槐米中芦丁(芸香苷)的提取分离及检识
槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定张景清（⼴西科技⼤学⽣物与化学⼯程学院⼴西柳州545006）1.摘要:本实验以槐⽶为原料，采⽤碱提酸沉法从槐⽶中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体作⽅法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
该⽅法提取率⾼达26.3%，对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析，并与标准品做对⽐，结果表明提取的芦丁与标准品的纯度⼤致相等。
2.引⾔芦丁,亦称芸⾹苷,⼴泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐⽶和荞麦叶中含量最⾼,可作为⼤量提取芦丁的原料。
芦丁属于黄酮类化合物,在⼼脑⾎管疾病的治疗上起到了举⾜轻重的作⽤,具有VP样作⽤。
有助于保持⽑细⾎管正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作⽤。
其临床效果肯定,副作⽤少,同时也是⼀种植物原料药[1]。
黄酮类化合物的提取⽅法较多主要是依据其溶解性及酸性。
黄酮类化合物的提取⽅法⼀般有：①热⽔提取法②醇提法③碱提酸沉法④系统溶剂提取法本实验碱提酸沉法通过从槐⽶中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作⽅法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
3.实验原理槐⽶中含芦丁、槲⽪素、皂苷、⽩桦、酯醇等多种成分。
芦丁是其主要成分，含量为16%-25%。
芦丁属于黄酮类化合物，结构中含有多个酚羟基，呈酸性，苷元为槲⽪素，糖基为芸⾹糖。
芦丁为浅黄⾊细⼩针状结晶，95-97℃脱⽔，熔点314℃，可溶于沸⼄醇、⽆⽔⼄醇、⼄酸⼄酯、丙酮，不溶于⽯油醚和⽔。
芦丁可溶于碱液中，呈黄⾊酸化后⼜析出，故可采⽤碱提酸沉法得到芦丁产品。
然后利⽤在冷⽔中不溶，在热⽔中微溶的溶解度差精制，可获得纯度⾼的微细针状结晶，最后利⽤芦丁、槲⽪素、及糖的性质予以鉴定。
4.实验部分4.1实验药品槐⽶（市售），氧化钙AR（西陇化⼯股份有限公司），盐酸AR（西陇科学有限公司），四硼酸钠AR（⼴东省台⼭市化⼯⼚），甲醇AR（天津市⼤茂化学试剂⼚），三氯甲烷AR（成都市科隆化学品有限公司）,氯仿（分析纯，成都市科龙化⼯试剂⼚），⼄醇（分析纯）4.2实验仪器JJ200电⼦天平（常熟市双杰测试仪器⼚），SHZ-D（III）循环⽔式多⽤真空泵（河南爱博特科技发展有限公司），ZNLC-GS 130*60智能磁⼒搅拌器（河南爱博特科技发展有限公司），薄层⾊谱展开缸，紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）4.3实验步骤4.3.1芦丁的提取⽅法⼀：称取槐⽶10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于500ml烧杯中，加⼊250ml⽔，加热搅拌下添加⽯灰乳，保持PH=8-8.5。
槐米萃取芦丁实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习槐米中芦丁的提取方法。
2. 掌握萃取实验的基本原理和操作步骤。
3. 了解芦丁的化学性质及其在槐米中的分布。
二、实验原理芦丁（Rutin）是一种黄酮类化合物，具有调节毛细血管壁渗透性的作用，临床上用作毛细血管止血药，常作为高血压病的辅助用药。
槐米是槐系豆科槐属植物的花蕾，含芦丁量高达12%~16%。
本实验通过萃取槐米中的芦丁，了解其提取方法及其在槐米中的分布。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、无水乙醇、盐酸、石灰水、硫酸、Mg粉、AlCl3、FeCl3、浓硫酸、浓盐酸等。
2. 实验仪器：研钵、烧杯、漏斗、抽滤瓶、容量瓶、分光光度计、紫外-可见分光光度计等。
四、实验步骤1. 槐米预处理：称取3g槐米于研钵中研成粉状，置于50mL烧杯中。
2. 碱提：加入30mL饱和石灰水溶液，加热至沸，并不断搅拌，煮沸一刻钟后，抽滤。
3. 滤渣处理：滤渣再用20mL饱和石灰水溶液煮沸10min，合并滤液。
4. 中和：用15%盐酸中和滤液至pH值约为2～3。
5. 静置：静置6h，使芦丁沉淀析出。
6. 抽滤：过滤，滤渣干燥，即得粗芦丁。
7. 精制：将粗芦丁用无水乙醇溶解，过滤，滤液浓缩，得精制芦丁。
五、实验结果与分析1. 槐米中芦丁的提取率：根据实验数据，槐米中芦丁的提取率为10.2%。
2. 芦丁的鉴定：通过Mg粉-HCl反应、AlCl3反应、FeCl3反应等显色反应，证实了提取物的确为芦丁。
3. 芦丁的纯度：精制芦丁的纯度可达99%以上。
六、实验讨论1. 槐米中芦丁的提取方法：本实验采用碱提酸沉法，该方法简单易行，提取率较高。
2. 芦丁的纯度：通过精制，芦丁的纯度可达99%以上，符合药用要求。
3. 芦丁的应用前景：芦丁具有广泛的药用价值，可作为药用原料，也可用于食品、化妆品等领域。
七、实验结论1. 本实验成功从槐米中提取了芦丁，提取率较高。
2. 提取的芦丁纯度可达99%以上，符合药用要求。
槐米中芦丁的提取,分离与鉴定实验报告
槐米中芦丁的提取,分离与鉴定实验报告一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
二、实验原理芦丁:浅黄色针状结晶，mp174℃-178℃。
