分子发光分析试卷概述
武汉大学《分析化学》(第5版)(下册)名校考研真题(分子发光分析法)【圣才出品】
1 / 1第8章 分子发光分析法
选择题
关于荧光效率，下面错误的叙述是（ ）。
[中国科学院研究生院2012研]
A ．具有长共轭的跃迁的物质具有较大的荧光效率
ππ*→B ．分子的刚性和共平面性越大，荧光效率越大
C ．顺式异构体的荧光效率大于反式异构体
D ．共轭体系上的取代基不同，对荧光效率的影响也不同
【答案】C
【解析】A 项，π→π*跃迁是产生荧光的最主要类型，π电子共轭程度越大，荧光效率越大；B 项，在相同的长共轭分子中，分子的刚性和共平面性越强，荧光效率越大。
例如，在相似的测定条件下，联苯和芴的荧光效率分别为0.2和1.0，二者的结构差别在于芴的分子中加入亚甲基成桥，使两个苯环不能自由旋转，成为刚性分子，共轭电子的共平面性增加，使芴的荧光效率大大增加；C 项，对于顺反异构体，顺式分子的两个基团在同一侧，由于位阻原因使分子不能共平面而没有荧光，故错误；D 项，荧光效率受取代基效应影响。
给电子基团，如—NH 2、—OH 、—OCH 3等能增加分子的电子共轭程度，使荧光效率提高，吸电子基团，如—COOH 、—NO 2等会妨碍分子的电子共轭性，使荧光效率降低甚至为零。
川大学仪器分析第八章 分子发光分析法答案
第八章分子发光分析法基本要求：了解荧光的产生和影响荧光强度的因素，掌握分子荧光光谱法的定量关系和应用特点，重点：荧光光谱法的定量关系、应用特点。
难点：荧光的产生和影响荧光强度的因素。
参考学时：3学时作业参考答案1.简述荧光法产生的基本原理。
具有什么样结构的物质最容易发荧光答：物质受电磁辐射激发后，被激发的分子从第一电子激发单重态的最低振动能级回到基态而发射荧光，基于测量化合物的荧光而建立起来的分析方法即为荧光分析法。
芳香族化合物、带有平面刚性结构的化合物、带稠环结构的化合物容易发荧光。
2.解释下列名词：单重态、三重态、荧光、振动弛豫、内转换、外转换、失活、系间窜跃、荧光量子产率、激发光谱、荧光光谱答：单重态：电子自旋都配对的分子的电子状态称为单重态。
三重态：有两个电子自旋不配对而同方向的状态。
荧光：受光激发的分子从第一激发单重态(S1)的最低振动能级回到基态(S0)所发出的辐射；振动弛豫：由于分子间的碰撞，振动激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级失活至较低振动能级，多余的振动能以热的形式失去的过程。
内转换：在相同激发多重态的两个电子能级间，电子由高能级以无辐射跃迁方式进到较低能级的分子内过程。
外转换：激发态分子与溶剂或其他溶质间的相互作用和能量转换而使荧光或磷光强度减弱甚至消失的过程。
失活：激发态分子不稳定，他要以辐射跃迁或无辐射跃迁的方式回到基态，这就是激发态分子的失活。
系间窜跃：激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的多重态发生变化的无辐射跃迁过程。
荧光量子产率：表示物质分子发射荧光的能力。
荧光量子产率＝发射荧光的分子数/激发态的分子数＝发射的光子数/吸收的光子数激发光谱：在荧光最强的波长处测量随激发光波长的改变而变化的荧光强度，将荧光强度对激发光波长作图，即得到激发光谱，实际为荧光物质的吸收光谱。
荧光光谱：如果将激发光的波长固定在最大激发波长处，测量不同荧光波长处荧光的强度，将荧光强度对荧光波长作图便得到荧光光谱（或称发射光谱）。
分子发光分析法
3.检测器 3.检测器
荧光计采用光电管作检测器 荧光分光光度计采用光电倍增管作检测器 电感耦合器件（charge couple device, CCD)
四、荧光分析方法与应用
1. 特点： 特点： （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级
？
光度法 A = lg I0/I = KC 荧光法 I= KC
(c) 刚性平面结构：可减少分子振动，减少与溶剂的相互作用 刚性平面结构：
