自组装多肽水凝胶支架中MSCs的三维培养及成骨分化

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自组装多肽水凝胶的制备及其在细胞培养上的应用

- 124 -新技术开发０　引言随着科技的迅速发展，生活水平的提高，人们对于新型材料的需求日益迫切，现有的材料无法满足生产实践，于是人们把目光投向了生物材料，尤其是水凝胶。

水凝胶是一种以水为分散介质的凝胶，具有三维的空间结构。

多肽基水凝胶指的是以多肽大分子为主要构件元件的形成的凝胶，在检测、医疗、和食品等领域有广泛的应用。

多肽水凝胶的形成方式包括两种，一种是通过化学交联，其产物被称为化学凝胶。

这种结合方式形成的水凝胶强度大，但是对反应条件要求高，同时产物难以具有响应性。

另一种则是通过非共价相互作用如氢键、范德华力、静电作用等物理作用力进行结合，即大分子自组装，其产物通常被称为物理凝胶。

这种结合方式反应条件简单，无需复杂的设备，组装体系对于外界环境改变较为敏感，可以有效感知外界温度、光、pH 等条件，还具有一定的生物相容性。

本文系统地总结了自组装多肽水凝胶的制备方法，并对当前多肽水凝胶的应用热点做出了评述，以期对多肽水凝胶未来的研究提供参考。

１　自组装多肽水凝胶的制备方法１．１　多肽分子自身组装形成水凝胶通过对多肽分子的构成氨基酸序列进行理性设计，可以使得多肽分子之间通过氢键、范德华力、疏水作用力等等自发组装，当浓度达到一定程度时，便可形成多肽水凝胶。

比如2012年，康艳晶等人通过氨水挥发调整溶液pH 值的方法，将多肽链pal-RLRRLRARARA 自组装形成了pH 响应性的智能水凝胶。

在常温下，由于中性及酸性条件下的精氨酸带正电，上述多肽链由于静电斥力无法形成凝胶，当溶液呈碱性时多肽链间的斥力减小，从而形成凝胶；除此之外，2012年周庆翰等人，利用天然蚕丝纤维优良的力学性能及良好的生物相容性设计了多肽序列RAG-16 （Ac-RADAGAGARADAGAGA-NH2），并利用精氨酸和天冬氨酸之间的静电相互作用及链间疏水作用自组装制备了RAG-16水凝胶。

其储能模量高达2723.9Pa，并且拥有良好的生物相容性。

【CN109771694A】自组装多肽纳米纤维水凝胶支架材料的制备方法及应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910212352.6(22)申请日 2019.03.20(71)申请人江苏瑞思坦生物科技有限公司地址 215000 江苏省苏州市吴中经济开发区吴中大道2588号5幢521房间(72)发明人王铁　焦阳　朱迪·德瓦库玛　(74)专利代理机构北京润文专利代理事务所(普通合伙) 11317代理人韩丰年(51)Int.Cl.A61L 27/22(2006.01)A61L 27/38(2006.01)A61L 27/52(2006.01)(54)发明名称自组装多肽纳米纤维水凝胶支架材料的制备方法及应用(57)摘要本发明公开了一种搭载人脐带华通胶间充质干细胞的自组装多肽纳米纤维水凝胶支架材料的制备。

本发明还公开了一种用于搭载人脐带华通胶间充质干细胞的组织工程材料，其包含自组装多肽纳米纤维水凝胶支架材料。

本发明中的自组装多肽纳米纤维水凝胶支架材料为RADA16-1多肽的水凝胶。

本发明的自组装多肽纳米纤维水凝胶支架材料成分明确，性能稳定，且无毒害，生物相容性好，能够为培养人脐带华通胶间充质干细胞提供可靠的微环境，在利用组织工程材料复合人脐带华通胶间充质干细胞的研究中具有良好的应用前景。