溶解度:1:8000;热水1:200;冷乙醇1:300;热乙醇1:30;冷甲醇1:100:热甲醇1:10.槲皮素:黄色结晶，mp313℃-314℃，能溶解于冷乙醇，易溶于沸乙醇，可溶于甲醇、乙酸乙酯等;难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。
本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取:取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟，并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。
浓缩至1/2体积，滤液在60℃-70℃再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。
五、实验说明及注意事项1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。
在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。
槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。
PH应严格控制8-9，不得超过10,。
因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。
酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。
2、提取过程中加入硼砂作用:保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。
黄酮类化合物—槐米中芦丁的提取分离与鉴定(天然药物化学课件)
二、槐米中芸香苷的理化性质
❖芸香苷广泛存在于植物界，已发现的含芦丁 植物至少在70种以上，其中以槐花米和荞麦 叶含量较高，可作为提取芦丁的原料。
❖芸香苷是由槲皮素3位上的羟基与芸香糖（ 葡萄糖与鼠李糖组成的双糖）脱水而成的苷 。
槲皮素
芸香苷（槲皮素-3-O-芸香糖）
实训 槐米中芸香苷及槲皮素的提取分 离检识技术
Байду номын сангаас
一、槐米中芸香苷的化学结构
【来源】豆科槐属植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾（槐米） 【生物活性】祛痰、止咳、降压、增加冠脉血流量等活性
❖ 2015版《药典》以总黄酮为指标成分对槐米或槐花进 行定性鉴定和含量测定。
❖ 要求槐花总黄酮（以芸香苷计）大于等于8.0%，槐米 总黄酮大于等于20.0%，对照品采用芸香苷。
二、槐米中芸香苷的理化性质
【溶解度】芸香苷溶解度在冷水中为1：10000，沸水中 为1：200，沸乙醇中为1：60，沸甲醇中为l：7，可溶 于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰乙酸和乙酸乙 酯中，不溶于苯、乙醚、三氯甲烷和石油醚。
❖ 芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露 在空气中能缓缓变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧 化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的 ，故在碱性溶液中加热提取往往加入少量硼砂。
芸香苷粗提 ：碱溶酸沉法
槐花米粗粉20g 加0.4％硼砂水250ml，石灰乳调 pH8～9 煮沸30min，4层纱布滤过，反复2次
滤液
药渣
放冷，浓盐酸调pH3～4，析 晶，滤过
滤液
沉淀 室温下晾干
芸香苷粗品
注意：在加热过程中，需要随时补充失去的水分和保持pH值8～9。
槐米中芦丁的提取
槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定一、实验目的1．掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。
2．掌握重结晶及过滤等基本操作。
3．学习芦丁及槲（hū）皮素的鉴定方法。
二、实验原理芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，槐米中含量高达12~16％，是提取芦丁的最佳原料。
芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。
近年来，芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。
芦丁属黄酮苷，其结构如下：芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C27H36O16· 3 H2O），熔点为177～178 ℃，无水物熔点为190~192 ℃，难溶于冷水，微溶于冷乙醇，可溶于热水和热乙醇中。
此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。
易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。
本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。
芦丁在不同溶剂中的溶液度：水CH3OH CH3CH2OH 吡啶冷0.0013 l.0 0.36 8.5热0.55 11.2 3.5 易溶芦丁的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。
槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。
槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C15H10O7·2 H2O），熔点313~314 ℃，无水物熔点为316 ℃。
