沙门氏菌国标检测方法
GB 4789.4-2010食品微生物学检验 沙门氏菌检验
食品微生物学检验 沙门氏菌检验GB GB 4789.44789.44789.4-20-20-201010北京陆桥技术有限责任北京陆桥技术有限责任公司公司技术服务电话：010-******** 销售服务电话：010-********技术部邮箱：luqiaotech@www. beijinglandbridge .com北京陆桥技术有限责任公司目 录�沙门氏菌简介�2010版国标主要修订内容�沙门氏菌的检验步骤及注意事项�沙门氏菌检验过程中的常见问题www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司沙门氏菌简介�沙门氏菌属沙门氏菌属：肠杆菌科：肠杆菌科�沙门氏菌能引起胃肠炎、伤寒、败血症等人类疾病，严重时能导致死亡。
�种类繁多，抗原结构复杂，种类繁多，抗原结构复杂，在在《ANTIGENIC FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS》》(2007 9th edition)(2007 9th edition)中已公布了中已公布了2579个血清型个血清型。
�食物是人类感染沙门氏菌的主要途径。
www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�形态特征：形态特征：革兰氏阴性革兰氏阴性革兰氏阴性、、两端钝圆短杆菌两端钝圆短杆菌，，无芽孢无芽孢，，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和和雏沙门氏菌外，都有周身鞭毛，运动力强�培养特性：需氧或兼性厌氧，10℃~42℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH 为6.8~7.8�革兰氏阴性、需氧或兼性厌氧无芽孢杆菌沙门氏菌简介：生物学特征www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�修改了标准的中英文名称�修改了标准的范围�修改了培养基和试剂；�修改了设备和材料；�修改了附录修改了附录A A （规范性附录）培养基和试剂2010版国标主要修订内容www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司——关于培养基和试剂的修订说明�修改了修改了HE HE HE琼脂和三糖铁琼脂的配方。
沙门氏菌检验
沙门氏菌检验程序
36 ℃±1 ℃，18 h～24 h XLD（或HE、科玛嘉显色培养基） 36 ℃±1 ℃，18 h～24 h
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA， 靛基质， 尿素 (pH 7.2)， KCN H2S+靛基质- 尿素KCN- 赖氨酸+ H2S+ 靛基质 + 尿 素- KCN-赖氨酸+ H2S-靛基质-尿素 -KCN- 赖氨酸+/-
食品卫生微生物学检验（GB/T4789.4）
吉林省疾病预防控制中心
刘桂华
1 前增菌； 2选择性增菌；
3 分离；
4 生化鉴定；
5. 血清学鉴定；
6.报告。
1 2 3 4 5
前增菌 选择性增菌 分离 鉴定 报告
检样 25g（mL）样品+225 mLBPW 36 ℃±1 ℃，8 h～18h 1 mL+TTB 10 mL 42 ℃±1 ℃，18 h～24 h BS 36 ℃±1 ℃，40 h～48 h 1 mL+SC10 mL
河生肠杆菌20E鉴定结果
应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测试，卡片含 有干燥的抗菌药物和生化基质。先制备一定浓度的欲鉴定菌
株的菌悬液，然后将菌悬液接种到各种细菌的小卡上，将其
放入具有读数功能的孵箱内，每隔一定时间，仪器会自动检 测培养基的发酵情况，并换算成能被计算机所接受的生物编
码。最后由计算机判定，打印出鉴定结果。
I-BS
C-HE
I-HE
I-XLD
C-XLD（变形菌落-错误）
样品+BPW+SC+BS
I-BS
C-BS
C-BS
I-BS
I-BS
C-BS
食品沙门氏菌检测
食品沙门氏菌检测沙门氏菌为肠道细菌科，即引发食物中毒细菌。
根据既有研究结果表明，因沙门氏菌导致的食物中毒病例占比较高，所以对食品中沙门氏菌检测的重要性逐渐突显出来，并且备受关注。
