细胞培养技术
细胞培养技术的研究及应用
细胞培养技术的研究及应用细胞培养技术是一项重要的生物学研究和应用技术，通过对细胞培养技术的研究和应用，可以解决很多人类健康和环境问题。
本文将介绍细胞培养技术的基本原理和技术路线，以及其在生物学研究和应用中的实际应用。
一、细胞培养技术的基本原理和技术路线细胞培养技术是通过对细胞体外培养，使其在适当的环境中持续生长和繁殖。
细胞培养技术有两种类型，分别为原代细胞培养和细胞系培养。
其中原代细胞培养指的是直接从动植物组织中分离出来的细胞培养，具有更加原始和稳定的基因型；而细胞系培养则是一种细胞自身在无数代细胞的演变过程中形成的具有特定表型和基因型的细胞种系。
细胞培养技术的基本技术路线包括以下三个步骤：（1）组织分离和细胞分离：青蛙卵母细胞、小鼠卵子、小鼠骨髓细胞、小鼠脾细胞等都可以用细胞培养技术处理。
通常采用胰酶、胆汁酸等消化酶对组织进行消化，从中提取出未分化的细胞。
（2）细胞培养条件调节：对于细胞培养技术，不同的细胞类型对培养基成分和培养条件是有所不同的。
例如配制适当的培养基、控制温度、保湿等重要条件是确定其生长特性的重要神经成分。
（3）细胞生长和繁殖：细胞在培养基中的生长特点和体内略有不同，其主要关注点是增殖、转染、药物筛选、毒性测试、体外血管重建、组织重建、再生医学等。
二、细胞培养技术的实际应用细胞培养技术在生物技术和医学领域中有广泛的应用。
以下将具体介绍细胞培养技术在这方面的应用。
（1）药物筛选：细胞培养技术可以在前期从上万的化合物中筛选出可以治疗癌症、心脏病等疾病的重要药物。
（2）肝脏毒素性病理反应预测：基于体外肝细胞培养技术，主要是通过细胞毒性试验、细胞输出项目等方法对毒性评估进行定性和定量分析极其的迅速和准确。
（3）组织工程：现已凭借细胞培养技术创造出了弯曲的软骨和人工血管等组织，日益成为支持组织工程的新技术手段。
（4）真核细胞的转染：细胞培养技术可以将外源DNA导入到真核细胞中，可以有偏向的决定细胞的DNA合成和功能实现。
细胞培养技术
细胞培养技术1. 引言细胞培养技术是生物学研究中的重要工具之一，它可以使研究人员能够在体外模拟和研究体内细胞的生长、分化和功能。
随着技术的不断发展和进步，细胞培养技术已经成为生物医学研究、药物筛选与开发以及组织工程等领域的关键技术之一。
本文旨在介绍细胞培养技术的基本原理、常用技术和应用领域。
2. 细胞培养技术的基本原理细胞培养技术的基本原理是通过提供适宜的培养基、维持适宜的环境条件（如温度、湿度和氧气浓度等）和提供适量的营养物质来满足细胞的生长和分裂需求。
培养基是细胞培养中非常重要的组成部分，它通常由基础培养基、补充物和生长因子等组成。
基础培养基提供了细胞培养所必需的无机盐、氨基酸等营养物质，补充物则能够提供胎牛血清、胎儿牛血清等对细胞生长有促进作用的物质。
3. 细胞培养技术的常用技术3.1 培养皿法培养皿法是最常用的细胞培养技术之一，它将细胞悬浮于培养皿中，通过提供适宜的培养基和环境条件来促进细胞的生长。
培养皿法相对简单易行，适用于大部分类型的细胞培养。
在培养皿法中，培养皿需经过灭菌处理，细胞悬浮液需要注意卫生和无菌操作。
3.2 悬浮培养法悬浮培养法是将细胞悬浮于培养液中，以悬浮形式进行培养。
与培养皿法相比，悬浮培养法可以提供更好的氧气和营养物质供应，从而促进细胞生长和代谢。
悬浮培养法通常适用于需要大量细胞或长时间培养的情况。
3.3 筛选技术在一些特殊的细胞培养实验中，研究人员需要筛选出特定类型的细胞。
筛选技术可以通过选择性培养基或标记物的使用，将目标细胞与其他非目标细胞或者其他细胞组织进行分离和筛选。
4. 细胞培养技术的应用领域细胞培养技术在许多领域中发挥着重要作用。
下面列举了一些常见的应用领域：•药物筛选与开发：细胞培养技术可以有效模拟细胞在体内的生长环境，并通过评估药物对细胞生长和代谢的影响，来研究和开发新药物。
•组织工程：细胞培养技术可以用于培养和繁殖不同类型的组织细胞，为组织工程的研究和应用提供基础。
细胞生物学实验技术
细胞生物学实验技术细胞生物学实验技术是现代生命科学研究中的关键环节，它为研究人员提供了深入了解细胞结构、功能和相互作用的途径。
本文将重点介绍一些常见的细胞生物学实验技术，包括细胞培养、染色技术、分离技术和显微镜观察等。
一、细胞培养技术细胞培养是一项基础性技术，它可以将细胞从体内取出并在适当的培养基中进行增殖和维持。
细胞培养的首要任务是提供适当的培养基，其中含有必需的营养物质、生长因子和适当的温度、湿度和气体条件。
细胞培养技术广泛应用于细胞生物学实验、组织工程、药物研发等领域。
二、染色技术染色技术是细胞生物学实验中常用的方法之一，它使研究者能够对细胞内各种结构和分子进行可视化观察。
常用的染色方法包括荧光染色、酶标染色和核酸染色等。
荧光染色利用荧光标记的抗体或染料，可使特定的细胞结构或分子在显微镜下发出荧光信号，从而观察其位置和表达水平。
酶标染色则通过酶与底物的反应，使细胞或组织显示出颜色等信号。
核酸染色则利用特定染料与细胞核酸结合，以观察DNA或RNA的分布情况。
