6旋毛虫病肉品检验技术
猪宰后旋毛虫病检疫.ppt
步骤4 镜检及判定
任务要求： 3. 旋毛虫包囊鉴定 与肉包子虫包囊的鉴别
猪宰后旋毛虫病检疫
图：肉孢子虫包囊
图：旋毛虫包囊
猪宰后旋毛虫病检疫
步骤5 检疫后的处理
任务要求： 1. 处理依据 《动物防疫法》、《病害动物和病害动物产品生物处理规程》
2. 处理结果 无害化处理或销毁处理
猪宰后旋毛虫病检疫
授课教师：
课程回顾
猪宰后胴体检疫
本节课学习任务
猪宰后旋毛虫病检疫
猪宰后旋毛虫病检疫
整 体 检 查 淋 巴 结 检 查
检疫概况
旋毛虫病概况 猪宰后旋毛虫病检疫的原因
猪宰后旋毛虫病检疫
学习任务重点
膈肌脚的视检和显微镜检查
学习任务难点
旋毛虫包囊的鉴定
猪宰后旋毛虫病检疫
任务步骤
猪宰后旋毛虫病检疫
任务思考与分析
为什么在制作肌肉压片过程中，需顺着肌纤维方向剪取肉粒？
猪宰后旋毛虫病检疫
再 见！
1. 膈肌脚采样 2. 视检肉样 3. 肌肉压片制作 4. 镜检及判定 5. 检疫后处理
猪求： 1. 采集部位 横膈膜与腰椎连接处
2. 肉样大小 左右膈肌各约30g左右
猪宰后旋毛虫病检疫
图：膈肌脚
步骤2 视 检
任务要求： 1. 膈肌处理 撕去肌膜
2. 视检方法 光线充足
猪宰后旋毛虫病检疫
步骤3 肌肉压片制作
任务要求： 1. 压片用肉粒选择 剪取肌纤维方向
2. 小肉粒特性 采样分布、大小、数量
猪宰后旋毛虫病检疫
步骤4 镜检及判定
任务要求： 1. 显微镜使用要求
低倍镜检查
2. 判定标准 无包囊的旋毛虫 有包囊的旋毛虫 钙化的旋毛虫 机化的旋毛虫
猪旋毛虫病的检疫检验与防控分析
现代生猪养殖业不断向前推进，养殖密度增加背景之下，传染性疾病的发生流行率呈现逐渐升高的态势，表现出复杂的临床症状，给疾病的诊断和防控工作带来了很大难题。
落实生猪检疫检验工作，尤其是落实生猪屠宰检疫工作，能够帮助基层兽医人员及时发现患病猪，及时处置患病情况，将各类疾病发生流行率降低到最少程度。
猪旋毛虫病是生猪屠宰检疫过程中法定检疫的对象，该种疾病具有一定的隐蔽性，生猪在未屠宰之前往往不会表现出明显的临床特征，只有在屠宰之后才会表现出明显的肌肉组织病变。
所以为了保证生猪产品的安全性，一定要落实猪旋毛虫病的检疫检验制度，并构建完善的防控措施，降低该种疾病对生猪养殖业和人类身体健康造成的危害。
本文主要对猪旋毛虫病流行特点进行探讨的基础上，明确了猪旋毛虫病的检疫检验措施，并提出了相应的防控方案，希望通过研究对广大同行有所帮助。
旋毛虫病是生猪养殖领域比较常见的一类体内寄生虫病，该类疾病的发生流行却有一定的隐蔽性，不仅可以感染猪，还可以威胁到人类的身体健康，对人畜构成的威胁较大。
猪旋毛虫病主要是由旋毛虫寄生在生猪的横纹肌而引发的一种寄生虫疾病，除了危害猪之外还可以危害狗、猫、鼠、兔、狼等多种牲畜类的动物，同时也会威胁到人类的身体健康，是一种典型的人畜共患传染性疾病，对人畜造成的危害极大。
当前随着我国生猪养殖业不断向着集约化规模化方向发展，养殖密度增加背景下旋毛虫病的危害呈现逐渐加重的态势，如若没有做出针对性的流行病学调查，掌握该种疾病的流行特征，经常会造成带病的生猪进入到屠宰环节。