权利要求书1页说明书4页CN 109771694 A 2019.05.21C N 109771694A1.一种自组装多肽纳米纤维水凝胶支架材料的制备方法，其特征在于，所述的自组装多肽纳米纤维水凝胶支架材料是一种RADA16-I(AcN -RADARADARADARADA -GG -KOSSAPTQLN -CONH2)水凝胶。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的自组装多肽RADA16-I(AcN -RADARADARADARADA -GG -KOSSAPTQLN -CONH2)是一种纯度>90％的多肽粉，利用超纯水将其溶解，使溶液浓度达到1％，并采用超声破碎仪探针超声，使其彻底溶解，然后将溶液利用孔径为0.22μm的一次性无菌注射式过滤膜消毒，得到1％自组装多肽RADA16-I溶液备用。

三维多孔支架表面成型二氧化钛纳米管阵列体外促进人牙髓干细胞粘附及成骨分化

scaffolds m a d e b y replication technique we r e coated with T i O , slurry of 5 % , 1 5 % , 3 0 % m a s s fractions respectively. After being heated
for 2 h at 5 0 0 , s a m p l e s w e r e respectively i m m e r s e d in 10 m o l / L N a O H for 12, 2 4, 3 6 h at 1 lOTi. Co m p r e s s i v e strength an d porosi
1.76 M P a , a n d the porosity w a s 7 9 % . C o m p a r e d with the control group, cells from the experimental gr o u p h a d m o r e pseudopodia, e x
Abstract ： Objective 10 fahricate titanium dioxide ( T i O , ) nanotuhe arrays o n the surface of 3 D porous zirc o n i u m dioxide( Z r 0 2 )
sc affolds a n d detect their influence o n adhesion a n d proliferation of h u m a n dental pulp s t e m cells ( h D P S C s ) . Methods Z r 0 2 porous

自组装多肽骨修复水凝胶的研究进展

Journal of China Pharmaceutical University2022，53（3）：356-364学报自组装多肽骨修复水凝胶的研究进展徐柳，徐姗，相堂永，沙政舟，张键，陈志鹏*（南京中医药大学药学院，南京210023）摘要开发具有成骨诱导的骨填充材料是促进骨再生的重要研究方向。

自组装多肽水凝胶凭借其高度的仿生人工细胞外基质结构、低免疫原性、易于合成及修饰、载药灵活等优势为骨组织修复提供了一个高效治疗手段。

本文讨论了自组装多肽水凝胶的设计原则，报道了自组装多肽结构特征及组装机制，重点介绍了自组装多肽骨修复水凝胶在递送干细胞、血管内皮细胞、骨形成蛋白、成骨因子以及小分子化合物等方面的最新研究进展，总结了限制自组装多肽水凝胶发展的瓶颈和未来发展方向，为构建高成骨性能凝胶递送系统提供理论参考。

关键词自组装；多肽；骨修复；水凝胶；生物材料中图分类号R944文献标志码A文章编号1000-5048（2022）03-0356-09doi：10.11665/j.issn.1000-5048.20220314引用本文徐柳，徐姗，相堂永，等.自组装多肽骨修复水凝胶的研究进展［J］.中国药科大学学报，2022，53（3）：356–364.Cite this article as：XU Liu，XU Shan，XIANG Tangyong，et al.Advances in self-assembled peptide hydrogels for bone regeneration［J］.J China Pharm Univ，2022，53（3）：356–364.Advances in self-assembled peptide hydrogels for bone regenerationXU Liu,XU Shan,XIANG Tangyong,SHA Zhengzhou,ZHANG Jian,CHEN Zhipeng*College of Pharmacy,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing210023,ChinaAbstract The development of osteoinductive bone-filling biomaterials for bone regeneration is of great signifi⁃cance.Self-assembled peptide hydrogels with high biomimetic extracellular matrix structure,low immunogenicity, easy synthesis and modification,and flexible loading capacity provide a highly efficient therapeutic platform for bone tissue repair.Herein,we discuss the design principles of self-assembled peptide hydrogels,report the struc⁃tural characteristics and assembly mechanisms of self-assembled peptides,and highlight recent advances in self-assembled peptide hydrogels for bone regeneration,including delivery to cells,bone morphogenetic proteins, active factors and small molecular substances.Finally,the bottleneck and development direction of self-assem⁃bled peptide hydrogels are pointed out,aiming to provide guidance for the construction of hydrogel delivery sys⁃tems with high osteogenic properties.Key words self-assembly;peptide;bone reparation;hydrogel;biomaterialsThis study was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.82173992)and the Postgraduate Research& Practice Innovation Program of Jiangsu Province(No.KYCX_201491)随着高强度体育活动的流行和人口老龄化加剧，我国每年因各种原因导致的骨伤患者达数百万，尤其是60岁以上的老人，而骨质疏松直接导致骨折率上升。

