济南市济钢高中人教版高中生物选修一专题五 课题三 血红蛋白的提取和分离 同步测试
【人教版】高二生物选修一：5.3《血红蛋白的提取和分离》教案设计.doc
专题5 DNA与蛋白质技术课题5.3 血红蛋白的提取和分离一、【课题目标】（一）知识与技能1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理（二）过程与方法体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤（三）情感、态度与价值观初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神二、【课题重点】凝胶色谱法的原理和方法三、【课题难点】样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填四、【教学方法】启发式教学五、【教学工具】多媒体课件六、【教学过程】（一）引入新课蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。
对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。
所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。
怎样提取蛋白质呢？（二）进行新课1．基础知识蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。
1．1凝胶色谱法（分配色谱法）：（1）原理：（图5－13a）分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
1．2缓冲溶液（1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。
（2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。
1．3凝胶电泳法：（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
［思考］阅读教材后，填写下表：）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺经胶电泳等。
济南市济钢高中人教版高中生物选修一专题五 课题三 血
10．相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶色谱柱中的行进过程，可表示为图中哪一个（ ）
（注：图中大圆点代表相对分子质量大的蛋白质）
A． B． C． D．
第II卷（非选择题)
请点击修改第II卷的文字说明
评卷人
得分
二、非选择题
11．红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题：
故答案选：D。
【点睛】
透析的原理是渗透,其目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质。
6．D
【解析】
试题分析：洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白以利于后续步骤的分离纯化，加入的生理盐水能维持细胞稳定形态，防止红细胞破裂，A项正确；猪成熟红细胞中无细胞核，缺少细胞器，提纯时杂蛋白质较少，B项正确；血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液（如果操作都正确），C项正确；在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白的分子量比杂蛋白大，质量越大的蛋白质，通过凝胶色谱柱的速度越快，D项错误。
考点：本题考查蛋白质的分离过程。
点评：本题难度中等，只需熟记蛋白质分离和提取过程中样品的加入和洗脱过程即可。
8．A
【解析】试题分析：取血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h。透析可以去除样品中分子量较小的杂质，A项正确；低速短时间离心是分离红细胞，在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白，B项错误；血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是溶解磷脂，加速血红蛋白的释放，C项错误；待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，开始用试管收集流出液，D项错误。
人教版生物选修一：5.3《血红蛋白的提取和分离》学案要点分析教学反思设计案例教案学案说课稿
人教版生物选修一：5.3《血红蛋白的提取和分离》学案要点分析教学反思设计案例教案学案说课稿课题3 血红蛋白的提取和分离1．尝试对血液中血红蛋白的提取和分离。
2．体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法。
3．了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的原理。
蛋白质的各种特性的差异如分子的______和______、所带________________、溶解度、________和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。
一、凝胶色谱法1．概念：凝胶色谱法也称做__________，是根据____________的大小分离蛋白质的有效方法。
2．原理：大多数凝胶是由________化合物构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量____的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程______，移动速度______；而相对分子质量______的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在________移动，路程______，移动速度______。
相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
3．凝胶材料：______性，______类化合物，如葡聚糖或________。
4．具体过程：（1）________混合物上柱。
（2）洗脱开始，______________的蛋白质______进入凝胶颗粒内；相对分子质量______的蛋白质则被排阻于凝胶颗粒之外。
（3）________________的蛋白质被滞留；__________________的蛋白质向下移动。
（4）相对分子质量不同的分子完全分开。
（5）____________的蛋白质行程较短，已从________中洗脱出来，________________的蛋白质还在行进中。
提示：洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
二、缓冲溶液1．作用：在________内，能够抵制外界的________对溶液____的影响，维持____基本不变。
人教版高中生物选修1同步课件+5.3血红蛋白的提取和分离课件
二、实验操作
采集得到猪血