生猪屠宰检疫期间如果不能够严格落实同步屠宰检疫制度，没有及时发现带病的猪肉制品就会造成患病猪肉制品在市场中流，通危及到消费者的身心健康。
对此就需要提高对该种疾病危害性的认知，加强流行病学调查，做到早发现早处理，在短时间内控制病情，避免损失进一步加大。
一、流行病学1、寄生虫特征猪旋毛虫又被称为长旋毛虫，该种寄生虫主要寄生在终末宿主的小肠道中，虫体头细尾端较粗。
猪旋毛虫病的检疫方法及处理
加 。同时 ， 应保证母猪适 当的运动 、 日光浴 ， 促使母
猪 生理功 能正 常运转 ， 以治疗本病时 ， ． 应抓住用
２１ ００年 第 ５期
静 嗣毽鍪圈豳 ・
・ 静
养 猪
端 旋 毛 虫 高 的 捡 疚 法 ＆ 处 理
赵 照 兴
（ 江省杭 州 市余杭 区畜 牧兽 医局 。杭 州 浙 ３ １ ０） １ １０
ＤＯ １ ０３ ６ ／ ． ： ．９ ９Ｊ Ｉ １ ＳＳＮ．６ １ ６ ２ ．０ ０．５０ ４ １ ７ － ０ ７２ １ ０ ．７
猪旋毛虫病属国家二类动物疫病 ， 由于旋 毛 是 虫的幼虫或成虫寄生所引起的一种重要的人 畜共 患寄生 虫病 ，人和其它 １０多种 动物均可感染此 ０ 病， 因此猪旋毛虫病是猪肉 Ｅ常食 品卫生检验检疫 ｔ
在 肉 样 上 顺 肌 纤 维 方 向剪 取 ２ ４块 米 粒 大 小 的 肉
猪旋 毛虫 病 是一 种 自然 疫 源性 疾 病 ， 成 虫 细 其 小， 肉眼几乎很难看清楚 ， 雌雄异体 ， 寄生于宿主肠 内 ， 肠 旋 毛虫 ； 虫 寄生 于 宿主 横纹 肌 细胞 内 ， 称 幼 称
粒， 制成肌 肉压片 ， 在低倍显微镜 （０— ０ ） ２ ５ 倍 下镜 检， 观察有无包囊和尚未形成包囊的幼虫。 ４ 宰 后病 理变 化 患旋 毛虫病的寄生部位肌肉发生变性 ， 肌纤维 肿胀甚至坏死 ， 横纹消失 ， 肌间结缔组织增生。
巢 、 宫、 子 阴道 和 外 阴 中发 挥 的作用 。蛇床 子 、 母 益
其各种生殖器官及腺体重新分泌促性腺激素 ， 提高 血液 中荷尔蒙的水平。治疗时中西药同时使用 ， 并
结合适 当的运动、 光浴。 日
３２ 治疗 方法 ．
猪旋毛虫病的检疫检验与防控
猪旋毛虫病的检疫检验与防控猪旋毛虫病是由旋毛虫寄生于猪体内引起的一种传染病，对猪的健康和生产造成严重影响。
为了有效控制猪旋毛虫病的传播和流行，必须采取严格的检疫检验和有效的防控措施。
本文将从猪旋毛虫病的疾病特点、检疫检验、防控措施等方面进行介绍，希望能够对相关从业人员和养殖户提供一定的参考和帮助。
一、猪旋毛虫病的疾病特点猪旋毛虫病是由寄生在猪肠道内的旋毛虫引起的一种传染病，主要通过猪体内受感染的粪便、尿液等传播。
该病症主要包括：1、急性型猪旋毛虫病，主要表现为呈暗绿色的腹泻、脱水、食欲下降、体温升高、消瘦等症状；2、慢性型猪旋毛虫病，主要表现为状泻、贫血、发育迟缓、食欲不振等症状。
猪旋毛虫病对猪的生长发育和免疫功能造成严重影响，严重时可导致猪的死亡。
二、猪旋毛虫病的检疫检验为了有效控制猪旋毛虫病的传播和流行，需要对猪进行严格的检疫检验。
检疫检验主要包括以下几个方面：1、临床检查：通过对猪的体温、食欲、粪便等情况进行观察，及时发现疑似猪旋毛虫病症状，采取相应的隔离和治疗措施。