自组装多肽纳米纤维水凝胶在细胞三维培养中的应用及特征

自组装多肽纳米纤维水凝胶在细胞三维培养中的应用及特征刘茜;王秀梅【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2014(000)012【摘要】背景：自组装多肽类材料因其独特的设计及良好的生物相容性和可降解性在众多三维支架材料中脱颖而出。

目的：综述RADA类离子互补型自组装多肽支架材料的结构和功能化设计，从细胞三维培养方面探讨多肽类材料作为细胞载体材料在细胞治疗中的应用前景。

方法：由作者通过PubMed、Web of science数据库及CNKI数据库检索有关自组装多肽水凝胶的相关文献，检索词为“self-assembly peptide, tissue engineering；自组装多肽，组织工程”，检索文献量总计224篇，纳入包含多肽材料设计、功能化多肽材料、多肽材料用于细胞三维培养方面的研究，最终纳入48篇。

结果与结论：从物理结构角度讲，多肽材料可以在生理环境中自组装成具有纳米级纤维和较高孔隙率的水凝胶，最大程度上模拟细胞外基质的结构，保障细胞生存在一个真正的三维环境中。

从生物功能角度讲，多肽材料可以根据不同需求复合特异性的生物活性短肽片断，赋予材料一定的细胞特异性，可以促进细胞的黏附、增殖或分化。

%BACKGROUND:Self-assembling peptide scaffolds have attracted much more attention among three dimensional biomaterials due to its biocompatibility, biodegradation, and tailor-made properties. OBJECTIVE:To review the structure and design of functionalized self-assembling RADA peptide, and the recent advances in the use of RADAself-assembling peptide for three-dimensional cel culture in cel therapyapplications. METHODS:Total 224 literatures related to self-assembling peptide and tissue engineering from PubMed, Web of Science and CNKI databases were screened out for this review. The keywords were“self-assembly peptide, tissue engineering”in English and Chinese, respectively. Final y 48 of 224 articles about the design, fictionalization, and three-dimensional cel culture of peptide scaffolds were included in this review. RESULTS AND CONCLUSION:Self-assembling peptide could undergo spontaneous assembly into wel-ordered interwoven nanofibers in water and rapidly form hydrogel, which physical y mimics the architecture of natural extracel ular matrix to ensure a real three-dimensional microenvironment for cel s. In terms of bio-function, this material can be tailor-made with various bioactive short peptide motifs to promote cel adhesion, proliferation, and differentiation.【总页数】7页(P1907-1913)【作者】刘茜;王秀梅【作者单位】苏州大学现代丝绸国家工程实验室，纺织与服装工程学院，江苏省苏州市 215123; 清华大学材料科学与工程学院，再生医学与仿生材料研究所，北京市 100084;清华大学材料科学与工程学院，再生医学与仿生材料研究所，北京市100084【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.自组装多肽水凝胶支架中MSCs的三维培养及成骨分化 [J], 周庆翰;王玉明;田志杰;林娟2.自组装多肽纳米纤维水凝胶在细胞三维培养中的应用及特征 [J], 刘茜;王秀梅;3.自组装纳米短肽RADA16-Ⅰ水凝胶在肿瘤细胞三维培养中的应用 [J], 刘子佳;米坤;王贵侠;黄奔;赵晓军4.MSCs在自组装多肽纳米纤维支架中的三维培养及脂向分化研究 [J], 林娟;周庆翰;杨雨晗5.自组装纳米多肽水凝胶负载干细胞对软骨损伤修复的研究 [J], 曾统;唐硕;张迪;邹峰;邹学农;陈海堡;靳松因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

