高效液相色谱样品前处理
高效液相色谱法测定化妆品中的维生素C及其衍生物
高效液相色谱法测定化妆品中的维生素C及其衍生物摘要：维生素C(VC)，又称L-抗坏血酸，是一种天然抗氧化剂，抑制皮肤中酪氨酸酶活性，阻断黑色素生成，达到美白效果。
维生素C虽然活性高，但在溶液中不稳定，容易受到光、热、氧等因素的破坏，失去还原能力，限制了其在化妆品中的有效利用率。
关键词：高效液相色谱；维生素Ｃ；抗坏血酸葡糖苷；抗坏血酸磷酸酯镁；抗坏血酸乙基醚；一、样品处理1. 水易分散的样品。
适合化妆水、水乳液等含油脂较少的样品。
准确称取约 0. 500 ｇ样品于 50 ｍＬ具塞比色管中，加入 30 ｍＬ 0. 02 ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0），涡旋混合 2 ｍｉｎ，转移至 50 ｍＬ容量瓶中，用 0. 02ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0）定容至刻度。
混匀后取 10 ｍＬ溶液于 15 ｍＬ离心管中，在10 ℃、12 000 ｒ／ｍｉｎ条件下离心 10 ｍｉｎ，上清液过0. 22μｍ滤膜，滤液待测。
2. 水不易分散的样品。
适合面膏等含油脂较高及凝胶类、啫喱类样品。
准确称取约 0. 250 ｇ样品于 50 ｍＬ具塞比色管中，加入 1. 0 ｍＬ二氯甲烷，涡旋混合至样品均匀分散后，准确加入 25 ｍＬ 0. 02 ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0），涡旋混合 2 ｍｉｎ。
混匀后取 10 ｍＬ溶液于15 ｍＬ离心管中，在10 ℃、12 000 ｒ／ｍｉｎ条件下离心 10 ｍｉｎ，上清液过0. 22 μｍ滤膜，滤液待测。
被测物含量超过标准曲线的线性范围时可取适量试样滤液用提取溶剂稀释后再测定。
二、样品前处理条件的优化维生素Ｃ和抗坏血酸磷酸酯镁易溶于水，抗坏血酸葡糖苷和抗坏血酸乙基醚是亲油亲水两性物质；维生素Ｃ在碱性和中性条件下不稳定，因此考虑采用酸性溶液作为提取溶剂。
化妆品基本上分为不需要乳化的液体类及需要乳化的膏霜类两大类。
前者含水量高，在水溶剂中容易分散形成均匀体系；后者含有一定的油脂，密度较高，在水溶液中不易分散。
高效液相色谱制样
高效液相色谱制样高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，缩写为HPLC）制样是指在对分离物质进行谱图检测前，将样品中的目标物质通过一系列方法进行富集、精制处理，以达到更好的分离效果。
HPLC是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术，在生产和科研中被广泛使用。
HPLC制样的基本流程主要包括样品的预处理和HPLC分离之前的样品富集处理。
样品预处理是指将样品中可能存在的干扰物质去除，以便于后续的分离和检测。
而HPLC分离前的样品富集处理，则是指将目标物质从复杂的样品基质中富集纯化，以提高检测的灵敏度。
样品预处理主要包括：1. 样品的前处理：如样品的粉碎、研磨、混匀等步骤，以确保样品中的目标物质均匀分布。
2. 样品的净化：如样品的过滤、离心等步骤，以去除杂质物质，确保样品的纯度。
3. 样品的化学转化：如样品的酸碱调节、氧化还原、酶解、蒸馏等步骤，以使目标物质得到更好的稳定性和纯度。
HPLC分离前的样品富集处理主要包括：1. 固相萃取（solid-phase extraction，简称SPE）：将样品溶液通过固相柱，以富集目标物质，去除干扰物质。
2. 液-液萃取（liquid-liquid extraction，简称LLE）：利用样品中组分的亲疏水性差异，采用萃取剂与样品进行混合萃取分离。
3. 气相萃取（gas chromatography，简称GC）：将样品挥发成气态，通过气相柱，以分离目标物质。
4. 薄层色谱（thin-layer chromatography，简称TLC）：利用样品在薄层分离柱中的迁移差异，以分离目标物质。
