柱色谱技术
柱色谱是较经典的有机物分离技术
柱色谱是较经典的有机物分离技术，原理和薄层色谱相同，但装置有所不同，主要由一个均匀玻璃柱和填充填料组成，填料是决定柱效的主要因素，填料必须满足具有不溶于所使用流动相、不使欲分离的样品破坏或分解、惰性大、可逆性强和吸附容量大。
同时，填料颗粒直径要均匀。
最常见的柱色谱是硅胶色谱、氧化铝色谱、离子交换柱色谱、聚酰胺柱色谱和凝胶柱色谱。
分配柱色谱是利用混合物中各组分在两种不相混溶的液体之间的分配系数不同，而得到分离的方法，分为正相和反相分配色谱两种类型：正相分配色谱：以水或亲水性溶剂为固定（液）相，以水不相混溶的有机溶剂作移动相的分配色谱称为正相分配色谱。
一般而言，分离水溶性或极性较大的成分，如生物碱、苷类、糖类、有机酸等化合物，常用正相分配色谱。
反相分配色谱：以亲脂性有机溶剂作固定（液）相，以水或亲水性溶剂作移动相的分配色谱称为反相分配色谱。
当分离脂溶性或极性较小的成分，如高级脂肪酸、油脂、游离甾体等物质时，常用反相分配色谱。
实践中有70%以上的分配色谱都采用反相色谱。
分配柱色谱往往适用于分离水溶性或极性较大的组分，如生物碱、苷类、糖类、有机酸、酚类及氨基酸的衍生物；对某些非极性化合物，如油脂、甾体等物质，可采用反相分配柱色谱法。
应用实例：狄戈辛（异羟基洋地黄毒苷）的分离支持剂：国产层析硅胶80 100目，加2/3量的水（以乙酸乙酯饱和），调匀，再以乙酸乙酯（水饱和）浸泡，调成稀糊状，湿法装柱，柱直径与长度比1:2 以上。
实验方法：取样品与1 2倍量硅胶磨匀，加入柱顶，用水饱和的乙酸乙酯（含0.5%甲醇）洗脱，分部收集，各流分均作纸色谱及薄层色谱检查，比移值相同的流分合并，减压蒸干，以甲醇结晶，得到洋地黄毒苷、羟基洋地黄毒苷、异羟基洋地黄毒苷三种单体。
吸附柱色谱是将待分离混合物样品均匀地加在装有吸附剂的柱子中，再加适当的溶剂（洗脱剂）冲洗，由于吸附剂对各组分吸附能力不同，各组分在柱中向下移动的速度不同，吸附力最弱的组分随溶剂首先流出，通过分段定量收集洗脱液而使各组分得到分离。
简述柱色谱的分离原理
简述柱色谱的分离原理柱色谱是一种常用的色谱技术，它利用固定相和流动相之间的相互作用来实现混合物中各组分的分离。
柱色谱的基本原理是，混合物中的各组分在固定相和流动相之间分配，由于各组分在两相之间的分配系数不同，因此在流动相的作用下，各组分在固定相中的移动速度不同，从而实现分离。
以下是柱色谱分离原理的详细解释：一、柱色谱的基本概念1. 固定相：固定相是柱色谱中不动的相，通常是填充在色谱柱中的固体颗粒，如硅胶、氧化铝等。
固定相的选择取决于需要分离的混合物的性质和实验目的。
2. 流动相：流动相是柱色谱中移动的相，通常是液体或气体。
流动相的选择取决于固定相的性质和需要分离的混合物的性质。
3. 分配系数：分配系数是指一个组分在固定相和流动相之间分配达到平衡时的浓度比值。
分配系数越大，说明该组分在固定相中的浓度越高，移动速度越慢。
二、柱色谱的分离过程1. 装柱：将固定相填充到色谱柱中，形成固定相层。
2. 加样：将混合物样品加入色谱柱中，样品在固定相和流动相之间分配。
3. 洗脱：用流动相冲洗色谱柱，流动相带着样品中的各组分在固定相中移动。
4. 分离：由于各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，因此在流动相的作用下，各组分在固定相中的移动速度不同，从而实现分离。
5. 收集：将分离后的各组分分别收集，得到纯净的组分。