三、分离技术分离技术在细胞生物学实验中具有重要作用，它可以将不同类型的细胞或细胞组分进行分离和纯化。
常用的分离技术包括细胞离心、流式细胞术和免疫磁珠分离等。
细胞离心是通过离心机将混合细胞悬液分离成上清液和沉淀，从而获得纯化的特定类型细胞。
流式细胞术则通过流式细胞仪测量细胞的大小、形态和表面标记物，从而实现对细胞的高通量分离和分析。
免疫磁珠分离则利用特定抗体结合在磁珠表面，以实现对需要纯化的细胞或细胞组分的选择性捕获。
四、显微镜观察显微镜观察是细胞生物学实验的重要手段，它使研究者能够观察到细胞内不同的结构和过程。
传统光学显微镜可实现对细胞形态和部分细胞器的观察，但其分辨率有限。
近年来，随着超分辨显微镜技术的发展，研究者们能够突破传统光学显微镜的分辨率极限，实现对亚细胞结构和分子过程的观察。
总结细胞生物学实验技术在现代生命科学研究中发挥着至关重要的作用。
细胞培养技术与应用
细胞培养技术与应用细胞培养技术是生物科技领域的重要组成部分，其应用范围广泛，涉及医学、农业、食品工业、环境保护等多个领域。
本文将简单介绍细胞培养技术的基本原理、分类、常见技术及应用。
一、细胞培养技术的基本原理细胞是生物体内组成单位，是生物学研究的基本对象。
细胞培养技术是指将生物体内的细胞从组织或器官中分离出来，放入含有必需营养物质和适当环境的培养基中，进行生长、增殖和分化的一种技术。
培养基是一种液态或固态的生物学培养用基质，其中含有细胞生长所需的各种营养物质、维生素、微量元素和生长因子等，而无菌的操作条件、适当的pH值和氧气浓度以及温度和湿度的控制，也是细胞培养过程中必须关心的问题。
细胞培养技术的基本原理就是通过对培养基中培养的细胞进行试验和分析，研究细胞生长、增殖、分化和功能等方面的问题。
二、细胞培养技术的分类细胞培养技术的分类主要依据种类、来源、形态等特性，可分为以下几类：1.原代细胞培养（Primary cell culture）此类培养为第一次从组织或器官中分离的细胞，具有原代细胞特征，具有细胞衰老限制，常能增殖到35-60倍，适于生物学仿真实验的研究；2.细胞株培养（Cell line culture）细胞株是长期经连续传代而获得的细胞世代，可分为稳定细胞株和不稳定细胞株。
稳定细胞株经多次传代后，还能保持原始形态和功能，代表性细胞株有HeLa、CHO、Vero等，常用于药理学、生物学及生物工程等领域中进行研究；3.二次扩增或转染细胞培养（Secondary cell culture）此类培养为从原代细胞或细胞株中分离后通过扩增或转染处理的细胞。
常用于细胞毒性实验、用于表达蛋白质、病毒、植物和昆虫细胞的重组蛋白等；4.三维细胞培养（3D Cell culture）此类培养方式为采用特殊的培养基和培养方法，使细胞形成三维组织结构。
其应用领域涉及人体组织再生医学、肝内药代动力学等。
5.定量检测型细胞培养（qPCR and ELISA）此类培养突出利用优化的细胞培养条件，量化检测细胞中与特定指标相关的分子量、酶活性、基因表达等，是常用于诊断、监测疾病和药效评估的技术。
生物制药中的细胞培养技术
生物制药中的细胞培养技术生物制药是利用生物技术生产药品的一种方法，其中细胞培养技术是生物研究领域中最重要的技术之一。
细胞培养技术是药品制造的核心技术之一，它涵盖了繁殖、分化和生长等复杂过程。
在生物制药领域中，细胞培养技术是不可或缺的技术手段之一。
下面就让我们来详细了解一下细胞培养技术在生物制药中的应用和意义。
1. 细胞培养技术的概念和分类细胞培养技术是指在细胞所需要的营养和环境指标下，利用体外培养技术使细胞繁殖并扩张量的一种技术。
细胞培养技术被广泛应用于生物医药、环境保护、农业和食品等领域。
它根据细胞类型、培养对象、生产目的和培养方式的不同，可以分为悬浮细胞培养和贴壁细胞培养两种。
2. 细胞培养技术在生物制药中的应用在生物制药领域中，细胞培养技术已经成为了药品研发和生产的核心技术之一。
目前，大部分有关蛋白质药物的研究都是通过细胞培养技术来进行的，包括重组蛋白、抗生素、癌症疫苗等。
大部分生物制药公司都使用细胞培养技术来生产药品，这些药品包括生物同源药、重组大分子、基因治疗药和细胞疗法等。
3. 细胞培养技术在药品研发中的意义细胞培养技术的发展对药品研发和生产产生了重大影响。
通过细胞培养技术，人们可以以高效、安全、可控的方式制造出高纯度的生物制品，并保证药品的长期稳定性。
同时，细胞培养技术还可以提高药品的产量和质量，减少生产过程中的变异性，并降低了生产成本。
4. 细胞培养技术的发展前景随着生物制药领域的不断发展，细胞培养技术成为了药品研发和生产的不可或缺的核心技术。
当前，细胞培养技术已经成为生物医药行业中的一个明确趋势，也是一个巨大的商业机会。
未来，生物制药领域的重点将是开发新的细胞培养技术和优化现有的技术，从而提高生物制品的产量和质量。
总之，细胞培养技术是生物研究领域中最重要的技术手段之一。
在生物制药领域中，细胞培养技术已经成为了药品研发和生产的核心技术之一。
如今，大部分生物制药公司都已经使用细胞培养技术来生产药品，并且未来这种技术还将得到更加广泛和深入的应用。
细胞培养技术
