细胞培养技术总结-重要
细胞工程知识点总结

细胞工程知识点总结细胞工程,是一门涉及生命科学和工程学的交叉学科,它关注的是利用细胞和分子技术来实现生物医学和生物工程的应用。
细胞工程的发展不仅对医学诊疗和疾病治疗领域有着重要的意义,也对生物工程的发展起到了推动作用。
在这篇文章中,我们将对细胞工程的一些重要知识点进行总结。
1. 细胞培养技术细胞培养技术是细胞工程的基础,它是指将细胞从体内或体外分离出来,在适当的环境条件下进行培养、增殖或分化。
细胞培养技术涉及到细胞培养基的配制、细胞传代方法、培养条件的调控等。
对于细胞工程的实验研究以及细胞药物的生产和培养,细胞培养技术都起到了至关重要的作用。
2. 细胞凋亡与细胞增殖细胞凋亡和细胞增殖是细胞工程中两个重要的生物学过程。
细胞凋亡是指受到内部或外部刺激后,细胞通过一系列的生化反应主动死亡。
细胞凋亡在细胞工程中有着广泛的应用,例如用于肿瘤治疗和组织工程的构建。
而细胞增殖则是指细胞的数量增加,通过细胞的分裂和增生来实现。
细胞增殖在组织修复和再生医学方面具有重要的意义。
3. 基因工程技术基因工程技术是一种将外源基因导入目标细胞中的方法,以实现特定功能或表达特定蛋白质的技术。
基因工程技术在细胞工程中被广泛应用,例如用于基因治疗和基因表达的研究。
基因工程技术的主要方法有转染法、电穿孔法、病毒介导转导等。
4. 细胞信号传导与细胞外基质细胞信号传导是细胞与细胞之间或细胞与环境之间进行信息传递的过程。
细胞信号传导是细胞工程领域研究的重点之一,它对细胞内信号传递路径的研究以及细胞外基质的调控具有重要意义。
细胞外基质是细胞外环境中的一种复杂的生物大分子结构,它不仅对身体组织的结构和功能有着重要的影响,同时也对细胞外基质中的信号传导起到了调控作用。
5. 组织工程与再生医学组织工程是一门将细胞、材料科学和工程学相结合的学科,它旨在通过构建人工组织和器官来替代或修复受损的组织和器官。
组织工程在细胞工程领域具有重要的地位,它涉及到细胞培养、支架材料的设计与构建、组织的生物学特性等。
细胞培养毕业实习报告总结

毕业实习报告总结:细胞培养首先,我要感谢我的导师和实验室的同事们,他们在我的实习期间给予了我无私的帮助和指导。
通过这次实习,我对细胞培养这一领域有了更深入的了解,也积累了宝贵的实践经验。
细胞培养是生物医学和生物技术领域中重要的实验技术,它通过模拟细胞在体内的生长环境,使细胞在体外继续生长和繁殖。
在实习期间,我学习了细胞培养的基本原理和操作技术,包括细胞的复苏、传代、胰蛋白酶消化、细胞计数、铺板等步骤。
我也了解了细胞培养中常用的仪器设备,如二氧化碳培养箱、显微镜、细胞计数仪等。
在实习过程中,我不仅掌握了细胞培养的基本技能,还参与了一些具体的实验项目。
我参与了一项关于细胞凋亡的研究,通过细胞培养技术,我成功地培养了所需细胞,并进行了凋亡实验。
通过观察细胞形态的变化和流式细胞术的分析,我得出了实验结果,并协助导师进行了数据分析和论文撰写。
这个过程中,我不仅学习了实验设计和数据分析的方法,还提高了自己的实验操作能力。
在实习期间,我也遇到了一些挑战和困难。
例如,细胞培养过程中细胞的生长速度较慢,有时需要耐心等待。
另外,细胞的复苏和传代过程中,也有一些技巧需要掌握。
通过请教导师和同事,我逐渐克服了这些困难,并取得了较好的实验结果。
通过这次实习,我不仅学到了专业知识和技能,还锻炼了自己的团队合作和沟通能力。
在实验室中,我与同事们共同合作,互相学习和帮助。
我们也定期进行实验室会议,分享实验进展和心得体会,这让我感受到了团队合作的重要性。
总之,这次细胞培养实习是一次非常宝贵的学习经历。
我不仅掌握了细胞培养的基本技能,还参与了一些具体的实验项目,并取得了较好的研究成果。
同时,我也学会了团队合作和沟通的能力。
我相信这次实习对我未来的学术研究和职业发展将产生积极的影响。
细胞培养技术员工作总结

细胞培养技术员工作总结总结一细胞培养一.基本理论概论原代培养:也叫初代培养,指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养。
传代培养:将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。
细胞系:原代培养物成功传代后,则称之为细胞系。
