水五日生化需氧量(BOD5)的测定
水五日生化需氧量(bod5)的测定
实验五水五日生化需氧量（BOD5）的测定1 目的1.1 理解BOD的含义及测定条件；1.2 了解水样预处理的道理与预处理方法。
2 方法原理生物化学需氧量(BOD)定义为：在规定的条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程所消耗的溶解氧量。
该过程进行的时间很长，如在20℃培养条件下，全过程需100天，根据目前国际统一规定，在20±1℃的温度下，培养五天后测出的结果，称为五日生化需氧量，记为BOD5，其单位用质量浓度mg/L表示。
对于一般生活污水和工业废水，虽然含较多有机物，如果样品含有足够的微生物和具有足够氧气，就可以将样品直接进行测定，但为了保证微生物生长的需要，需加入一定量的无机营养盐(磷酸盐、钙、镁和铁盐)。
某些不含或少含微生物的工业废水、酸碱度高的废水、高温或氯化杀菌处理的废水等，测定前应接入可以分解水中有机物的微生物，这种方法称为接种。
对于一些废水中存在着难被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，可以将水样适当稀释，并用驯化后含有适应性微生物的接种水进行接种。
一般检测水质的BOD5只包括含碳有机物质氧化的耗氧量和少量无机还原性物质的耗氧量。
由于许多二级生化处理的出水和受污染时间较长的水体中，往往含有大量硝化微生物。
这些微生物达到一定数量就可以产生硝化作用的生化过程。
为了抑制硝化作用的耗氧量，应加入适量的硝化抑制剂。
3 适用范围BOD5为2—1000mg/L水样，超过1000mg/L的水样，应适当稀释。
4 主要仪器及设备使用的玻璃仪器皿在实验前应认真清洗，防止油污、沾尘。
玻璃器皿干燥后方能使用。
常用实验室设备如下：4.1 生化培养箱温度控制在20±l℃，可连续无故障运行。
4.2 充氧设备充氧动力常采用无油空气压缩机(或隔膜泵、或氧气瓶、或真空泵)。
充氧流程可分为正压、负压充氧两种流程。
4.3 BOD培养瓶：容积550±1mL。
HJ505-2009 水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法2023简版
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法引言水质是评价水体健康和污染程度的重要指标之一。
五日生化需氧量（BOD5）是评价水体中有机物污染程度的常用指标之一。
本文将介绍HJ505-2009标准中关于BOD5测定的稀释与接种法。
方法概述BOD5测定的稀释与接种法是一种通过稀释样品来提高测定的灵敏度和减小误差的方法。
该方法首先对待测样品进行适当的稀释，然后接种具有较高BOD5值的种子菌群，使其在一定的时间内进行生物分解。
最后通过测定生物分解过程中产生的需氧量来估计原始样品中有机物的含量。
1. 样品的稀释首先，取待测水样，根据样品的特性和测定要求，选择合适的稀释倍数。
常见的稀释倍数有1：10、1：100等。
将待测样品和稀释液按照一定比例混合，并充分均匀搅拌。
2. 种子菌群的接种从具有较高BOD5值的稀释液中提取种子菌群。
将种子菌群均匀地接种到已稀释的样品中，使得接种液和样品充分均匀混合。
3. 反应时间接种完成后，将混合液倒入已经校准过的BOD5测定瓶中，并封闭好。
将封闭的瓶置于恒温槽中，在恒温条件下进行反应。
根据不同的要求，常见的反应时间为5天。
4. 需氧量的测定反应结束后，使用溶解氧计或BOD5测定仪器对样品中的溶解氧进行测定。
根据溶解氧的消耗量，即可计算出BOD5的含量。
结论本文介绍了HJ505-2009标准中关于BOD5测定的稀释与接种法。
该方法通过稀释待测样品和接种种子菌群，从而提高了测量的灵敏度和减小了误差。
通过测定反应过程中的需氧量，我们可以估计水样中有机物的含量。
这一方法在水质监测和污染物溯源中具有重要的应用价值。
参考文献- HJ505-2009 《水质五日生化需氧量（BOD5）的测定》。