2、病原学检验：通过实验室的病原学检验，对猪体内的粪便、肠道等样本进行检测，确认是否感染了旋毛虫及其数量，为后续防控措施的制定提供依据。
3、流行病学调查：通过对猪群的密切接触情况、饲养环境、饲料和饮水的卫生情况等进行调查，总结传播规律，找出传播源和主要传播途径。
4、疫情监测：对已经感染的猪进行动态监测，掌握疾病流行的趋势和规律，及时调整防控措施，防止疾病的扩散和交叉感染。
三、猪旋毛虫病的防控措施1、饲养管理：保持猪圈的卫生环境，定时清理粪便、消毒猪圈，保证饮水和饲料的卫生安全，减少粪便和尿液对猪的污染。
2、药物治疗：针对已感染的猪，可以使用一些抗旋毛虫的药物进行治疗，减轻症状，控制疾病的发展。
3、隔离措施：对怀疑病猪和已感染的猪，及时进行隔离，防止疾病的扩散和传播。
4、疫苗预防：针对猪旋毛虫病，可以研发相应的疫苗，提高猪的免疫力，减少疫情的发生和流行。
旋毛虫病肉品检验技术
旋⽑⾍病⾁品检验技术旋⽑⾍病⾁品检验技术旋⽑⾍病是重要的⼈畜共患寄⽣⾍病，它是由⽑形科的旋⽑形线⾍（Trichinella spiralis）成⾍寄⽣于肠管，幼⾍寄⽣于横纹肌所引起的。
该病流⾏于哺乳类动物间，鸟类可实验感染。
⼈若摄⾷了⽣的或未煮熟的含旋⽑⾍包囊的猪⾁可感染⽣病，主要临床表现为胃肠道症状、发热、肌痛、⽔肿和⾎液嗜酸性粒细胞增多等，严重者可以导致死亡，故⾁品卫⽣检验中将旋⽑⾍列为⾸要项⽬。
旋⽑⾍病的⾁品检验是⽣猪屠宰检疫中的⼀项重要内容，通过该项检验可以检出感染旋⽑⾍的猪只。
对于杜绝病猪⾁流⼊⾁品市场，有着重要的作⽤。
⼀、实验⽬的及要求1．掌握肌⾁旋⽑⾍压⽚镜检法、消化法的操作⽅法。
2．了解酶联免疫吸附试验的⽅法。
3．掌握旋⽑⾍病⾁的处理⽅法。
⼆、实验器材（⼀）旋⽑⾍压⽚镜检法1．材料：被检⾁品。
2．器材：载玻⽚，剪⼑，镊⼦，天平，显微镜。
3．试剂：50%⽢油⽔溶液，10%稀盐酸。
（⼆）旋⽑⾍集样消化法1．材料：被检⾁品。
2．器材：组织捣碎机，采样盘，磁⼒加热搅拌器，圆盘转动式计数镜检台，集⾍器，载玻⽚，表⾯⽫，烧杯，剪⼑，镊⼦，天平，温度计，显微镜。
3．试剂：0.04%胃蛋⽩酶溶液，盐酸。
（三）旋⽑⾍酶联免疫吸附试验（ELISA）1．材料：被检⾁品。
2．器材：滤纸⽚，玻璃瓶，剪⼑，酶标测定仪，反应板，加样器。
3．试剂：（1）阳性⾎清，阴性⾎清；（2）旋⽑⾍抗原；（3）酶标抗体（⼜称酶结合物、酶标记免疫球蛋⽩）；（4）包被液：Na2CO3 1.59g、NaN3 0.2g、NaHCO3 2.93g，⽤蒸馏⽔加⾄1000ml，调整pH为9.6。
放4℃冰箱中保存备⽤。
（5）洗涤液：NaCl 8.9g、Tween-20 0.5g、KH2PO4 0.2g、NaN3 0.2g、Na2HPO4·12H2O 2.9g、KCl 0.2g，⽤蒸馏⽔加⾄1000ml，调整pH为7.4。
（6）底物溶液（OPD-H2O2）：称取邻苯⼆胺40mg，溶解于100ml pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液（0.1M 柠檬酸24.3m1，加0.2M NaH2PO4 25.7ml，加⽔50ml）中，然后加30％过氧化氢0.15ml，现配现⽤。