而对食品沙门氏菌的检测需从多个角度展开分析，以解决食品安全问题。
1 沙门氏菌有哪些生物学特性？沙门氏菌会对人和动物的健康带来严重危害，是十分常见的致病菌。
此病菌的型别诸多且抗原复杂，其对于外界环境的抵抗性较为明显，而且能够在食品中存活较长时间，在粪便内的存活时间达到1-10个月之久。
沙门氏菌的传播路径一般包括肉产品、禽和蛋等，在身体状况的基础上，还和菌株血清型存在一定关联，会严重危害老人与孩童，或者是免疫有缺陷的人。
所以说，有必要对容易被污染的食品进行分类型地管理，以免沙门氏菌对我们的身体健康造成负面影响。
2 检测沙门氏菌的国标方法如何？现阶段，根据国家规定对沙门氏菌进行检测的方法被称作是国标方法。
而这种检测方法的步骤较为繁杂，需经过增菌→增菌→分离→生化试验→血清学检定等多个环节完成。
正是因为国标检测沙门氏菌的程序复杂，所以需要耗费较多的时间与精力，一般在4-7天之间才能够获得所要的检测结果。
3 采用分子生物学方法检测沙门氏菌第一种，扩增片段长度多态性技术的应用。
这种对沙门氏菌进行检测的技术相对便利且快速，可以获得稳定且可靠性较高的结果，因而在检测微生物方面的应用较为常见。
在众多研究中，针对沙门氏菌株展开了扩增片段长度多态性指纹分析，并了解到血清型的差异所获得的扩增片段长度多态性指纹图也有所差异，具有较高的分辨率，进而对不同的菌株进行有效地区分。
第二种，聚合酶连反应技术的应用。
聚合酶连反应技术本身敏感性与特异性较为突出，且应用十分便捷，同样被使用在检测微生物方面。
大部分研究者通过对聚合酶连反应技术的合理运用，开展了沙门氏菌的检测工作。
在对聚合酶连反应技术进行应用的过程中，对食品中的沙门氏菌进行检测，在和增强化学发光反应相互结合的基础上，即可实现交杂扩增产物的目的，最终实现了检测方法的成功研发。
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准主要包括以下步骤：
1.样品采集：从待检测的食品中采集适量样品，确保样品的代表性。
2.样品处理：将采集的样品进行适当处理，如破碎、研磨等，以便后续的
检测操作。
3.增菌培养：将处理后的样品接种到选择性培养基中，进行增菌培养。
选
择性培养基可以抑制其他微生物的生长，促进沙门氏菌的增殖。
4.分离培养：将增菌培养后的样品划线接种到鉴别培养基上，进行分离培
养。
鉴别培养基可以进一步筛选出沙门氏菌，并对其进行鉴别。
5.生化鉴定：对分离培养得到的沙门氏菌进行生化鉴定，以确定其是否为
沙门氏菌。
常用的生化鉴定方法包括API 20E、三糖铁试验等。
6.血清学鉴定：对生化鉴定为沙门氏菌的菌株进行血清学鉴定，以确定其
具体血清型。
常用的血清学鉴定方法包括玻片凝集试验、试管凝集试验等。
7.药敏试验：对分离得到的沙门氏菌进行药敏试验，以确定其对不同药物
的敏感性，为临床治疗提供参考。
需要注意的是，食品沙门氏菌测试方法标准可能因不同国家和地区而有所差异。
因此，在实际操作中，应根据当地的标准和法规进行相应的调整和操作。
食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验
沙门氏菌检验程序
1 取消样品分类，前增菌液统一为“缓冲蛋白胨 水” 原国标：BPW FDA、AOAC：多种前增菌液 ISO：BPW
2 对所有样品均进行8-18h前增菌 原国标只对冻肉、乳品、蛋品等加工食品进 行前增菌，FDA、AOAC、ISO、Canada MFHPB、CCFRA等组织或国家对所有样品都 进行前增菌。
65.3 81.0 52.0 83.2 80.0 83.0 86.2 106.6 77.7 68.4 98.4 71.6 100.0
I： 进口 C：国产
SS琼脂 上面的志 贺氏菌和 沙门氏菌
C-BS
I-BS
C-HE
I-HE
I-XLD
C-XLD（变形菌落-错误）
I-XLD
样品+BPW+SC+BS
DUPONT Qualicon BAX System 应用DNA分子核酸探针或基因探针技 术制造的全自动PCR分析仪。将已知核 苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法 标记，加入已变性的被检DNA样品中， 在一定条件下即可与该样品中有同源序 列的DNA区段形成杂交双链，从而达到 鉴定样品中DNA的目的。
AOAC 967.25－967.28