三、柱色谱的分类1. 吸附柱色谱：吸附柱色谱是利用固定相的吸附作用来实现混合物中各组分的分离。
固定相通常是具有吸附性的固体颗粒，如硅胶、氧化铝等。
流动相的选择取决于固定相的性质和需要分离的混合物的性质。
2. 分配柱色谱：分配柱色谱是利用固定相和流动相之间的分配作用来实现混合物中各组分的分离。
固定相通常是具有溶解性的固体颗粒，如离子交换树脂、凝胶等。
流动相的选择取决于固定相的性质和需要分离的混合物的性质。
3. 离子交换柱色谱：离子交换柱色谱是利用固定相的离子交换作用来实现混合物中各组分的分离。
固定相通常是具有离子交换性的固体颗粒，如离子交换树脂等。
请你总结柱色谱的操作步骤及注意事项
请你总结柱色谱的操作步骤及注意事项
柱色谱是常用的分离和分析技术之一，通常有以下操作步骤及注意事项：
操作步骤：
1. 样品制备：将需要分离的混合物溶解或悬浮在合适的溶剂中，经过过滤或离心等处理，得到样品溶液。
2. 填充柱料：将柱料填充到柱中，常用的柱料有硅胶、脱脂棉、高效液相色谱柱等。
3. 平衡柱料：用适当的溶剂通过柱料进行平衡，以保证柱料内部的平衡状态。
4. 装样：将样品溶液使用适当的方法（如注射器）装载到柱中。
5. 洗脱：通过柱料添加适当的洗脱剂，将混合物中的目标成分逐一洗脱出来。
6. 收集洗脱液：将洗脱液逐一收集到相应的集样器中，可以根据需要选择收集不同时间段或体积段的洗脱液。
7. 分析：对收集的洗脱液进行后续的分析，如测量吸光度、进行色谱质谱分析等。
注意事项：
1. 柱料的选择：根据样品特性选择合适的柱料，以保证分离效果。
2. 柱料的平衡：进行柱色谱操作前，要确保柱内的柱料处于平衡状态，以获得稳定的分离结果。
3. 柱色谱条件的控制：调整洗脱剂的流速、浓度等条件，可以影响分离效果和分离时间。
4. 样品的预处理：对样品进行合适的预处理，如过滤、离心、
浓缩等，以避免堵塞柱料。
5. 柱的保养与维护：定期对柱进行保养和维护，如洗涤、再生、更换等，以保证柱的使用寿命和分离效果。
6. 操作的环境控制：在操作过程中，注意保持干净的工作台和无尘环境，以避免杂质的干扰。
经典液相色谱分析技术—经典柱色谱技术
三、分离原理
❖ 阳离子交换树脂 RSO3 - H + ＋Na+ 交→换
RSO3 -Na + ＋H+
❖ 阴离子交换树脂 RN+（CH3）3OH - ＋Cl-
交换
→ RN+（CH3）3Cl - ＋OH-
用离子交换树脂分离不同离子时，样品组分离子与流动相离子在 树脂上产生竞争交换，交换能力弱的离子易被流动相洗脱，交换能力强 的后被洗脱，从而使样品组分达到分离的效果。
磺酸基（-SO3H） 磷酸基（-PO3H2） 羧酸基（-COOH）
酚羟基（-OH）
阴离子交换剂：强碱型和弱碱型
可电离的基团
伯胺基（-NH2） 仲胺基（-NHCH3 ） 叔胺基（-N(CH3)2） 季胺基（-N+(CH3) 3 ）
仪器分析技术
2、离子交换树脂的特性
二乙烯苯
1）重量交联度：树脂中所含交联剂的百分率。
二、离子交换树脂及其性能
离子交换树脂是具有网状结构的复杂的有机高分子聚 合物。网状结构的骨架部分一般很稳定，不溶于酸、碱和一 般溶剂。在网状结构的骨架上有许多可被交换的活性基团。
离子交换树脂
仪器分析技术
1、离子交换剂的分类 根据活性基团的不同、离子交换树脂可分为：
阳离子交换剂：强酸型和弱酸型
可电离的基团
的流动相； ➢ 3）柱顶部链接一个漏斗，在搅拌下缓慢均匀连续地加入凝胶悬浮液，
同时打开柱的出口，维持适当流速，使凝胶颗粒水平沉积到所需高度； ➢ 4）拆除漏斗，用滤纸片盖住凝胶床表面，再用大量洗脱剂将凝胶床洗
