益肾健脾养血通利方对多囊卵巢综合征大鼠模型胰岛素样生长因子 1mRNA表达的影响

益肾健脾养血通利方对多囊卵巢综合征大鼠模型胰岛素样生长因子-1 mRNA表达的影响(作者：___________ 单位： _________ 邮编：____________ )【摘要】目的观察益肾健脾养血通利方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型胰岛素样生长因子-1(IGF-1) mRNA表达的影响, 从而在分子水平初步探讨该方治疗PCOS的可能机制。

方法SD雌性大鼠72只，随机分为正常对照组、模型组、克罗米芬组及中药小、中、大剂量组，除正常对照组外，其余各组皮下埋植左旋炔诺孕酮硅胶棒，建立PCOS大鼠模型,应用原位杂交法观察IGF-1 mRNA在大鼠多囊卵巢中的表达。

结果模型组IGF-1 mRNA表达明显高于对照组，图像半定量分析显示中药治疗组均能减少IGF-1 mRNA的表达。

结论益肾健脾养血通利方具有降低大鼠多囊卵巢中IGF-1 mRNA的表达，改善胰岛素抵抗状况的作用。

【关键词】多囊卵巢综合征；益肾健脾养血通利方；胰岛素样生长因子-1 ;动物模型Abstract : Objective To investigate the effects of Yishen Jianpi Yangxue Tongli Fang (YSJP) on IGF-1 mRNA expression in the ovary of PCOS rat, and study its mechanism on the molecular level. Methods Seve nty two female SD rats were ran domly divided into no rmal con trol group, model group, clom ifene group and low-, mid-, high-dose Chin ese medic ine group. The ani mal model established by capsulae levonorgestreli silasticus was used to observe the IGF-1 mRNA expression in ovary by hybridization in situ. Results IGF-1 mRNA expression of PCOS model group was higher than the normal control group obviously. The semi-quantitative image an alysis showed that TCM treatme nt could decrease IGF-1 mRNA expressi on. Con clusi on Yishe n Jia npi Yan gxue Ton gli Fang could decrease the IGF-1 mRNA expression in ovary and improve the in suli n resista nee of PCOS rats. Key words : polycystic ovary syndrome ; Yishen Jianpi Yangxue Tongli Fang ; IGF-1 ; animal model目前，多数学者认为胰岛素抵抗和高胰岛素血症与多囊卵巢综合征(PCOS)的发病密切相关,是PCOS主要特征之一。

大量研究表明, 胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在PCOS胰岛素抵抗、高胰岛素血症及高雄激素血症中起着重要作用。

全国名老中医柴松岩根据多年临床经验认为，本病多因脾肾不足、痰湿阻遏而发病，其经验方益肾健脾养血通利方具有明显改善PCOS患者月经状况、促进排卵及妊娠的作用［1］。

本研究应用原位杂交法观察IGF-1 mRNA在大鼠多囊卵巢中的表达，从而在原有基础上从分子水平探讨该方治疗PCOS时，对其病理生理过程的可能作用。

1实验材料1.1动物雌性SD大鼠,24日龄，中国科学院遗传与发育生物学研究所动物中心提供，许可证编号：SCXK(京)2002-0006。

1.2药物与试剂健脾益肾养血通利方浸膏，单味药均购自同仁堂药店，经鉴定为正品；中国中医科学院医学实验中心制剂室精制；临床人用量为120 g 原药材/d,批号041002。

枸橼酸氯米芬胶囊，上海衡山药业有限公司生产，批号040501 ;注射用人绒毛膜促性腺激素(HCG),上海第一生化药业有限公司生产，批号030610 ;左旋炔诺孕酮硅胶棒，黑龙江省丹东市鸭绿江制药厂生产，批号20010101 ;焦碳酸二乙酯(DEPC),Sigma公司产品。

2实验方法2.1分组72只SD雌性大鼠随机分为6组：正常对照组、模型组、克罗米芬组(25 mg/kg)及中药小(5 g/kg)、中(10 g/kg)、大(20 g/kg)剂量组(分别相当于人用量的2.5、5、10倍)，每组12只。

2.2造模及给药参照文献［2］方法，常规饲养3 d后,除正常对照组外，其余5组皮下埋植左旋炔诺孕酮硅胶棒（3 mm,内含左旋甲基炔诺酮3.6 mg）,于27日龄时每只动物皮下注射HCG 1.5 U,每日2次,共9 d,正常对照组每日注射等容积生理盐水。