(如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系;已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系,称连续细胞系或无限细胞系。
)细胞株:通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。
培养类型:细胞培养,组织培养,器官培养。
细胞生长的方式:贴附生长,悬浮生长培养细胞的形态(形态不一定,环境改变形态可能改变):成纤维性型细胞,上皮型细胞(单层膜样生长),游走性细胞(游散生长,常有伪足跟突起)二.培养过程及要点(切记无菌操作)(一)工作环境的处理1.实验进行前,无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60分钟灭菌,以70%酒精擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10分钟后,才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70%酒精擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。
2.实验用品以70%酒精擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在台面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。
3.小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45?角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
吸管口切勿碰到容器瓶口4.工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少Classll)。
细胞培养方法总结

细胞培养方法总结细胞培养是生物学研究中重要的实验技术之一,通过在体外人工创造和维持细胞生长环境,使细胞能够持续繁殖、生长和分化。
本文将对常用的细胞培养方法进行总结,并介绍其步骤和注意事项。
一、细胞培养基的配制细胞培养基是细胞生长所必需的营养物质和生长调节因子的混合物,根据细胞类型和实验需求的不同,培养基种类繁多。
在配制培养基时,应按照标准操作流程,确保成分准确无误并避免细菌和真菌的污染。
二、细胞的分离和传代1. 细胞的分离:将细胞从原来的培养皿中取出,并用消化酶、细胞分离酶等方法进行细胞的离散处理,以获得单细胞悬浮液或小团的细胞群。
2. 细胞的培养:将悬浮的细胞或细胞小团转移至新的培养皿中,添加适量的培养基,并静置于恒温培养箱中,创造适宜的生长环境,促进细胞的生长。
3. 细胞的传代:当原始细胞群生长至饱和状态时,需进行细胞的传代,即将部分细胞转移到新的培养皿中,以保持细胞的活力和增长。
传代过程中,注意维持传代比例和规律的同时,避免细胞超密植或过稀。
三、细胞冻存和解冻细胞冻存是将培养好的细胞保存在低温下,以延缓其代谢过程,以备后续使用。
具体步骤包括:1. 预处理:加入冻存保护剂,如二甲基亚砜(DMSO)或甘油,以降低冻存过程对细胞的伤害。
2. 储存管制备:将细胞转移到冻存管中,并标记相关信息,如细胞类型、培养时间等,以方便后续的识别。
3. 冷冻:将装有细胞的冻存管放置在低温环境中,逐渐降温至最终低温储存条件下,一般为液氮温度(-196°C)。
4. 解冻:将冻存管取出,快速置于37°C预热的培养基中解冻,然后将细胞转移至培养皿中,尽快恢复细胞活性。
四、细胞凋亡检测细胞凋亡是指细胞主动发生的自我死亡过程。
为了研究细胞凋亡的发生机制,需对细胞进行凋亡检测。
以下是常用的细胞凋亡检测方法之一:1. Annexin V/PI双染法:利用Annexin V亲和素与磷脂酰丝氨酸的结合,通过荧光检测乙酰胆碱酯酶的失活,以区分早期和晚期凋亡。
细胞实验技术员的工作总结

细胞实验技术员的工作总结
作为一名细胞实验技术员,我的工作主要是在实验室中进行细胞培养、实验操
作和数据分析。
这项工作需要精准的操作技巧、严谨的实验态度和扎实的专业知识。
首先,细胞培养是我工作中的重要环节。
