水中五日生化需氧量(BOD5)的测定(标准操作规程作业指导书)
五日生化需氧量作业指导书11
文件类型：作业指导书第01 版第0 次修改文件名称：BOD5的作业指导书文件编号：DLJCB/BOD5-201409-01 五日生化需氧量的测定（稀释法）指导书1 方法依据水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法HJ 505—20092 适用范围2.1 本标准规定了测定水中五日生化需氧量的稀释与接种的方法。
2.2 本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量的测定。
2.3 方法的检出限为0.5 mg/L，方法的测定下限为2 mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6 mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6000 mg/L。
3 试剂和仪器3.1 试剂3.1.1 水：实验用水为符合 GB/T 6682 规定的3级蒸馏水，且水中铜离子的质量浓度不大于0.01 mg/L，不含有氯或氯氨等物质。
3.1.2 盐溶液3.1.2.1 磷酸盐缓冲溶液：将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、21.8g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g七水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至1000ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月。
此溶液的pH值为7.2。
3.1.2.2 硫酸镁溶液，ρ(MgSO4）=11.0g/L：将22.5g七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至1000ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
3.1.2.3 氯化钙溶液，ρ(CaCl2）=27.6g/L：将27.6g无水氯化钙（CaCl2）溶于水中，稀释至1000ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
3.1.2.4 氯化铁溶液，ρ(FeCl3）=0.15g/L：将0.25g六水合氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于水中，稀释至1000ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
五日生化需氧量的测定BOD5
葡萄糖-谷氨酸溶液。分别称取150mg葡萄糖和谷 氨酸（均于130℃烘过1h），溶于水中，稀释至 1000mL。 盐酸溶液，0.5mol/L。 氢氧化钠溶液，0.5mol/L。 稀释水。在20L玻璃瓶内加入18L水，控制水温在 20℃左右，用抽气或无油压缩机通入清洁空气 2~8h，使水中溶解氧饱和或接近饱和（20℃时溶 解氧大于8mg/L）。使用前，每升水中加入氯化钙 溶液、三氯化铁溶液、硫酸镁溶液和磷酸盐溶液各 1mL，混合均匀。稀释水pH值应为7.2，其BOD5值 应小于0.2mg/L。
2、水样的稀释 根据确定的稀释倍数，用虹吸法把一定量的污水引入 1000mL量筒中，再沿壁慢慢加入所需稀释水（接种 稀释水），用特制搅拌棒在水面以下慢慢搅匀（不应 产生气泡），然后沿瓶壁慢慢倾入两个预先编号、体 积相同的(250mL)的碘量瓶中，直到充满后溢出少许 为止。盖严并水封，注意瓶内不有气泡。 用同样方法配置另两份稀释比水样。
三、仪器与试剂
恒温培养箱[（20+1）℃]。 20L细口玻璃瓶。 1000～2000mL量筒。 特制搅拌棒，在玻璃下端安装一个2mm厚，大小 和量筒相匹配的有孔橡皮片。 250~300mL碘量瓶，带有磨口玻璃塞并具有供水 封用的钟形口。 虹吸管，供分取水样和添加稀释水用。
氯化钙溶液。称取27.5g无水氯化钙，溶于水中，稀 释至1000mL。 三氯化铁溶液。称取0.25g三氯化铁（FeCl3·6H2O）， 溶于水中，稀释至1000mL。 硫酸镁溶液。称取22.5g硫酸镁（MgSO4·7H2O）,溶 于水中，稀释至1000mL。 磷酸盐溶液。称取8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、 21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g磷酸氢二钠 （NaHPO4·7H2O）和1.7g氯化氨（NH4Cl），溶于约 500mL水中，稀释至1000mL并混合均匀，此缓冲溶 液的pH应为7.2。
五日生化需氧量(BOD5)的测定
五日生化需氧量（BOD 5）的测定1.用BOD 营养盐缓冲剂粉枕包2.选择样品体积。
详见样品容量3.用移液管轻轻搅匀样品。
向第4.向另一个BOD 瓶中加入稀释水。