HJ505-2009 水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法1.引言1.1 目的旨在规定水质中五日生化需氧量(BOD5)的测定方法，采用稀释与接种法进行测定。
1.2 术语定义1.2.1 五日生化需氧量(BOD5)指在规定的条件下，细菌生物对有机物所需的氧量。
1.2.2 稀释与接种法一种测定水质中BOD5的方法，通过将待测水样稀释后与BOD5基准溶液接种，测定不同时间间隔下的溶液中溶解氧的消耗量。
2.范围2.1 适用范围本方法适用于表征水质中有机物的生化需氧量。
2.2 不适用范围本方法不适用于含有高浓度或难以接种的水样。
3.装备与试剂3.1 装备所需装备，包括但不限于：溶氧仪、稀释器、恒温培养箱等。
3.2 试剂所需试剂，包括但不限于：BOD5基准溶液、氨氮缓冲溶液等。
4.操作步骤4.1 样品采集与处理详细描述样品采集的步骤，包括样品的选择、采集容器的准备等。
4.2 稀释与接种详细描述稀释与接种法的步骤，包括待测水样的稀释比例、接种基准溶液的准备等。
4.3 培养与测定详细描述培养与测定的步骤，包括培养温度、培养时间、测定溶解氧的方法等。
5.结果计算与报告详细描述结果计算与报告的方法，包括BOD5值的计算公式、结果的单位表示等。
6.质量控制详细描述质量控制的方法，包括质控样的使用、质控结果的判定等。
7.附件所涉及的附件如下：- 附件1：某水样BOD5测定数据记录表- 附件2：BOD5基准溶液配制方法8.法律名词及注释所涉及的法律名词及注释如下：- 法律名词1：注释1- 法律名词2：注释29.遇到的困难及解决办法在实际执行过程中，可能遇到的困难及解决办法如下：- 困难1：描述困难1的情况，并提供相应的解决办法。
- 困难2：描述困难2的情况，并提供相应的解决办法。
参考文献：[1] 相关文献1的引用[2] 相关文献2的引用附录：- 附录A：常用实验室设备清单- 附录B：常用试剂列表以上为HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法的详细文档模板范本。
水中五日生化需氧量(BOD5)的测定
1.适用范围本作业指导书适用于BOD5大于或等于2mg/L并且不超过6000mg/L的水样。
BOD5大于6000mg/L的水样仍可用本方法，但由于稀释会造成误差，有必要要求对测定结果做慎重的说明。
本试验得到的结果是生物化学和化学作用共同产生的结果，它们不像单一的，有明确定义的化学过程那样具有严格和明确的特性，但是它能提供用于评价各种水样质量的指标。
本试验的结果可能会被水中存在的某些物质所干扰，那些对微生物有毒的物质，如杀菌剂、有毒金属或游离氯等，会抑制生化作用。
水中的藻类或硝化微生物也可能造成虚假的偏听偏离结果。
2.方法名称及依据稀释与接种法（Dilution and seeding method）本方法出自中华人民共和国国家标准《水中五日生化需氧量（BOD5）的测定》（GB7748－87）。
3.定义生物化学需氧量（BOD）：在规定条件下，水中有机物和无机物在生物氧化作用下，所消耗的溶解氧（以质量浓度表示）。
4.原理将水样注满培养瓶，塞好后应不透气，将瓶置于恒温条件下培养5天，培养前后分别测定溶解氧浓度，由两者的差值可算出每升水消耗掉氧的质量，即BOD5值。
由于多数水样中含有较多的需氧物质，其需氧量往往超过水中可利用的溶解氧（DO）量，因此在培养前需对水样进行稀释，使培养后剩余的溶解氧（DO）符合规定。
一般水质检验所测BOD5只包括含碳物质的耗氧量的无机还原性物质的耗氧量，有时需要分别测定含碳物质耗氧量和硝化作用的耗氧量。
常用的区别含碳和氮的硝化耗氧的方法是向培养瓶中投加硝化抑制剂，加入适量硝化抑制后，所测出的耗氧量即为含碳物质的耗氧量。
在5天培养时间内，硝化作用的耗氧量取决于是否存在足够数量的能进行此种氧化作用的微生物，原污水或初级处理的出水中这种微生物的数量不足，不能氧化显著量的还原性氮，而许多二级生化处理的出水和受污染较久的水体中，往往含有大量硝化微生物，因此测定这种水样时应抑制其硝化反应。