涤一段时间。
仪器分析技术
3、加样
• 用流动相平横处理； • 样品过滤或离心； • 打开色谱柱活塞，让流动相与凝胶床刚好
柱色谱的组装及使用步骤
柱色谱的组装及使用步骤
柱色谱是一种常用的分离与纯化技术，其组装与使用步骤如下：
组装步骤：
1. 准备柱：将柱底塞子放置在柱底上，然后把柱管放入柱底，确保柱底与柱管之间无漏气。
2. 注入填料：将柱管倾斜，从顶端注入填料，用手轻轻敲击柱管帮助填料均匀分布，直到填料填满柱管。
3. 压实填料：用柱底塞子或适当大小的塞子在填料顶部轻轻压实填料，使填料紧密结合，防止颗粒流失。
使用步骤：
1. 平衡柱：将柱管与流动相连接，调整流速，通过柱底逐渐注入流动相，直到填料被完全浸泡。
这一步称为平衡柱，旨在保证填料表面与流动相充分接触并达到稳定状态。
2. 样品加载：将待分离的混合物样品通过进样口注入柱管顶端，允许样品进入填料中。
注意，样品浓度应适中，以避免柱塞或样品堵塞柱管。
3. 洗脱操作：控制流动相的流速和组成，通过改变流动相的性质或者使用梯度洗脱方法，逐渐洗脱样品中的目标化合物，使其在填料中有选择性地分离出来。
4. 收集分离物：根据洗脱出的目标化合物的时间窗口进行分馏收集，以得到纯净的目标化合物。
5. 柱后处理：将柱管内的填料用适当的溶剂进行再洗，并对填料重复压实，以备下次使用。
需要注意的是，每次使用前都需要检查柱管是否漏气和填料是
否存在杂质，以确保柱色谱系统的正常运行。
同时，观察流出液的吸光度或检测结果，判断柱色谱的分离效果，并根据需要调整柱床、填料和流动相的选择。
柱色谱分离技术
实训操作规程柱色谱分离技术操作规程1．装柱装柱的好坏直接影响分离效率。
装柱之前，先将空柱洗净干燥，然后将柱垂直固定在铁架台上。
如果色谱柱下端没有砂芯横隔，就取一小团脱脂棉，用玻璃棒将其推至柱底，再在上面铺上一层厚0.5~1cm的石英砂，然后进行装柱。
装柱的方法有湿法和干法两种。
①湿法装柱：将吸附剂用洗脱剂中极性最低的洗脱剂调成糊状，在柱内先加入约3/4柱高的洗脱剂，再将调好的吸附剂边敲打柱身边倒入柱中，同时打开柱子的下端活塞，在色谱柱下面放一个干净并干燥的锥形瓶，接收洗脱剂。
当装入的吸附剂有一定的高度时，洗脱剂流下速度变慢，待所用吸附剂全部装完后，用流下来的洗脱剂转移残留的吸附剂，并将柱内壁残留的吸附剂淋洗下来。
在此过程中，应不断敲打色谱柱，以使色谱柱填充均匀并没有气泡。
柱子填充完后，在吸附剂上端覆盖一层约0.5cm厚的石英砂或覆盖一片比柱内径略小的圆形滤纸。
②干法装柱：在色谱柱上端放一个干燥的漏斗，将吸附剂倒入漏斗中，使其成为细流连续地装入柱中，并轻轻敲打色谱柱柱身，使其填充均匀，再加入洗脱剂湿润。
2．加样液体样品可以直接加入到色谱柱中，如浓度低可浓缩后再进行分离。
固体样品应先用少量的溶剂溶解后再加入到柱中。
在加入样品时，应先将柱内洗脱剂排至稍低于石英砂表面后停止排液，用滴管沿柱内壁把样品一次加完。
在加入样品时，应注意滴管尽量向下靠近石英砂表面。
样品加完后，打开下旋塞，使液体样品进入石英砂层后，再加入少量的洗脱剂将壁上的样品洗脱下来，待这部分液体的液面和吸附剂表面相齐时，即可打开安置在柱上装有洗脱剂的滴液漏斗的活塞，加入洗脱剂，进行洗脱。
3．洗脱在洗脱过程中，样品在柱内的下移速度不能太快，如果溶剂流速较慢，则样品在柱中保留的时间长，各组分在固定相和流动相之间能得到充分的吸附或分配作用，从而使混合物，尤其是结构、性质相似的组分得以分离。