细胞培养技术一、细胞培养基本概念细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境, 在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下, 使期生长繁殖, 并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。
在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。
外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可反复取材等优点, 它在临床染色体分析中使用最广泛。
体外培养细胞株可在培养过程中发生自发的或在外界作用下的转化, 成为永久细胞系, 也可直接建成永久细胞系, 永久细胞系能在体外无取制的传代和生长。
永久细胞系通常具有非整倍体细胞和各个细胞的核型不完全相同特性。
但细胞克隆的细胞系其这一特性可以不明显。
二、细胞培养的环境细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。
1.无污染环境培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。
当细胞放置于体外培养时, 与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力, 一旦被污染或自身代谢物质积累等, 可导致细胞死亡。
因此在进行培养中, 保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等, 是维持细胞生存的基本条件。
2.恒定的温度维持培养细胞旺盛生长, 必须有恒定适宜的温度。
人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃, 偏离这一温度范围, 细胞的正常代谢会受到影响, 甚至死亡。
培养细胞对低温的耐受力较对高温强, 温度上升不超过39℃时, 细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时, 即能受到一定损伤, 但仍有也许恢复；在40-41℃1小时, 细胞会普遍受到损伤, 仅小半数有也许恢复；41-42℃1小时, 细胞受到严重损伤, 大部分细胞死亡, 个别细胞仍有恢复也许；当温度在43℃以上1小时, 细胞所有死亡。
3.气体环境气体是人体细胞培养生存必需条件之一, 所需气体重要有氧气和二氧化碳。
氧气参与三羧酸循环, 产生供应细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。
细胞培养技术
三、培养细胞技术
（二）细胞来源 （2） 消化培养法 与组织块培养法区别： A. 用酶制剂处理组织块，除去细胞间
质，使细胞分离，形成细胞悬液； B. 细胞生长方式多为单层。
优点：更易摄取营养、排除代谢产物生长 较快。
缺点：操作繁杂，易污染；消化可能对细 胞有损伤。
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三、培养细胞技术
（二）细胞来源 2. 细胞系（cell line） 原代培养物开始第一次传代培养后的细
底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞
血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白
和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些
带正电荷的糖蛋白的Байду номын сангаас贴壁因子先吸附于底物
上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。
进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功 能基团）
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潜伏期
此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。
单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体,治疗用单
克隆抗体。
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细胞培养目的和作用
基础研究 (1) 药物作用机理； (2) 基因功能； (3) 疾病发生 机理。
2、生物制药 疫苗生产：如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗
等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。 基因工程药物生产：如在临床医学中具有治疗价值的