处理样品 35℃ 1mL+10mLSC 35℃ 24±2h XLD & HE & BS 35℃ TSI 35℃ 纯培养物 尿素酶＋ 非沙门菌 尿素酶－ 24±2h（BS 24h&48h） & LIA 24±2h 不纯培养物 MAC or XLD or HE 纯培养物 非 沙 门 菌 非 沙 门 菌 24±2h 1mL+10mLTT
35± 1℃ 18~24h & 48h TSI & LIA 血清学试验
沙门氏菌检测的三种方法比对的结果与讨论
沙门氏菌检测的三种方法比对的结果与讨论
梁先龙 代真真 白莉敏 戚修欢(安徽中青检验检测有次能力验证再次确认实验室检测能力；探 求快速、灵敏、可靠的食品中沙门氏菌的检测方法。方法：采用 沙门氏菌的国标方法、PetrifilmTM 测试纸片法和 VIDAS 免疫法 的定性研究。结果：编号为 CODE 2 和 CODE4 的样品为阳性 结果，其余四个样品均未检出。结论：3 种方法检测沙门氏菌均 取得满意结果；进一步确认了本实验室对本实验的能力；Petri⁃ filmTM 测试纸片法，简单，方便准确率高，在食品检测中应用中 值得推广。
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2018 年 09 月
质量与检测
1.5.3.3 接种与判读:使用无菌接种环(直径 3mm 左右)蘸取每
份样品，打开测试片并快速移动到凝胶上，进行一步划线。将
上层薄膜放下遮住测试片。然后去气泡。在 41.5 C 的田建霞培
养 24h. 将测试片的有色面朝上，最多可叠加 20 个测试片。取出
测试片进行判读，测试片上带黄色圈或有气泡或以上两者都有
ClassⅡBSC 生物安全柜 (中国海尔)、高压灭菌锅(上海博 讯)、生 化 培 养 箱 ( 上 海 博 讯)、、生 物 显 微 镜 、移 液 器（Eppen⁃ dorf）。 1.5 方法
三 种 方 法 ：国 标 方 法 、PetrifilmTM 测 试 纸 片 法 和 酶 标 免 疫法
样品前处理根据 GB4789.4-2016《食品微生物学检验 沙门
氏菌检验》和安徽省食品安全检验机构提供的作业指导书进行 检测。
1.5.1 国标方法 1.5.1.1 前增菌 吸取 5ml 灭菌 BPW 稀释样品作为原液，吸取 4ml 原液至 36ml 缓冲蛋白胨溶液中,为预防及保证样品的准确性，同时在食 药局发的无菌离心管中加入 9ml 缓冲蛋白胨水，漩涡振荡均 匀, 放入生化培养箱中 36℃培养 18 h。取标准菌株肠炎沙门氏 菌 CICC21482 和伤寒沙门氏菌 ATCC14028 一环接种于 10m L 灭菌的 BPW 增菌液同步培养，作为阳性对照。 1.5.1.2 选择性增菌 前增菌样液用移液枪轻吹打均匀，取其增菌液 1 m L 于 10 m L SC 增菌液中,36℃培养 24 h, 同时另取 1 m L 于 10 m L TTB 增菌液中,42℃培养 24 h。 1.5.1.3 选择性分离 取增菌液 1 环, 用接种环分别划线于沙门氏菌属显色平板、 XLD 平板和 BS 平板。XLD 琼脂平板和沙门显色培养基平板 36℃培养 24 h，而 BS 琼脂平板于 36℃培养 48 h, 培养至上述时 间后观察各平板上是否有可疑沙门氏菌属菌落。 1.5.1.4 生化鉴定实验 挑取上述选择性分离中的平板的可疑菌落 2 个或以上, 纯 化至 NA 平板上 36℃培养 18h,而后接种于沙门氏菌干制生化鉴 定盒中进行生化实验。 1.5.1.5 血清学鉴定 将生化实验符合沙门氏菌的菌株做血清凝集实验。采用 玻片凝集法, 在洁净玻片上滴加 1 滴 A-F 群多价 O 抗血清, 用 接种针挑取菌落与血清混合, 并轻碾均匀, 将玻片倾斜摇动混 合 1 min, 观察有无凝集现象, 同时生理盐水作为对照。A-F 群多价 O 抗血清凝集的菌落按 GB 4789.4-2010[2]标准中血清 分型进行 O 抗原的鉴定。将菌落点种于 Swarm 琼脂平板过夜 培养, 取远端菌进行 H 抗原的鉴定。 1.5.2 酶标抗体（ELISA）法
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式沙门氏菌是一种常见的细菌引起的食源性疾病，可能会导致严重的胃肠道感染。
为了保障食品安全，确保公众的健康，我们需要进行沙门氏菌的国标检验。
下面是一份生动、全面且有指导意义的文章，详细介绍了沙门氏菌检验的国标检验步骤和接种方式。