可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。
在沸腾的无水乙醇中溶解度为4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。
可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。
槲皮素的结构式如下：槲皮素的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259nm，266nm，299nm ，359nm。
槐米中芸香苷
槐米中芸香苷（芦丁）的提取与鉴定【实验目的】1、学会运用碱溶酸沉法，从槐米中提取、精制芦丁，并进行水解。
2、学会用显色反应及纸色谱法检识黄酮类化合物。
【实验原理】采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性，能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出。
芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离。
【实验材料】设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、移液管、纱布、温度计、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、水浴锅、pH 试纸、新华色谱滤纸、紫外灯、展开筒、试管、试管架。
药品：槐米粗粉、浓盐酸、蒸馏水、0.4%硼砂、石灰乳、2%硫酸、95%乙醇、氢氧化钡、葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液、正丁醇、醋酸、芦丁标准品、槲皮素标准品、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉、苯胺-邻苯二甲酸、醋酸镁【实验步骤】实验1、芸香苷的提取：称取槐米粗粉20g，置500 ml烧杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液200 ml，在搅拌下加石灰乳，调至pH8～9，加热微沸20分钟（注意保持pH8～9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用四层纱布滤过。
滤渣同样操作再提取一次，合并两次滤液。
滤液在60℃～70℃用浓盐酸调至pH5左右，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗2～3次至中性，抽干，置空气中晾干，得芸香苷粗品。
实验2、芸香苷的精制：称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60℃～70℃干燥，得精制芸香苷，称重，计算得率。
实验3、芸香苷的水解和鉴定：取芸香苷1g，研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15 ml）重结晶即得精制槲皮素。
实验二 槐花米中芦丁的提取与检识
实验二槐花米中芦丁的提取与检识一、实验目的1. 通过芦丁提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。
2. 掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮甙的检识方法。
二、主要化学成分的结构及性质芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现发现芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤其以槐花米（为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料，芦丁是由槲皮素（Querecetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）脱水而成的甙类化合物。
芦丁为淡黄色粉末或针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为177-178℃。
芦丁略溶于热水（1：200），难溶于冷水（1：8000），溶于热甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、热乙醇（1∶30）、冷乙醇（1∶650），难溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。
O OHOHO ORHOOH芸香苷R=－葡萄糖－鼠李糖槲皮素R=H三、实验原理由槐花米中提取芦丁的方法很多，目前我国多采用碱提酸沉的方法，其原理是：根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，向此盐溶液加入酸，调节pH 值，则芦丁又重新游离析出，从而获得粗制芦丁。
除此方法外，还可以采用沸水提取或醇提取法。
四、实验器材与试剂器材：铁架台，烧杯，电炉，烘箱、水浴锅、三角烧瓶，布氏漏斗，滤纸，试管，层析槽，石棉网，毛细管等。
试剂：芸香苷标准品，生石灰，HCl，乙醇，甲醇，镁粉，醋酸镁，AlCl3，氯仿，铁氰化钾等。
五、实验内容1、实验操作流程图2、具体操作步骤（1）芦丁的提取称取槐花米20g，置于干燥的研磨中用钵棒挤压成粗粉。
称取1-1.5g石灰粉（生石灰），置于干净的小研钵中加入10ml水后研成乳液备用。
将粉碎的槐花米置于500ml 的烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石灰乳，调节pH至8-9，加热微沸，维持pH 值至30min，趁热抽滤。
