[d] [go!]艾灸对慢性内脏痛大鼠镇痛效应的实验研究

［２５１张京英，刘农虞，杨兆民等。

不同灸法、灸量对家兔全血组胺含量的影响及其意义叽．中国针灸，１９９４，（６）：２７—３０【２６１李应存主编《实用敦煌医学》，兰州，甘肃科学技术出版社，２００７：６７—６９［２７】高汉媛，赵耀东，惠建萍等．针刺加铺灸治疗类风湿性关节炎５３例Ⅱ】．甘肃中医学院学报．２００６，２３（１）：１５４－－１５６艾灸对慢性内脏痛大鼠镇痛效应的实验研究吴焕淦，戚莉，马晓茺，刘慧荣（上海中医药大学，上海２０１２０３）摘要：目的观察艾灸干预对慢性内脏痛模型大鼠的镇痛效应及对脊髓内啡肽（ｅｎｄｏｒｐｈｉｎ，ＥＰ）、脑啡肽（ｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ。

ＥＮＫ）含量的影响。

方法采用乳鼠直结肠球囊扩张刺激制备慢性内脏痛大鼠模型。

随机将造模大鼠分为模型组、温和组、假温和灸组，并与正常大鼠作对照。

温和灸组选取双侧天枢、上巨虚穴进行干预．假温和灸组艾灸点燃后倒置于双侧天枢、上巨虚穴。

采用腹部撤回反射（ａｂｄｏｍｉｎａｌｗｉｔｈｄｒａｗｌｒｅｆｌｅｘ。

ＡＷＲ）评分作为检测内脏痛的行为学指标；酶联免疫法（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＡ）检测脊髓（腰４至骶１段）内啡肽、脑啡肽的含量。

结果模型组大鼠在２０、４０、６０和８０ｍｍＨｇ强度刺激下的ＡＷＲ评分均显著高于正常组（Ｐ＜０．０１），脊髓内啡肽、脑啡肽浓度与正常组比较显著降低（Ｐ＜０．０１）；与模型组相比，温和灸组大鼠在２０、４０、６０和８０ｍｍＨｇ强度刺激下的ＡＷＲ评分均显著降低（Ｐ＜０．０１），假温和灸组则无明显改变；与模型组相比，温和灸组大鼠脊髓内啡肽、脑啡肽浓度显著升高（Ｐ＜０．０１），假温和灸组无显著改变。

结论温和灸能提高慢性内脏痛大鼠的痛阈，脊髓内源性阿片肽（内啡肽、脑啡肽）参与了艾灸镇痛的效应机制。

关键词：艾灸镇痛；慢性内脏痛；大鼠；内源性阿片肽；温和灸针刺镇痛的机制研究已引起广泛关注，我国在这一领域一直处于国际领先地位，已从神经生理学、神经化学、分子生物学和脑功能成像等不同角度对针刺镇痛原理进行了系统的研究㈣。

脊髓是针刺镇痛的一个重要环节，内源性阿片肽是针刺镇痛的重要物质基础［６１。

韩济生等１７－９１的研究表明：电针能增加脊髓内啡肽、脑啡肽、孤啡肽、强啡肽等内源性阿片肽的含量，不但能提高机体痛阈，而且能延长针刺镇痛的效应时间。

除内源性阿片肽外，诸多神经活性物质，如Ｐ物质（ｓＰ）ｆｌｏＪ、谷氨酸（Ｇｌｕ）ｔ¨】、ＮＯｔｌ２１、ＮＭＤＡ受体（ＮＲ）ｔ埘、Ｐ２Ｘ受体［－。

】在慢性内脏痛的形成和发展中起着重要的调节作用，与针刺镇痛密切相关。

有研究报道，兴奋性神经胶质细胞可以释放多种神经递质或调质，如ＳＰ、Ｇｌｕ、ＡＴＰ等，胶质细胞作用也存在于慢性内脏痛中，神经胶质细胞通过多种途径和邻近的神经元进行信息交流，共同参与疼痛信息的整合、调控和传递【１５１。

临床上，作为与针刺疗法并驾齐驱的艾灸疗法，对胃肠道疾病，如肠易激综合征㈣、溃疡性结肠炎旧、克隆氏病㈣、急慢性胃炎１１９等，具有良好的临床疗效，尤其是在腹痛的缓解方面，艾灸效应非常明显。

然而艾灸镇痛是否亦具有针刺镇痛的相关机理，鲜有报道。

内脏痛的神经支配与脊髓节段有关，艾灸获得缓解慢性内脏痛的镇痛效应，是否与影响脊髓相应节段镇痛物质的变化有关？本课题组以往研究发现，艾灸能提高慢性内脏痛大鼠的痛阈，具有镇痛效应Ｉｒａ－２１１。

因此，有必要从脊髓镇痛物质角度探讨艾灸缓解慢性内脏痛的作用机制。

本实验根据ＡＬ—ｃｈａｅｒ等【２１Ｊ首创球囊刺激乳鼠直结肠建立慢性内脏痛大鼠模型，以脊髓内啡肽、脑啡肽为研究对象，通过观察温和灸对慢性内脏痛大鼠的镇痛效应及脊髓内啡肽与脑啡肽含量的影响，探讨艾灸疗法的镇痛途径。

