微生物实验室标本接种程序
微生物接种流程规范版本
一、痰液标本1.痰液标本接种流程1)接种编号：1401xx2)接种培养基：血平板中国蓝平板嗜血巧克力平板金黄色葡萄球菌显色板（CHRO）附加：呼吸科，血液科，肿瘤科，ICU，感染科种沙保弱平板3)培养条件：35℃温箱:血平板、中国蓝平板、金黄色葡萄球菌显色板（CHRO）35℃ + 5%CO2温箱：嗜血巧克力平板25℃温箱：沙保弱平板（装进塑料密封袋或纸胶带封口）2.痰涂片及染色镜检流程1)涂片编号：革兰氏染色：1404xx抗酸染色：1406xx2)一般细菌涂片镜检A.涂片：挑取痰液均匀涂于玻片表面，风干备用。
B.革兰氏染色：龙胆紫（30S）→碘液（60S）→丙酮乙醇（30S）→沙黄（30S）C.痰样本质量评估：上皮细胞≥25/LP,判定为不合格标本上皮细胞≤25/LP，判定为合格标本3.浓集法抗酸杆菌涂片镜检1)痰标本制备：取全部标本于50ml离心管中，加等量84消毒液混匀后静置15min， 3000rpm/min离心30min，弃上清取沉淀涂片2)抗酸染色：石碳酸复红（5min）→盐酸酒精（60S）→亚甲蓝（30S）3)结果判读：二、咽拭子标本1.咽拭子标本接种流程接种编号：1401xx接种培养基：血平板培养条件：35℃温箱一般细菌涂片镜检:同痰标本1404xx三、尿液标本1.尿液标本接种流程接种编号：1402xx接种培养基：血平板（1ul尿液标本均匀涂抹,行菌落计数）中国蓝板(四区划线)培养条件：35℃温箱一般细菌涂片镜检(1404xx)尿标本制备：取15ml标本3000rpm/min离心15min，取沉淀涂片涂片染色：步骤同痰样本四、生殖道分泌物标本1. 生殖道分泌物标本接种流程接种编号：1402xx接种培养基：血平板中国蓝平板淋球菌TM平板培养条件：35℃温箱：血平板、中国蓝平板35℃ + 5%CO2温箱：淋球菌TM平板2. 一般细菌涂片镜检(1404xx)同痰标本五、宫颈分泌物（B族链球菌培养）1.宫颈分泌物接种流程接种编号：1402xx接种培养基：血平板B群链球菌筛选平板（STRB）[一块种六个标本] 培养条件：35℃温箱六、脓液标本1.开放性脓液标本接种流程接种编号：1402xx接种培养基：血平板中国蓝平板复合因子巧克力平板培养条件：35℃温箱2.封闭腔脓液标本接种流程接种编号：1402xx接种培养基：血平板中国蓝平板厌氧平板（放于厌氧产气袋GENbag anaer中）培养条件：35℃温箱3.一般细菌涂片镜检(1404xx)同痰标本七、无菌体液标本1.无菌体液标本接种流程接种编号：1407xx接种瓶：取1-3ml标本直接注入儿童瓶增菌培养。
微生物标本的接种及流程
微生物标本的接种及流程Microbial specimen inoculation is an essential process in microbiology that involves the transfer of a specific microorganism onto a solid culture medium for growth and analysis. This process is crucial for identifying and studying various pathogens, determining antibiotic susceptibility, and conducting research on different microbial species. 微生物标本接种是微生物学中一个至关重要的过程，涉及将特定微生物转移到固体培养基上进行生长和分析。
这个过程对于识别和研究各种病原体、确定抗生素敏感性以及对不同微生物种类进行研究至关重要。
The first step in the inoculation process involves obtaining a sample of the microorganism through various techniques such as swabbing, scraping, or collecting specimens from clinical samples. It is crucial to handle the sample carefully to prevent contamination and ensure the accuracy of the results. 接种过程中的第一步涉及通过擦拭、刮取或从临床样本中收集标本等各种技术获得微生物样本。
必须小心处理样本，以防止污染并确保结果的准确性。
临床微生物检验标本采集程序
临床微生物检验标本采集程序1 标本采集的基本原则：1.1 严格的无菌操作，避免污染，避免来自寄生菌的污染，应当保证每份样本代表感染过程｡1.2 选择正确的解剖部位、合适时间、合乎规程技术，采集样本。