(d) 取代基效应 取代基效应：给电子取代基使荧光增强；吸电子取代基使荧光减弱 如苯胺和苯酚荧光较强，而硝基苯为非荧光物质 （e）重原子效应 ）重原子效应：卤素取代基随原子序数的增加，荧光减弱，而磷光增强
（3)荧光螯合物 荧光螯合物
I p = 2 . 3ϕ p I o c
式中：Ip 为磷光效率，Io 为激发光的强度人为磷光物质的摩尔吸收系数，b为 试样池的光程。在一定的条件下，ϕ 、I p、 、b均为常数，因此上式可写成： κ
I p = Kc
根据上式可以用磷光强度对磷光物质浓度制作定量分析的标准曲线
2. 温度对磷光强度的影响：随着温度的降低，磷光逐渐增强 温度对磷光强度的影响： 3.重原子效应： 3.重原子效应：重原子的高核电荷使磷光分子的电子能级交错，容易引 重原子效应 起或增强磷光分子的自旋轨道偶合作用，从而使S 起或增强磷光分子的自旋轨道偶合作用，从而使S1→ T1的体系间窜跃 概率增大，有利于增大磷光效率。 4.室温磷光 4.室温磷光 （1）固体基质：在室温下以固体基质吸附磷光体，增加分子刚性、减少三重 态猝灭等非辐射跃迁，从而提高磷光量子效率。 （2）胶束增稳：利用表面活性剂在临界浓度形成具多相性的胶束，改变磷光 体的微环境、增加定向约束力，从而减小内转换和碰撞等去活化的几率，提 高三重态的稳定性。 （3）敏化磷光: 激发三重态将能量转移于另一易发磷光的受体，让其法磷光
最新四川大学仪器分析第八章 分子发光分析法答案
4. 荧光物质浓度高时，为什么会发生荧光强度偏离 F=2.3K’I0εbc 光系式的情况？ 答：由 Lambert-Beer 定律可知，F=K’I0（1－e－2.303εbc），将此式中的指数项展开，当 εbc<0.05、I0 一定时，荧光强度 F＝Kc，所以低浓度时，溶液的荧光强度与荧光物质浓 度呈线性关系。当 c 变得足够大使得吸光度.超过 0.05 时，F 将偏向浓度轴。原因很多。 首先是数学上的近似带来的误差，其次是入射光被强烈地吸收，造成溶液内部的入射光 强锐减。当溶液浓度增加时，发光物质分子间碰撞还会产生自猝灭。当荧光化合物的发 射波长与吸收峰重叠时，液体内部激发态分子所发射的荧光在通过外部溶液时被同类分 子吸收，因而浓度增加同时会导致自吸收增强。
8．试比较紫外-可见分光光度计与荧光光度计的异同点。 不同点： 第一是光源不同。荧光光度计光源为高压汞蒸气灯和高压氙弧灯，紫外-可见分光 光度计用的光源是钨灯、碘钨灯、氢灯等； 第二是吸收池不同。在荧光分光光度计中的荧光池是四面透明；透过荧光池的激发 光方向与被测物发射的荧光是相互垂直的；而在紫外-可见分光光度计中，比色皿是两 面透明；入射光与检测器是在同一直线上。 相同点：都是由光源、单色器、吸收池、检测器四大主要部分组成。
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溴化碳）能使荧光减弱。溶剂纯度对荧光强度的影响也很大。当溶剂中含卤素或重金属 原子时，荧光强度降低。
pH 值的影响：pH 值对荧光强度的影响是可逆的，含酸、碱性取代基的芳香化合物 的荧光一般都与 pH 值有关，一些荧光物质在酸性或碱性溶液中会发生水解。而不会离 解的荧光物质在任何 pH 值均产生荧光。
试题解答11(分子发光)
《仪器分析》试题答案
《分子发光分析法》
p223
1． 解释下列名词：
（1）量子效率； （2）荧光猝灭；（3）系间跨越；（4）振动弛豫
解答
2． 为什么分子荧光分析法比分子吸收光度法的灵敏度和选择性好？
解答
3． 分子荧光和化学发光分析法在基本原理和仪器结构上有什么差异
解答
4． 试比较下列两种化合物中那种荧光效率高？并说明其理由。
解答
荧光素的荧光效率比酚酞的荧光效率高，因为荧光素的刚性平面结构。
5． 苯胺是一种具有荧光性质的化合物，在pH3.0和pH10.0的介质中那一种荧光强度大？
为什么？
解答
苯胺在pH10.0的介质中比在pH3.0的介质中的荧光强度大。
在pH3.0的介质中因为氨基的质子化作用，会使其吸电子效应增强。
6. 烟酰胺腺嘌呤双核苷酸的还原型（NADH ）是一种重要的强荧光辅酶。
在340nm 波长处有