基于自交联高分子材料的3d打印水凝胶支架的制备及其在软骨组织工程中的应用

基于自交联高分子材料的3d打印水凝胶支架的制备及其在软骨组织工程中的应用是一个新兴的研究领域。

这种技术利用3D打印技术制造出具有复杂结构和精确定制的水凝胶支架，同时这种支架材料具有良好的生物相容性和机械性能。

在制备这种3D打印水凝胶支架时，首先需要选择合适的自交联高分子材料。

这些材料需要具有良好的生物相容性、可降解性和力学性能。

然后，将这些高分子材料溶解在适当的溶剂中，形成溶液。

接下来，利用3D打印技术，将溶液逐层打印成具有所需形状和结构的支架。

在打印过程中，高分子材料发生自交联反应，形成稳定的水凝胶支架。

在软骨组织工程中，这种3D打印水凝胶支架可以作为细胞生长的载体。

首先，将软骨细胞种植在支架上，然后将其植入到受损的软骨部位。

随着细胞的生长和分化，它们会与支架材料相互作用，形成新的软骨组织。

这种组织工程方法可以用于治疗各种软骨损伤和疾病，如关节炎和软骨缺损等。

总之，基于自交联高分子材料的3D打印水凝胶支架在软骨组织工程中具有广泛的应用前景。

随着技术的不断发展和完善，这种支架材料有望为软骨损伤的治疗提供一种新的有效方法。

DMSCs_三维培养方法及其在组织再生和疾病治疗中应用的研究进展

第 50 卷第 2 期2024年 3 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.50 No.2Mar.2024DOI：10.13481/j.1671‐587X.20240233DMSCs三维培养方法及其在组织再生和疾病治疗中应用的研究进展李国鑫, 赵小琳, 李晨曦, 刘影驰, 朱芷墨, 袁瑶, 安政雯（吉林大学口腔医院口腔生物学教研室，吉林长春130021）［摘要］牙源性间充质干细胞（DMSCs）是来源于神经嵴外胚层的间充质干细胞，具有优越的自我更新和多向分化的能力，被广泛应用于组织工程和再生医学研究。

利用三维培养方法可对DMSCs 进行大量体外扩增以满足研究和治疗的需要。

与传统的二维培养方法比较，三维培养技术可更有效地模拟干细胞在体内所处的结构和微环境，从时间和空间上共同调控干细胞的增殖及分化。

近年来开展的体外三维培养方法较多，悬滴培养法操作简单，但较难控制培养组织的气象环境；微流控芯片可更好地控制细胞参数，但成本高昂，且存在技术平台的难题而难以广泛应用；磁悬浮培养费用低廉，操作简便，细胞成球速度快，但由于磁化作用难以用来定量分析。

其他三维培养方法还包括旋转细胞培养系统、离心成球培养法、液体覆盖法和人工支架法等，上述培养方法都存在不同的优势和一定的局限性。

现对体外三维培养DMSCs的不同方法及其在不同组织再生和疾病治疗中的应用进行综述，为DMSCs功能的精准调控和再生医学研究提供参考。

［关键词］牙源性间充质干细胞；球体培养；干性维持；组织工程；再生医学［中图分类号］R780.2［文献标志码］AResearch progress in 3D culture methods for dental mesenchymal stem cells and their applications in regenerationand disease treatmentLI Guoxin, ZHAO Xiaolin, LI Chenxi, LIU Yingchi, ZHU Zhimo, YUAN Yao, AN Zhengwen（Department of Oral Biology， Stomatology Hospital， Jilin University，Changchun 130021， China）ABSTRACT The dental mesenchymal stem cells （DMSCs） are mesenchymal stem cells derived from the neural crest ectoderm and have exceptional self-renewal and multilineage differentiation capabilities. The DMSCs are extensively used in tissue engineering and regenerative medicine research. The DMSCs can be expanded in vitro on a large scale to meet the needs of research and therapy by three-dimensional culture technique. Compared with traditional two-dimensional cell culture techniques，three-dimensional culture more effectively simulates the structure and microenvironment that the stem cells encounter in vivo，providing simultaneous spatial and temporal regulation of the proliferation and differentiation of the stem cells. Various three-dimensional in vitro culture techniques have been developed in recent years. Hanging drop culture is straightforward， but controlling the tissue culture environment is challenging； microfluidic [文章编号] 1671‐587X(2024)02‐0564‐08[收稿日期]2023‐02‐06[基金项目]国家自然科学基金项目（82270960）；科技部国家重点研发计划项目（2022YFC2504200）；吉林省科技厅科技发展计划项目（JCSZ2021893-35）[作者简介]李国鑫（1995－），男，山西省大同市人，在读硕士研究生，主要从事肿瘤与免疫微环境调控方面的研究。