１材料与方法１．１实验动物雄性ｓＤ乳鼠（出生后５ｄ），由上海中医药大学实验动物中心提供。

（６窝，每窝７．８只，每窝乳鼠与１雌性哺乳大鼠共同饲养，自由饮食饮水），饲养环境为１２ｈ昼夜节律变换，室温控制在１８～２４。

Ｃ，湿度控制在５０％。

７０％。

３ｄ后用于实验。

随机分为正常组、造模组。

实验时室温维持在２０。

２４ｑＣ。

所有实验对动物的处理符合国际疼痛研究会制定的准则。

１．２实验设计表３温和灸对慢性内脏高敏感性大鼠内啡肽的浓度的影响（因数据离散度较大，所以用中位数，四分位数表示）注：与正常组相比，△Ｐ＜０．Ｏｌ；与模型组相比，‘Ｐ＜０．０１２．３温和灸对慢性内脏痛大鼠脊髓脑啡肽浓度的影响（表４）各组大鼠脊髓脑啡肽浓度经方差分析，Ｆ＝２５．１７２，Ｐ＝０．０００，各组差异具有统计学意义（Ｐ＜ｏ．０１）。

组间比较显示，模型组大鼠脊髓脑啡肽浓度低于正常组，差异具有统计学意义（砖ｏ．０００，Ｐ＜０．０１）。

经温和灸干预后，大鼠脊髓脑啡肽浓度明显增加（Ｐ＝０．００１，Ｐ＜０．０１）。

假温和灸组大鼠脊髓脑啡肽与模型组相比没有明显变化。

表４温和灸对慢性内脏痛大鼠脊髓脑啡肽浓度的影响注：与正常组相比，△Ｐ＜Ｏ．０１；与模型组相比，４Ｐ＜０．０ｌ３讨论内脏痛（ｖｉｓｃｅｒａｌｐａｉｎ）指一类发生在内脏器官的疼痛，是临床上极为常见的症状，给人类带来了巨大的身心痛苦和沉重的经济负担。

内脏痛是多数功能性肠紊乱患者都会有的特征。

Ｍｅｔｒｚ等∞认为直肠感觉的改变可能是肠易激综合征（ｉｒｒｉｔａｂｌｅｂｏｗｅｌｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＩＢＳ）的生物学标志。

慢性腹痛是ＩＢＳ患者最常见的症状，缓解患者的腹痛是临床治疗的主要目的。

灸法是借灸火的热力给人体以温热性刺激，通过经络腧穴的作用，以达到治病、防病目的的一种治疗方法例。

艾灸镇痛在中医学中已有数千年的历史，并且直到现在仍活跃应用于临床实践。

临床上灸法常用于治疗各种痛症，如原发性痛经嘞、偏头痛㈣、膝关节骨性关节炎｜２７－篮１、类风湿性关节炎冽、癌性疼痛【孵等。

在本次实验中，我们成功制备慢性内脏痛大鼠模型，以ＡＷＲ评分作为检测内脏痛的行为学指标。

结果示：模型组大鼠在２０、４０、６０和８０ｍｍＨｇ压力刺激下的ＡＷＲ评分显著高于正常组（Ｐ＜０．０１）；在给予温和灸干预后，各强度压力刺激下ＡＷＲ评分均显著降低（Ｐ＜Ｏ．０１）；假温和灸组则无明显改变，提示温和灸能有效降低慢性内脏痛大鼠异常升高的痛阈，具有镇痛效应。

本课题组以往采用相同内脏痛模型对艾灸的研究发现畔１１：隔药灸和温和灸均可以显著降低慢性内脏痛大鼠的ＡＷＲ评分，与本次实验结果相一致。

此外，前期实验中田ｌ还发现艾灸可调节脊髓５－ＨＴ的表达，提示了艾灸的镇痛作用可能与中枢神经机制有关。

大鼠在施灸过程中会保持安静，不会挣扎，似乎在熟睡。

这提示：灸法可能不但通过５－ＨＴ途径起到缓解慢性内脏痛的作用，还有可能通过内源性镇痛物质而起作用。

内源性阿片肽是内源性镇痛物质之一，是针刺镇痛的物质基础。

中枢内阿片肽对各种性质的疼痛有明显的镇痛作用。

本次实验结果示：模型组大鼠脊髓内啡肽、脑啡肽浓度显著低于正常组（Ｐ＜０．０１）；温和灸组大鼠脊髓内啡肽、脑啡肽浓度显著较高（Ｐ＜０．０１）；假温和灸组无显著改变，提示脊髓内源性阿片肽（内啡肽、脑啡肽）参与艾灸调控内脏痛觉信息传递过程。