我需要根据实验需求选择合适的培养
基和细胞系,进行细胞传代和细胞冻存,保证细胞的健康生长和稳定性。
在培养过程中,我要时刻注意细胞的状态和纯度,确保实验的可靠性和准确性。
其次,实验操作是我工作的核心内容。
我需要根据实验设计进行细胞处理、药
物处理、蛋白抽提等操作,严格按照操作规程和标准操作程序进行,确保实验的可重复性和结果的可信度。
在操作过程中,我要时刻关注实验条件的控制和实验设备的维护,保证实验的顺利进行。
最后,数据分析是我工作的重要环节。
我需要对实验结果进行统计分析和图表
绘制,解读实验数据并撰写实验报告。
在数据分析过程中,我要时刻关注数据的准确性和可靠性,确保实验结果的科学性和可信度。
综上所述,作为一名细胞实验技术员,我需要具备扎实的细胞生物学和实验技
术知识,严谨的工作态度和精准的操作技巧。
通过不懈的努力和持续的学习,我将不断提升自己的专业水平,为科研工作的顺利进行贡献自己的力量。
细胞培养个人工作总结范文

细胞培养个人工作总结范文细胞培养是生物学实验中非常重要的一个环节,我在进行细胞培养工作中取得了一些经验和收获,现做以下总结:首先,在进行细胞培养实验时,我要保证实验室环境的洁净,经常对实验设备进行消毒和清洁,以防止细菌或其他有害物质的污染。
同时,在进行细胞培养时,要注意无菌操作,避免外界微生物的污染。
其次,我在培养细胞过程中,掌握了种植细胞的最佳条件和方法。
比如,在细胞培养的过程中,我严格控制培养基的pH值、营养物质的添加和细胞密度的控制,以保证细胞的健康生长和增殖。
另外,在细胞培养过程中,我也注意到了细胞的形态学变化和生长速度等指标的监测和记录,及时发现细胞的异常情况,以便及时调整培养条件。
最后,我在细胞培养实验中,还积累了大量的实践经验和技能,这些都将对我今后的科研工作产生积极的影响。
总而言之,通过细胞培养的个人工作总结,我进一步加深了对细胞培养工作的理解,提高了细胞培养技能,为今后的科研工作奠定了更加扎实的基础。
希望在今后的科研工作中,我能够不断积累经验,提高专业素养,为科学研究做出更多的贡献。
在细胞培养的工作实践中,我还学会了如何选择合适的细胞培养基和添加剂,以促进细胞的健康生长。
同时,我也学会了如何判断细胞的状态和纯度,并且掌握了一些常见的检测方法和技术,如细胞计数、细胞鉴定、细胞凋亡检测等。
这些技能不仅为我日常的细胞培养工作提供了坚实的保障,也为我未来的科研探索和学术研究奠定了基础。
在进行细胞培养的工作中,我还注意到了实验中的一些常见问题和解决方法。
比如,细胞在培养过程中出现的感染、细胞质纺锤体形成异常、细胞黏附不良等情况,这些都需要我们认真研究问题的根源,并采取相应的措施解决。
通过对实验过程中遇到的问题进行分析和总结,我得以不断提高自己的动手能力和解决问题的能力,使得我在工作中更加得心应手。
在实验的过程中,我发现了培养过程中一些可能的改进点。
比如,改进培养基的配方、优化培养条件、探索新的细胞培养技术等,这些都是我在细胞培养工作中不断努力的方向。
细胞培养实验总结总结

细胞培养实验总结引言细胞培养是现代生物学研究中常用的实验技术之一,它可以模拟体内环境,为研究细胞的生理生化过程提供便利。
本文对进行的细胞培养实验进行总结,包括实验目的、实验步骤、实验结果及讨论等内容。
实验目的本次实验的主要目的是通过细胞培养技术培养和观察细胞生长情况,了解细胞培养过程中的操作步骤和注意事项。
同时,通过添加不同培养基成分,探究对细胞生长和分化的影响。
实验步骤1.准备实验器材和培养基:将所需的培养基放置在无菌工作台上,同时清洗好所有需要使用的培养器皿和器械,保持无菌状态。
2.细胞传代:将上一代培养的细胞用无菌吸管吸取,移至新的培养器皿中,加入新鲜准备好的培养基。
细胞传代的目的是保持细胞的生长状态和纯度。
3.细胞观察:将培养器皿放置在显微镜下,使用适当倍率进行观察。
检查细胞的生长状况和细胞数量是否符合预期。
4.添加培养基成分:根据实验设计,可以在相应的培养器皿中加入不同的培养基成分,例如细胞分化因子、抗生素等。
目的是观察添加不同成分后细胞的生长和分化变化。
5.细胞采集:当细胞达到一定的生长密度时,可以进行细胞采集。
用无菌吸管吸出细胞悬液,将其置于离心管中,并进行离心处理,获取细胞沉淀。
6.分析实验结果:对培养的细胞进行计数、生长速率分析等统计,观察实验结果是否符合预期。