自组装多肽水凝胶支架中MSCs的三维培养及成骨分化

自组装多肽水凝胶支架中MSCs的三维培养及成骨分化周庆翰;王玉明;田志杰;林娟【摘要】The osteogenic differentiation of MSCs was evaluated using a new class of synthetic self - assembling peptide hydrogels, RADA16, as a scaffold for three - dimensional culture. MSCs derived from human bone marrow were culture - expanded and seeded into the hydrogel and further cultured in osteogenic medium for 1 - 3 weeks. The cell viability was visualized and detected under fluorescence microscopy. Alkaline phospharase activity was evaluated by histochemical techniques. Semi - quantitative RT - PCR analyses were preformed to detect the expression of mRNA transcripts. Almost MSCs were living cells and had a typical spindle shape. In osteogenic differentiation, the expression of ALP at the protein and mRNA level was significantly higher than that of control cells. Although the ALP activity peaked at 14 days, the BSP content increased continuously for 21 days. These results showed that the biodegradable/biocompatible hydrogel, RADA16, supports MSCs attachment and differentiation toward the osteogenic lineage, indicating that RADA16 can be considered as an attractive synthetic biomatcrial for using in bone tissue engineering.%使用一种新型人工设计自组装多肽（RADA16）水凝胶作为三维培养支架评价MSCs成骨分化情况。