过滤）
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二、培养细胞相关条件
（二）培养用品
（1）培养瓶（25 、75 cm3）
6孔）
培养板（96、48、24、12、
培养皿（各种直径规格）
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二、培养细胞相关条件
（二）培养用品 （2）离心管（15、50 ml） （3）移液管、吸管 （4）冻存管、EP管 （5）试剂瓶等。
细胞培养技术
细胞培养技术细胞培养技术是一种重要的生物技术手段，可用于研究细胞的生理、代谢和分子机制，了解疾病的发病过程，开发新药物和生物制品等。
本文将从细胞培养的基本原理、培养条件、培养方法及其应用等方面来介绍细胞培养技术。
1. 细胞培养的基本原理细胞培养基本上是将有机体的一部分组织或细胞分离出来，放在独立的培养容器（如培养皿、培养瓶）中，以固体、液体或半固体培养基为基础，模拟生物体内的环境，通过提供适当的营养、温度、湿度和气氛等条件，使细胞在体外生长、分化和繁殖，维持其生命活动。
细胞培养的基本原理包括以下几个方面：(1) 提供适当的培养基细胞培养基是细胞培养的重要条件之一，它要求有营养成分的成份、酸碱度、适当的温度和湿度等。
细胞培养基主要分为无血清培养基和含血清培养基两种。
无血清培养基可以避免血清的批次差异，降低了培养过程中的变异性，但无血清培养基更贵，对细胞生长的影响程度更大且对培养稳定性的要求更高。
在实际应用中，血清培养基仍然是最常用的培养基。
(2) 控制氧气供应细胞在生长过程中需要充足的氧气和营养物质供应。
氧气，作为呼吸作用中的最终受体，在细胞生长、异化和化学诱导中，也扮演了重要的角色。
Highmoreet al.（1978）根据细胞所需氧的需求程度将细胞分为三种类型，即耗氧型、耐氧型和厌氧型。
在细胞培养的过程中，要根据不同的需求，合理控制氧气供应，以满足细胞的生长需求。
(3) 提供适当的温度和湿度细胞定植能力、增殖速度和产生生化反应等都受到温度和湿度的影响。
在常温下，细胞生长速度相对较慢，而在适当的温度下，细胞生长速度会加快，并且会增加细胞代谢产生的热量。
湿度是影响细胞生长的另一个重要因素，不适当的湿度会影响培养液中溶液中的渗透压和细胞内液体平衡，导致细胞死亡。
(4) 增加营养和生长分子的供应细胞生长、分化和繁殖与大量的物质变换和反应有关。
给予细胞必需的营养物质和生长分子，能够促进细胞的生长和增殖，并在一定程度上控制细胞的分化和功能表达。
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第一章 细胞培养的基本原理与技术现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。
基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。
正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
第一节 体外培养的概念一、基本概念 体外培养（in vitro culture），就是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。
●组织培养：是指从生物体内取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。
●细胞培养：是指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。
●器官培养：是指从生物体内取出的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。
二、体内、外细胞的差异和分化1.差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。
因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。
实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。
2.分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体内不同。
细胞是否表现分化,关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。
第二节 细胞培养的一般过程一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。
准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。
二、取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。
如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。