实验结果根据实验步骤和操作要求,我们成功地进行了细胞培养实验,并获得了一系列实验结果。
首先,观察到细胞在培养基中显示出良好的生长状态。
细胞数量逐渐增多,呈现典型的细胞周期。
观察到细胞的形态变化,细胞逐渐变大,细胞贴壁生长良好。
这说明培养基的成分和培养条件对细胞的生长具有重要影响。
其次,实验中添加了不同的培养基成分,包括细胞分化因子和抗生素。
观察到加入细胞分化因子后,部分细胞呈现出明显的分化现象,形成不同的细胞类型。
而加入抗生素后,观察到细胞数量减少,并且呈现出不同程度的细胞死亡。
这说明细胞分化和细胞存活受到培养基成分的影响。
细胞培养员的工作总结

细胞培养员的工作总结
作为一名细胞培养员,我深知这项工作的重要性和复杂性。
在细胞培养领域,
我们的工作是至关重要的,因为细胞培养是许多生物医学研究和药物开发的基础。
在这篇文章中,我将总结一下作为一名细胞培养员的工作内容和重要性。
首先,作为一名细胞培养员,我们的主要工作是负责培养和维护各种类型的细胞。
这包括从动物组织中分离细胞、培养细胞、检测细胞的健康状况以及进行细胞传代。
这些工作需要高度的技术和实验操作技能,因为细胞的生长和健康状况对于后续的实验结果至关重要。
其次,细胞培养员需要严格遵守实验室的操作规程和安全标准。
在细胞培养实
验室中,我们需要确保实验室的清洁和无菌操作,以防止细胞培养过程中的污染。
此外,我们还需要定期检查和维护实验室设备,确保其正常运行。
另外,作为一名细胞培养员,我们还需要与其他研究人员密切合作。
我们需要
根据研究项目的需求,为科研人员提供高质量的细胞培养服务,并确保实验结果的准确性和可重复性。
因此,良好的沟通和团队合作能力也是我们工作中的重要素质。
最后,作为一名细胞培养员,我们需要不断学习和更新自己的知识和技能。
细
胞培养技术是一个不断发展和更新的领域,我们需要及时了解最新的实验方法和技术,以提高我们的工作效率和实验质量。
总的来说,作为一名细胞培养员,我们的工作是非常重要和复杂的。
我们需要
具备扎实的实验操作技能、严格的实验室管理能力、良好的沟通和团队合作能力,以及不断学习和更新自己的知识和技能。
只有这样,我们才能为生物医学研究和药物开发做出更大的贡献。
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细胞培养及检测相关技术小结一、细胞培养基配制以1000ml培养基为例。
1000ml成骨细胞培养基 = 850mlα-MEM培养液 + 150 ml 特级胎牛血清FBS (15%)(1). α-MEM powder: 10.2 g/L ~~~ 8.67 g for 850 ml(2). NaHCO3: 2.2 g/L ~~~ 1.87 g for 850 ml(3). Twice distilled water 850 ml, dissolve the powder in water(4). FBS (15%,v/v) 150 ml(5). Filter to sterilized bottle(6). Label the bottle and store in 4℃.Notes: 4,5 should be operated in the sterile working place. And if necessary, we can add some antibiotics into the medium(usually in primary cell culture). 二、PBS(10×)NaCl: 80g/LKCl: 2g/LNa2HPO4: 14.4 g/LKH2PO4: 2.4 g/LPH=7.4, with HCl or NaOHToo much PO42-is harmful to cell, so only very little amount is necessary. Get some certain to dilute this 10 times concentration PBS when we need.三、胰蛋白酶Trypsin- EDTA 消化液(10×)This solution is used for cell released from the culture flask。
