖的过程是原料中多糖成分不断溶出并向水中扩散的过程。
最初水溶液中多糖含量较低，而鱼腥草组织内含量较高，则内外形成浓度梯度，多糖物质易从鱼腥草内部向周围水溶液扩散的动力较大，因此提取时间增加，多糖提取率升高。
随着提取的过程，水溶液中的多糖物质逐渐增多，浓度升高，而同时鱼腥草组织内，多糖含量逐渐降低，则内外浓度梯度不断减小，最终内外多糖浓度趋于平衡，所以在5～9 h，多糖提取率增长缓慢，因此酸法提取鱼腥草多糖提取时间选择5 h 适宜。
2.1.2 提取温度对鱼腥草多糖提取率及含量的影响。
由图2可知，在50～80 ℃的温度范围内，随温度升高，提取率也随之升高，在80 ℃提取率达到最大值。
随后，多糖提取率随温度升高而降低，有可能是因为温度高，易造成多糖析出过程中多糖降解，从而是提取率降低。
所以酸法提取鱼腥草多糖提取温度选择80 ℃适宜。
2.1.3 浸提次数对鱼腥草多糖提取率及含量的影响。
由图3可知，多糖提取率随浸提次数增加缓慢升高，原因可能是当水进入鱼腥草组织细胞时，由于渗透作用，水逐渐进入细胞内，溶解多糖，形成内外多糖浓度差。
于是鱼腥草组织内多糖物质不断涌出，水不断渗入细胞内，循环往复，直至细胞内外多糖浓度差达到动态平衡。
连续多次过滤鱼腥草溶液，连续多次加水，就可以把所需成分大部分溶出。
所以随浸提次数增加，多糖提取率升高。
但从图3可以看出，浸提次数增加，多糖提取率增加较为缓慢，原因可能为鱼腥草多糖细胞壁并未被破坏完全，导致多糖物质无法从中析出。
综合考虑，酸法提取鱼腥草多糖浸提次数选择3次。
2.1.4 料液比对鱼腥草多糖提取率及含量的影响。
由图4可知，在料液比1∶10～1∶40 g/ml，多糖提取率随之升高，在料液比1∶40 g/ml 处，达到最大值。
鱼腥草组织细胞含有细胞壁，多糖物质为大分子物质，外界环境水渗透入细胞，溶解多糖物质，但多糖物质不易流出细胞。
水溶液加酸，可以有效破坏细胞壁，能让溶解的多糖物质流出细胞，提高提取效率。
料液比1∶40～1∶50 g/ml，多糖提取率随之降低。
可能是酸液浓度过高，破坏了细胞结构，造成多糖物质析出后降解，降低提取率。
结合图4，酸法提取鱼腥草多糖最佳料液比为1∶40 g/ml。
以上单因素试验可知，鱼腥草多糖提取最佳条件为：提取时间5 h、提取温度80 ℃、浸提次数3次、料液比1∶40 g/ml。
2.2 正交试验结果在单因素试验基础上进行正交试验，因素水平设计见表1，正交试验结果见表2。
根据L9（34）正交表，对多糖提取率进行分析，最优水平选择：对于因数A有K3j>K2j>K1j，表明浸提时间为6 h时提取率最高；对于因数B有K1j>K2j>K3j，表明浸提温度为70 ℃时最好；对于因数C有K1j>K3j>K2j，表明浸提次数为1次时最好；对于因数D有K3j>K2j>K1j，表明料液比为1∶40 g/ml时提取率最高。
综合可得酸提鱼腥草多糖的最优组合是B1A3C1D3，即浸提温度70 ℃、浸提时间6 h、浸提次数1次、料液比1∶40 g/ml。
极差分析表明，在4个因素中，影响鱼腥草多糖提取的主次顺序为A（浸提时间）>B（浸提温度）>D（料液比）>C（浸提次数）。
其中A（浸提时间）是酸提鱼腥草多糖的主要影响因素，C（浸提次数）对多糖提取影响最小，B（浸提温度）和D（料液比）因素的影响不显著。
2.3 抗氧化活性2.3.1 羟自由基清除率。
由图5可见，邻二氮菲在溶液pH 7.2～7.4条件下，与Fe2+离子反应，变成橘红色，但与Fe3+离子不反应。
PBS缓冲液维持了溶液稳定的pH，加入样品物质，使Fe3+还原为Fe2+，观察溶液颜色，颜色越深，代表样品物质抗氧化活性越强。
分析可得：羟自由基清除率随浓度升高变强，0.2～0.6 mg/ml，清除率明显低于VC；多糖浓度达0.6～1.0 mg/ml，清除率趋于平稳，基本可达80%，与VC对比清除率相差不多。