猪旋毛虫病主要检验要点
猪旋毛虫病主要检验要点猪旋毛虫病主要检验要点猪旋毛虫检验一般在生猪宰杀后同步检验进行，检验时必须在有充足的光源、专门的检验设备和安静的环境下进行，同时必须有足够的人员满足与屠宰生产线同步同速进行检验。
因此，良好的组织管理是猪旋毛虫检验的必要保障。
样品采取与送检采集。
猪宰后检验采取左右膈肌脚各30克（膈肌脚难以取得时可取膈肌、腹斜肌等）。
采样时一般在开膛后去白内脏后与红内脏前进行，采样人一手拿钩一手拿刀，用钩子钩住膈肌脚，用刀在钩住的膈肌脚周围划割，把膈肌脚采下。
编号。
结合生产速度采用整十或整五的编号方式，将样品编上与胴体相同的号码，便于送检。
送检。
根据生产速度，合理使用采样盘或传送带等方式，把样品迅速送至旋毛虫检验室进行检验。
结果报送。
对旋检结果及时传递给复检（或终检）人员，及时对屠宰生猪进行综合判定。
猪旋毛虫的实验室检验要点视检。
将膈肌的肌膜和脂肪撕去，纵向拉平膈肌，在充足的光线下，肉眼观察表面有无针尖大半透明隆起的乳白色或灰白色小点，然后再剪开肉样深部进行观察。
镜检。
从左右膈肌脚不同部位，顺肌纤维方向剪取米粒大小的24个肉粒，其中视检到的小白点必须剪下。
将肉粒均匀放在旋毛虫压片器中，排成两行，每行12粒，压薄镜检。
如用载玻片代替，24个肉粒需要4块载玻片，肉粒放好后用手压紧两玻片，两端用橡皮圈缠牢，将肉粒压薄。
将制好的压片置于显微镜下，用低倍镜观察，逐个检查肉粒。
判定。
肌纤维间已形成包囊的旋毛虫，多呈梭形、椭圆形，包囊中虫体弯曲呈螺旋状。
肌纤维间钙化的旋毛虫，则囊内有多少不一、浓度不均匀的黑色末状或块状钙化物。
钙化的包囊，滴加盐酸将钙盐溶解后，可以见到虫体痕迹。
旋毛虫的几种检验检疫技术
１ 目检 法
程 比较 烦琐 ，检 测过 程花 时 间 长。
由于旋 毛 虫感 染 动 物后 ，大约 ２ １ ｄ ～７ 个 月 就会 形 成钙 化 ，这 ４ 酶联 免疫 吸附试验 （ Ｅ Ｌ ｌ Ｓ Ａ ） Ｓ Ｐ Ａ — Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 的原 理 是根 据葡 萄球 菌 蛋 白Ａ （ Ｓ Ｐ Ａ） 能 与人 和 多 样 只要 用 肉眼就 能将 其 检 出 。该 方法 一 般是 直 接在 肉尸 的左 右 横 ｇ Ｇ 结合 ，有 较 高 的敏感 性 ，而且 可以不 受种 属特 异 膈 肌脚 采取 不少 于 ３ ０ ｇ 的 肉样 ，然后 撕 去肌 膜 ，将肌 肉拉 平 ，观 察 种 哺乳 动 物 的Ｉ 肌 肉纤维 的表 面 。若 发现 有半 透 明露 滴 状 或乳 白色 、黄 白色点 状 性 的限 制 ，并且 具 有 制备 容 易 、性 质稳 定 、易 纯 化 ，使 用更 趋 方 Ｌ Ｉ Ｓ Ａ中的 酶标 第 二 抗体 来检 测 物 ，即可 判 定该 猪 肉为旋 毛 虫 肉 。这种 方 法 的检 出率 较 高 ，但 是 便 等 优 点 ，所 以 可用 以代 替 间 接Ｅ 需 要 在 自然 光线 好 的 条件 下进 行 ，而且 这 种方 法不 宜 单 独 用 ， 旋 毛 虫 的感 染情 况 。