1.3 选择合适的部位采集用于厌氧菌培养的样本。
1.4 要收集足够量的样本，量少可能导致假阴性结果。
1.5 应尽可能在病人使用抗菌药物前采集样本，如不能停用抗菌药物，应于下次抗菌药物应用前采集。
1.6 血培养样本在病人寒颤和发热初起时为最佳时机。
1.7 导尿留取样本时，不可从尿袋中采集样本。
引流液样本不能直接从引流袋放出，因引流液在袋中潴留时间太长容易滋生细菌。
1.8 各类微生物样本不宜加防腐剂1.9 盛标本的容器须先经灭菌（煮沸、高热、或高压灭菌），但不得用消毒剂或酸类处理。
1.10 有些临床标本还要注意采集的时机和部位，如伤寒沙门菌的阳性检出率，发病的第1～2 周采集血液，第3～4 周采集大便和尿液，阳性率较高。
1.11 样本的运送处理和储存规定1.11.1 样本2h之内送到实验室。
1.11.2 血培养瓶如果不能及时送检，应置室温保存（但不得超过24 小时）。
禁止将不能及时送检的血培养瓶放置冰箱保存。
1.11.3 淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌培养时，样本不能放4℃条件保存，应在30min内送检，并注意保温。
1.11.4 痰培养疑为嗜血杆菌、肺炎链球菌感染时，应立即送检，因为这些细菌在自然环境中极易死亡。
1.11.5 导管样本如不能在规定时间内送检，应在盛装导管的容器中加少量无菌生理盐水，以免导管干燥，病原微生物死亡。
1.11.6 活检组织样本和眼分泌物样本应在30min内送检，如样本较小或不能在规定时间内送检，应在盛装组织的容器中加少量无菌生理盐水，以免样本干燥，病原微生物死亡。
不可用纱布包裹组织样本。
2 常见临床微生物标本的采集方法。
2.1 血液及骨髓样本2.1.1 检验项目：血液及骨髓培养。
2.1.2 适应症病人出现以下临床表现：发热（38℃）或低温（36℃）、寒战、白细胞增多（白细胞数>10×109/L，特别有“核左移”时）、皮肤粘膜出血、昏迷、多器官衰竭、血压降低、C反应蛋白升高及呼吸加快、血液病患者出现粒细胞减少、血小板减少等临床可疑血流感染时应采集血液样本进行血培养及骨髓培养。
微生物的实验室培养2
5、菌种的保存
1、临时保藏：
接种到固体斜面培 养基，菌落长成后 置于4℃冰箱保存。
2、长期保存：
甘油冷冻管藏法
微生物的类群
病毒界 原核生物界（如细菌、放线菌等） 真菌界（如酵母菌、霉菌等） 原生生物界
•细菌的结构
细胞壁 一般结构 细胞膜
细胞质(核糖体、质粒等) 拟核
特殊结构 荚膜、鞭毛、芽孢
培养基的配制
培养基的种类
• 理想的凝固剂应具备以下条件： –不会被微生物分解利用； –不会因高温灭菌而受到破坏； –在微生物生长的温度范围内保持固体状态 –对微生物及操作人员均无毒害作用； –透明度好、凝固力强； –价格低廉，配制方便。
• 常用的凝固剂——琼脂
–主要成分是硫酸半乳聚糖 –熔点为96℃
凝固点为40℃ –透明度强。
一、无菌技术
A.培养细菌用的培养基或培养皿 灭菌 B.玻棒、试管、烧瓶和吸管 灭菌 C.接种环、接种针 灭菌 D.实验操作者的双手 消毒
二、基本操作程序
1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
A.培养细菌用的培养基或培养皿。 B.玻棒、试管、烧瓶和吸管。 C.接种环、接种针。 D.实验操作者的双手。
一、无菌技术
消毒
使用较温和的物理或化学方法仅杀死物 体表面或内部一部分对人体有害的微生 物（不包括芽孢和孢子）。
灭菌
使用强烈的理化因素杀死物体内所有的 微生物，包括芽孢和孢子。
一、无菌技术
• 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌
• 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物
• 加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞
临床微微生物标本的采集注意事项接种及涂片染色
导管尖端阳性培养结果
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6、脑脊液标本
⑴ 培养基：5%羊血琼脂、5%兔血巧克力琼脂、
葡萄糖肉汤
⑵ 培养环境：置5 % CO2、35℃环境培养。
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7、胆汁或胸水或腹水标本
⑴ 培养基：如标本量大时可按血液培养方法直接
取16-20ml分别种入需氧和厌氧培养瓶。如标本
的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗。
5、长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取