2.3.2 超氧阴离子自由基清除率。
由图5可见，邻苯三酚在碱性条件下发生自氧化释放超氧阴离子，并生成有色中间产物，该有色中间产物在320 nm 波长处有一特征吸收峰，当有抑制剂存在时，可清除超氧阴离子自由基，从而阻止中间产物的积累。
分析可得，0.2～0.4 mg/ml，清除率很低，效果不明显；0.6～1.0 mg/ml，清除率较为稳定，但是也并不高，平均可达70%。
2.3.3 DPPH自由基清除率。
DPPH 自由基是一种稳定的有机自由基，其溶液具有特征的紫红色吸收峰，当存在自由基清除剂时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其所接受的单电子数成定量关系，因而可用分光光度法进行定量分析。
分析可得（图5）：0.2～0.4 mg/ml，清除率较低，平均只有20%；0.6～1.0 mg/ml，清除率增长很快，几近与VC持平，效果很好。
鱼腥草抗菌活性成分提取工艺研究【开题报告】
鱼腥草中提得一种黄色油状物，对各种微生物（尤其是酵母菌和霉菌）均有抑制作用，对溶血 性的链球菌、金黄色葡萄球菌、流感杆菌、卡他球菌、肺炎球菌有明显的抑制作用。对大肠杆菌、 痢疾杆菌、伤寒杆菌也有作用，人工合成的癸酰乙醛亚硫酸氢钠加成物称为合成的鱼腥草素。 优选鱼腥草中挥发油和多糖的最佳提取工艺。目前有关鱼腥草中黄酮的提取有溶剂提取、酶法、超 声法和微波法提取法[2-5]等研究报道,而超声波法因其具有提取时间短,生产过程容易操控等特点, 是一种非常实用、有效的提取方法[6]。该方法利用超声波的空化作用加速植物有效成分溶出,另外 超声波次级效应, 如机械震动乳化、扩散、击碎、化学效应等,也能加速提取成分的扩散、释放并 与溶剂充分混合,因而它具有提取率高,速度快,操作简便,节约溶剂,低温提取等特点,并且可以为中 药大生产的提取分离提供合理化生产工艺、流程及参数。近年来有关超声提取在中药材提取中的研 究很多,但因为超声波具有的高能量,可能会对植物中的有效成分的活性有影响,所以本课题主要是 研究超声波法提取鱼腥草中黄酮的工艺,并将提取物的抑菌活性与传统醇提法进行比较,从而获得较
三、研究步骤、方法及措施：
3.1 超临界 CO2 萃取法提取鱼腥草挥发油 称取鱼腥草药材(20 目)120g，装入 1L 的萃取釜内，设 定流量为 30～40kg/h，CO2 钢瓶的压力为 5MPa，按照表 1 设计的实验条件，超临界 CO2 萃取；每 10min 收集提取物，直至 2h，称其重量，计算鱼腥草挥发油萃取率，确定最佳提取条件。结果见表 1、表 2。
鱼腥草提取物抗炎及抗氧化作用研究概述
・4・生物学教学2020年(第45卷)第1$期鱼腥草提取物抗炎及抗氧化作用研究概述吴苹陈芳*(山东聊城大学药学院聊城252059)摘要鱼腥草含有挥发油、生物碱、有机酸及多糖等生物活性成分，具有抗炎、抗氧化、抗病毒和提高机体免疫力等多种生理功效。
本文对鱼腥草有效活性成分在体内、外模型中的抗炎和抗氧化研究进行了概述,为炎症、氧化应激相关疾病的未来治疗方向提供基本资料。
关键词鱼腥草抗炎作用抗氧化作用活性成分鱼腥草属三白草科，是一种多年生草本植物[1]o 传统上，鱼腥草的提取物被用于预防或治疗炎症性疾病。
氧化应激和炎症被认为是各种疾病病理的核心机制。
抗原刺激细胞免疫系统，使免疫细胞分泌促炎细胞因子和趋化因子，诱导活性氧或活性氮产生，促使机体产生炎症消灭病原体。
但是持续活跃的炎症反应可导致活性氧的过度产生，诱导氧化应激,使细胞受到氧化损伤。
因此，有选择地针对氧化应激和炎症的相关反应机制来开发相应的疾病治疗方法就成为了全新的研究方向。
本文概述鱼腥草提取物在体内外抗炎和抗氧化活性的研究进展，希望对治疗相关疾病的药物研发和应用提供基本资料。
1鱼腥草对炎症的潜在作用炎症本质上是细胞对各种刺激的保护反应，可分为两大类：急性炎症和慢性炎症。