化验室测定水质五日生化需氧量操作规程
化验室测定水质五日生化需氧量操作规程一、实验目的测定水样的五日生化需氧量（BOD5），了解水样的有机物污染程度。
二、实验原理五日生化需氧量（BOD5）是指一定温度下，在条件适宜的细菌作用下，有机物被生物氧化所需的氧量。
实验中，将水样与添加细菌的琼脂糖培养液混合并置于恒温器内，五天后再测定混合液中的溶解氧浓度，根据溶解氧浓度差计算得到水样的BOD5值。
三、实验仪器和试剂1.恒温器：可控制温度为20±1℃。
2.恒温水浴槽：用于调节实验所需恒定温度。
3.溶解氧电极：用于测量水样中溶解氧浓度。
4.密封玻璃瓶：容量为300mL，用于混合水样和琼脂糖培养液。
5.搅拌器：用于溶解氧的均匀分布。
6.pH计：用于测量水样的酸碱度。
7.琼脂糖培养液：配制培养细菌的营养液。
四、实验步骤1.准备实验设备并调节恒定温度为20±1℃。
2.选取适当的密封玻璃瓶，并清洗干净。
3.取300mL水样并过滤，以去除不溶物。
4.在过滤的水样中测量初始溶解氧浓度，并记录。
5.在密封玻璃瓶中加入200mL过滤的水样和100mL琼脂糖培养液。
6.用搅拌器均匀混合水样和琼脂糖培养液。
7.将密封玻璃瓶置于恒温器内，保持20±1℃的温度。
8.在五天后取出密封玻璃瓶，使用溶解氧电极测量溶解氧浓度。
9.计算BOD5值：BOD5=初始溶解氧浓度-五天后溶解氧浓度。
五、实验注意事项1.实验环境应保持清洁，避免外界有机物污染。
2.水样和琼脂糖培养液的配制要准确，避免对实验结果产生干扰。
3.实验过程中应严格控制温度，以确保实验条件一致。
4.混合水样和琼脂糖培养液时要充分搅拌，确保溶解氧均匀分布。
5.溶解氧电极的使用要准确、标定和校准，以获得准确的溶解氧浓度值。
6.实验过程中应注意个人安全，避免接触有害物质。
六、实验结果记录和分析1.记录水样的初始溶解氧浓度和五天后的溶解氧浓度。
2.计算水样的BOD5值，并用于分析水样的有机物污染情况。
水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法
水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法
什么是BOD5？
BOD5，也就是五日生化需氧量（Biochemical Oxygen Demand），是一种用来衡量水中有机物质分解速度的指标。
通俗地说，就是测量水中的有机物质被微生物分解所消耗的氧气量。
这个指标可以评估污水、废水以及天然水体的水质。
BOD5的测定
BOD5的测定需要进行水样稀释和接种操作。
下面分别介绍这两个步骤。
水样稀释
为了保证BOD5的测定准确性，需要将水样进行稀释，通常是以1:5或1:10
的比例稀释。
具体的步骤如下：
1.取一定量的水样，根据实际情况选择合适的量，通常是10 mL或20
mL；
2.分别加入已经在恒温条件下预先接种好的含有适当微生物的生物培养
液；
3.用去离子水或蒸馏水进行稀释，使稀释比例达到1:5或1:10；
4.用漩涡振荡器将混合液充分混匀，然后装入BOD5需氧瓶中。
接种
接种是指在水样中向其中添加某些特定微生物，常用的有镰刀菌和链球菌等。
作用是加速水中的有机物质分解，提高BOD5的测定准确性。
接种的具体步骤如下：
1.在稀释过的水样中加入0.5 ml左右的包含有大量微生物的生物培养
液，然后用漩涡振荡器均匀混合，放入BOD5需氧瓶中；
2.氧化还原指示液（常用的指示液为甲基橙）滴入需氧瓶中，然后将其
密封，放入常温下放置5天。
BOD5的测量是一种水质评价的标准方法，可以作为污水、废水处理以及水环境保护的重要依据。
通过对稀释和接种方法的认真实施，可以保证测定结果的准确性和可靠性。
水质五日生化需氧量(bod5)的测定
中华人民共和国国家环境保护标准HJ 505—2009代替GB/T 7488-1987水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法警告：丙烯基硫脲属于有毒化合物，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服；标准溶液的配制应在通风柜内进行操作；检测后的残渣残液应做妥善的安全处理。