总之，HPLC制样是HPLC分析中非常关键的步骤，通过对样品的预处理和富集处理，可以最大限度地提高分离和检测的效果，使得检测结果更加准确、可靠。
液相色谱分析纯化样品前处理
4ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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样品采集
• 气体样品的采集
– 直接采集和富集采集
• 液体样品与固体样品的采集 • 样品采集的注意事项
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SPME实验过程
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SPME装置
萃取模式的选择 直接SPME模式 顶空SPME模式
通过装在注射器内石英纤维萃取 头表面的高分子涂层，对样品中的 有机物进行选择性萃取和预富集， 然后将富集了分析物的涂层立即插 入气相色谱进样口热解吸进样。
• 大部分的原始样品不适合直接分析，需要对其 进行前处理
• 样品前处理的情况将影响定性和定量结果的准 确性
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样品前处理的原则
• 收集的样品必须具有代表性 • 采样方法必须与分析目的保持一致，并且采集到
• 特殊样品制备 • 应用实例分析
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样品处理概况
• 根据所需采集的原始样品和样品基体的性质、 所要获得的信息( 分析测试的目的)、允许的分 析时间和色谱仪器对所分析样品的要求等，决 定样品的采集和制备方法及其程序。
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液相色谱中样品前处理技术
液相色谱中样品前处理技术综述在复杂基体中低浓度甚至是痕量的有机化合物的分离和测定是分析化学所面临的一个挑战。
在样品前处理方面,现代色谱分析样品制备技术的发展趋势是使处理样品的过程要简单、处理速度快、使用装置小、引进的误差小,对欲测组分的选择性和回收率高。
目前国际上液相色谱通常采用的样品处理技术有:固相萃取(MXPD)、超临界萃取(SFE)、固相微萃取技术。
而我国目前主要采用传统的溶剂萃取,液液分配、柱层析净化,前处理方法自动化程度低,提取净化的效率不高,速度慢,环境污染严重。
新开发的前处理技术其目的和结果就是要实现快速、有效、简单和自动化的完成分析样品制备过程。
下以就简单介绍几个主要的样品处理技术:1.溶剂萃取在色谱分析样品制备中,溶剂萃取方法主要有液-液萃取、液-固萃取和液-气萃取,它们都是属于两相间的传质过程,即物质从一相转入另一相的过程。
溶剂萃取技术在我们液相色谱分析的样品制备过程中,是用到最为广泛的一种技术。
关于其原理和方法,在此不再赘述。
在液-液萃取中非常重要的操作是急速的振动样品,这样可以确保两相的完全接触,有助于质量传递。
由于物质剧烈的振动,使得乳化现象经常发生,特别是那些含有表面活性剂和脂肪的样品。
为了防止乳化形成,常采用加热或加盐的方法破乳。
通过改变K D值,改变溶剂或化学平衡作用的添加剂,如使用缓冲剂调节PH,盐调节离子强度等。
常用于破乳的技术有:(1)加盐;(2)使用加热-冷却萃取容器;(3)通过玻璃棉塞过滤乳化液样品;(4)通过相过滤纸过滤乳化液样品(5)通过离心作用;(6)加少量的不同的有机溶剂。
溶剂萃取的方式在现代水产品检测技中应用十分广泛,因其实验器材简便,经济,容易操作。
在鱼体的孔雀石绿,环丙沙星等药物残留的检测中,都有用到溶剂萃取的方式。
在孔雀石绿残留的检测中,为了防止乳化现象的产生,也用到了二甘醇这进行破乳。
2.固相萃取(solid phase extraction SPE)1固相萃取(SPE)是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,与样品的基体和干扰化合物分离。