发生炎症的机制涉及多种类型细胞及其分泌的细胞因子等。
研究揭示，鱼腥草在体内和体外都有很强的抗炎功效。
1.1鱼腥草在体外炎症相关分子机制中的作用鱼腥草在不同溶剂中的提取物均具有抗炎作用。
炎症疾病的发生和发展与肿瘤坏死因子(TNF-")、白细胞介素(IL)和一氧化氮有着密切的关系。
Park等[2]的研究表明，鱼腥草的水提物可剂量依赖性抑制脂多酶(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞中TNF-"的分泌。
鱼腥草的乙醇提取物可以抑制LPS处理的肺上皮细胞和肺»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»»: &3]周阳，王啸晨.阿尔茨海默病遗传及信号通路研究进展&J]•安徽医科大学学报，2019,54(6)：994-1000.&4]李墨香，郝倩，刘莹，等•淀粉样前体蛋白基因多态性与阿尔兹海默病的关系&J] •中国细胞生物学学报，2018,40(9):1599—1605.&5]RANFT U，SCHIKOWSKI T，SUGIRI D，et al.Long-term exposure te traffic related particulate matter impairs ognitivefunction in the elderly&J].Environment Research，2009，109(8):1004-1011.&6]侯焕喜，王训•阿尔茨海默病与微量元素及氧化应激的关系&J] •中西医结合心脑血管病杂志，2014,12(8):983-985.&7]PITOCCO D，TESAURO M，ALESSANDRO R，et al.Oxidative stress in diabetes:implications for vvsculat and othec complications&J].International Journal of Molecular Science，2013，14(3):泡巨噬细胞中的白细胞介素-6(IL-6)和一氧化氮的释放[3]。
鱼腥草多糖提取工艺及抑菌活性研究
鱼腥草多糖提取工艺及抑菌活性研究雒江菡;于瑞洪;阎红【摘要】Using Houttuynia cordata Thunb.as a raw material,we investigated the extraction process of polysaccharides from Houttuynia cordata Thunb.by a single-factor experiment and an orthogonal experiment, and studied bacteriostasis of polysaccharides.The optimum extraction conditions were determined as follows:extraction temperature was 80 ℃,solid-liquid ratio was 1 :40(g:mL),and extraction time was 6h.Under a-bove conditions,the extraction rate was 9.74%.Polysaccharides from Houttuynia cordata Thunb.strongly in-hibited the growth of Escherichia coli and Staphylococcus aureus ,and weakly inhibited the growth of Bacillus subtilis .This study lays the foundation for further development and application of Houttuynia cordata Thunb. in food and drug fields.