尿标本。
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（三）分泌物的采集
1、对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃
体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、 生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐 水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集 病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。
宜做培养的标本；
当白细胞≤10个／L ，上皮细胞≤25个／L时再参照油
镜观察标本中细菌分布作出判断。
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痰镜检的判断标准：
当标本中细菌种类超过3种以上，未见到钎毛拄状上 皮细胞，作为不合格标本；如见到数量不等的白血
胞或钎毛拄状上皮细胞或两者同在，含1-2种不同细
菌，可考虑继续培养，结果可根据病情再作分析；当 涂片中见到1-3种细菌，少量的扁平上皮细胞，少量 或较多钎毛拄状上皮细胞均可按合格标本继续培养。
10ml）。 9、粪标本培养，放置时间过长，已干。
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三、分离培养基本操作规范
合格的标本是保证培养成功的重要条件，但如 果没有适宜的分离培养基、培养环境以及正确 的处理方法同样不能获得好的结果，为此制定
如下基本操作规范以保证致病细菌分离成功 。
临床微生物实验室标本处理流程详细
微生物实验室标本处理流程涂片革兰染色，其他形
态：1.弧形菌属根据标本种类标本接种后油镜下观察染色 2.弯
曲菌3.酵母菌上显板挑选可疑菌落，35°C培养，情况和细菌形
态4其他菌：鉴定参照《全国必要时可做18~24h 检验操作规
程3版》） CO2，厌氧培养 G+球菌G-球菌：主要奈瑟G-杆菌 G+
杆菌（分芽菌属和布兰汉菌属（多为污为主孢和无染，结合
临芽孢）床）触酶（+）触酶试验氧化酶触酶（-）：链球菌属
氧化酶（+）：氧化酶(-): 血浆凝固酶非发酵菌（不动，嗜肠杆
菌属麦除外）血浆凝固酶血浆凝固酶（+）（-）参照《全国
检验操作规一般采用肠杆菌属鉴定板程3版》鉴定，并做链条，
沙门志贺加做血清学球菌属药敏鉴定葡萄糖O/F F（+）：金F （-）：新生霉新生霉素参照《全国检验操作规程按照肠杆菌属
做药敏微球菌试验并报告黄色葡萄素（+）：（-）：腐生3版》
鉴定按照非发酵菌球菌葡萄球菌属做药敏试验并报告表皮葡萄
球菌备注：此图为粗略图，以全国检验操作规程3版为准按照
葡萄球标本处理：1.痰液：血板+麦康凯（插管痰注明）菌属做
药敏 2.大便：血板+麦康凯+SS平板（稀便注明）试验，报
告 3.尿：血板+麦康凯（中段尿注明，用大环取样）
4.棉签取样的标本: 血板+麦康凯(最好以生理盐水湿润后接种)
5.带菌量少的标本：需要增菌处理注意事项：接种标本后平板
注意注明接种时间和标本编号，性病衣原体筛查要留标本于冰
箱中。
支原体标本避免干燥和高温，及时处理为宜。
微生物标本接种(两篇)2024
引言概述微生物标本接种是一项重要的实验室技术，它在微生物学研究、医学诊断和食品工业等领域中起着关键作用。
本文将继续介绍微生物标本接种的相关内容，包括无菌技术、常用标本接种方法、优化接种条件、接种后的菌落观察与鉴定，以及相关的规范要求。
通过本文的阐述，读者将进一步了解微生物标本接种的重要性以及操作技巧。
正文内容一、无菌技术1.理解无菌技术的意义和目的a.防止外源性微生物污染b.保证实验结果的准确性2.熟悉无菌技术的基本要求a.选择适当的工作环境与设备b.采取适当的个人防护措施c.消毒操作的重要性与方法二、常用标本接种方法1.心形接种法a.标本接种器的选择与使用b.接种斜面固体培养基的操作步骤c.控制接种量的技巧2.点菌接种法a.接种环的选择与使用b.点菌接种的操作流程c.避免混合样品的方法3.涂片接种法a.特定细菌的涂片接种方法b.真菌与酵母菌的涂片接种注意事项c.涂片的热固化与染色技巧三、优化接种条件1.温度控制的重要性a.理解不同微生物的生长温度要求b.设定合适的培养温度2.湿度和氧气的影响a.理解湿度对微生物生长的影响b.确保适当的氧气供应3.营养物质的选择与配比a.确定微生物所需的营养物质b.确保培养基的合理配比四、接种后的菌落观察与鉴定1.菌落形态的观察与描述a.形态特征的分类与测量b.菌落颜色的描述与分析2.镜检观察技巧a.镜检与染色的操作流程b.不同染色方法的选择与应用3.菌种鉴定的基本步骤a.生理生化特性的鉴定b.分子生物学方法的应用五、规范要求与注意事项1.实验室安全与操作规范a.安全规章制度的遵守b.废物处理与消毒措施的要求2.实验记录与数据分析a.正确记录实验数据与结果b.数据的统计与分析方法3.质量管理与质控措施a.核心实验室的质量管理要求b.质控措施的实施与监督总结微生物标本接种是微生物学研究和医学诊断中至关重要的步骤。