1 适用范围本标准规定了测定水中五日生化需氧量（BOD）的稀释与接种的方法。
本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD）的测定。
方法的检出限为L，方法的测定下限为2mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6000mg/L。
2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 7489 水质溶解氧的测定碘量法GB/T 11913 水质溶解氧的测定电化学探头法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范3 方法原理生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。
通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h 或(2+5)d±4h(先在0～4℃的暗处培养2d，接着在(20±1)℃的暗处培养5d，即培养(2+5)d)，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD形式表示。
若样品中的有机物含量较多，BOD的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微1生物引入水样中进行接种。
五日生化需氧量(BOD5)的测定
配制方法及浓度
称取480gMnSO4·4H2O溶于水中,过滤 后稀释至1L。该溶液在酸性条件下， 加入碘化钾后遇到淀粉，不得变色。
盐酸 将40mL(ρ=1.18g/mL)盐酸溶于水，稀 溶液 释至1000 mL，浓度为0.5mol/L。
碘化钾 称取10g固体碘化钾，用水溶解后稀释 溶液 至100mL，配制成10%碘化钾溶液。
稀释倍数的确定
①地面水：由测得的高锰酸盐指数与一定的 系数的乘积，即求得稀释倍数。
高锰酸盐指数
<5 5-10 10-20 >20
系数
一 0.2, 0.3 0.4, 0.6 0.5, 0.7, 1.0
②工业废水： 由CODCr值分别乘以系数0.075, 0.15, 0.25即获 得三个稀释倍数。
②直接稀释法：（本实验采用 ）
将移液管插 入液面下加 1.5~2.0ml 浓硫酸
待棕色絮状 沉淀降到瓶 的一半时， 再颠倒几次
盖好瓶塞，勿 使瓶内有气泡， 颠倒混合15次， 静置
稀释倍数的确定 水样稀释方法
水样预处理
1.水样的pH值若超出6.5-7.5范围时，可用盐酸 或氢氧化钠溶液调节pH近于7，但用量不要超 过水样体积的0.5%。若水样酸度或碱度很高， 可改用高浓度的碱或酸液进行中和。
2.水样中含有铜，铅，锌，镉，铬，砷，氰等 有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的 稀释水进行稀释，或提高稀释倍数以减少毒物 的浓度。
试剂
名称 碱性碘化 钾溶液
0.5%淀粉 溶液
配制方法及浓度
称取500g氢氧化钠溶解于300400mL水中，另称取150g碘化钾溶 于200mL水中，待氢氧化钠溶液冷 却后，将两种溶液合并后混合，用 水稀释至1L。若有沉淀则放置过夜 取上清液，贮于塑料瓶中，存放时 避光。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验五水五日生化需氧量（BOD5）的测定1 目的1.1 理解BOD的含义及测定条件；1.2 了解水样预处理的道理与预处理方法。
2 方法原理生物化学需氧量(BOD)定义为：在规定的条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程所消耗的溶解氧量。