%以鱼腥草为原料,采用单因素实验和正交实验优化了鱼腥草多糖的提取工艺,并对其抑菌活性进行了研究.确定最优提取工艺条件为:提取温度80℃、料液比1:40(g:mL)、提取时间6 h,在此条件下,提取率为9.74%.鱼腥草多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌作用,而对枯草芽孢杆菌无明显的抑菌作用.该研究对鱼腥草在食品和药品等方面的进一步开发和应用奠定了基础.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2017(034)011【总页数】4页(P27-29,43)【关键词】鱼腥草多糖;提取工艺;抑菌活性【作者】雒江菡;于瑞洪;阎红【作者单位】哈尔滨商业大学药学院细胞与分子生物学研究所,黑龙江哈尔滨150001;黑龙江生物科技职业学院,黑龙江哈尔滨 150025;哈尔滨商业大学药学院细胞与分子生物学研究所,黑龙江哈尔滨 150001【正文语种】中文【中图分类】TQ461鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)，又名折耳根、猪鼻孔、颤儿根、臭根草、鱼鳞草等,在我国长江以南的各个地区分布较广，尤其以湖南、贵州、湖北、四川等省居多。
鱼腥草总黄酮的提取及抗氧化能力的研究
合物广泛存在于 自然 界的绝大多数植 物 中，是一类 具有 ２ 一 苯基色原酮 结 构 的化合 物 其 羟基 衍生 物 多具 黄 色， 故又称 黄碱素或黄酮 。黄酮类化合物 在植物体 中大部分 与糖结合成苷 类 ，小 部分游离存 在。黄酮在植物 的生长 发育过程 中有 着很重要 的作 用 ，具有多种生 物活性 。研 究发现 ，鱼腥 草黄酮有抗 疲劳 ，抗肿瘤 ，抗 抑郁 ，抑菌 等作用＿ １ 。 ］ 。 目前 关 于鱼腥 草黄 酮抗 氧 化 的研究 论 文很 多＿ ５ ］ ，但关于其总抗 氧化能 力的研究 很少 ，本文就 鱼腥
与浓氨试液 ｌ ｍｌ ，密塞 ，轻轻振 摇 ，称 定重量 ，放置 ２ ４
小 时及精密加入氢氧化钠试液 ３ ｍｌ ，放置 ３ ０分钟 ，再精
本实验 的测定波长 。 ３ ． ２ 流 动 相 的 选 择 参 照 有 关 资 料 我 们 对 乙 胯 ０ ． ０ １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ庚烷磺 酸钠 与 ０ ． ０ ２ ｍｏ ｌ ／ Ｌ磷 酸二 氢钾等 量混
正文所述的供试 品溶液的制备方法。
参考 文献
［ １ ］ 国家药典委 员会 中华 人民共 和 国药 典 （ 一 部） ［ Ｍ］北京 ： 化学工 业 出版社 ，
２ ０１ Ｏ
合溶液 （ 用１ ０ ％磷 酸调节 Ｐ Ｈ值 ２ ． ８ ）（ ２ ２ ：７ ８ ） 、乙脖
（ 本文校对 ： 韩世辉
◎１ ｃ ｆ
入高效液相色谱仪 ，测定 士的宁的含量 （ 结果见表 ２ ） 。
表 ２ 三批 样 品 中士 的宁 的 含 量 测 定 结 果
第 ２ ０ １ Ｉ ３ 卷 年 第 ３ ６ 月 期 ・ 总 下 第 半 １ ５ 月 ８ 期 刊
０ ． ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ庚烷磺 酸钠与 ０ ． ０ ２ ｍｏ ｌ ／ Ｌ磷 酸二 氢钾 等量混 合溶液 （ 用 １ ０ ％磷酸调节 ｐ Ｈ值 ２ ． ８ ）（ ２ ３： ７ ７ ）进行优 化 试 验 ，结 果 ，以 乙 脖 ０ ． ０ １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 庚 烷 磺 酸 钠 与 ０ ． ０ ２ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ磷酸二氢钾等量混 合溶液 （ 用１ ０ ％磷 酸调 节 ｐ Ｈ值 ２ ． ８ ）（ ２ ３： ７ ７ ）为流动相分离效果较好 ，保 留时间 适度 ，因此 ，确定其为本法的流动相 。