初次离心后的结果
3次洗涤后的结果
二、实验操作
（一）样品处理和粗分离
2.血红蛋白的释放
加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的 甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟 （加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。
目的分析：
①蒸馏水的作用是____使__红__细__胞__大__量__吸__水__胀__裂____。 ②加入甲苯的作用是__溶__解__红__细__胞__的__细__胞__膜______。 ③充分搅拌的目的是__加__速__红__细__胞__的__破__裂_______。
一、基础知识
（三）电泳
3.类型: 琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳。
蛋白质在聚丙烯酰 胺凝胶中的迁移率取决 于它所带净电荷的多少 以及分子的大小等因素。
一、基础知识
（三）电泳
3.类型: SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋
白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定 的结果只是单条肽链的分子量。SDS能与各种蛋白质形成 蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白 质分子原有的电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷 差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
二、实验操作
（二）凝胶色谱操作
1.凝胶色谱柱的制作
2.凝胶色谱柱的装填
3.样品的加入和洗脱
二、实验操作
（二）凝胶色谱操作
1.凝胶色谱柱的制作
①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平 ②底塞的制作：打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，
再用100目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端。 注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面， 否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。 ③顶塞的制作：打孔→安装玻璃管。 ④组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。 ⑤安装其他附属结构。
人教版高中生物选修一专题五课题3 血红蛋白的提取和分离 课件(共14张PPT)
电泳
概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
分类： 琼脂糖凝胶电泳 聚丙稀酰胺凝胶电泳
样品处理及粗分离
1.血液由血浆和各种血细胞构成。 2.血红蛋白包含四条肽链。 3.本实验所用材料：哺乳动物的红细胞。 4.采集血液时加入柠檬酸钠。
2020/6/21
一：红细胞的洗涤一
1.目的：去除杂蛋白 2.方法：低速短时间离心 3.洗涤时加入试剂：5倍体积的生理盐水
血红蛋白提取的过程
教学难点
血红蛋白提取的原理
2020/6/21
分离蛋白质的原理
根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形 状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、 吸附的性质、对其他分子的亲和力等等，可以
用来分离不同蛋白质。
2020/6/21
凝胶色谱法
凝胶是一些多糖类构成的内含许多贯穿的 通道的微小多孔的球体。
第三节 血红蛋白的提取和分离
教学目标
知识目标
1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白 2、了解色谱法、电泳法等分血红蛋白提取和分离的实验的严格要求， 注意按照操作提示进行相关步骤
。
2020/6/21
教学重难点
情感目标
初步形成科学的思维方式，发展科学素养和 人文精神
教学重点
凝胶色谱法原理
相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内 部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短， 移动速度较快。
相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内 部的通道，在凝胶的外部移动，路程较长，移 动速度较慢。
2020/6/21
缓冲溶液
指在一定的范围内，能对抗外来少量 强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显 变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶 液叫做缓冲溶液。
【人教版】生物选修一：5.3《血红蛋白的提取和分离》教案设计
专题5 DNA与蛋白质技术课题5.3 血红蛋白的提取和分离一、【课题目标】（一）知识与技能1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理（二）过程与方法体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤（三）情感、态度与价值观初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神二、【课题重点】凝胶色谱法的原理和方法三、【课题难点】样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填四、【教学方法】启发式教学五、【教学工具】多媒体课件六、【教学过程】（一）引入新课蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。
对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。
所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。
怎样提取蛋白质呢？（二）进行新课1．基础知识蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。
1．1凝胶色谱法（分配色谱法）：（1）原理：（图5－13a）分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
（3）分离过程：（图5－13b）混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
1．2缓冲溶液（1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。
（2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。