该过程进行的时间很长，如在20℃培养条件下，全过程需100天，根据目前国际统一规定，在20±1℃的温度下，培养五天后测出的结果，称为五日生化需氧量，记为BOD5，其单位用质量浓度mg/L表示。
对于一般生活污水和工业废水，虽然含较多有机物，如果样品含有足够的微生物和具有足够氧气，就可以将样品直接进行测定，但为了保证微生物生长的需要，需加入一定量的无机营养盐(磷酸盐、钙、镁和铁盐)。
某些不含或少含微生物的工业废水、酸碱度高的废水、高温或氯化杀菌处理的废水等，测定前应接入可以分解水中有机物的微生物，这种方法称为接种。
对于一些废水中存在着难被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，可以将水样适当稀释，并用驯化后含有适应性微生物的接种水进行接种。
一般检测水质的BOD5只包括含碳有机物质氧化的耗氧量和少量无机还原性物质的耗氧量。
由于许多二级生化处理的出水和受污染时间较长的水体中，往往含有大量硝化微生物。
这些微生物达到一定数量就可以产生硝化作用的生化过程。
为了抑制硝化作用的耗氧量，应加入适量的硝化抑制剂。
3 适用范围BOD5为2—1000mg/L水样，超过1000mg/L的水样，应适当稀释。
4 主要仪器及设备使用的玻璃仪器皿在实验前应认真清洗，防止油污、沾尘。
玻璃器皿干燥后方能使用。
常用实验室设备如下：4.1 生化培养箱温度控制在20±l℃，可连续无故障运行。
4.2 充氧设备充氧动力常采用无油空气压缩机(或隔膜泵、或氧气瓶、或真空泵)。
充氧流程可分为正压、负压充氧两种流程。
4.3 BOD培养瓶：容积550±1mL。
4.4 样品运输贮藏箱：温度保持0~4℃。
4.5 250mL溶解氧瓶或具塞试剂瓶2~6个。
4.6 50mL滴定管2支。
4.7 1mL移液管3支，25mL、100mL移液管各1支。
4.8 10mL、100mL量筒各1个。
4.9 250mL碘量瓶2个。
5 试剂采用分析纯试剂。
实验用水采用重蒸蒸馏水。
5.1硫酸锰溶液将MnSO4·4H2O 480g或MnSO4·2H2O 400g溶于蒸馏水中，过滤后稀释成100mL。
(此溶液中不能含有高价锰，试验方法是取少量此溶液加入碘化钾及稀硫酸后溶液不能变成黄色，如变成黄色表示有少量碘析出，即表示溶液中含有高价锰)。
MnO23+2I-+6H+=I2+Mn2++3H2O5.2碱性碘化钾溶液溶解500g氢氧化钠于300—400mL蒸馏水中，冷至室温。
另外溶解300g碘化钾于200mL蒸馏水中，慢慢加入已冷却的氢氧化钠溶液，摇匀后用蒸馏水稀释至1000mL(强碱性溶液腐蚀性很大，使用时注意勿溅在皮肤或衣服上)，如有沉淀，则放置过夜取上清液，贮藏于塑料瓶或棕色试剂瓶中（用棕色试剂瓶时要用橡胶瓶塞）。
5.3 浓硫酸比重1.84，强酸腐蚀性很大，使用注意勿溅在皮肤或衣服上。
5.4 1％淀粉指示液称取2g可溶性淀粉，溶于少量蒸馏水中，用玻璃棒调成糊状：慢慢加入(边加边搅拌)刚煮沸的200mL 蒸馏水中，冷却后加入0.25g水杨酸或0.8g氯化锌ZnCl2防腐剂。
此溶液遇碘应变为蓝色，如变成紫色表示已有部分变质，要重新配制。
5.5 (1+1)硫酸溶液将浓硫酸(比重1．84)与水等体积混合。
5.6 2 mol/L(1／2 H2SO4)5.7盐溶液下述溶液至少可稳定一个月，应贮存在玻璃瓶内，置于暗处。
一旦发现有生物滋长迹象，则应弃去不用。
5.7.1 磷酸盐：缓冲溶液。
将8.5g磷酸二氢钾(KH2PO4)、21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g七水磷酸氢二钠(NaH2PO4·7H2O)、和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于500mL水中，西是指1000mL。
此缓冲溶液的pH应为7.2。
5.7.2 七水硫酸镁：22.5g/L溶液将22.5g七水硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至1000mL并混合均匀。