超高压提取鱼腥草多糖最佳工艺研究
摘
要： 为研 究超高压提取 鱼腥草 多糖 最佳工 艺条件 ， 在 单 因素试验 基础上 ， 采用 （ ３ ） 正
交 实验设计对鱼腥草 多糖超高压提取 工艺进 行 了优化研 究 ， 以期 考察料液 比、 超 高压 压力 、 加 压 时间对 多糖 得 率 的影 响 。结果 表 明 ： 固液 比 １： ２ ０ ｇ ／ ｍＬ 、 超 高压 压 力 ３ ２ ０ ＭＰ ａ ， 超 高压 时 间
对多糖有破坏 。超高压提取植物 原料 中有效成 分 ， 具有 时间短 、 对成分 破坏 小 的特点［ ６ ］ ， 但 目前在 鱼腥 草多糖
１： ２ ０ ｍＬ加入水 ， 然后 在不 同超 高压 压力 （ １ ０ ０ 、 ２ ０ ０ 、 ３ ０ ０ 、 ４ ０ ０ 、 ５ ０ ０ ＭＰ ａ ） 下保 压 ４ ｍｉ ｎ进行 提取 ， 研究 超高压
可 见 分 光光 度 计 （ 上 海分 析仪 器 总厂 ） 。
１ ． ２ 试 验方 法
正 交 实验 因素 与 水 平
Ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ ａ ｎ ｄ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｓ ｏ ｆ ｏ ￣ｈ ｏ ｇ ｏ ｎ ａ ｌ ｔ ｅ ｓ ｔ
１ ． ２ ． １ 超高压提取鱼腥草多糖
微波 法 、 超声法＿ ４ ］ 。但 酸 法 提 取 时 间 长 ， 超 声 和 微 波 法
液过滤 ， ５ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ离心 ２ ０ ｍｉ ｎ ， 真空浓缩 ， 测定多糖含
量， 计算 多糖提取得率 。 １ ． ２ ． ２ 单 因素试验 固液比对鱼腥草多糖得率的影 响： 在鱼腥草粗 粉 中加 入不 同量 的水 （ １： ５ 、 ｌ；１ ０ 、 １： １ ５ 、 １： ２ Ｏ 、 １： ３ Ｏ ｇ ／ ｍ Ｌ ） ， 在３ ０ ０ ＭＰ ａ 压力下保压 ４ ｍ ３ ｎ进行 提取 ， 研究 固液 比对鱼腥草多糖 得率的影 响。超 高压压 力对 鱼腥草 多糖得率 的影响 ： 在鱼腥草 粗粉 中按 固液 比
鱼腥草多糖体外抗氧化活性研究
40 卷 6 期
李利华等 鱼腥草多糖体外抗氧化活性研究
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定容至 100 ml 容量瓶中，吸取各多糖试样溶液 0． 6 ml，加蒸
馏水补至 1． 0 ml，于冰水浴中向各管加入 4． 00 ml 蒽酮试剂，
全部加完后浸入沸水浴中，煮沸 10 min，取出，迅速用蒸馏水
冷却至室温，以蒸馏水代替样液作空白，于 620 nm 波长处测
定吸光度。平行 3 次取平均值，计
C
×
D W
×
V
×
100；
式中，W 为样品质量； C 为多糖浓度； V 为溶液体积； D 为稀释
因素。
1． 2． 4 鱼腥草多糖体外抗氧化活性试验。
1． 2． 4． 1 还原能力的测定。还原能力的测定参考 Oyaizu 的 方法［9］。取 5 支 10 ml 比色管，在各管中依次加入 2 ml 不同