一最大吸收，在365nm 波长处有一最大发射，用NADH 的标准溶液得到如下表的度相对荧光强。
一未知样品的相对荧光强为42.3，试求样品中的NADH 的浓度为多少？
HO COOH
荧光素酚酞
C
解答
f
I
C
A=1.40671 B=117.07927 R=0.99991
I f=1.40671+117.07927c
当I f=42.3时，c=0.343 mol/L。
分子发光分析试卷
分子发光分析中国·武汉二O 一五 年 六 月华中农业大学本科课程考试试卷考试课程与试卷类型：分子发光分析姓名：学年学期：2014-2015-2 学号：考试时间：班级：一、选择题（选出一个正确答案，将序号填写在【】里。
每小题2分，共24分。
）1.非辐射跃迁的衰变过程中，不包括那个过程？【】A 振动松弛B内转化C 系间窜越D系间转化2．下面那个不是有效的荧光猝灭剂。
【】A 对二氰基苯B N,N-二甲基苯胺C N,N-二乙基苯胺D 苯胺3 下列那个不是市场上常见的荧光分光光度计。
【】A 美国Cary Eclipse（瓦里安）B 日本Hitachi(日立)C 岛津CF-5301PC等系列D 上海F95/96等系列4 常规的荧光分析法中，间接测量法不包括下面中的那个? 【】A 荧光衍生法B 荧光猝灭法C 荧光吸收法D 敏化荧光法5 下列哪位人物没有提出同步荧光分析法。
【】A ClackB InmanC WinefordnerD Stern6 延迟荧光的主要类型不包括下面哪种？【】A E-型迟滞荧光B 简单荧光C P-型迟滞荧光D 复合荧光7 动力学分析法不包括下面哪个类型。
【】A 酸催化法B 非催化法C 催化法D 酶催化法8 下列哪种检测方式不属于单分子荧光检测形式。
【】A 光子爆发检测B 多分子图像记录C 单分子图像记录D 单分子光谱测绘9 下列哪个不是测定铜的荧光分析方法？【】A 直接荧光法B 间接荧光法C 荧光猝灭法D 荧光滴定法10 下列哪个物质不曾用于钒的荧光测定？【】A 间苯二酚B 苯甲酸-锌汞齐C 1-氨基-4-羟基蒽醌D 桑色素11 下列哪个pH值会使铁离子与氨基酚反应的产物具有相对较强的荧光？【】A 6B 7C 8D 912 同步荧光法可以对下列除哪种物质外进行同十测定？【】A 荧光黄B 罗丹明6GC 罗丹明BD 荧光红二．判断正误题（正确打“√”，错误打“×”，将答案填写在【】内。
(完整word版)分子发光分析(习题及答案)
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分子发光分析
一、选择题
1. Stokes位移是指分子的荧光发射波长总是比其相应的吸收(或激发)光谱的波长( 1 )
(1) 长(2) 短(3) 相等(4) 无法比较
2. 发射光谱的形状与激发波长（4 ）
(1) 有关(2) 无关(3) 不确定(4) 前三者都有可能
3.电子由第一激发单重态的最低振动能级返回到基态的过程是发射( 1 )
(1) 荧光(2) 磷光(3) 化学发光(4) 拉曼光
4. 电子由第一激发三重态的最低振动能级返回到基态的过程是发射( 2 )
(1) 荧光(2) 磷光(3) 化学发光(4) 拉曼光
5. 荧光是一种( 3 )现象
(1) 热致发光(2) 场致发光(3) 光致发光(4) 生物发光
6. 下列哪种分子结构不利于产生荧光？( 3 )
(1) 具有ππ*跃迁(2) 具有刚性平面结构
(3) 具有吸电子基团(4) 具有长的共轭结构
二、填空题
1. 荧光物质分子都有两个特征光谱，即____激发光谱_________和______发射光谱_______。
2. 荧光发射光谱与它的激发光谱成____镜像_________关系。
三、简答题
1. 激发态分子常见的非辐射的去活化过程有哪几种？试分别加以说明。
2. 如何区别荧光和磷光？。
仪器分析练习题02紫外可见分光光度法分子发光分析法(含答案