这瓶就是稀释水空白。
准备稀释水。
详见稀释水准备。
选择。
一个BOD 瓶中加入最小采样量 注：如果最小采样量在3mL 左 的样品。
右，不需稀释直接测溶解氧。
再向另外4个BOD 瓶中加入不当测生活污水或沉降后的污水 同体积的样品。
做好标记，并等溶解氧浓度约为0mg/L 的样记录下每瓶水样的体积。
品时，这一步可以省略。
5.如果测试CBOD ，向每个瓶中6.向每个瓶中倒稀释水至瓶口7.小心地盖上瓶塞防止气泡。
按8.测试每个瓶中最初的溶解氧 浓度。
使用电极、仪器或滴定 法。
若使用滴定法则需准备2套BOD 瓶。
记得测量稀释水空白的溶解氧 浓度。
加入2管硝化抑制剂（约 边缘，沿着瓶壁倒入以防产生 住瓶塞并上下颠倒瓶子数次以 0.16g ）。
阻止氮化合物的氧化， 气泡。
混匀液体。
结果是CBOD 。
9.小心地盖上瓶塞防止气泡。
10.在每个BOD 瓶上置一个塑 料盖。
将BOD 瓶置于20（±1）°C 的培养箱内培养5天。
11.5天后测每瓶中剩余溶解氧 12.计算BOD 值。
（详见计算方法——标准方法） 向每个BOD 瓶内倒入稀释水作的浓度。
每瓶中剩余溶解氧的浓度至少 为水封。
应为1.0mg/L 。
稀释水准备•为了得到最好的结果，使用经过碱性高锰酸盐蒸馏的水。
•不要使用经离子交换柱所得的去离子水。
柱中的树脂(尤其是新柱)有时会释放有需氧量的有机物。
另外，细菌会在柱中滋生污染稀释水。
•在20°C条件下将蒸馏水储存在干净的容器里并放在培养箱中。
向容器中倒入蒸馏水至3/4体积，并摇晃容器使得空气进入水中饱和，或者较松地盖住容器并放置 24 小时或更久，以使氧气溶解。
•使用小型玻璃抽水泵或者气体压缩机使水中的空气饱和。
确保空气是经无菌过滤器过滤的。
BOD5实验作业指导书
水质五日生化需氧量（BOD5）的测定1、方法依据水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法，HJ505-20092、适用范围本标准规定了测定水中五日生化需氧量（BOD5）的稀释与接种的方法。
本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。
方法的检出限为0.5 mg/L，方法的测定下限为2 mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6 mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6 000 mg/L。
3、测定原理生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。
通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4 h或（2+5）d±4 h［先在0～4℃的暗处培养2 d，接着在（20±1）℃的暗处培养5 d，即培养（2+5）d］，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD5形式表示。
若样品中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6 mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。
4、试剂本标准所用试剂除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂。
4.1 水：实验用水为符合GB/T 6682规定的3级蒸馏水，且水中铜离子的质量浓度不大于0.01 mg/L，不含有氯或氯胺等物质。
4.2 接种液：可购买接种微生物用的接种物质，接种液的配制和使用按说明书的要求操作。
也可按以下方法获得接种液。
4.2.1 未受工业废水污染的生活污水：化学需氧量不大于300 mg/L，总有机碳不大于100 mg/L。
五日生化需氧量作业指导书11
文件类型：作业指导书第01 版第0 次修改文件名称：BOD5的作业指导书文件编号：DLJCB/BOD5-201409-01 五日生化需氧量的测定（稀释法）指导书1 方法依据水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法HJ 505—20092 适用范围2.1 本标准规定了测定水中五日生化需氧量的稀释与接种的方法。
2.2 本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量的测定。
2.3 方法的检出限为0.5 mg/L，方法的测定下限为2 mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6 mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6000 mg/L。
3 试剂和仪器3.1 试剂3.1.1 水：实验用水为符合 GB/T 6682 规定的3级蒸馏水，且水中铜离子的质量浓度不大于0.01 mg/L，不含有氯或氯氨等物质。