高效液相色谱样品预处理步骤
高效液相色谱样品预处理步骤1. 样品准备在准备高效液相色谱样品时，需要确保样品的稳定性，防止样品在分析过程中发生变化。
因此，在样品准备过程中需要注意以下几点：（1）选择合适的样品存储容器，避免样品被污染或发生变化；（2）确保样品在分析前达到室温，以避免样品在注射到色谱柱时产生气泡；（3）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载。
2. 样品过滤在进行高效液相色谱分析前，需要将样品通过过滤器进行过滤，以去除样品中的固体杂质或悬浮物，从而防止其对色谱柱的堵塞或损坏。
通常使用的过滤器有不同规格的筛网或滤膜。
3. 样品衍生化在一些情况下，需要对样品进行衍生化处理，以便更好地进行高效液相色谱分析。
衍生化处理可以将样品中的某些化合物转化为更易分析的形式，例如将某些极性化合物转化为非极性化合物，使其更适合用有机溶剂进行洗脱。
4. 样品稀释在某些情况下，需要将样品进行稀释，以便更好地进行高效液相色谱分析。
过浓的样品可能会导致色谱峰过宽或重叠，影响分析结果的准确性。
通常使用的的是溶剂或水进行稀释。
5. 样品进样在进行高效液相色谱分析时，需要将样品通过进样针注入到色谱柱中。
在进行进样时，需要注意以下几点：（1）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载；（2）确保进样针的清洁和干燥，以避免对分析结果产生干扰。
6. 样品分离在将样品注入到色谱柱后，需要对其进行分离。
通常使用的的是高压泵将流动相通过色谱柱，将样品中的各个化合物进行分离。
在进行分离时，需要注意以下几点：（1）选择合适的流动相，以便将样品中的各个化合物进行分离；（2）调整流动相的流速和比例，以便获得更好的分离效果。
7. 检测器检测在分离后的各个化合物通过色谱柱流出时，需要使用检测器进行检测。
常见的检测器有紫外可见光检测器、电导检测器、荧光检测器等。
检测器可以提供样品的信号，并记录下各个化合物的在色谱图中的保留时间。
8. 数据处理在检测器检测完成后，需要对数据进行处理。
岛津高效液相色谱仪LC-2030操作规程
一、分析前准备1.1 流动相前处理将流动相（色谱纯级别的甲醇、乙腈或去离子水）经过0.45um的微孔滤膜过滤后，倒入流动相瓶中，放入超声波清洗器内震荡排气20分钟左右（注意将瓶盖轻轻盖上防灰）1.2 流动相安装将处理好的流动相放在储液托盘上，将对应通道的洗液管路分别放入流动相瓶中，盖好瓶盖并记好对应通道的流动相种类。
1.3 样品记录将样品处理稀释后使用注射器过滤头过滤后装入1.5ml样品瓶中（大约三分之二），放入自动进样器的样品架上，并记录样品瓶位置以便设置批处理文件。
1.4 色谱柱安装打开柱温箱门，将色谱柱的出口端安装在色谱柱夹具上，在色谱柱上连接配管，在色谱柱出口端连接检测器入口端的蓝色PEEK管。
1.5 检查清洗液在RINSE通道内放置50%甲醇：水溶液；含有两根管路的通道内放置10%异丙醇：水溶液。
（清洗液建议至少一月更换一次）二、开始分析2.1仪器开机打开仪器左方的电源开关，待自检完成后，使用触屏笔输入登录通行ID Number （默认值为“00000”），按下OK进入初始窗口2.2 启动LabSolutions双击桌面的LabSolutions图标在登录菜单里，正确输入用户名和密码（默认用户名为“admin”，密码不填），点击确定，进入LabSolutions主项目LabSolutions主项目包含4个子项目，“仪器”为在线采集项目；“处理工具”为离线处理数据项目；“管理工具”为软件管理属性设置项目；“手册”为软件在线使用手册。
2.3 进入在线采集双击图标，正常连接能听到“滴”的连接提示音，如硬件不匹配提示，请参考附录，重新做系统配置2.4 进入数据采集界面进入数据采集界面后，看到以下画面2.5 选择（新建或打开）方法文件点击主项目下的进入数据采集项目，点击工具栏中的新建或打开快捷键新建或者打开一个方法文件。