5.7.3 氯化钙：27.5g/L溶液将27.5g无水氯化钙（CaCl2）（若用水合氯化钙，要取相当的量）溶于水，稀释至1000mL并混合均匀。
5.7.4：0.25g /L溶液将0.25g六水氯化铁（Ⅲ）（FeCl3·H2O）溶解于水中，稀释至1000mL并混合均匀。
5.8 硫代硫酸钠溶液C(Na2S2O3)=0.025mol／L称取 6.2g硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)溶于煮沸放冷的蒸馏水中，加入0.2g碳酸钠，用水稀释至1000mL。
贮于棕色瓶中，使用前用重铬酸钾，C(1／6K2Cr2O7)=0.0250mol／L标准溶液标定，标定方法如下。
于250mL碘重瓶中，加入l00mL蒸馏水和1g碘化钾，加入10.00mL 0.0250 mo1／L重铬酸钾标准溶液，5mL 2 mol/L(1／2 H2SO4)硫酸溶液(5.6)，密塞，摇匀，于暗处静置5 min后，用待标定的硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1 mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪尽为止，记录用量。
标定反应：K2Cr2O7+6KI+7H2SO4=Cr2(SO4)3+312+4K2SO4+7H2O(硫酸铬，绿色)I2+2Na2S2O3=2NaI+Na2S4O6(连四硫酸钠，无色)C=10.00×0.0250／V式中C——硫酸钠溶液浓度(mol/L)V——硫代硫酸钠溶液消耗量(mL)5.9 氢氧化钠，0.5mol/L5.10 盐酸，0.5mol／L5.11 稀释水在5-20L玻璃内瓶装入一定量的纯水曝气2-8h，使稀释水的溶解氧接近饱和；曝气后瓶口盖上两层干净纱布，置于20℃培养箱中放置数小时，使水中溶解氧含量不少于8mg/L。
临用前每升水中加入四种营养盐溶液(5.7.1)、(5.7.2)、(5.7.3)、(5.7.4)各lmL并混合均匀。
稀释水的pH值为7.2，应在8h内使用完。
5.12 接种水如被检验样品本身不含有足够的适应性微生物，应采取下述方法获得接种水。
接种温度应在20±l℃。
5.12.1 城市污水，一般采用住宅区生活污水，过滤后在20℃培养箱内放置一昼夜，取上清液作为接种水。
5.12.2 待测样品经生化处理构筑物的出水处的出水。
5.12.3 当工业废水中含有难降解有机物时，取该工业废水排放口下游3-8Km 处的水作为做接种水；如无此种水源采用驯化菌种的方法在实验室培养含有适应于待测样品的接种水，建议采用如下方法：取中和或适当稀释后的该水样进行连续曝气，每天加少量新鲜水样。
同时加入适量表层土壤、花园土壤或生活污水，使能适应水样的微生物大量繁殖。
当水中出现大量絮状物，或分析其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适应的微生物已经繁殖，可用做接种水。
一般驯化过程需要3-8d。
5.13 接种的稀释水根据需要和接种水的来源，向每升稀释水（5.11）中加入1.0~5.0mL接种水（5.12）中的一种。
以接种的稀释水的5天（20℃）耗氧量应在0.3~1.0mg/L之间。
6 步骤6.1 实验前准备工作6.1.1实验前8h将生化培养箱接通电源，并使温度控制在20℃下正常运行。
6.1.2将实验用的稀释水、接种水和接种的稀释水放入培养箱内恒温备选用。
6.2水样预处理6.2.1水样的pH值不在6.5~7.5之间时；先做单独试验，确定需要的盐酸（5.10）或氢氧化钠溶液（5.9）体积，再中和样品，不管有无沉淀形成。
当水样的酸度或碱度很高，可改用高浓的碱或酸进行中和，确保用量不少过水样体积的0.5%。
6.2.2含有少量游离氯的水样，一般放置1-2h后，游离氯即可消失。
对于游离氯在短时间内不能消失的水样，可加入适量的亚硫酸钠溶液，以除去游离氯。