Study on Antioxidant Activity of Polysaccharide from Houttuynia cordata Thunb in vitro LI Li-hua （ College of Chemical and Environmental Sciences，Shaanxi University of Technology，Hanzhong，Shaanxi 723001） Abstract ［Objective］ The aim was to study the antioxidant activity of polysaccharide from H． cordata in vitro． ［Methods］ The crude polysaccharide from H． cordata was extracted by water extraction and alcohol precipitation． Using VC as a positive control，the antioxidation activity of the polysaccharide was studied by various antioxidant assays，including reducing power，hydroxyl free radical （ ·OH） ，superoxide anion free radical （ O2－ ·） and nitrite （ NO2－ ） scavenging． The polysaccharide content was also determined． ［Results］The average content of polysaccharide was 2． 41% ． Within the concentration range，the reducing power of the polysaccharide was equal to VC ，the ·OH scavenging capability was lower than VC ，the O2－ · scavenging capability was lower than VC but closed to VC with the increasing of concentration，the NO2－ scavenging capability was stronger than VC ． ［Conclusion］The polysaccharide from H． cordata has noticeable antioxidant activity in vitro and shows an antioxidant effect positively dependent on dose． Key words Houttuynia cordata Thunb； Polysaccharide； Antioxidant activity； in vitro
鱼腥草抗补体活性多糖的制备工艺研究
鱼腥草抗补体活性多糖的制备工艺研究［摘要］目的：建立鱼腥草中抗补体活性多糖的整套制备工艺。
方法：以多糖得率和经典抗补体活性为综合指标，利用正交试验确定鱼腥草活性多糖的最佳提取工艺和最佳醇沉条件；以蛋白清除率和多糖保留率为综合指标，进行三氯乙酸法除蛋白工艺优化；以色素去除率和多糖损失率为综合指标，利用正交试验优化最佳脱色工艺。
结果：最佳制备工艺为于50倍水、90℃下煎煮3次、每次2h；将提取液浓缩至相当于每毫升0.12g生药，加入4倍体积的90%乙醇，静置24h；离心去上清液，沉淀依次用无水乙醇、丙醇、无水乙醚洗涤，再用水复溶，于复溶液中加入三氯乙酸至终浓度为20%除蛋白；于50℃，pH 3.0，3%活性炭下吸附50min脱色。
采用该工艺制备三批鱼腥草抗补体活性多糖，多糖得率平均为4.03%（RSD0.96%），糖质量分数平均为80.97%（RSD 1.5%），蛋白质量分数平均为2.02%（RSD 2.3%），补体抑制活性的CH50平均为0.079 g·L-1（RSD 3.6%）。