通过本文的介绍，我们了解了无菌技术的重要性以及常用的标本接种方法。
微生物标本接种操作规程
微生物标本接种操作规程微生物标本接种操作规程一、接种前准备1. 检查试剂和培养基的使用期限和保存情况，确保其质量可靠。
2. 准备好所需的培养器具和实验用具，如试管、培养皿、培养瓶、个体接种环、接种针、显微镜等。
二、接种环境准备1. 实验室内要保持整洁，无杂物和灰尘，防止外界微生物的污染。
2. 实验室要保持恒定的温度和湿度，避免温度过高或过低、湿度过低或过高对微生物生长的影响。
3. 空气中要保持无菌状态，使用高效过滤器过滤空气，防止微生物的传播和污染。
三、接种手部消毒1. 洗手后，戴上实验手套，确保双手干燥。
2. 取适量洗手液，搓揉双手至起泡，按照手部清洁步骤进行洗手。
3. 洗手液清洗后，用自来水充分冲洗干净。
4. 用干净的纸巾或者吹风机将双手彻底擦干。
5. 手套使用后，及时更换。
四、接种操作1. 将待接种的微生物培养物摇匀，取适量的培养物。
2. 打开培养器具和培养基，注意避免接触容器口和培养基内壁，避免污染。
3. 将所取的适量培养物分别接种在相应的培养器具中，如试管、培养皿、培养瓶等。
4. 接种时要避免接触到环境中的空气，以免引入外来微生物。
5. 接种环具要经过高温灭菌处理后再取用，避免对微生物生长的影响。
6. 接种完毕后，及时将培养器具密封，避免细菌外界的污染。
五、接种后处理1. 接种完毕后，将接种环具和接种针等实验用具用适当方法进行处理，如高温炙烧、高压灭菌等。
2. 培养器具和培养基未使用完的部分要密封保存，避免受到外界的污染。
3. 接种完毕后，要及时将工作台面清洁干净，防止微生物交叉污染。
六、接种操作注意事项1. 接种操作要迅速而准确，避免接触到环境中的空气，以免引入外来微生物。
2. 接种环境要保持无菌状态，严格控制操作员的接触，避免污染。
3. 接种操作要注意卫生与安全，避免操作员自身的污染和微生物的传播。
4. 接种操作之间要经常更换实验用具，避免传播微生物。
七、接种结果判断与记录1. 接种完成后，根据培养基的特性，放置在相应的培养条件下进行培养。
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微生物实验室标本接种程序
1.目的
规范标本接种标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.范围
微生物室所有标本的接种。
3.职责
微生物检验人员严格执行本程序。
4.程序
4.1分区划线法
此法多用于粪便等含菌量较多的标本。
用接种环先将标本涂布在平板第一区并作数次划线，再在二、三……区依次用接种环划线。
每划一个区域，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一区域。
每一区域的划线应接触上一区域的接种线2～3次，使菌量逐渐减少，以形成单个菌落。
4.2倾注平板法
本法用于尿液等标本的细菌计数。
将灭菌生理盐水适量稀释（通常作10－1～10－5稀释）的标本1ml，置于灭菌平皿内，注入已熔化并冷却至50℃左右的培养基15ml，混匀，待冷却后，倒置。
4.3 斜面接种法
此法主要用于鉴定或保存菌种，或观察细菌的某些生化特性和动力。
用左手握住菌种管和斜面培养管底部，右手持接种针（环）。
用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。
用接种针（环）伸入菌种管内挑取移种之菌落。
伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上地蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。
将接种针垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种针。
4.4 穿刺培养法
此法用于保存菌种，观察动力及某些生化反应。
以接种针挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种针。
4.5 液体培养基接种法
用灭菌接种环挑取菌落或标本。
在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌混匀在液体培养基中。