但样品在柱内的下移速度也不能太慢(甚至过夜)，因为吸附剂表面活性较大，时间太长有时可能造成某些成分被破坏，使色谱带扩散，影响分离效果。
柱色谱PPT课件
吸附色谱三要素－洗脱剂
极性 小
大
溶剂组合
己烷－苯 苯－乙醚 苯－乙酸已酯 氯仿－乙酸已酯 氯仿－甲醇 丙酮－水 甲醇－水
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吸附色谱三要素－洗脱剂
层析时，如被分离的物质含有羧基或氨 基等极性强的官能团，容易发生色带扩散和 拖尾现象，为了防止这种现象达到有效分离: ❖ 在分离含有羧基的试样时，可加少量的醋 酸； ❖在分离含有氨基试样时，可加少量的氨水、 吡啶、二已胺等溶剂，以控制它们的解离， 消除拖尾，提高层析效能。
溶于层析时所用的溶剂中； 2）能保持一定量的固定相，并使流动相能自由通过，
并不改变其组成； 3）保持固定相的量应尽量多，最好能达到支持剂重
量的50％以上。
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分配色谱三要素-支持剂和固定相
❖ 纤维素：含水量可达25％，层析用纤维素可分两 种，即天然纤维素和微晶纤维素。纤维素上有许 多羟基，易与水形成氢键而将水吸附，这种吸附 着的水分形成分配柱层析中的固定相。
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分配色谱三要素-洗脱剂
2 溶剂（洗脱剂） 一般是根据分配层析所使用的固定相和欲分
离化合物的性质来选择溶剂。在分配层析中通常 是用水为固定相，选用与水不混溶的溶剂作为流 动相。
在实际操作中多用混合溶剂作为洗脱剂，使 用时可调整溶剂系统的组成和各组分的比例，以 获得理想的溶剂系统，并加入醋酸、氨水等弱酸、 弱碱，以防止某些被分离组分的离解。
干法装柱 将吸附剂通过漏斗形成细流，慢慢加入柱内， 同时不断敲打使之均匀。 打开下端活塞，从上端倒入洗脱剂冲柱，以排 出柱内气泡，并保留一定液面
湿法装柱
在柱中装入最初要用的洗脱剂，再倒入吸附剂， 同时打开下端活塞，使洗脱剂带动吸附剂沉降 到柱下端至完全，在吸附剂上面加少许棉花或 小片滤纸。
柱色谱的原理
柱色谱的原理柱色谱是一种广泛应用于化学分析领域的分离技术，它基于不同物质在固定相和流动相作用下的分配行为，实现了对混合物中成分的分离和检测。
柱色谱的原理主要包括样品的进样、分离、检测和数据处理等步骤。
首先，样品的进样是柱色谱分析的第一步。
样品通过进样装置被引入柱色谱系统中，然后被注入到固定相填充的柱子中。
在柱子中，样品成分会根据其与固定相的亲和力不同而被分离开来。
接着，样品成分在流动相的作用下逐渐移动，从而完成了分离的过程。
其次，分离是柱色谱的核心原理。
在柱色谱中，固定相起到分离作用，它可以是液相或固相。
当样品在固定相中移动时，不同成分会在固定相中停留的时间不同，从而实现了分离。
这种分离是基于样品成分与固定相之间相互作用力的差异，包括吸附、分配、离子交换等机制。
接下来，检测是柱色谱的另一个重要原理。
在柱色谱分析中，检测器会对分离后的物质进行检测，并将检测信号转化为电信号输出。
常用的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
通过检测器的检测，可以得到样品中各个成分的浓度和峰面积等信息。
最后，数据处理是柱色谱分析的最后一步。
通过对检测到的信号进行处理和分析，可以得到样品中各个成分的含量和相对分布情况。