结论：本实验系统建立的工艺稳定可靠，所得多糖的糖含量高、活性强，适合鱼腥草抗补体活性多糖的大量制备。
［关键词］鱼腥草；多糖；抗补体；提取；醇沉；除蛋白；脱色补体系统是人体重要的免疫防御系统之一，但其过度激活会引起人体免疫系统的过度反应，造成人体自身正常组织的损伤，参与急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、老年性痴呆等多种重大疾病的病理过程[12]，目前临床上对补体系统过度激活相关疾病尚无理想的治疗药物。
自然界中广泛存在具有抗补体作用的活性物质，包括多糖、黄酮、甾体、三萜、生物碱、蛋白质等多种类型[35]，从天然产物中寻找开发高效低毒的新型补体抑制剂越来越受到国内外学者的关注。
鱼腥草为三白草科Saururaceae蕺菜属植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的新鲜全草或干燥地上部分，具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋的功效，临床上用于肺炎、上呼吸道感染、流感、肝炎等病的治疗[6]。
鱼腥草抗氧化活性研究进展
鱼腥草抗氧化活性研究进展作者：宋继敏,等来源：《现代园艺·下半月园林版》 2019年第1期鱼腥草,又名鱼鳞草、折耳根、蕺菜等,为三白草科蕺菜属多年生草本植物[1]。
我国主要分布于长江以南各省区,资源丰富。
鱼腥草既是我国传统中药材,《本草纲目》列为上品,其性味辛、寒,归肺经,具有清热解毒、消肿排脓、利尿通淋等功效[2],临床上常用于痰热咳喘、热淋等症;又是民间特味美食,含有丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质等营养成分,是卫生部确定的药食两用植物资源之一[3]。
现代科学研究表明,鱼腥草含有抗氧化成分,具有抗氧化活性[4-5],研究鱼腥草抗氧化活性对于提高鱼腥草科技附加值、开发鱼腥草抗氧化剂具有重要实际意义。
本文梳理综述我国有关鱼腥草抗氧化活性的研究进展,为鱼腥草抗氧化活性的进一步研究及其抗氧化产品的开发提供参考。
1 鱼腥草多糖抗氧化活性多糖是指由多个单糖分子缩合、失水而成,是一类分子结构复杂且庞大的糖类物质,其广泛存在于植物、动物、微生物中。
多糖是鱼腥草中重要的功能成分之一,具有较强的抗氧化活性,目前,国内对鱼腥草多糖抗氧化活性的研究相对较多。
李程程等[6]研究了野生鱼腥草多糖的还原能力、清除羟自由基、超氧阴离子自由基和亚硝酸盐的能力,结果表明,野生鱼腥草多糖具有较强的还原能力,对羟自由基、超氧阴离子自由基和亚硝酸盐的清除能力都较好,且呈一定的量效关系。
认为鱼腥草多糖作为一种来源于植物的天然有机物质,有取代化学合成抗氧化剂的应用前景。
来林康等[4]的研究发现,鱼腥草多糖对羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH 自由基的清除率分别为46.17%、57.50%和60.43%,说明鱼腥草多糖具有较好的抗氧化活性。
李利华[7]的研究得出,在试验浓度范围内,鱼腥草多糖的还原能力与Vc 相当,对NO2-的清除能力强于Vc,对O2-·的清除能力与Vc 相接近,对·OH 的清除能力不及Vc,表明鱼腥草多糖在不同的抗氧化体系中均具有抗氧化活性,且与多糖浓度正相关。
野生鱼腥草多糖的提取及抗氧化活性的研究
摘要 ： 为优 化 野 生鱼 腥 草 多糖 水提 法 的 最 佳 工 艺条 件 ， 研 究野 生鱼腥草 多糖提取 物的还 原能 力、 清 除羟基 自 由基 的 能 力 及 清 除 超 氧 阴 离子 和 亚 硝 酸 盐 的 能 力 。利 用 正 交 试 验 设 计 ， 对 野 生 鱼 腥 草 多糖 提 取 的料 液 比 ， 提