6.2.3从水温较低的水体中或富营养化的湖泊中采集的水样，应迅速升温至20℃左右，以赶出水样中过饱和的溶解氧。
否则会造成分析结果偏低。
从水温较高的水体中或废水排放口取样，应迅速使其冷却至20℃左右，否则会造成分析结果偏高。
6.2.4若待测水样没有微生物或微生物活性不足时，都要对样品进行接种。
诸如以下几种工业废水：a、未经生化处理过的工业废水；b、高温高压或经卫生杀菌的废水，特别要注意食品加工工业的废水和医院生活污水；c、强酸强碱性的工业废水；d、高BOD5值的工业废水；e、含铜、锌、铅、砷、镉、铬、氰等有毒物质的工业废水。
以上的工业废水都需采用具有足够微生物。
7 测试7.1 不经稀释水样的测定①溶解氧含量较高、有机物含量较少的地表水，可不经稀释而直接以虹吸法将约20℃的混匀水样转移入两个溶解氧瓶内，转移过程应注意不使产生气泡。
以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样后溢出少许，加塞。
瓶内不应留有气泡。
②其中一瓶随即测定溶解氧，另一瓶的瓶口进行水封后，放入培养箱中，在20培养5天。
在培养过程中注意添加封口水。
③从开始放入培养箱算起，经过5昼夜后，弃去封口水，测定剩余的溶解氧。
7.2 需经稀释水样的测定7.2.1 稀释倍数的确定根据实践经验，提出下述计算方法，供稀释时参考。
7.2.1.1地表水由测得的高锰酸盐指数与一定的系数的乘积，即求的稀释倍数。
高锰酸盐指数与系数的关系见表2-3。
表2-3 由高锰酸盐指数与系数的关系7.2.1.2工业废水由重铬酸钾法测得的COD值来确定，同程需作单个稀释比。
使用稀释水时，由COD值分别乘以系数0.075、0.15、0.225，即获得三个稀释倍数。
使用接种稀释水时，则分别乘以系数0.075、0.15、0.25即获得三个稀释倍数。
7.2.2 稀释操作7.2.2.1 一般稀释法：按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水（或接种稀释水）于1000mL量筒中，加入需要量的均匀水样，再加入稀释水（或接种稀释水）至800mL，用带胶板的玻棒小心上下搅匀。
搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面，防止产生气泡。
按照（7.1）相同的步骤操作，测定培养5天前后的溶解氧。
另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水（或接种稀释水）作为空白试验，测定培养5天前后的溶解氧。
7.2.2.2 直接稀释法直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。
在已知两个容积相同（其差＜1mL）的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀释水），再加入根据瓶容积和稀释比例计算出来的水样量，然后用稀释水（或接种稀释水）使刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。
7.3溶解氧的测定：溶解氧的测定方法用碘量法（通常用叠氮化钠改良法），详见本书第二章《实验六水溶解氧（DO）的测定》8 计算8.1不经稀释直接培养的水样BOD s = DO1－DO2BOD s——水样的BOD5值，mg／LDO1：水样在培养前的溶解氧浓度，mg／LDO2：水样在培养五天后的溶解氧浓度，mg／L8.2 经稀释后培养的水样2121215)()(ffBBCC BOD⋅---=C1——水样在培养前的溶解氧浓度，mg／LC2——水样在培养五天后的溶解氧浓度，mg／LB1——稀释水（或接种稀释水）在培养前的溶解氧浓度，mg／LB2——稀释水（或接种稀释水）在培养五天后的溶解氧浓度，mg／Lf1——稀释水（或接种稀释水）在培养液中所占比例f2——水样在培养液中所占比例1[1]9 注意事项9.1 根据废水浓度高低及毒性大小确定使用稀释水、接种水还是稀释接种水，若稀释比大于100，将分两步或几步进行稀释。