数据处理包括信号的放大、滤波、积分等操作，最终得到的数据可以用于定量分析和质量控制。
综上所述，柱色谱的原理是基于样品成分在固定相和流动相作用下的分配行为实现分离和检测。
通过进样、分离、检测和数据处理等步骤，可以对样品中的成分进行分析和检测，为化学分析提供了重要的手段和方法。
柱色谱技术在生物化学、环境监测、药物分析等领域有着广泛的应用，为科学研究和工业生产提供了有力的支持。
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5.2 吸附色谱(adsorption chromatography)
固定相为吸附剂的柱色谱法称为吸附柱色谱法。 5.2.1原理： 1、吸附是利用吸附剂对液体或气体中某 一组分具有选择性吸附的能力，使其富 集在吸附剂表面的过程。 利用溶质与吸附剂之间的分子吸附力(范 德华力，包括色散力、诱导力、定向力 以及氢键)的差异而实现分离 吸附剂由载体和配位体组成。
5.2.2常用吸附剂
5.2.2.1对吸附剂的要求 吸附剂的表面积、含水量、颗粒大小等 都对分离效果有一定的影响，因此对吸 附剂有如下要求： ①表面积，每克吸附剂有200-800m2表面 积，其线性容量较大，有一定的吸附能 力； ②含水量，吸附剂含水量小，吸附能力 强。因此水通常作为极性吸附剂的减活 剂；
（1）被测物质的结构、极性与吸附力 物质的结构不同，其极性也不同，在吸 附剂表面的吸附力也不同。 常见化合物的极性（吸附能力）有下列 顺序： 烷烃 <烯烃 <醚 <硝基化合物 <二甲胺 < 酯 <酮 <醛 <胺 <酰胺 <醇 <酚 <羧酸
（2）流动相的极性
流动相的洗脱能力主要是由其极性决定，强极 性流动相占据吸附中心的能力强，其洗脱能力 强，使组分的k值小，保留时间短。 常用溶剂的极性（洗脱能力）的顺序大体是： 石油醚 <环己烷 <二硫化碳 <三氯乙烷 <苯 <甲 苯 <二氯甲烷 <氯仿 <乙醚 <乙酸乙酯 <丙酮 < 正丁醇 <乙醇 <甲醇 <吡啶 <酸
附剂上的吸附系数或吸附能力差别 而分离；
（2）、分配色谱：利用样品组分在
固定相与流动相中的溶解度不同， 所造成的分配系数差别而分离；
（3）、离子交换色谱：利用样品离
子与固定相的可交换离子的交换能 力或交换系数的差别而分离；
大小与凝胶的孔径间的关系即渗透 系数差别而分离；
（4）、凝胶色谱：利用样品的分子
（3）吸附剂和流动相的选择原则
以硅胶或氧化铝为吸附剂的柱色谱分离极性较 强的物质时，一般选用活性较低的吸附剂和极 性较强的流动相，使组分能在适宜的分析时间 内被洗脱和分离。 如果被分离的物质极性较弱，则宜选用活性较 高的吸附剂和极性较弱的流动相，使组分有足 够的保留时间。 以聚酰胺为吸附剂时，通常用水溶液作流动相， 如不同配比的醇-水、丙酮-水及二甲基甲酰胺氨水等溶液。
色谱图是色谱分离的重要理论依据，色谱 图可以给我们提供如下的重要信息： ⑴根据峰的多少可以判断样品是否为纯化 合物。出现多少个峰起码就有多少个这 些峰所代表的组分。 ⑵说明分离情况，评价色谱柱对性质相 近组分的分离度，亦即分辨率。峰之间 分得越开，分离情况就越好。 ⑶提供组分出现的时间和体积数据。根 据这些数据可对组分进行适当地收集和 分离。 ⑷根据峰高和峰面积进行定量计算。
硅胶作为吸附剂有较大的吸附容量，分 离范围广，能用于极性和非极性化合物 的分离，如有机酸、挥发油、黄酮、氨 基酸、皂甙等。
氧化铝：适宜分离植物中的碱性成分如 生物碱。
5.2.3流动相及其选择