3.1.2 盐溶液3.1.2.1 磷酸盐缓冲溶液：将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、21.8g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g七水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至1000ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月。
此溶液的pH值为7.2。
3.1.2.2 硫酸镁溶液，ρ(MgSO4）=11.0g/L：将22.5g七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至1000ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
3.1.2.3 氯化钙溶液，ρ(CaCl2）=27.6g/L：将27.6g无水氯化钙（CaCl2）溶于水中，稀释至1000ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
3.1.2.4 氯化铁溶液，ρ(FeCl3）=0.15g/L：将0.25g六水合氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于水中，稀释至1000ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
水五日生化需氧量(BOD5)的测定
实验五水五日生化需氧量（BOD5）的测定1 目的1.1 理解BOD的含义及测定条件；1.2 了解水样预处理的道理与预处理方法。
2 方法原理生物化学需氧量(BOD)定义为：在规定的条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程所消耗的溶解氧量。
该过程进行的时间很长，如在20℃培养条件下，全过程需100天，根据目前国际统一规定，在20±1℃的温度下，培养五天后测出的结果，称为五日生化需氧量，记为BOD5，其单位用质量浓度mg/L表示。
对于一般生活污水和工业废水，虽然含较多有机物，如果样品含有足够的微生物和具有足够氧气，就可以将样品直接进行测定，但为了保证微生物生长的需要，需加入一定量的无机营养盐(磷酸盐、钙、镁和铁盐)。
某些不含或少含微生物的工业废水、酸碱度高的废水、高温或氯化杀菌处理的废水等，测定前应接入可以分解水中有机物的微生物，这种方法称为接种。
对于一些废水中存在着难被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，可以将水样适当稀释，并用驯化后含有适应性微生物的接种水进行接种。
一般检测水质的BOD5只包括含碳有机物质氧化的耗氧量和少量无机还原性物质的耗氧量。
由于许多二级生化处理的出水和受污染时间较长的水体中，往往含有大量硝化微生物。
这些微生物达到一定数量就可以产生硝化作用的生化过程。
为了抑制硝化作用的耗氧量，应加入适量的硝化抑制剂。
3 适用范围BOD5为2—1000mg/L水样，超过1000mg/L的水样，应适当稀释。
4 主要仪器及设备使用的玻璃仪器皿在实验前应认真清洗，防止油污、沾尘。
玻璃器皿干燥后方能使用。
常用实验室设备如下：4.1 生化培养箱温度控制在20±l℃，可连续无故障运行。
4.2 充氧设备充氧动力常采用无油空气压缩机(或隔膜泵、或氧气瓶、或真空泵)。
充氧流程可分为正压、负压充氧两种流程。
4.3 BOD培养瓶：容积550±1mL。
水五日生化需氧量(BOD5)的测定
实验五水五日生化需氧量（BOD5）的测定1 目的1.1 理解BOD的含义及测定条件；1.2 了解水样预处理的道理与预处理方法。
2 方法原理生物化学需氧量(BOD)定义为：在规定的条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程所消耗的溶解氧量。
该过程进行的时间很长，如在20℃培养条件下，全过程需100天，根据目前国际统一规定，在20±1℃的温度下，培养五天后测出的结果，称为五日生化需氧量，记为BOD5，其单位用质量浓度mg/L表示。
对于一般生活污水和工业废水，虽然含较多有机物，如果样品含有足够的微生物和具有足够氧气，就可以将样品直接进行测定，但为了保证微生物生长的需要，需加入一定量的无机营养盐(磷酸盐、钙、镁和铁盐)。
某些不含或少含微生物的工业废水、酸碱度高的废水、高温或氯化杀菌处理的废水等，测定前应接入可以分解水中有机物的微生物，这种方法称为接种。
对于一些废水中存在着难被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，可以将水样适当稀释，并用驯化后含有适应性微生物的接种水进行接种。
一般检测水质的BOD5只包括含碳有机物质氧化的耗氧量和少量无机还原性物质的耗氧量。
由于许多二级生化处理的出水和受污染时间较长的水体中，往往含有大量硝化微生物。
这些微生物达到一定数量就可以产生硝化作用的生化过程。
为了抑制硝化作用的耗氧量，应加入适量的硝化抑制剂。