Ｄ Ｏ Ｔ — Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 是 以纤维 素 薄膜 为 同相 载 体 ，孑 Ｌ 冈 为其 检 率 的高 低 取 决 于 检验 人 员 的 经 验 ，漏 检 率 也 相 对 较 径 大 约 为０ ． ２～ ０ ． ４ ｍ，将 抗 原或 抗体 用 大头 针蘸 取 印滴 吸 附住 纤 高 ，有 时 可 以达 Ｎ ８ ｏ ． ５ ％。所 以 只能 用 作 初 次筛 选 ，结 合 显微 镜 维膜 表 面 ，然 后通 过 相应 的抗原 抗 体 反应 以及 加 入底 物 后 呈现 出 肉眼可 见 的颜 色斑 点 。这 种 方 法 的优 点是 敏感 性 高 、被 检 样 品用 检查 可 以有效 地提 高旋 毛虫 的检 ｆ ｆ ｊ 率。
屠宰场对鲜猪肉旋毛虫病的镜检与处理方法
养猪一点通EASY SKILL屠宰场对鲜猪肉旋毛虫病的镜检与处理方法蒋维政（广西全州县石塘镇水产畜牧兽医站，广西 全州 541504）旋毛虫病是旋毛虫的成虫和幼虫寄生于人和动物的疾病，多种动物例如肉食兽、草食兽、杂食兽以及家禽等都能感染。
因此，对屠宰场鲜猪肉进行正确规范的旋毛虫病检验工作越来越显重要，本文对鲜猪肉旋毛虫病的显微镜检验方法及处理措施进行了较为详细的阐述。
1 旋毛虫病的感染过程旋毛虫的成虫见于人类、猪、大鼠、熊和许多其他食肉动物的小肠内。
食入含有活虫的不熟的肉类以后，肌肉中的旋毛虫包囊被消化，幼虫于十二指肠或空肠释出，在感染后30～40 h就能发育性成熟进行交配，感染后4～7 d雌虫开始排出幼虫。
有些幼虫入侵肠黏膜的乳糜管、淋巴管、静脉等移行到达全身横纹肌，猪以膈肌和舌肌为主，马以舌肌和咬肌为主。
2 旋毛虫及其毒素的降解1）虫体寄生的肌纤维及其周围的肌纤维发生变性。
2）因旋毛虫寄生发生死亡的动物和人的身体内发生许多病理变化，实质器官与脂肪发生变性、出血，出现大叶性肺炎、心包炎等。
3）将严重感染旋毛虫的肌肉经高温处理杀死虫体后喂狗或猫，狗或猫仍然发病或死亡，体内器官变性，病变严重，原因是虽然高温能杀死虫体，但不能降解其毒素。
3 新鲜猪肉旋毛虫镜检法3.1 采样每头猪的左右膈肌脚各取一块肉样，每块肉样的重量在30～50 g之间，且与胴体标记同一号码，依次排列在采样盘中，固定肌样位置，确保肌样号码不会弄错。
3.2 肉眼检查膈肌样品在进行显微镜检查之前，由有经验的检验人员撕去肌膜作肉眼观察，检查有无可疑白色小点，可以提高检出率。
若发现肌肉表面有旋毛虫或住肉孢子虫白色椭圆形细小白点后，应有目的地剪取肌样进行检查。
3.3 压片肉眼检查后，在肉样上顺着肌纤维方向用弯曲的外科剪刀剪取24颗米粒大小的肉粒（左右膈肌脚各12粒），在一块5 mm厚的载玻片上排成2排，再覆盖1块盖玻片，加压制成压片，压片厚度应能透过玻璃看清报纸上的小字，每个玻片只允许检查1头猪的肌样。
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针尖大灰白色小点 不透明的黑色块状物