艾灸镇痛是一种多通路，多水平的综合过程。

脊髓是艾灸刺激和痛觉信号的初级整合中枢，脊髓背角内存在躯体一内脏汇聚投射神经元，躯体初级传人纤维和内脏初级传人纤维汇聚脊髓背角的Ｉ、Ⅱ层［３１ｌ。

我们认为，艾灸信号和内脏伤害性传入信号在脊髓水平发生互相汇聚和相互作用，脊髓相应节段镇痛物质含量升高，使脊髓内发生节段抑制（包括突触后抑制和突触前抑制），影响痛觉信号进一步向上传递。

多种神经递质在脊髓水平参与了慢性内脏痛的调控。

ＡＴＰ是一种细胞间信息传递物质，通过激活Ｐ２嘌呤受体（Ｐ２Ｘ和Ｐ２Ｙ）实现信息传递功能，从而产生广泛的生物学效应【３２】。

已有多项研究表明，Ｐ２Ｘ受体（特别是Ｐ２Ｘ２、Ｐ２Ｘ３受体）在外周和中枢参与了伤害性信息的传导和调制１３３－３４］。

ＡＴＰ通过Ｐ２Ｘ和Ｐ２Ｙ受体在内脏痛觉信号转导起到重要调节作用。

ＸｕＧＹ等∞的研究显示，结肠相关背角神经元Ｐ２Ｘ受体在ＩＢＳ慢性内脏痛的维持中发挥重要作用。

Ｐ２Ｘ参与慢性内脏痛的形成与辣椒素受体（Ｖａｎｉｌｌｏｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒｌ，ＶＲｌ）有关。

ＲｏｂｉｎｓｏｎＤＲ等［ｓ６１对ＩＢＳ内脏痛机制的研究中，ＤＲＧ逆行标记细胞存在Ｐ２Ｘ３表达和Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ—ｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ（ＣＧＲＰ）、ＶＲｌ表达。

ＶＲｌ是一类表达在感觉神经末梢上的受体，同时也是一个配体门控的非选择性阳离子通道，属于瞬时感受器电位通道（ｔｒａｎｓｉｅｎｔｒｅｃｅｐｔｏｒｐｏｔｅｎｔｉａｌｃｈａｎｎｅｌ，ＴＲＰｃｈａｎｎｅｌ）家族，又称ＴＲＰＶｌ，它参与机体对刺激的感知、疼痛和镇痛机制，在慢性内脏痛中发挥有重要作用１３７１。

研究证实，除Ｐ２Ｘ受体外，ＡＴＰ参与内脏感觉的转导和传递还可能通过Ｐ２Ｙ受体来完成。

肠内刺激信号通过其相应受体经初级脊神经传人神经元进行传导，致疼痛性结肠扩张能引起ｃ—ｆｏｓ原癌基因在脊髓背角神经元和特殊脑部结构中表达１３ｓ—ｏｌ。

Ｃ—ｆｏｓ是内脏接受刺激后中枢神经系统激活的标志。

我们的以往研究显示与正常组比较，内脏高敏感ＩＢＳ大鼠ｃ—ｆｏｓ的表达在脊髓和大脑中显著提高，电针可以显著降低ｃ—ｆｏｓ原癌基因在脊髓和大脑中的表达ｆ４ｌｌ。

新近的一些研究也提示Ｐ２Ｘ、Ｐ２Ｙ表达异常可引起中枢ｃ—ｆｏｓ表达改变１４２删。

鉴于神经元与神经胶质细胞在结构与功能上的紧密联系，有学者㈣提出神经元一胶质细胞复合体（Ｎｅｕｒｏｎ—Ａｓｔｒｏｃｙｔｅｃｏｍｐｌｅｘｓ，Ｎ—ＡＣｓ）的概念，将神经元一胶质细胞作为一个功能性的整体引入到针刺镇痛机制的研究中，这对疼痛信号传导和针刺镇痛机制的研究具有突破性意义。

Ｐ２Ｘ受体通路，Ｐ２Ｙ受体通路和ＮＭＤＡ受体通路是否参与了艾灸镇痛的分子机制？“Ｎ—ＡＣｓ”对慢性内脏痛以及艾灸镇痛有何反应？有待于进一步的实验研究。

综上，温和灸能提高慢性内脏痛大鼠的痛阈，并且这种效应与增加脊髓相应节段内源性阿片肽（内啡肽、脑啡肽）含量有关。

４展望目前，艾灸疗法的临床优势已表现出来，艾灸治疗内脏痛是一种较为理想的手段，并且还兼有从整体上调节机体各种生理功能的作用，艾灸镇痛必有广阔的临床应用前景。

本课题组以往研究显示针灸缓解慢性内脏痛具有可靠的临床疗效｜４５】；电针能够调节慢性内脏痛大鼠异常升高的ＣＲＨ、５一ＨＴ、ＳＰ、ＶＩＰ、Ｃ—ｆｏｓ等的表达，发挥针刺镇痛的作用［４６１；ＰＥＴ脑成像技术显示电针可以降低ＩＢＳ患者扣带回等内脏感觉中心的葡萄糖代谢率，可能通过在脊髓层面抑制内脏疼痛信息的上传、在丘脑层面通过整合内脏疼痛信息，抑制内脏感觉信息的上传，缓解腹痛等症状吲。