3 适用范围BOD5为2—1000mg/L水样，超过1000mg/L的水样，应适当稀释。
4 主要仪器及设备使用的玻璃仪器皿在实验前应认真清洗，防止油污、沾尘。
玻璃器皿干燥后方能使用。
常用实验室设备如下：4.1 生化培养箱温度控制在20±l℃，可连续无故障运行。
4.2 充氧设备充氧动力常采用无油空气压缩机(或隔膜泵、或氧气瓶、或真空泵)。
充氧流程可分为正压、负压充氧两种流程。
4.3 BOD培养瓶：容积550±1mL。
化验室测定水质五日生化需氧量操作规程
化验室测定水质五日生化需氧量操作规程一、实验目的测定水样的五日生化需氧量（BOD5），了解水样的有机物污染程度。
二、实验原理五日生化需氧量（BOD5）是指一定温度下，在条件适宜的细菌作用下，有机物被生物氧化所需的氧量。
实验中，将水样与添加细菌的琼脂糖培养液混合并置于恒温器内，五天后再测定混合液中的溶解氧浓度，根据溶解氧浓度差计算得到水样的BOD5值。
三、实验仪器和试剂1.恒温器：可控制温度为20±1℃。
2.恒温水浴槽：用于调节实验所需恒定温度。
3.溶解氧电极：用于测量水样中溶解氧浓度。
4.密封玻璃瓶：容量为300mL，用于混合水样和琼脂糖培养液。
5.搅拌器：用于溶解氧的均匀分布。
6.pH计：用于测量水样的酸碱度。
7.琼脂糖培养液：配制培养细菌的营养液。
四、实验步骤1.准备实验设备并调节恒定温度为20±1℃。
2.选取适当的密封玻璃瓶，并清洗干净。
3.取300mL水样并过滤，以去除不溶物。
4.在过滤的水样中测量初始溶解氧浓度，并记录。
5.在密封玻璃瓶中加入200mL过滤的水样和100mL琼脂糖培养液。
6.用搅拌器均匀混合水样和琼脂糖培养液。
7.将密封玻璃瓶置于恒温器内，保持20±1℃的温度。
8.在五天后取出密封玻璃瓶，使用溶解氧电极测量溶解氧浓度。
9.计算BOD5值：BOD5=初始溶解氧浓度-五天后溶解氧浓度。
五、实验注意事项1.实验环境应保持清洁，避免外界有机物污染。
2.水样和琼脂糖培养液的配制要准确，避免对实验结果产生干扰。
3.实验过程中应严格控制温度，以确保实验条件一致。
4.混合水样和琼脂糖培养液时要充分搅拌，确保溶解氧均匀分布。
5.溶解氧电极的使用要准确、标定和校准，以获得准确的溶解氧浓度值。
6.实验过程中应注意个人安全，避免接触有害物质。
六、实验结果记录和分析1.记录水样的初始溶解氧浓度和五天后的溶解氧浓度。
2.计算水样的BOD5值，并用于分析水样的有机物污染情况。
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1.适用范围
本测定规程规定了测定水中五日生化需氧量（BOD5）的稀释与接种的方法。
2.测试原理
在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。
通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4 h或（2+5）d±4 h[先在0~4℃的暗处培养2 d，接着在（20±1）℃的暗处培养5 d，即培养（2+5）d]，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD5的形式表示。
3.仪器设备
3.1 生化培养箱：20±1℃。
3.2 溶解氧仪：0~20 mg/L。
3.3 曝气装置。
3.4 溶解氧瓶：300 mL。
3.5 滤膜：孔径为1.6 μm。
3.6 一般实验室常用仪器和设备，玻璃容器需符合国家A级标准。
4.试剂
除非另有说明，分析时均用符合国家标准的分析纯试剂。
4.1 一级水，文中所说的水均指一级水。
4.2接种液：可购买接种微生物用的接种物质，接种液的配制和使用按说明书的要求操作。
也可按以下方法获得接种液。
4.2.1 未受工业废水污染的生活污水：化学需氧量不大于300 mg/L，总有机碳不大于100 mg/L。
4.2.2 含有城镇污水的河水或湖水。
4.2.3 污水处理厂的出水。
4.2.4 分析含有难降解物质的工业废水时，在其排污口下游适当处取水样作为废水的驯化接种液。
也可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入少量生活污水，使适当该种废水的微生物大量繁殖。
当水中出现大量的絮状物时，表明微生物已繁殖，可用作接种液。
一般驯化过程需
3~8 d。
4.3 盐溶液
4.3.1 磷酸盐缓冲溶液：将8.5 g磷酸二氢钾、21.8 g磷酸氢二钾、33.4 g七水合磷酸氢二钠和1.7 g氯化铵溶于水，稀释至1000 mL，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月。
此溶液的pH值为7.2。
4.3.2 硫酸镁溶液，ρ（MgSO4）=11.0 g/L：将22.5 g七水合硫酸镁溶于水，稀释至1000 mL，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
4.3.3 氯化钙溶液，ρ（CaCl2）=27.6 g/L：将27.6 g无水氯化钙（CaCl2）溶于水中，稀释至1000 mL，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