流动相的洗脱作用实质上是流动相分子与被分 离组分分子竞争占据吸附剂表面活性吸附中心 的过程。 强极性的流动相分子因占据极性中心的能力强， 而具有强的洗脱作用； 非极性的流动相分子竞争占据吸附活性中心的 能力弱，洗脱作用就弱。 因此，为了使样品中吸附能力稍有差异的各组 分得到分离，就必须根据样品的性质、吸附剂 的活性选择适当极性的流动相。
俄国植物学家
茨维特在1903 年使用的色谱 原型装置如图。
2、什么是色谱技术（分配色谱）
概念：色谱分离技术是利用混合液中各种 组分之间的理化性质差别，在固定相和流 动相中具有不同的平衡分配系数（或溶解 度），当两相作相对运动时，不同的组分 在两相中被反复多次地分配，形成特有的 区段，从而得到分离。
5.2.5吸附色谱的操作程序
吸附色谱法的操作方式有薄层色谱和柱 色谱法。 薄层色谱是将吸附剂均匀铺在玻璃上， 把待分离的样品点在薄层上，然后用合 适的溶剂展开而达到分离、鉴定和定量 的目的。
吸附色谱的柱色谱法是将分离样品均匀 加入到装有吸附剂填料的柱子内，再以 适当的洗脱剂洗脱以达到不同组分的分 离。具体如下：
简单的说，色谱技术是在特定的色谱柱 当中，利用不同物质与固定相的亲和力 差异而实现分离的一组技术。其优点是 分辨率高，是生化产品纯化、分析的重 要手段，这一切均源于其特殊的分离模 式，即塔板理论
3、色谱分离方法的分类
◆按机理分，常用于生物大分子分离的色 谱方法有以下几种：
（1）、吸附色谱:利用样品组分在吸
③吸附剂与流动相（样品）不发生化学 反应； ④吸附剂颗粒直径适宜，一般吸附剂的 粒径为100-200目或200-300目。 吸附剂通常应具备以下特征：对被分离 的物质具有较强的吸附能力、有较高的 吸附选择性、机械强度高、再生容易、 性能稳定、价格低廉。
5.2.2.2常用吸附剂种类
1、活性炭： 含碳原料经碳化和活化后便成为活性炭。 是一类具有吸附性能的碳基物质的总称， 具有多孔结构和很大的比表面。 活性炭性能稳定，抗腐蚀，常用于食品 工业的脱色、脱臭、净化，也用于环境 保护中的三废处理等。
色谱技术是一组相关分离方法的总称， 色谱柱的一般结构含有固定相（多孔介 质）和流动相，根据物质在两相间的分 配行为不同（由于亲和力差异），经过 多次分配（吸附-解吸-吸附-解吸…）， 达到分离的目的。
其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相 的流体（气体或液体），称为流动相。
a.是非极性吸附剂，因此对非极性溶质在 水中吸附能力大于有机溶剂中的吸附能 力。 b.当（洗脱）溶剂的极性降低时，则活 性炭对非极性溶质的吸附能力随之减弱； c.从活性炭柱上洗脱被吸附物质时，溶剂 的洗脱能力将随溶剂极性的降低而增强。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
2、硅胶
是一种坚硬、多孔结构的固体颗粒，分子 式为SiO2.H2O, 制备时用硫酸处理硅酸钠 水溶液使之生成凝胶，经水洗、除硫酸后 干燥即为硅胶。 硅胶易吸附极性物质（水、甲醇等），而 难于吸附非极性物质。