小鼠前成骨细胞MC3T3-E1在自组装多肽水凝胶支架中的成骨分化

小鼠前成骨细胞MC3T3-E1在自组装多肽水凝胶支架中的成
骨分化
林娟;周庆翰;赵晓军
【期刊名称】《四川动物》
【年(卷),期】2009(28)5
【摘要】水凝胶内MC3T3-E1细胞可向成骨方向分化,并能在凝胶内产生矿化的细胞外基质.
【总页数】5页(P676-679,封2)
【作者】林娟;周庆翰;赵晓军
【作者单位】四川大学纳米生物医学技术与膜生物学研究所,成都,610064;四川大学纳米生物医学技术与膜生物学研究所,成都,610064;四川大学纳米生物医学技术与膜生物学研究所,成都,610064
【正文语种】中文
【中图分类】Q254
【相关文献】
1.三维多肽支架中前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的初步研究 [J], 陈婷;卢婷利;马玉樊;王韵晴;校月红;李昱辉
2.Rap1b对鼠前成骨细胞Mc3T3-E1成骨分化早期的影响 [J], 施歌;马俊青;赵超越;陈行素;朱零;陈文静
3.自组装多肽水凝胶支架中MSCs的三维培养及成骨分化 [J], 周庆翰;王玉明;田志
杰;林娟
4.Dlx2基因过表达与前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中的细胞凋亡和周期调控 [J], 孙昊;王旭东;代杰文;卢境婷;沈国芳
5.Dlx2基因过表达与前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中的细胞凋亡和周期调控 [J], 孙昊;王旭东;代杰文;卢境婷;沈国芳
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第４０卷第１７期
２１０２年９月
广
州
化
工
Ｖｏ．０Ｎｏ７１４．１Ｓｐｔｍｂｅ．０１ｅｅｒ２２
ＧｕｎｚｏｅｃｌＩｄｔｙａｇｈｕＣｈｍｉａｎｕｓｒ
自组装多肽水凝胶支架中ＭＣ的三维培养及成骨分化水Ｓｓ
ＺＯｉＨＵＱｎｇ—ｈｎ，ＷＮｕ— ｎＩＮＺｉｆＩｕｎａＡＧＹｍｉ，ＴＡｈ — ｅ，ＬＮＪａｇｉ
（ｏｅｅｏｈｍｓｙａｄＥｖｏｍｎＰｏｅｔｎＥｇｅｒｇｏｔｗｓＵｉｒｔｆａｉａｔｓｉｈａ１Ｃｌｇｆｅｉｒｎｎｉｎｅｔｒｔｉｎｉｅｉ，ＳｕｈｅｔｎｖｓｙｏＮｔｎｌｉ，ＳｃｕｎｌＣｔｒｃｏｎｎｅｉｒｏｉｅＣｅｇｕ６０４；ｈｃｏｌｆｉｍｄｃｌｃｎｅｈｎｄｄｃｌｏｅｅｉｕｎＣｅｇｕ６０８，Ｃｉａｈｎｄ１０１２ＴｅＳｈｏｏｏｅｉａＳｉｃ，ＣｅｇｕＭｅｉｌｇ，Ｓｃａｈｎｄ１０３ｈｎ）ＢｅａＣｌｈ
ＡｂｔａｔＴｈｓｅｇｎｃｄｆｅｅｔａｉｎｏＣｓｗａｖｌａｅｓｎｅｃａｓｏｙｔｅｉｅｆ—ａｓｍｂｌｇｐｅｓｒｃ：ｅｏｔｏｅｉｉｆｒｎｉｔｏｆＭＳｓｅａｕｔｄｕｉｇａｎｗｌｓｆｓｎｈｔｃｓｌｓｅｉｐ— ｎｔｄｄｏｅｓ．ＲＡＤＡ１ｉｅｈｙｒｇｌａｃｆｌｏｈｅ６．ｓａｓａｆｄｆｒｔｒｅ—ｄｍｅｓｏａｕｔｒ．ＭＳｒｖｄｆｏｈｍａｎｒｏｗｅｅｃ — ｏｉｎｉｎｌｃｌｕｅＣｓｄｅｉｅｒｍｕｎｂｏｅｍａｒｗｒｕｌｔｒｕｅ—ｅｐｎｅｎｅｄｄｉｔｈｙｒｇｌａｄｆｒｈｒｃｌｕｅｎｏｔｏｅｉｄｕｆｒ１～３ｗｅｋ．Ｔｈｅｌｖａｉｉｘａｄｄａｄｓｅｅｎｏｔｅｈｄｏｅｎｕｔｅｕｔｒｄｉｓｅｇｎｃｍｅｉｍｏｅｓｅｃｌｉｂｌｔｙ