4.3.4氯化铁溶液，ρ（FeCl3）=0.15 g/L：将0.25 g六水合氯化铁（FeCl3·H2O）溶于水中，稀释至1000 mL，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
4.4 接种稀释水：在20 L的玻璃瓶或者纯水桶中加入一定量的一级水[加水量根据样品的个数确定：加水量V≥0.3*（4+3n）L，每批两个空白，两个质控样，n 表示样品个数]。
用曝气装置至少曝气1 h，使稀释水中的溶解氧达到8 mg/L以上。
使用前每升水中加入上述四种盐溶液各1.0 mL、接种液10 mL，混匀，20℃保存。
在曝气的过程中防止污染，特别是防止带入有机物、金属、氧化物或还原物。
接种稀释水中氧的质量浓度不能过饱和，使用前需开口放置1 h，且应在24 h 内使用。
剩余的接种稀释水应弃去。
4.5 盐酸溶液，ρ（HCl）=0.5 mol/L：将40 mL浓盐酸溶于水中，稀释至1000 mL。
4.6 氢氧化钠溶液，ρ（NaOH）=0.5 mol/L：将20 g氢氧化钠溶于水中，稀释至1000 mL。
4.7 亚硫酸钠溶液，ρ（Na2SO3）=0.025 mol/L：将1.575 g亚硫酸钠溶于水中，稀释至1000 mL。
此溶液不稳定，需现用现配。
4.8 葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12O6，优级纯）和谷氨酸（HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH，优级纯）在130℃干燥1 h，各称取150 mg
溶于水中，在1000 mL容量瓶中稀释至标线（也可以称15 mg至100 mL）。
此溶液的BOD5为（210±20）mg/L，现用现配。
5. 样品前处理
若对样品结果精度要求较高时，需要进行以下前处理步骤。
5.1 pH值调节
若样品或稀释后样品pH值不在6~8范围内，应用盐酸溶液（4.5）或氢氧化钠（4.6）溶液调节其pH值至6~8。
5.2 余氯和结合氯的去除
若样品中含有少量余氯，一般在采样后放置1~2 h，游离氯即可消失。
对短时间不能消失的余氯，可加入适量亚硫酸钠溶液去除样品中存在的余氯和结合氯。
5.3样品均质化
含有大量颗粒物、需要较大稀释倍数的样品或经冷冻保存的样品，测定前需将样品搅拌均匀。
5.4样品中有藻类
若样品有大量藻类存在，BOD5的测定结果会偏高。
测定前应用孔径为1.6 μm 的滤膜过滤，检测报告中注明滤膜孔径的大小。
6. 分析测试
6.1 稀释倍数的确定
样品稀释的程度应使消耗的溶解氧质量浓度不小于2 mg/L，培养后样品中剩余溶解氧质量浓度不小于2 mg/L，且试样中剩余的溶解氧质量浓度为开始浓度的1/3~2/3为最佳。
一个样品做3个系数倍数，稀释倍数可根据化学需氧量（COD Cr）的测定值确定。
以样品的COD Cr含量为100 mg/L为例，具体算法为：将COD Cr值分别乘以0.075、0.15、0.25三个系数得到7.5、15、25即样品的三个稀释倍数，再用溶解氧瓶的容积300 mL除以这三个稀释倍数得到样品的取样体积40 mL、20 mL、12 mL，然后加满接种稀释水。
6.2 样品测量
将加入样品并加满接种稀释水的溶解氧瓶用超声波清洗器超声几秒钟，超声
过程中稍微倾斜转动溶解氧瓶以除去瓶内的微小气泡。
用溶解氧仪测量试样的溶解氧浓度并记录在原始记录表上，同时记录环境温度和大气压力。
用水封法盖好瓶盖，盖瓶盖时注意防止瓶内产生新的气泡。
将溶解氧瓶放入（20±1）℃的生化培养箱内培养5天，培养过程中，注意及时补充瓶盖凹槽内的水，保持瓶子一直是水封状态。
5d±4 h后，再次测量试样的溶解氧浓度并记录，测量完后的试样弃去。
6.3 空白样品
用一级水代替样品，其他步骤相同完成测量。
7. 数据处理
ρBOD(mg/L)=[(ρ1-ρ2)-(ρ3-ρ4)*f1]/f2
ρ1：20℃下接种稀释水样在培养前的溶解氧浓度，mg/L；
ρ2：20℃下接种稀释水样在培养后的溶解氧溶度，mg/L；
ρ3：20℃下空白样在培养前的溶解氧浓度，mg/L；
ρ4：20℃下空白样在培养后的溶解氧溶度，mg/L；
f1：接种稀释水或稀释水在培养液中所占体积比例
f2：原样品在培养液中所占体积比例。
8. 质量保证与质量控制
8.1 每批样品要求做两个空白样品，空白样品的BOD5应不能超过1.5 mg/L，否则检查可能的污染来源。
8.2 每批样品要求做两个标准样品（LCS），做法如下：取6.0 mL标准溶液（4.8）于300 mL的溶解氧瓶内，其他步骤同样品相同操作，结果应在180~230 mg/L 范围内（原始记录表上只记录一个合格的即可），否则应检查接种液、稀释水的质量。
8.3 非购买的接种液从外面取回实验室后需要放置一天后再使用，当接种液内的微生物死亡太多时需要重新取合适的接种液。
10. 参考文件
10.1 水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法HJ 505-2009。