机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。
理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。
取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置的培养液中保存。
取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。
取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。
三、培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。
如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。
如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。
细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。
正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。
原代培养一般有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。
过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。
细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。
每传代一次称为“一代”。
二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。
转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。
四、冻存及复苏（可参阅后面有关章节）为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。
冻存的温度一般用液氮的温度－，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。
在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。
复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入水中，使之在一分钟内迅速融解。
然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。
五、常用仪器设备 无菌室,超净工作台,三重纯水蒸馏器,抽气泵,压力蒸气消毒器,电热恒温培养箱,培养器具，CO2培养箱,恒温水浴锅,倒置显微镜,离心机,无菌过滤器,洗刷装置,细胞计数板和电子细胞技术仪等等。
第三节 细胞培养的无菌环境一、无菌室无菌室的结构：一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。
无菌室的消毒和防污染：为保持无菌状态，经常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2小时），每周甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）和每月新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。
实际工作中，要根据无菌室建筑材料的差异来选择合适的消毒方法。
此外，还应注意防止无菌室的污染。
造成无菌室污染的可能包括：送入无菌室的风没有被过滤除菌；进出无菌室时，能使外界空气直接对流进无菌室的操作间；等。
二、超净工作台工作原理：鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。
根据气流在超净工作台的流动方向不同，可将超净工作台分为侧流式、直流式和外流式三种类型。
超净台的使用与保养：超净台的平均风速保持在0.32/秒为宜，过大、过小均不利于保持净化度；使用前最好开启超净台内紫外灯照射10－30分钟，然后让超净台预工作10－15分钟，以除去臭氧和使用工作台面空间呈净化状态；使用完毕后，要用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净，以保证超净台无菌。
还要定期用福尔马林熏蒸超净台。
第四节 常用培养器皿及清洗消毒细胞培养需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金属器皿、塑料、橡胶制品、布类、纸类等，因此掌握清洗、消毒知识，学会清洗、消毒方法是从事细胞培养工作必须的。
一、清洗 离体条件下，有害物质直接同细胞接触，细胞对任何有害物质十分敏感，极少残留物都可以对细胞产生毒副作用。