当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与 固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在 性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作 用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动， 混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使 得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一 定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方 法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础。
吸附过程通常包括：待分离料液与吸附 剂混合、吸附质被吸附到吸附剂表面、 料液流出、吸附质解吸回收等四个过程。 吸附柱色谱法吸附过程是样品中各组分 的分子（X）与流动相分子（Y）争夺吸 附剂表面活性中心（即为竞争吸附）的 过程。利用被分离组分在固体表面活性 吸附中心吸附能力的差别而实现分离。
理论塔板数的计算方法：
N---理论塔板数 tR---保留时间 W1/2---半峰宽 Wb---峰底宽度
理论塔板高度：
L为色谱柱的柱长
（4）阻滞因子Rt 阻滞因子是在色谱系统中溶质的移动速 度和标准物（与固定相没有亲和力的流 动相 Kd=0）的迁移率之比
溶质的迁移距离 Rf 流动相在色谱系统中的迁移距离
（3）、色谱柱的理论塔板数、塔板高度
Martin 在1941年提出了色谱的塔板理论， 把色谱柱比作蒸馏塔。虽这一理论没有揭 示出色谱过程的本质，却形象地描绘了色 谱过程的主要特征，并给出了衡量色谱柱 效率的指标--理论塔板数、塔板高度。
它们反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布 以及分离度与柱高之间的关系
Chapter 5 色谱技术 Chromatography
通过本章学习应能够回答以下问题
什么是色谱分离技术？ 色谱分离技术的分类？ 什么是色谱柱的理论塔板数以及如何计 算理论塔板数？ 什么是吸附色谱及其分类和基本原理？ 什么是分配色谱？
离子交换色谱的分类及应用 凝胶色谱的分离原理及分类 离子交换及疏水作用层析的原理 高效液相色谱的分离原理及应用？ 蛋白质分离的常用色谱方法有哪些？ 共价色谱的工作原理？
色谱分离的基本概念
分配系数 可由Langmuir方程得出
Kd---分配系数 q、c---溶质在固相和液相中的浓度
（2）、保留时间（tR）和保留体积
（VR）：
保留时间（tR）：从进样开始到柱后出现样品 的浓度极大值所需的时间为保留时间，用表示。 它与固定相、流动相的性质、柱温、流速、柱 体积等因素有关； 保留体积（VR）：从进样开始到某组分在柱 后出现浓度极大值时流出溶剂的体积，又称洗 脱体积。反映样品在柱子中的保留或阻滞能力， 是色谱过程的基本热力学参数之一
式中，Sa为吸附剂的表面积，Vm为流动 相的体积。吸附系数与吸附剂的活性， 组分的性质和流动相的性质有关。
2、吸附等温线
概念：当温度一定时，吸附量与浓度之 间的函数关系称为吸附等温线。
Langmuir吸附等温 线
qo和K是经验常数， c代表溶液中溶质浓 度 蛋白质分离提纯时 适合此吸附方程。
多个组分流过色谱柱后，形成连续出现 的多处色谱峰，这些色谱峰构成的图形 称为色谱图。
单个组分的色谱图示例见下图，
①基线，指当没有样品进入检测器时，检测器给出不 变的信号。 ②峰高，即色谱峰的顶点到基线的垂直距离。 ③半峰高度，峰高一半处的宽度。 ④峰底宽，由色谱峰两边拐点做切线，与基线相交， 两交点间的距离即是峰底宽。 ⑤峰面积，即色谱峰曲线所形成的面积。