一、单选题1. UV-Vis 吸收光谱是由（ ） A. 最内层原子轨道上的电子跃迁产生 B. 原子最外层电子跃迁产生 C. 分子价电子能级跃迁产生D. 分子振动和转动产生2. 下列有关有机化合物外层电子能级跃迁的哪种表述是正确的（ ） A. σ→σ*有最低的能量 B. π→π*最低的能量C. n →π*有最低的能量D. n→σ*可产生波长最大的吸收3. 某化合物在己烷和乙醇中的λmax 分别为305和307 nm ，则该化合物的跃迁是下列哪种跃迁（ ）A. π→π*B. n →π*C. n →σ*D. σ→σ*4. 下列哪种化合物中不存在π→π*跃迁（ ） A. 乙烯B. 丙酮C. 苯乙炔D. 乙醇5. 当pH 由酸性变为碱性，苯酚的最大吸波长将发生何种变化（ ） A. 红移B. 蓝移C. 不变D. 不能确定6. 分光光度计中控制波长纯度的元件是（ ） A. 棱镜B. 光栅C. 狭缝D. 光栅+狭缝7. 某浓度待测物的透射比为T ，若其它条件不变，浓度增大一倍后的透射比应为（ ） A. 2TB. 2/TC. T 2D.T8. 在符合朗伯-比尔定律的范围内，有色物质的浓度、最大吸收波长和吸光度三者的关系为（ ） A. 增大、增大、增大 B. 减小、不变、减小 C. 减小、增大、减小D. 增大、减小、不变9. 指出下列哪种因素不会产生对朗伯-比尔定律的偏差（ ）A. 溶质的离解作用B. 杂散光进入检测器C. 溶液的折射指数增加D. 改变吸收光程长度 10. 下列哪种化合物不太适合作为UV 光谱测定时的溶剂（ ）A. 环己烷B. 甲醇C. 乙腈D. 甲苯11. 质量相同的A 、B 物质（摩尔质量M A >M B ），经过显色测量后所得吸光度相等，则它们的摩尔吸光系数的关系为（ ） A. εA >εBB. εA <εBC. εA =εBD. εA <1/2εB12. 在符合朗伯-比尔定律的范围内，以下说法正确的是（ ）A. 溶液透射比T 越大，说明对光的吸收越强B. 透射比T 与浓度成正比C. 摩尔吸光系数随λ改变，但与浓度无关D. 摩尔吸光系数随λ和浓度而改变13.以下说法正确的是（）A. 透射比与浓度呈直线关系B. 助色团可使生色团的吸收波长红移C. 比色法测定FeSCN+时，应选用红色滤光片D. 玻璃棱镜适合紫外光区14.在吸收光谱曲线中，吸光度的最大值是偶数阶导数光谱曲线的（）A. 极大值B. 极小值C. 零D. 极大或极小值15. 双波长分光光度计和单波长分光光度计的主要区别在于（）A. 光源个数B. 检测器个数C. 吸收池个数D. 使用单色器个数16. 双波长分光光度计的输出信号是（）A. 试样吸收与参比吸收之差B. 试样在λ1与λ2处的吸收之差C. 试样在λ1与λ2处的吸收之和D. 试样在λ1和参比在λ2处的吸收之差17. 示差分光光度法与普通分光光度法的不同之处是（）A. 标准溶液不同 D. 所选测定波长不同B. 参比溶液不同 D. 使用的光程不同18. 用普通分光光度法测定标液c1的透射比为20%，试液透过率为12%；若以示差光度法测定，以c1为参比，则试液的透射比透光度为（）A. 40%B. 50%C. 60%D. 70%19. 某分光光度计的测量误差∆T=，在透射比T=70%时，由测量引起的浓度相对误差为（）A. 2%B. 8%C. 6%D. 4%20. 邻二氮菲法测定铁时，应在加入盐酸羟胺摇匀后应放置至少2分钟后再加显色剂邻二氮菲，若放置时间不足，则分析结果很可能会（）A. 无影响B. 不一定C. 偏低D. 偏高21. 邻二氮菲法测定水中微量铁含量的分析步骤是（）A. 还原－发色－调节pH－比色－酸化B. 酸化－还原－调节pH－发色－比色C. 发色－酸化－还原－调节pH－比色D. 调节pH－发色－还原－酸化－比色22. 在吸光光度法中，有时会出现标准曲线不通过原点的情况，下列哪种情况不会引起这一现象（）A. 吸收池位置放置不当B. 参比溶液选择不当C. 吸收池光学玻璃不洁净D. 显色反应灵敏度较低23．用紫外吸收光谱区别共轭烯烃和α,β-不饱和酮可根据下列哪种吸收带出现与否来判断（）A. K带 B. R带 C. E带 D. B带24. 下列四种化合物λmax的顺序为（）（a）CH CH CH CH2（b）CH CH2C2H5（c）CH CH CH CH2（d）CH CH2C2H5A. b>c>d>aB. a>d>c>bC. b>d>c>aD. a>c>d>b25. 