组织工程支架材料。
关键词：间充质干细胞；成骨分化；三维培养；自组装多肽
中图分类号：Ｒ１，Ｑ１３８８３
文献标识码：Ａ
文章编号：１１９７（０２１ — ０８００ — ６７２１）７０５ — ３０
Ｔｈｅ — ｍｅｓｏｌＣｕｔｅａｄＯｓｅｇｎｃＤｉｅｅｔａｉｎｆＭＳＣｓｒｅ—ｄｉｎｉｎａｌｕｒ ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ｔｏｅｉｆｒｎｉｔｏｏｉｅｆ—ＡｓｅｂｉｇＰｅｉｄｒｇｌＳａｏｄｎＳｌｓｍｌｎｐｔｄｅＨｙｏｅｃｆｌｓ
周庆翰，王玉明田志杰，，林娟
（１西南民族大学化学与环境保护工程学院，四川成都６０４；１０１２成都医学院生物医学系，四川成都６０８）１０６
摘要：使用一种新型人工设计自组装多肽（ＡＡ６ＲＤ１）水凝胶作为三维培养支架评价ＭＣ成骨分化情况。将人骨髓Ｓｓ
ＭＣ培养增殖后接种到水凝胶中，在成骨分化培养液中进一步培养１Ｓｓ～３周。荧光染色法观察细胞形态和存活情况；组织学染色
检测ＭＳｓＡＰ活性；半定量ＲＰＲ分析成骨特异性基因的表达。绝大多数ＭＳｓ水凝胶支架内能够存活，呈纺锤样形态。ＣＬＴ— ＣＣ在诱导培养后蛋白和基因表达水平均检测到ＡＰ活性，在ｌ时达到峰值。骨晚期分化特异性基因ＢＰ也有表达，且表达量随培Ｌ４天Ｓ养时间延长而增多。自组装多肽水凝胶为ＭＳｓＣ的黏附生长及向成骨细胞分化提供良好的三维微环境，有望成为极具吸引力的骨
ｗａｉｕｌｅｎｅｅｔｄｕｄｒｆｕｏｅｃｎｅｍｉｒｓｏｙＡｌａｉｈｓａａｅａｔｖｔｓｅａｕｔｄｂｉｔｃｅｃｌｓｖｓａｉｄａｄｄｔｃｅｎｅｚｌｒｓｅｃｃｏｃｐ．ｋｌｎｅｐｏｐｈｒｓｃｉｉｗａｖｌａｅｙｈｓｏｈｍｉａｙｔｃｉｅ．Ｓｍｉ— ｑａｔｔｔｖｅｈｎｑｕｓｅｕｎｉａｉｅＲＴ — ＰＣＲｎａｙｅｒｒｆｒｄｔｔｃｈｘｒｓｉｎｏｌａｌｓｓｗｅｅｐｅｍｅｏｄｅｅｔｔｅｅｐｅｓｏｆｎＲＮＡｒｎｓｒｐｓＡｌｏｔｏｔａｃｉｔ．ｍｓＭＳＣｓｗｅｅｌｉｇｃｌｎｄａｔｐｉａｐｉｄｅｓａ．Ｉｓｅｇｎｅｄｉｅｅｔｔｎ，ｔｅｅｐｅｓｏｆＡＬｔｔｅｐｏｅｎｒｉｎｅｌａｄｈａｙｃｌｓｎｌｈｐｅｎｏｔｏｅｉｆｒｎｉｉｖｓｆａｏｈｘｒｓｉｎｏＰａｈｒｔｉａｄｍＲＮＡｅｅｓｓｇｉｃｎｌｉｈｒｔａｈｔｏｏｔｏｅｌ．ＡｌｏｇｈＰｃｉｉｙｐａｅｔ１ａｓ，ｔｅＢＳｎｌｖｌｗａｉｎｆａｔｙｈｇｅｈｎｔａｆｃｎｒｌｃｌｓｉｔｕｈｔｅＡＬａｔｖｔｅｋｄａ４ｄｙｈｈＰｃｎｅｔｉｃｅｓｄｃｎｉｕｕｌｒ２１ａｓＴｈｓｅｕｔｈｗｅｈｔｔｅｉｄｇａｂｅｉｃｍｐｔｂｅｙｒｇ１ＲＡ— ｏｔｎｎｒａｅｏｔｎｏｓｙｆｏｄｙ．ｅｅｒｓｌｓｓｏｄｔａｈｂｏｅｒｄａｌ／ｂｏｏａｉｌｈｄｏｅ．ＤＡ６，ｓｐｏｔＣｓａｔｃＩｕｐｒｓＭＳｔｈｍｅｔａｄｄｆｒｎｉｔｎｔｗａｄｔｅｏｔｏｅｉｉｅｇａｎｎｉｅｅｔａｉｏｒｈｓｅｇｎｃｌｎａｅ，ｉｉａｉｇｔａｆｏｎｄｃｔｎｈｔＲＡＤＡ１ａｅｃｎ— ｃｎｂｏ６ｓｄｒｄａｎａｔａｔｖｙｔｅｉｉｍａｅｉｌｆｒｕｉｇｉｏｅｔｓｕｎｉｅｒｎ．ｉｅｅｓａｔｒｃｉｅｓｎｈｔｃｂｏｔｒａｓｎｎｂｎｉｓｅｅｇｎｅｉｇｏ