究 主 要 集 中在 挥 发 油 成 分 上 ， 而 对 鱼 腥 草 多 糖 的
研究 大 多抗 氧化 活性 研究 方 面鲜有报 道 。本 文对 野
液 配制【 ¨ ］ ： 精 密称 取 １ ０ ５ ℃干 燥 至 恒 重 的 葡 萄 糖 标准品 ０ ． １ ｇ置 １ ０ ０ ｍＩ 容 量瓶 中 ， 加 水溶 解并 定 容， 摇匀 ， 再取 ｌ ｍＩ 定容至 １ ０ ｍＩ ， 即 可 得 到 浓 度为 ０ ． １ ｍｇ ・ ｍＩ 的葡萄 糖标 准溶 液 。分 别 吸取
０、 ０ ． ２ Ｏ 、 ０ ． ４ ０、 ０ ．６ ０ 、 ０ ． ８ ０、 １ ．０ ０和 １ ．２ ０ ｍＩ 的
生 鱼腥 草多 糖进 行 提 取并 测 定 其 含 量 ， 研 究 其 抗
氧 化活 性 ， 旨在 开 发 鱼 腥 草 天 然 抗 氧 化 产 品 ， 以 改
善 化学 抗氧 化产 品 的安 全性 和生 物相 容性 问题 。
关键词 ： 鱼腥草； 多糖 ； 抗 氧 化 活性 中图 分类 号 ： ＴＱ２ ８ １ 文献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ２ — ２ ７ ６ ７ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ３ — ０ １ ２ ＆０ ４ Ｉ Ｘ） Ｉ ： １ Ｏ ． １ １ ９ ４ ２ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ｌ ０ ０ ２ — ２ ７ ６ ７ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ３ ． Ｏ １ ２ ８
正交超声法提取鱼腥草多糖工艺研究
Ｖ 、 Ｅ等多种营养成分 ， ＣＶ 同时还含有多糖 、 黄酮 、 挥 发 油类 等 多种 药 用成 分 ， 一种 “ 食兼 用 型 ” 是 药 的野 生 植 物 ， 有 清 热 解 毒 、 肿 排 脓 、 尿 通 淋 的 功 具 消 利
效 『 １１ ．ｏ主要用 于肺 脓疡 、 痰热 咳嗽 、 热痢 热淋 、 疮 痈 肿毒 、 消痈 排浓 、 杀虫 、 积 、 消 健脾 、 止血 。广泛 分 布
图 ２ 蔗 糖 标 准 曲线
Ｆ ｇ２ Ｓ ａ ｄ ｒ ｕ ｅ ｏ ｕ ｒ ｓ ｉ ． ｔ ｎ ａ ｄ ｃ ｒ ｆ ｃ ｏ ｅ ｖ ｓ
回归方程 为 ： Ａ＝００ ８ Ｃ ． ３ ， ０９ ９ 。 ． ７ 一００ ３ Ｒ ： ．９ ９ ０ ０ 收峰 ， 故可用 比色法在此波长下测定吸光度 。本实 １ ． 多糖 的测 定 ４ 验以葡萄糖做标准 曲线。此法简单 ， 试剂便宜， 灵敏 ’ 精 确 称 取 真 空 干 燥 恒 重 后 的 鱼 腥 草 多 糖 度高 ， 实验时 基本不 受蛋 白质 存在 的干扰 。 ５ ０ ｇ 水 溶解 后 定 容 到 １００ ０ｍ ， ０． ｍＬ容 量 瓶 中， 匀 ， 摇 Ｈ Ｉ － Ｉ 作为多糖储备液 。精确量取多糖储备液 ２ ０ Ｌ 定 ．ｍ， ０ Ｈｏ一 一 一 一 ｏＨ ３ ０ Ｈ２ 容 置 ２００ Ｌ量 瓶 中， 分别 取 ２Ｏｍ ５ ．ｍ 再 ．Ｏ Ｌ置 ２ ． ｍ ５Ｏ Ｌ Ｏ ｃ Ｈ。 Ｈ —ｆ Ｈ Ｈ２０４９ ％ ） ｚ Ｈ —ｃ０ ｓ （８ 量 瓶 中 ， 后加 入 ４ 苯 酚 溶 液 １ ０ ， 匀 后 迅 然 ％ ． ｍＬ 摇 ０ ０Ｈ ０Ｈ
Ｌ ｎ， ＨＡＯ Ｗ ｅ－ ｉ ｇ ， ＥＮ Ｐ － ｏ ｇ ＵＯ Ｘｉ Ｚ ｉ ｘｎ ＊Ｗ ｕ ｈ ｎ
（ ｅ ａ ． ｆ ｈｍ． Ｃ ｅ Ｅ ｇＢ ｏｉ ｎｖｒｉ ｆ ｒ Ｄ ｐｒ ｏ ｅ ＆ ｈ ｍ． ｎ． ａｊＵ ｉｅｓｙｏ ｔ Ｓｉｎｅ，ａ ２０ ３ Ｃ ｉａ ｔ Ｃ ， ｔ Ａ ｓ＆ ｃｅｃｓ ｌｉ １ １ ， ｈｎ ） Ｂ ７