The final concentration of EDTA is 0.05%;The final concentration of Trypsin is 0.53 mmol/L.Take 40 ml solution for example (10×)(1). Trypsin: 40ml×0.05%×10 =0.02g(2). EDTA: 40ml×0.53×10-3×376(molecular weight)×10-3×10 =0.0797g(3). PBS 40 ml(4). Filter and distribute it into 2 ml sterilized tubes.四、细胞冻存液细胞冻存液是DMSO(二甲基亚砜)和FBS的混合液,DMSO与FBS的体积比为1:2,混合均匀后过滤,加0.5ml混合液入灭菌过的冻存管,放进-20℃冰箱中备用。
五、传代细胞买来时,多为老细胞,细胞活性不强,因此,需要先传代以恢复其活性。
细胞刚买来时,培养瓶里面一般都装满了培养基,在操作时,需要先将培养基移出至干净灭菌的管子备用。
1.取光镜观察已长满细胞的培养瓶(下面按一瓶计算加入液体量),进行消化:a)吸取19ml PBS(需用小滤膜过滤去除细菌等)b)弃去旧培养基c)用5ml PBS 晃洗培养瓶,弃去PBS,并重复一次。
d)在剩余的9ml PBS中加入1ml的trypsin+EDTA 消化液(消化液为10倍于正常浓度)。
过滤后加入培养瓶中。
如果细胞贴壁不牢,只需要加一次,2ml;如果细胞贴壁牢固,第一次可加入3~5ml,水平晃动几秒后弃去,再加入2ml消化液,晃动并轻弹培养瓶底,同时在倒置显微镜下观察细胞形态,当细胞被完全消化下来时,加入10ml细胞培养液,并将细胞液移至离心管。
2.离心,1200rev/min,5min。
弃去上清液,晃动离心管使细胞分散,加入培养基10ml,用两个培养瓶分装细胞液;3.标记后半旋开瓶盖放入孵化箱进行培养。
Notes: 1. 细胞不能长时间处于无液体状态,因此在每个步骤之间,应该作好准备工作,如在步骤1.c)和1.d)之间,应该先准备消化液,再弃去第二次的PBS清洗液。
2. 通常情况下,成骨细胞的贴壁力较强,因此可以弃去第一次的消化液,再加入第二次;反之,如遇到贴壁力较弱细胞,加入一次消化液肉眼可见细胞明显脱落,则只需加入这一次消化液。
3. 在显微镜下观察细胞脱壁情况时,细胞呈圆形并聚集成团,水平晃动培养瓶时,细胞跟随瓶子晃动,在此,要确认细胞完全从瓶壁上消化下来。
4. 在分散离心后的细胞时,要确认细胞分散均匀,因为成团的细胞不利于细胞生长,并且对LDH等实验结果影响较大。
六、换液传代后,细胞生长每两天就需要换一次液,以补充细胞生长所需的养分。
换液前,需在显微镜下观察细胞的生长状态,要特别注意细胞是否被污染,如果是被污染,应弃去污染的细胞。
换液时,弃去旧培养基,加入新鲜培养基,每瓶5ml。
Day 0 Day 1 Day 2 Day 3Day 4 Day 5 Day 6 Day 7七、冻存细胞(缓冻)1. 灭菌细胞冷冻管,灭菌前,半旋开管盖,灭菌完毕以后,旋紧;2. 取出已准备好的细胞冻存液(见四);3. 按照传代的操作(见五)将细胞脱壁,分散后加入适量培养基,然后计数细胞,冻存细胞时细胞的最佳密度为1e6 cells/ml;4. 1ml细胞液进细胞冻存管(已有0.5ml细胞冻存液,混合均匀);5. 适量异丙醇C3H7OH进冷冻盒;(丙醇为一种冷冻介质,使冷冻速度为1℃/min)6. 把冷冻管放进冷冻盒,放进-70℃的冰箱;7. 一周后(一般大于24h即可),取出冷冻盒,把冷冻管放进液氮中-170℃冻存。
Notes: DMSO is harmful to cells at room temperature, but can protect cells at very low temperature.八、细胞复苏(速溶)1. 液氮中取出冷冻管,迅速放入小烧杯中,注意小烧杯中的水应该低于冷冻管口避免污染,待细胞液融化后,用酒精擦拭管口,然后打开管盖将细胞液移至已灭菌烧杯;之后缓慢地加入10ml培养基,在10min内完成,(缓慢地让细胞内的DMSO释放出来)。
2. 分装细胞液,5ml/瓶,第二天换液去掉冻存液中的DMSO。
九、骨髓细胞原代培养(综合上述各步骤):1.购买约大鼠3只;灭菌实验用的器具。