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定实验一预试；苷的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。
实验二产品的精制:重结晶；苷的水解。
实验三苷、苷元的定性鉴定；甙、甙元的TLC 鉴定；糖的纸层析鉴定。
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定（一）预试；苷的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。
（二）产品的精制：重结晶；苷的水解。
（三）苷、苷元的定性鉴定；甙、甙元的TLC鉴定；糖的纸层析鉴定。
教学目的：1 •掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法。
2 •掌握化学鉴别试验、苷水解、薄层层检查等手段在苷类结构鉴定上的作用。
已知重要成分及其性质1. 芦丁（芸香苷，rutin ）淡黄色针晶，水中结晶者含3分结晶水，C27H30O16 3H2O lOOmmHg和11O C 加热12小时后，变为无水物，无水物于25C变棕，115〜7C软化，214〜5C发泡分解，1g芦丁溶于约300ml冷水，200ml沸水，7ml沸甲醇，溶吡啶，甲酰胺和碱液，微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于氯仿，二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。
2. 槲皮素（Guereetin ）为芦丁的苷元，C15H10O7，MW302.23 ;含二分子结晶水为黄色针晶，（稀乙醇），5〜7C失水，314C解，1g溶于290ml无水乙醇、23ml沸乙醇，溶于冰醋般在碱水中溶解显黄色，几不溶于水R=一glu—rha 芦丁R= — 0H 槲皮素3. 皂苷（Saponin）粗品为白色粉末，mp 210C〜20C（dec）。
易溶于吡啶。
能溶于200倍的甲醇，酸水解得下列两种苷元及糖。
糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
（1）白桦酯醇（Betulin）无色针晶，mp215〜2C,能溶于醋酸，丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等；难溶于石油醚和水(2)槐花二醇(Sophoradiol)无色针晶, 醚、苯、丙酮、甲醇、难溶于水。
整套实验的过程：预试一一提取分离一一鉴定实验一预试；甙的碱提取，酸沉淀实验目的通过系统预试，了解检品中含有哪些类型的成分，可能含有哪些化学类型的成分，为进一步提取分离有效成分提供线索。
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结晶
静置液减压抽滤在 60-70温度下烘干 得粗品芸香苷 置于300ml蒸馏水 煮沸至芸香苷全部溶解 趁热抽滤 滤液放冷析晶
天然产物化学
水解 取精制芸香苷1g 置250ml圆底烧瓶中 加2%H2SO4溶液80ml 加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶， 即为槲皮素。放冷抽滤 沉淀物用蒸馏水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素
天然产物化学
提取
碱溶酸沉法
芸香苷分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与 碱成盐而溶于碱液中加酸酸化后又可以沉淀 析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
天然产物化学
实验步骤
重复以上操作， 硼砂水150ml,时 间20min
加0.4%硼砂水200ml 加热微沸30min,用石 灰乳保持pH8-9
结晶
天然产物化学
天然产物化学
聚酰胺薄层色谱检识
点 样：（1）自制1%芸香苷乙醇溶液 （2）自制1%槲皮素乙醇溶液 对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液乙酯（3∶1∶0.5）
显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫 外灯下观察斑点颜色 （2）用氨水熏，记录斑点颜色和位置 结果：记录图谱，斑点颜色，计算芸香苷和槲皮素 Rf
天然产物化学
槐米中芦丁（芸香苷）的提取、分离和检识
天然产物化学
芦 丁
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含 有三分子的结晶水，熔点为174~178℃， 无水物188~190℃。 溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200； 冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。 微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、 氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
天然产物化学
化学检识
• 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样 品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管 中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色 变化。