下列关于荧光发射光谱的叙述中正确的是（）A. 发射与激发光谱在任何情况下都是镜像关系B. 发射光谱的形状与激发波长无关C. 发射光谱位于激发光谱的左侧D. 发射光谱就是分子的吸收光谱26. 用波长300 nm的入射光激发硫酸奎宁的稀硫酸溶液时，所产生的300 nm的发射光是（）A. 荧光B. 磷光C. Reyleigh散射D. 无法判断27.分子荧光分光光度计常用的光源是（）A. 空心阴极灯B. 氙灯C. 氘灯D. 碳硅棒28. 荧光分析法是通过测定那种类型的光而达到对物质定性或定量分析的目的（）A. 激发光B. 磷光C. 发射光D. 散射光29. 下列是化学发光仪必须的元件是（）A. 光电倍增管B. 光栅C. 氘灯D. 氙灯30. 荧光物质，随溶液的温度降低，其荧光量子率将（）A. 减小B. 增大C. 不变D. 不能确定31. 极性溶剂会使被测物质的UV-Vis吸收光谱（）A. 消失B. 精细结构更明显C. 发生位移D. 分裂32. 分子的UV-Vis吸收光谱为带状光谱，其原因是（）A. 分子中价电子运动的离域性质B. 分子中价电子能级的相互作用C. 分子振动能级的跃迁伴随着转动能级的跃迁D. 分子电极能级的跃迁伴随着振动、转动能级的跃迁33. 某化合物分子式为C5H8O，其UV光谱上有两个吸收带：λmax=204 nm（εmax=9750）；λmax=314 nm （εmax=38）。
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分子发光分析中国·武汉 二O 一五 年 六 月华中农业大学本科课程考试试卷考试课程与试卷类型：分子发光分析姓名：学年学期：2014-2015-2 学号：考试时间：班级：一、选择题（选出一个正确答案，将序号填写在【】里。
每小题1分，共12分。
）1．下列哪一项不是n→π*跃迁的最低激发单重态的性质【】A．是自旋禁阻的跃迁B．摩尔吸光系数小C．激发态寿命长D．S1到T1系间窜越的几率小2．下列哪一种分子的去激发过程是磷光过程? 【】A．分子从第一激发三重态的最低振动能级返回到基态B.分子从第二激发单重态的某个低振动能级过渡到第一激发单重态C.分子从第一激发单重态非辐射跃迁至三重态D. 分子从第一激发单重态的最低振动能级返回到基态3．荧光属于下列哪一种放光形式【】A．化学发光B．光致发光C．生物发光D．场致发光4．下列关于强荧光物质应具有的特征错误的是【】A．具有大的共轭π键结构B．具有刚性的平面结构C．取代基团为吸电子基团D．具有最低的单线电子激发态S1为π，π1*型5．喹啉在下列哪种介质中荧光强度最高【】A．乙醇B．甲醇C．水D．苯6．下列化合物磷光最强的是【】A．B．C．D．7．下列关于室温磷光法的说法错误的是【】A．固体基质室温磷光法所用的载体可以将分析物束缚在表面或基质中而增加其刚性B．胶束增稳的溶液室温磷光法利用了胶束对磷光团的约束力而减少了内转化和碰撞能量损失C．室温磷光法中分析物的磷光量子产率通常比低温磷光法中的高D．敏化溶液室温磷光法的分析物质本身并不发射磷光，而是引发受体发磷光8．分子荧光分析法比紫外-可见分光光度法的灵敏度高2～4个数量级的原因【】A．荧光物质的摩尔吸光系数大；提高激发光的强度可以提高荧光的强度B．荧光信号是在暗背景下测量的；提高激发光的强度可以提高荧光的强度C．荧光发射的量子产率高；荧光物质的摩尔吸光系数大D．荧光发射的量子产率高；9．在分子荧光分析法中，下面说法正确的是【】A．荧光发射光谱不随激发波长的变化而改变B．荧光发射光谱要随激发波长的变化而改变C．荧光激发光谱与它的紫外－可见吸收光谱互为镜像对称关系D．荧光发射光谱与它的紫外－可见吸收光谱形状相似且波长位置也一样10．在分子荧光测量中，要使荧光强度正比于荧光物质的浓度，必要的条件是什么？【】A．用高灵敏度的检测器B．在稀溶液中测量C．在最大摩尔吸光系数下测量D．在最大量子产率下测量11. Which factor has no effect on the fluorescence quantum yield molecule?【】A．molecular structureB．the presence of heavy atomsC．the concentration of the solutionD．the temperature of solution12．Which of the following group can enhance fluorescence intensity ？【】A．—NH2B．—COOHC．—NO2D．—NO二、判断正误题（正确打“√”，错误打“×”，将答案填写在【】内。