在“仪器参数”界面设置数据采集所需参数，主要包括：泵（模式：四元低压梯度；流速；各通道流动相比例和压力上限）；检测器波长、检测池温度；数据采集结束时间；柱温箱温度以及自动排气等。
FL2200仪器操作说明
福立FL2200-2高效液相色谱操作流程1.样品前处理。
请严格配制流动相、标样和样品溶液，具体注意事项看仪器使用说明书2.打开电脑电源，打开FL2200反控色谱工作站3.打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器电源开关，仪器自动自检4.仪器自检完毕后直接进入工作界面，此时工作站上相应图标变得可操作5.设定泵A的流量为1mL/min，点击A【泵启动】，如果使用梯度泵，则先填写梯度程序。
此时泵图标由白色变成蓝色，表示泵工作6.设置柱温箱温度，点击【柱箱开】，柱箱自动升到设定温度7.设置检测器波长为实际分析样品所需波长8.设置自动进样器参数，自动进样器的位置参数在出厂时已经设置好，在此只需要设置与样品相关的参数即可9. 待基线稳定，进行进样操作，点击自动进样器启动，自动进样器根据我们实际设定值进行自动进样10. 做样结束，进行清洗A、仪器系统的清洗，如有必要，再执行以下清洗仪器做样完毕后，关闭检测器→停泵→把吸滤头放于甲醇：水=10：90的溶液中→打开“放空阀”→点击“清洗”→清洗2~5分钟→停泵→关闭“放空阀”→调节流量为1.00ml/min→启动泵→清洗系统30min（具体视柱子在冲洗时压力是否正常，如一般10%甲醇水清洗稳定的压力在10~11之间，要求色谱柱为[C18 4.6*250mm 5um]，如果大于该值，说明冲洗不完全，请继续清洗）→压力正常→把吸滤头放于纯甲醇中→冲洗30min（具体视柱子在冲洗时压力是否正常，如一般甲醇清洗稳定的压力在5~7之间，要求色谱柱为[C184.6*250mm 5um]，如果大于该值，说明冲洗不完全，请继续清洗）→清洗完毕→关闭泵电源。
B、清洗进样针、进样器做样完毕后，请及时清洗自动进样器进样针、进样器。
C、清洗柱塞杆做样结束后，定时间清柱塞杆，清洗柱塞杆一般用10%甲醇水溶液清洗30ml 11. 清洗完毕，关掉仪器和电脑的电源开关。
液相色谱样品前处理流程
液相色谱样品前处理流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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高效液相色谱样品前处理
1.高效液相色谱法分析样品为什么要进行样品前处理
(1)样品浓度调节：某些待测组分在样品中的浓度过低或过高，造成仪器检测困
难，因此需要提前对样品进行浓缩或稀释。
(2)避免污染，保护仪器：某些样品的酸碱度、离子强度等易造成系统污染和缩
短仪器使用寿命
(3)消除干扰：基体或共存物质的干扰
(4)介质置换：样品介质不适合后续的分离和检测，需要提前进行介质置换。
2.高效液相色谱法分析样品前处理的遵循原则
(1)去除基体杂质，消除干扰因素；
(2)完整保留待测组分，处理过程中尽可能避免待测组分发生化学反应或被污
染；
(3)方法简单易行、重现性好、成本低。
3.高效液相色谱法分析样品前处理技术
干扰物质，然后用洗脱液将待测组分
分离出来。
染分析
微波辅助萃取利用高频电磁波的作用，使样品中待
测组分从胞内释放出来，并在低温下
溶解于萃取溶剂中，过滤，达到分离
的目的。
天然药物、农药残留、有
机金属化合物等物质的提
取
超声波辅助萃取利用超声波的机械效应、空化作用以
及热效应等，破坏样品细胞组织，加
大细胞内的传质效率，从而促进待测
组分的释放和提取。
蛋白质、多糖、烟碱等物
质的提取
超临界流体萃取采用二氧化碳作为流体，在超临界条
件下，二氧化碳使样品的各组分依次
萃取出来，当恢复常温和常压时，溶
解在二氧化碳中的待测组分立即以液
体状态与气态流体分离。
多用于天然物质的提取
迪信泰检测平台以液相/气相为依托，采用HPLC/GC及LC-MS等检测平台，致力
于为各科研院所，高校，药企，生物工程类企业提供生物、食品、药物、环境等多领域的物质检测服务。