粟粒大或米粒大，呈 灰黄色
椭圆或圆形，粟粒至 黄豆大，呈灰白-淡 黄-黄色，触摸有坚 硬感
不透明的黑色块状 不透明的黑色块状
物
物
脱 虫体或残骸清晰 可见虫体或残骸 未 见 或 可 见 发 育 不 全 可见角质小钩
可见角质小钩
钙 可见
的角质小钩
处
理
（二）旋毛虫集样消化法
（5）鉴别诊断。在旋毛虫检验时，往往会发现住肉孢子虫和发育不完全的囊尾蚴，虫体典型者， 容易辨认，如发生钙化，死亡或溶解现象时，则容易混淆，在检查时可参考表 21-1 进行鉴定。
表 21-1 旋毛虫、住肉孢子虫、囊尾蚴肉眼检查及镜下区别 （引自孙锡斌，旋毛虫病肉的检验和囊尾蚴生活力的测定，1992）
PBS 液，振摇、静置，上清即为被检样品。 （2）抗原包被。将旋毛虫抗原用包被液稀释成一定浓度（抗原蛋白含量 2mg/ml），加入反应板 A、
B、C、D 列 1-10 号孔内，每孔加 0.2m1；E 列各孔分别为阴、阳性血清对照，每孔加 0.2ml。每列的第 11 孔为空白对照（每孔加稀释液 0.2ml），加毕，将反应板加盖，置湿盒内，37℃孵育 2h 或 4℃过夜， 使其达到最大反应强度。
（三）旋毛虫酶联免疫吸附试验（ELISA）
1．实验原理。ELISA 是利用酶作为抗原或抗体的标记物，在固相载体上进行抗原或抗体的测定。 ELISA 的原理是：让抗原或抗体结合到固相载体表面，并保持其免疫活性；使抗原或抗体与某种酶联 结成酶标抗原或抗体，仍保留其免疫活性和酶的催化活性。在测定时，把受检标本和酶标抗原或抗体， 按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，形成抗原-抗体复合物。经清洗后在固相载体表面留 下不同量的酶。加入酶反应的底物后，底物在复合物上酶的催化作用下生成有色产物，产物的量与标本 中受检抗原或抗体的量直接相关。故可根据颜色反应的深浅，间接推断受检抗原或抗体的存在及其含量， 达到定性或定量检测的目的。
使虫体挤入压出的肌浆中。 （2）包囊形成期的旋毛虫，在淡黄色背景上，可看到发光透明的圆形或椭圆形物。包囊的内外两
层主要由均质透明蛋白质和结缔组织组成，囊中央是蜷曲的虫体（见图 21-4）。成熟的包囊位于相邻肌
细胞所形成的梭形肌腔内。 （3）发生机化现象的旋毛虫。虫体未形成包囊以前，包围虫体的肉芽组织逐渐增厚、变大，形成
部 肠肌等
股部等部位寄生 等
肌等
肌等
位
最多
肉 眼 检 查 虫 体压 钙片 化镜 灶检
针尖大或针头 大，灰白或灰黄 色。与钙化的住 肉孢子虫不易区 别 包囊内有大小不 等的黑色钙盐颗 粒，有的在囊周 围形成厚的组织 膜
虫体钙化灶略小 于囊尾蚴钙化灶， 呈灰白或灰黄色。 触摸有坚实感
数量不等、浓淡不 匀的灰黑色钙化 点，有时隐约可见 虫体
纺锤形、椭圆形或圆形的肉芽肿。被包围的虫体有的结构完整，有的破碎甚至完全消失。虫体形成包囊 后的机化，其病理过程与上述相似。由于机化灶透明度较差，需用 50％甘油水溶液作透明处理，即在 肉粒上滴加数滴 50%甘油水溶液，数分钟后，肉片变得透明，再覆盖上玻片压紧观察。