1．3凝胶电泳法：（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
（2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺经胶电泳等。
济南市济钢高中 人教版生物选修1专题5.3血红蛋白的提取和分离【word】无答案
人教版生物选修1专题5.3血红蛋白的提取和分离一、单选题1. 关于蛋白质提取的叙述中，不正确的是（）A .分离与纯化蛋白质之前首先要用适当的方法使蛋白质释放出来B .抽提时要依据蛋白质的不同特性选择不同的溶剂C .蛋白质的粗提取物离心可除去一些小分子杂质D .蛋白质的粗制品可能是多种蛋白质的混合物2. 凝胶色谱法是根据（）分离蛋白质的有效方法A .分子的大小B .相对分子质量的大小C .带电荷的多少D .溶解度3. 在血红蛋白分离过程中如果红色带区歪曲、散乱、变宽，与其有关的是（）A .凝胶色谱柱的制作B .色谱柱的装填C .洗脱过程D .样品的处理4. 将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第2层是（）A .甲苯B .血红蛋白水溶液C .脂溶性物质的沉淀层D .其他杂质的沉淀5. 如图所示为从血红细胞中提取核糖体的大致过程，下列对该过程的叙述中，正确的是（）A .步骤（1）加入14C—氨基酸的目的是为了在步骤（5）中检测核糖体B .步骤（2）的目的是破坏细胞膜C .步骤（3）（4）的目的是分离细胞器或细胞结构D .该过程运用了渗透作用原理、同位素示踪、离心法、层析法6. 下列有关说法不正确的是（）A .探究果胶酶最适用量的实验中可先将果泥加热煮沸后冷却备用，目的是排除果泥中原有的酶对实验结果的干扰B .探究温度对酶活性的影响的实验中，将酶溶液加入底物后，迅速将温度调至设定的温度，并持续反应一段时间C .采用稀释涂布平板法计数某种细菌的原理是，当样品稀释度足够高时，固体平板上的一菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，故可通过平板上的菌落数推测样品中的活菌数D .SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，不同蛋白质分子的迁移率完全取决于分子的大小7. 下图是用除去DNA的滤液进行血红蛋白的提取和分离实验的装置，下列有关叙述不正确是（）A .首先用图甲装置对滤液进行处理，其目的是去除相对分子质量较小的杂质B .图乙装置的试管中收集到的液体中最先出现的是相对分子质量较小的蛋白质C .用图乙装置分离血红蛋白时，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每管收集5 mL，连续收集D .图丙装置中电泳法分离提纯血红蛋白的原理是血红蛋白带有一定量的电荷，在电场的作用下向一极移动8. 下列关于生物技术实践的说法正确的是（）A .蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的移动速度较慢B .细菌能在液体培养基中以有丝分裂方式扩增C .自养微生物能在缺少有机碳源的培养基上生长D .参与果酒和果醋发酵的微生物都含有多种细胞器9. 下列关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述，正确的是（）A .为了防止血液凝固，应在采血器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠B .红细胞洗涤使用5倍体积的蒸馏水，直到离心后上清液不呈现黄色为止C .利用0.9％的NaCl对血红蛋白溶液的透析12小时，可以去除小分子杂质D .在凝胶柱中加入蛋白样品后即可连接缓冲溶液洗脱瓶进行洗脱和收集样品10. 下图为凝胶色谱法分离蛋白质示意图和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳示意图。
人教版高中生物选修一专题5课题3《血红蛋白的提取和分离》课件
的提取和分离》课件
2020/9/19
新课导入
下面请看一条新闻
艾滋病研究进展 英国《自然》杂志登论文说，“ＴＲＩＭ ５”蛋白质可有效抑制艾滋病病毒的感染。 此后，世界各地的很多科学家开始研究“ ＴＲＩＭ５”蛋白质的结构，但到目前为止尚 未有人宣称取得突破性进展。
1.发挥学生主观能动性。 2.激发学生学习兴趣，培养学会僧 创新能力。
教学重难点
课题重点
凝胶色谱法的原理和方法。
课题难点
凝胶色谱法的原理和方法。
内容解析
基础知识：
凝胶色谱法
什么是凝胶？
凝胶是一些多糖类构成的
内含许多贯穿的通道的微小多 孔的球体。
凝胶色谱法的原理
相对分子量
较小的蛋白质容 易进入凝胶内部 的通道，在凝胶 的外部移动，路 程较长，移动速 度较慢。
相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入 凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的 路程较短，移动速度较快；
相对分子质量较小的蛋白质分子比较容易 进入凝胶内的通道，通过的路程较长，移动速 度较慢。
因此，样品中相对分子质量较大的蛋白质 先流出，相对分子质量中等的分子后流出，相 对分子质量最小的分子最后流出，这种现象又 叫分子筛现象。
5. 与其它真核细胞相比，红细胞有什么 特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么 意义？
答：血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色 谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应 该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常 直观，大大简化了实验操作。
温宿县第一中学
古丽胡玛尔·塔依尔 2年级（3）班 2017-4-11
相对分子量较
大的蛋白质无法 进入凝胶内部的 通道，只能在凝 胶外部移动，路 程较短，移动速 度较快。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一、单选题济南市济钢高中人教版高中生物选修一专题五 课题三 血红蛋白的提取和分离 同步测试
1. 已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是（ ）
A ．若将样品以2000r/min 的速度离心10min ，分子戊存在于沉淀中，则分子甲也存在于沉淀中
B ．若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快
C ．将样品装入透析袋中透析12h ，若分子乙保留在袋内，则分子丙也保留在袋内
D ．若用SDS ﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最远
2. 在血红蛋白分离过程中如果红色带区歪曲、散乱、变宽，与其有关的是 （ ）
A ．凝胶色谱柱的制作
B ．色谱柱的装填
C ．洗脱过程
D ．样品的处理
)
蛋白质的分离与纯化技术是蛋白质研究的重要技术。
下列有关叙述不正确的是(3.