第一步：样品准备在进行沙门氏菌检验之前，我们首先需要准备样品。
常见的样品包括食品、水、动物排泄物等，可能携带沙门氏菌。
样品应该收集自具有代表性的地点，并采取无菌采样容器进行收集。
收集样品时要注意避免污染，并确保样品的数量足够进行检验。
第二步：样品处理样品处理的目的是将潜在的沙门氏菌分离出来，并进行后续的检测。
可以采用不同的方法进行样品处理，常见的方法包括富集培养和选择性培养。
富集培养是将样品放入富集培养基中，利用培养基中的营养物质以及特定条件促使沙门氏菌生长。
选择性培养则是利用培养基中的特殊抑制剂抑制其他细菌的生长，从而使沙门氏菌生长出来。
第三步：菌落鉴定在样品处理后，我们需要对培养基上的菌落进行鉴定，确认是否为沙门氏菌。
常见的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化鉴定和分子生物学鉴定。
形态学鉴定主要通过观察菌落的形状、颜色和大小等特征来判断细菌的种类。
生理生化鉴定则是通过检测菌落对特定物质的代谢情况来确定细菌的种类。
分子生物学鉴定是利用特定的DNA序列来识别沙门氏菌的基因，通常使用PCR技术进行检测。
第四步：抗菌药敏试验沙门氏菌的抗菌药敏性检测是为了确定对何种抗生素具有敏感性。
通过抗菌药敏试验，我们可以选择合适的药物来治疗感染。
可以使用各种常见的抗生素盘进行试验，然后观察沙门氏菌对不同抗生素的反应。
根据抗生素的抑菌效果，可确定沙门氏菌的耐药性情况。
第五步：结果分析与报告最后一步是对检验结果进行分析，并撰写检验报告。
检验结果要结合国家标准进行评估，确定样品是否合格。
如果样品中检测到沙门氏菌，还需要评估其数量以及对公众健康可能造成的风险。
在撰写报告时，需要详细记录样品的来源、处理方法、检验步骤和结果，以及相应的建议和措施。
沙门氏菌鉴定流程
沙门氏菌的检测方式主要包括血常规检查、便常规检查、ELISA法检查等，能够判断疾病的严重程度。
1、血常规检查：感染沙门氏菌时，多数患者的白细胞、中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞计数出现偏低的情况，大儿童的白细胞计数通常出现升高的现象，该项结果可以辅助诊断沙门菌病。
2、便常规检查：感染沙门氏菌以后，部分患者可能会出现黏液样变或血便的情况，通过明确患者急性胃肠炎的症状来辅助诊断沙门菌病。
3、ELISA法检查：检测患者血清中沙门菌抗原、抗体是否出现异常的情况，有助于沙门菌感染的诊断。
除此之外，沙门氏菌的检测方式还包括B超检查、肥达试验等，如果自身的病情比较严重，建议应及时到正规医院的感染病科进行检查并治疗，以免延误病情。
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沙门氏菌国标检测方法
一、样本采集
在采集样本时，应确保采集的样本具有代表性，且无菌操作。
通常采集食品、动物粪便、环境样本等。
对于食品，应采集不同种类，如肉类、禽类、奶制品等。
对于动物粪便，应采集新鲜样本，避免受到污染。
环境样本应采集可能存在沙门氏菌的表面或水样。
二、增菌培养
增菌培养是沙门氏菌检测的重要步骤，目的是增加细菌的数量，使其更容易分离和检测。
常用的增菌培养基有肉汤培养基和缓冲葡萄糖胨水培养基等。
将采集的样本接种到培养基中，在37℃下培养18-24小时。
三、分离培养
将增菌培养后的培养物划线接种于选择性培养基（如SS 琼脂、麦康凯琼脂等）上，在37℃下培养18-24小时。
选择性培养基可以抑制其他细菌的生长，有利于沙门氏菌的分离。
四、初步鉴定
对分离培养得到的单个菌落进行初步鉴定，包括菌落形态、染色特性、镜下形态等观察。
同时进行革兰氏染色和氧化酶试验，以初步判断是否为沙门氏菌。
五、生化试验
生化试验是确定分离菌株是否为沙门氏菌的关键步骤。
常用的生化试验包括赖氨酸脱羧酶试验、尿素试验、靛基质试验等。
根据试验结果，对分离菌株进行初步分类。
六、血清学分型
为了确定分离菌株的具体血清型，需要进行血清学分型。
通过与已知抗血清进行反应，确定细菌的特异性抗原，从而确定其血清型。
血清学分型对于追踪沙门氏菌的来源和传播途径具有重要意义。
七、报告结果
根据以上各步骤的检查结果，综合分析并得出最终结果。
对于疑似沙门氏菌的样本，应进行复核和确认。
最终结
果应以书面形式报告给相关单位或个人，报告应包括样本来源、检测方法、检测结果等内容。
同时，应对检测结果进行解释和说明，提供相应的建议和措施。