（4）钙化的旋毛虫。在包囊内可见数量不等、浓淡不均的黑色钙化物，包囊周围有大量结缔组织 增生。由于钙化的不同发展过程，有时可能看到下列变化：①包囊内有不透明黑色钙盐颗粒沉着；②钙 盐在包囊腔两端沉着，逐渐向包囊中间扩展；③钙盐沉积于整个包囊腔，并波及虫体，尚可见到模糊不 清的虫体或虫体全部被钙盐沉着。此外，在镜检中有时也能见到由虫体开始钙化逐渐扩展到包囊的钙化 过程（多数是由于虫体死亡后而引起的钙化）。发现钙化旋毛虫时，可以通过脱钙处理，滴加 10%稀盐 酸将钙盐溶解后，可见到虫体及其痕迹，与包囊毗邻的肌纤维变性，横纹消失。
一、实验目的及要求
1．掌握肌肉旋毛虫压片镜检法、消化法的操作方法。 2．了解酶联免疫吸附试验的方法。 3．掌握旋毛虫病肉的处理方法。
二、实验器材
（一）旋毛虫压片镜检法 1．材料：被检肉品。 2．器材：载玻片，剪刀，镊子，天平，显微镜。 3．试剂：50%甘油水溶液，10%稀盐酸。 （二）旋毛虫集样消化法
2．实验方法、步骤和操作要领。 （1）采样。首先确定群检分组的头数，每组头数的大小可根据各地区旋毛虫病的发生情况而定， 即在旋毛虫病的低发病地区采取 5-10 头猪为 1 组，而常年未检出旋毛虫的地区每组可增加到 30-50 头 或 100 头。既能因地提高检验工效，又不致使旋毛虫检验流于形式。如果以 10 头猪为 1 组，其分组情 况应按生产流水线上胴体编号 1-10、11-20、21-30……顺序。每头猪取横膈膜肌脚 2g，每组 10 头样肉， 共 20g，依次放在序号相同的采样盘或塑料袋内送检。 （2）捣碎。按采样盘顺序，每次取 1 组（20g），置捣碎机容器中，加入 0.04%胃蛋白酶溶液 100ml （按每 10g 样肉加 50ml 酶溶液的比例），徐徐启动捣碎机，转速由 8000rpm 逐渐到 16000rpm。捣碎约 30s 至肉样成颗粒或絮状，并混悬于混浊的消化液中。 （3）加热、消化、集虫。取下容器将捣碎液倒入 500ml 烧杯中，加入 2%的热盐酸溶液 100ml（与 酶溶液等量），使温度保待在 45℃左右。然后将集虫器从液面上小心压入杯中，加人磁棒，将烧杯放在 加热磁力搅拌器上，启动转速节柄，消化液被搅成一旋窝。在 45℃左右搅拌 3-5min 后，回转调节柄， 停止搅拌，待磁棒静止后取出磁棒。取出集虫器，卸下集虫筛，用适量清水将筛面物充分洗入表面皿中。 （4）镜检。将表面皿移于镜检台的圆孔上，旋转圆盘使表面皿中心底部接物镜头下，将表面皿前 后、左右晃动数次，使有形成分集中于皿底中心，用 40 倍物镜检查有无旋毛虫虫体、包囊以及虫体碎 片或空包囊。 （5）查病畜胴体。镜检发现阳性时，按圆盘转数（0、1、2、3……顺序）乘以 100（每组头数× 圆盘孔数）加孔号乘以 10（每组头数），即得出该组 10 头猪的胴体编号。计算公式：圆盘转数×100+ 孔号×10。例如：阳性组圆盘转数是 20，孔号数为 3，代入公式为 20×100+3×10=2030，该组胴体编 号即为 2021、2022、2023……2030 这 10 个号码。将该 10 头猪的胴体全部推入修割轨道待查。复查按 每 2 头为一组消化镜检，检出阳性组，再逐头检测，确定病畜胴体。复查时用压片镜检法更快、更方便。