每题2分，共10分。
）1．【】Stokes位移是指分子的荧光发射波长总比其相应的磷光发射波长要长2．【】提高共轭度有利于增加化合物的荧光量子产率并产生红移3．【】有激发光照射时，苯酚在pH=1时无荧光发射，在pH=13时有荧光发射4．【】发生电子转移反应的熄灭剂不限于金属离子。
5．【】对于静态猝灭，猝灭剂的存在并没有改变荧光分子激发态的寿命三、名词解释（每小题5分，共20分。
）1．：荧光探针2．荧光量子产率3．激发光谱：4．延时荧光四、简答题（简要回答下列各题，要求依据明确、条理清楚。
共4小题，共30分。
）1．为什么荧光发射光谱和它的吸收光谱呈镜像对称关系?（6分）,2. 荧光分光光度计和紫外-可见分光光度计的主要区别是什么?(答出两点即可)（6分）3.荧光强度与荧光物质浓度的关系为F=Kc。
满足F=Kc公式的条件有哪些？（8分）4.从荧光衍生法、荧光猝灭法、荧光增强法、敏化荧光法和荧光偏振免疫分析法中选择两个分别简要说明其原理。
（10分）五、英文翻译（本大题共1小题，共10分。
）Fluorescence spectral data are generally presented as emission spectra. A fluorescence emission spectrum is a plot of the fluorescence intensity versus wavelength (nanometers) or wavenumber (cm-1). Two typical fluorescence emission spectra are shown in Figure 1.3. Emission spectra vary widely and are dependent upon the chemical structure of the fluorophore and the solvent in which it is dissolved. The spectra of some compounds, such as perylene, show significant structure due to the individual vibrational energy levels of the ground and excited states. Other compounds, such as quinine, show spectra devoid of vibrational structure.六、计算题（写出主要计算步骤及结果。
本大题共1小题，共10分。
）1. 用荧光分析法测定食品中维生素B2的含量：称取2.00g食品，用10.0mL氯仿萃取（萃取率100%），取上清液2.00mL，再用氯仿稀释为10.0mL。
维生素B2氯仿标准溶液浓度为0.100µg•mL-1。
测得空白溶液、标准溶液和样品溶液的荧光强度分别为：F o=2.0，F s=62.0，F x=59.0，求该食品中维生素B2的含量（µg•g－1）。
七：改错题（8分）下面是荧光分析法定量检测维生素B2的试验步骤，其中有3处错误，请指出来并解释原因。
1、系列标准溶液的制备取维生素B2标准溶液(10.0µg/mL) 0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL分别置于25mL的容量瓶中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