A．根据蛋白质分子不能透过半透膜的特性，可将样品中各种不同的蛋白质分离
B．根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小等，可通过电泳分离蛋白质
C．根据蛋白质相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法分离蛋白质
D．根据蛋白质的分子大小、密度不同，可通过离心沉降法分离蛋白质
4. 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的分离过程可表示为下列哪一项（）
A．B．C．D．
5. 在蛋白质的提取和分离实验中,下列对样品处理过程中,正确的是（）
A．洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐
B．洗涤时离心速度过小,时间过短,白细胞等会沉淀,达不到分离的效果
C．洗涤过程选用0.1%的生理盐水
D．透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质
6. 以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是
A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂
B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少
C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测
D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢
7. 下列对在凝胶柱上加入样品和洗脱的操作不正确的是( )
A．加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐
B．让吸管管口沿管壁环绕移动，贴壁加样至色谱柱顶端，不要破坏凝胶面
C．打开下端出口，待样品完全进入凝胶层后直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱
D．待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，每5mL收集一管，连续收集流出液
8. 下列有关“血红蛋白提取和分离”的相关叙述中，正确的是（）
A．透析可去除样品中分子量较小的杂质
B．血红蛋白释放后应低速短时间离心
C．血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂
D．洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液
9. 对凝胶电泳的相关认识错误的是（）
A．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率只取决于分子的大小
B．蛋白质在SDS﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率完全取决于分子的大小
C．SDS﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳不仅用于蛋白质相对分子质量的测定，还可用于蛋白质混合组分的分离
D．凝胶中加入SDS可以消除净电荷对迁移率的影响
10. 相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶色谱柱中的行进过程，可表示为图中哪一个（）
（注：图中大圆点代表相对分子质量大的蛋白质）
A ．
B ．
C ．
D ．
二、综合题
11. 红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。
请回答下列有关问题：
（1）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，加入柠檬酸钠的目的是_____________ 。
洗涤红细胞时要用______（填溶液）反复洗涤、离心。
要让红细胞破裂，释放血红蛋白时要加入_________。
（2）得到的血红蛋白溶液装入透析袋中透析，即血红蛋白的粗分离，目的是除去_______。
（3）然后通过_____（填方法）将样品进一步纯化，最后进行纯度鉴定，使用最多的是______（填方法）。
三、实验题
12. 红细胞中含有大量的血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的，血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2，可选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。
请回答下列有关问题：
（1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：________、________、________和________。
（2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。
①加入柠檬酸钠的目的是________。
②以上所述的过程即是________ ，它包括________、________、分离血红收溶液和透析。
（3）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定。
样品纯化的目的是________。
（4）电泳法利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及________、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。
13. 血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2或CO2的运输。
请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。
（1）将实验流程补充完整:A为_____,B为____。
凝胶色谱法是根据_______来分离蛋白质的有效方法。
（2）洗涤红细胞的目的是去除____,洗涤次数过少,无法除去____;离心速度过高和时间过长会使____一同沉淀,达不到分离的效果。
洗涤干净的标志是____。
释放血红蛋白的过程中起作用的是____。
（3）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液（pH为7.0）的目的是_______。
如果红色区带____,说明色谱柱制作成功。