因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，达到不含任何残留物的要求。
（一）玻璃器皿的清洗 一般经过浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四个步骤。
1.浸泡:新的或用过的玻璃器皿要先用清水浸泡，软化和溶解附着物。
新玻璃器皿使用前得先用自来水简单刷洗，然后用5％盐酸浸泡过夜；用过的玻璃器皿往往附有大量蛋白质和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后应立即浸入清水中备刷洗。
2.刷洗:将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂水中，用软毛刷反复刷洗。
不要留死角，并防止破坏器皿表面的光洁度。
将刷洗干净的玻璃器皿洗净、晾干，备浸酸。
3.浸酸:浸酸是将上述器皿浸泡到清洁液中，又称酸液，通过酸液的强氧化作用清除器皿表面的可能残留物质。
浸酸不应少于六小时，一般过夜或更长。
放取器皿要小心。
4.冲洗:刷洗和浸酸后的器皿都必须用水充分冲洗，浸酸后器皿是否冲洗的干净，直接影响到细胞培养的成败。
手工洗涤浸酸后的器皿，每件器皿至少要反复“注水－倒空”15次以上，最后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包装备用。
（二）橡胶制品清洗新的橡胶制品洗涤方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，0.5mol/L HCl煮沸15分钟，流水冲洗，自来水煮沸2次，蒸馏水煮沸20分钟，烤干备用。
（三）塑料制品的清洗塑料制品特点：质软、易出现划痕；耐腐蚀能力强、但不耐热。
清洗程序：使用器皿后立即用清水清洗，浸于自来水过夜，用纱布或棉签和清洗液刷洗，流水冲洗，晾干，浸于清洁液15分钟，流水冲洗（15－20遍）,蒸馏水浸洗三次，双蒸水泡24小时，晾干备用。
（四）包装:对细胞培养用品进行消毒前，要进行严密包装，以便于消毒和贮存。
常用的包装材料：牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、较大培养皿等，近几年用铝箔包装，非常方便，适用。
培养皿、注射器、金属器械等用牛皮纸包装后再装入饭盒内，较大的器皿可以进行局部包扎。
二、消毒和灭菌 微生物污染是造成细胞培养失败的主要原因（一）物理消毒法1.紫外线消毒:紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种微生物。
革兰阴性菌最为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力最强。
紫外线的直接作用是通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活，间接作用是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。
直接照射培养室消毒，用法简单，效果好。
紫外灯的消毒效果同紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关，辐射强度随灯距离增加而降低，照射剂量和照射时间呈正比。
因此紫外灯同被照射物的距离和照射时间要适合。
离地面的30W灯可照射9平方米房间，每天照射2－3小时，期间可间隔30分钟。
灯管离地面以外要延长照射时间，照射效果较差。
紫外灯照射工作台的距离不应超过，照射时间30分钟为宜。
紫外灯不仅对皮肤、眼睛伤害，且对培养细胞与试剂等也产生不良影响，因此，不要开着紫外等操作。
2.高温湿热灭菌:压力蒸汽灭菌是最常用的高温湿热灭菌方法。
对生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白质变性凝固而使微生物死亡。
布类、物、璃器皿、属器皿、胶和某些培养液都可以用这方法灭菌。
不同压力蒸汽所达到的温度不同，不同消毒物品所需的有效消毒压力和时间不同。
从压力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品（不包括液体），应立即放到60烤箱内烘干，再贮存备用，否则，潮湿的包装物品表面容易为微生物污染。
煮沸消毒也是常用的湿热消毒方法，它具有条件简单、使用方便等特点。
3.高温干热消毒:干热灭菌主要是将电热烤箱内物品加热到以上，并保持90－120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的。
主要用于灭菌玻璃器皿（如体积较大的烧杯、培养瓶）、金属器皿以及不能与蒸汽接触的物品（如粉剂、油剂）。
干热灭菌后要关掉开关并使物品逐渐冷却后在打开，切忌立即打开，以免温度骤变而使箱内的玻璃器皿破裂。
干烤箱内物品间要有空隙，物品不要靠近加热装置。
烧灼也是灭菌方法之一，常利用台面上的酒精灯的火焰对金属器皿及玻璃器皿口缘进行烧灼消毒。