得浓度依次为0.20µg/mL、0.40µg/mL、0.60µg/mL、0.80µg/mL、1.00µg/mL的一系列维生素B2标准溶液。
待测。
2、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置λem＝540nm为发射波长，在500~1000nm范围内扫描，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。
从激发光谱图上可找出其最大激发波长λex。
从得到的激发光谱中找出最大激发波长，在此激发波长下，在250-500nm范围内扫描，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。
从荧光发射光谱上找出其最大荧光发射波长λem。
3、标准溶液及样品的荧光测定固定任意一个激发波长和荧光发射波长。
测量上述系列标准维生素B2溶液的荧光发射强度。
数据记录于表中。
以溶液的荧光发射强度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，制作标准曲线。
在同样条件下测定未知溶液的荧光强度，并由标准曲线确定未知试样中维生素B2的浓度，计算待测样品溶液中的维生素B2的含量。
华中农业大学本科课程考试试卷参考答案与评分标准考试课程与试卷类型：分子发光分析姓名：学年学期：2014-2015-2 学号：考试时间：班级：一、选择题（每小题1分，共12分。
）1-5：DABCC 6-10：BCDAB 11-12：CA二、判断正误题（每题2分，共10分。
）1-5：×√×√√三、名词解释（每小题XX分，共XX分。
）1．：荧光探针与蛋白质或其他大分子结构非共价相互作用而使一种或几种荧光性质发生改变的小分子物质。
可用于研究大分子物质的性质和行为。
2．荧光量子产率定义为荧光发射量子数与被物质吸收的光子数之比，也可表示为荧光发射强度与被吸收的光强之比，或表示为荧光发射速率与吸收光速率常数之比，或者用公式表示： 荧光量子产率 =荧光发射量子数/吸收的光子数 = kf [S1]/吸光速率 = If/Ia，，只要给出一种定义即可。
3．激发光谱：在一定条件下，固定发射波长（λem），扫描激发波长（λex），记录荧光强度（F），以荧光强度F对激发波长λex作图得到的曲线为激发光谱。
激发光谱说明不同激发波长的辐射引起物质发射某一波长荧光的相对效率。
激发光谱形状与吸收光谱相似。
4．延时荧光分子受到激发后，处于激发单重态，通过内转换、振动弛豫和体系间跨越，跃迁到第一激发三重态的最低振动能级，如果分子再次受激发，又回到激发单重态，然后以辐射形式回到基态的各个振动能级发射的光。
四、简答题（简要回答下列各题，要求依据明确、条理清楚。
共4小题，共30分。
）1．基态（S0态）到S1态为激发谱,S1态到S0态为荧光谱.一般而言,S0和S1的振动能级相对比较接近能级间距比较近,所以光谱的形状比较相似；另外,从S0态到S1的振动态的吸收光谱与S1的振动基态到S0的各个振动能级的能量要高,所以,荧光光谱线对于激发谱要有所红移,于是形成了镜像。
意思正确即可。
2. （1）荧光分光光度计有两个单色器,而紫外只有一个单色器（2）荧光分光光度计的光源和检测器是成直角分布的,而紫外是成一条直线的.（3）荧光分光光度计是以氘灯做为光源,而紫外是以氢灯或氘灯作为紫外区光源,钨灯或卤钨灯作为可见光区的光源（4）荧光分光光度计的比色皿是四壁均为光学面,而紫外仅为两面为光学面.3.（1）入射光为单色光；（2）Ecl≤0.05；（3）入射光的强度I0一定；（4）样品池厚度一定。
（答出一个1分，两个3分，三个4分，四个5分。
）4.（下面任意答出一种得5分）荧光衍生法：是运用某种手段将自身不发荧光的分析物，转变成一种发荧光的化合物，再通过测定该化合物的荧光强度，以间接测定分析物。
荧光猝灭法：有些分析物本身不发荧光，但却能使某种荧光试剂的荧光发生猝灭，且荧光猝灭的程度与分析物的浓度有着定量的关系，通过测定该荧光试剂荧光强度的下降程度，便可间接地测定该分析物。