2.用乙醚麻醉后,敲碎头盖骨,并剪断颈椎,致死。
3.剪开腿部皮肤及肌肉,取出上肢骨和下肢骨(要从关节处剪开,此时不应暴露骨髓腔),用PBS浸泡。
4.用手术刀、剪、切断骨的两端,可见骨髓腔,并用已过滤(0.22um滤膜)的培养基,冲洗骨髓腔,收集冲洗液(含骨髓细胞)。
5.1000rpm的速度离心冲洗液。
6.弃去离心管中上清液,加入新培养基,并加入抗生素(青霉素和链霉素各200u/ml,此浓度为正常浓度的两倍,主要是考虑到操作过程有染菌的可能)。
7.分装至培养瓶中,每瓶5ml含骨髓细胞培养基,置于培养箱中培养。
8.培养三天后,更换培养基,依旧加入200u/ml 的青霉素和链霉素,继续培养箱培养。
9.培养两天后,更换培养基,依旧加入200u/ml 的青霉素和链霉素,继续培养箱培养。
10.培养两天后,更换培养基,依旧加入200u/ml 的青霉素和链霉素,继续培养箱培养。
(原代培养的前一星期需加抗生素抑菌,后面培养中则不需加抗生素)11.培养两天后,更换培养基,不加抗生素,继续培养箱培养,隔两天换液。
(一般在星期一、三、五进行换液)12.约培养两星期后,可见小鼠骨髓细胞生长良好,已长满25cm2培养瓶的底面,此时可以冻存部分细胞,以备下次实验使用,冻存过程如下:a)用2倍于常用浓度的trypsin+EDTA 进行消化。
b)消化后,加入适量培养基(至少与消化液等量的培养基,以保护离心过程中消化液对细胞没有过大伤害),1500rpm下离心5min。
c)弃上清后,振荡分散均匀,然后加入培养基稀释成4ml的细胞液,细胞计数。
d)冷冻小瓶中预先加入0.5ml的冻存保护液,然后再加入1ml的细胞液(保护液为FBS:DMSO=2:1,则培养瓶中液体的配比为→培养基:FBS:DMSO=6:3:1),写上细胞名称,传代数,细胞浓度,操作人,时间。
冻存浓度:>1e6cells/mle)将冷冻小瓶放入冷冻盒内,盒内预先加入正丙醇或异丙醇(使温度变化缓慢,保护细胞),置于-70℃低温冰箱中冻存一星期后,转移到液氮内冻存即可。
13.冻存细胞的复苏:a)取出冻存小瓶,常温解冻后,向溶解的细胞液中加入8ml培养基,此培养基慢加,一般在10分钟左右加完。
b)分装至培养瓶或培养皿中。
十、MG63细胞株培养细胞株可以无限快速增殖,平常只需正常换细胞培养基(两天一次),传代(细胞长满培养瓶底部即可,一般为一周一次)。
检测方法:Cytotoxicity检测细胞毒性▪LDHProliferation and viability of the cell检测细胞增殖和细胞活力: ▪MTT, Alamar BlueFunctional secretion of the cell细胞功能代谢:▪ALP(碱性磷酸酶为细胞分化早期标志物)Immunofluorescence stain:细胞骨架和其它特异蛋白。
Morphology of the cell on material surface形貌观察:▪SEM,phase contrast microscopyLDH(一般不选此方法)LDH是一种检测细胞损伤程度的方法,所以一般不采用本方法检测成骨细胞在材料表面的增殖分化,只用于检测某材料对细胞的毒性有多大。
在材料表面种下细胞,细胞会在材料表面贴壁生长,如果材料的生物功能性不好或有细胞毒性,就会损坏细胞。
LDH是乳酸脱氢酶,只存在于细胞膜内,因此细胞膜损坏后,LDH 会释放在上清液中。
加入LDH Reagent后,溶液显色,呈淡兰色,这是一个酶动力学反应过程。
颜色越深表示LDH的量越多,因此细胞损伤越严重。
它是一种检测材料和细胞刚刚接触的一个反应,所以应在细胞种上之后马上作此实验。
对于药物而言,这个实验并不是必须,因为药物对细胞不会马上有毒性,所以一般对药物不做LDH.Lacatate + NAD+LDH Pyruvate + NADH + H+1、灭菌样品、镊子及所需实验器具;2、配制无血清的培养基(1 ml/well)M199: 9.5 g/LNaHCO3: 2.2 g/LTwice distilled water过滤备用;3、取光镜观察已长满细胞的培养瓶(下面按一瓶计算加入液体量),进行消化:a)吸取19ml PBS(需用小滤膜过滤去除细菌等)b)弃去旧培养基c)用5ml PBS 晃洗培养瓶,弃去PBS,并重复一次。