克罗米芬组及中药各剂量组分别按照上述剂量灌胃给予克罗米芬及健脾益肾养血通利方浸膏，连续6周；正常对照组及模型组灌胃给予常水。

提前12 h禁食不禁水，戊巴比妥钠麻醉,冰盘上快速游离卵巢,4%多聚甲醛（0.1 mol/L PBS配制，内含0.1%DEPC）固定组织，进行石蜡切片。

采用原位杂交方法，按照试剂盒说明书要求进行IGF-1 mRNA检测。

3统计学方法实验数据以x ±＞表示。

采用Motic6.0软件和原位杂交病理图像分析系统对结果进行图像分析。

根据图像分析系统采集的数据，对每个统计场的目标平均光密度和面密度进行统计。

4结果原位杂交结果显示，IGF-1 mRNA阳性表达信号为棕黄色位于细胞胞浆；模型组表达明显高于对照组。

图像半定量分析显示中药治疗组均能减少IGF-1 mRNA的表达。

见表1。

表1益肾健脾养血通利方对PCOS大鼠卵巢IGF-1 mRNA表达的影响（略）注：与正常对照组比较，##P V 0.01 ;与模型组比较,*P v 0.05,**P v 0.015讨论IGF-1是一种能促进合成代谢的多肽，其结构类似胰岛素,IGF-1的作用是由IGF受体介导的,该受体在结构和功能上类似胰岛素受体,提示胰岛素和IGF-1可能存在交叉反应，即重叠的生物效应［3］。

有研究表明,IGF-1和胰岛素可协同调节卵巢性激素的合成［4］,表现在IGF-1能直接刺激卵泡膜细胞合成雄激素，也能协同促黄体生成素（LH）促进雄激素的合成；过高的胰岛素能抑制肝脏胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）的合成，提高卵巢组织IGF-1的生物活性，在胰岛素和IGF-1共同作用下产生一个雄激素化的卵巢微环境。

PCOS 患者离体培养的卵巢间质加入高于正常血浆浓度的胰岛素后，间质合成IGF-1和雄激素增加；高胰岛素可能和与其结构同源的IGF-1受体及其杂交受体结合，诱导并增强IGF-I基因及受体基因的表达［5］。

PCOS患者因胰岛素和IGF-1的过度作用，卵巢对LH的敏感性增加，使卵泡募集数增加，正常卵泡闭锁不断发生或减少丄H的作用扩大，局部产生的雄激素使发育到一定阶段的卵泡延缓或停止发育，而高胰岛素和IGF-1对原始卵泡不断启动，从而促进多囊卵巢形成［6］。

西药治疗大体从促排卵（如克罗米酚等）、抗雄激素（如口服避孕药妈富隆、赛普龙等）和降低胰岛素（如二甲双胍、甲福明等）等着手。

为探讨该方治疗PCOS的可能机理，前期工作选用Poresky PCOS动物模型来观察益肾健脾养血通利方对大鼠体重、动情周期、血清胰岛素和IGF-1水平、性激素及病理组织学的变化，实验结果显示，本方具有降低血清胰岛素和IGF-1水平、改善多囊卵巢征象、恢复排卵的作用［7］。

在左旋炔诺孕酮PCOS大鼠实验中冲药治疗组大鼠的妊娠率显著高于病理模型组，而电镜结果显示，中药对PCOS实验动物模型受损卵巢细胞有较理想的修复作用[8]。

本研究结果表明，中药治疗组多囊卵巢中IGF-1 mRNA水平降低，这与临床及前期实验结果是一致的。

由此可见，本方可改善胰岛素抵抗及高胰岛素血症，使局部雄激素生成减少，各种激素和因子相互促进和制约，使下丘脑-垂体-卵巢轴的功能得以恢复，加上卵巢内环境的改变，使卵巢恢复正常局部调控，最终使PCOS临床症状及相关生化指标得以改善。

以上系列研究表明，本方治疗PCOS是具有多靶效应的。

【参考文献】[1]华苓,吴育宁，张巨明，等•益肾健脾养血通利法治疗多囊卵巢综合征的临床观察[J].中国中西医结合杂志，2003,23(11) : 819 —822.[2] 朱辉，倪江,姚兰春,等.大鼠多囊卵巢动物模型的实验研究[J].哈尔滨医科大学学报，1999,33(3) : 187 —188.[3] 郑建淮,曹缵孙，陈晓燕•胰岛素抵抗在多囊卵巢综合征中的作用[J].国外医学•妇幼保健分册,2001,12(2) : 70.[4] Hotle J. Polycystic ovary syndrome and insulin resista nee : thirty genes struggli ng with overfeed ing and sede ntarylife style [J]. J Endoerinol Invest,1998,21(9) : 589 —601.[5] 梁晓燕，庄广伦，方群,等.多囊卵巢综合征患者卵巢间质胰岛素样生长因子受体的表达[J].中华妇产科杂志，1997,32(10):582 —585.[6] 徐雯,王元佩，赵采，等•多囊卵巢综合征患者血清、卵泡液中胰岛素样生长因子-1水平研究[J].福建医药杂志,2004,26(4):113 —114.[7] 黄玉华,赵子厚,柴松岩，等.益肾健脾养血通利方对Poresky PCOS大鼠模型的影响[J].中国中医基础医学杂志,2004,10(1) : 38 —41.[8] 黄玉华，赵子厚,柴松岩，等.益肾健脾养血通利方对左旋炔诺孕酮PCOS大鼠模型的影响[J].中国中医药信息杂志,2006,13(10) : 38 —39.。