1．材料：被检肉品。 2．器材：组织捣碎机，采样盘，磁力加热搅拌器，圆盘转动式计数镜检台，集虫器，载玻片，表 面皿，烧杯，剪刀，镊子，天平，温度计，显微镜。 3．试剂：0.04%胃蛋白酶溶液，盐酸。 （三）旋毛虫酶联免疫吸附试验（ELISA）
1．材料：被检肉品。 2．器材：滤纸片，玻璃瓶，剪刀，酶标测定仪，反应板，加样器。 3．试剂： （1）阳性血清，阴性血清； （2）旋毛虫抗原； （3）酶标抗体（又称酶结合物、酶标记免疫球蛋白）； （4）包被液：Na2CO3 1.59g、NaN3 0.2g、NaHCO3 2.93g，用蒸馏水加至 1000ml，调整 pH 为 9.6。 放 4℃冰箱中保存备用。 （5）洗涤液：NaCl 8.9g、Tween-20 0.5g、KH2PO4 0.2g、NaN3 0.2g、Na2HPO4·12H2O 2.9g、KCl 0.2g， 用蒸馏水加至 1000ml，调整 pH 为 7.4。 （6）底物溶液（OPD-H2O2）：称取邻苯二胺 40mg，溶解于 100ml pH5.0 磷酸-柠檬酸缓冲液（0.1M 柠檬酸 24.3m1，加 0.2M NaH2PO4 25.7ml，加水 50ml）中，然后加 30％过氧化氢 0.15ml，现配现用。 （7）终止液（2M H2SO4）：浓硫酸 22.2ml，蒸馏水 177.8ml。
实验二十一 旋毛虫病肉品检验技术
旋毛虫病是重要的人畜共患寄生虫病，它是由毛形科的旋毛形线虫（Trichinella spiralis）成虫寄生 于肠管，幼虫寄生于横纹肌所引起的。该病流行于哺乳类动物间，鸟类可实验感染。人若摄食了生的或 未煮熟的含旋毛虫包囊的猪肉可感染生病，主要临床表现为胃肠道症状、发热、肌痛、水肿和血液嗜酸 性粒细胞增多等，严重者可以导致死亡，故肉品卫生检验中将旋毛虫列为首要项目。旋毛虫病的肉品检 验是生猪屠宰检疫中的一项重要内容，通过该项检验可以检出感染旋毛虫的猪只。对于杜绝病猪肉流入 肉品市场，有着重要的作用。
图 21-3 制成压片镜检
图 21-4 旋毛虫幼虫包囊
检（见图 21-3）。 4．镜检。把压片标本放在低倍（4×10）显微镜下，从压片的一端第一块肉片处开始，顺肌纤维依
次检查。镜检时应注意光线的强弱及检查速度，切勿漏检。 5．结果判定。 （1）没有形成包囊的幼虫，在肌纤维之间呈直杆状或逐渐蜷曲状态，但有时因标本压得太紧，可
1．实验原理。先用机械方法将受检肉样捣碎，使其呈颗粒或絮状，再用消化酶在最适温度和最佳 酸碱度条件下进行生物化学消化。本实验采用快速集样消化法，即由磁棒转动带动杯中消化液旋转成旋 窝，加速底物消化分解，同时比水重的有形物质随旋窝的力量向中心移动，但未消化的巨型肌组织残质 则被集虫器外周粗筛阻留，而虫体或虫体包囊等细小物体随旋窝向中心移动进入集虫器；当转动停止， 集虫器中的有形物质便随旋窝作用逐渐沉降于底部细筛孔漏掉，只保留虫体和包囊在筛面上供镜检。
态 虫 体 常 蜷 曲 成 S 香 蕉 形 滋 养 体 和 个吸盘，尚无或有发育 头节 上有 四个 吸盘 头节 上有 四个 吸盘
形或 8 字形
卵圆形孢子
不全的角质钩
ห้องสมุดไป่ตู้