医院纤维蛋白原测定(FIB)凝固法操作规程
凝血四项操作规程(共4张PPT)
血浆活化部分凝血活酶时间测定
（APTT）
• 方法原理：用部分凝血活酶代替血小板膜磷脂，为凝 缩方短法， ：见冯于克先劳天斯性法因、子光学5增法多和、磁口珠服法避及孕P药T衍和生血法栓{形PT成完性成疾时病，。全部纤维蛋白原转变成纤维蛋白，纤维蛋白产生的浊度与纤维蛋白含量成正比
。血浆凝血酶时间测定（TT）
维生素K缺乏症、严重肝脏疾病及血中抗凝物质增加； 减用少激为 活先剂天激性活纤12维、蛋11白凝原血含因量子低。下。
血方浆法纤 ：维冯蛋克白劳原斯测法定、（光学FIB法）和磁珠法及PT衍生法{PT完成时，全部纤维蛋白原转变成纤维蛋白，纤维蛋白产生的浊度与纤维蛋白含量成正比
浆浊度、粘稠度增加直至凝固。 。待检血浆中加入足量的激活剂、部分凝血活酶悬液和钙离子用来启动内源凝血系统来形成纤维蛋白，使血浆浊度、粘稠度增加直至凝固。
减血少浆为 凝先血天酶性时纤间维测蛋定白（原TT含）量低下。
• 临床意义：延长，见于内源凝血系统因子（12、11、 待减检少血 为浆先中天加性入纤足维量蛋的白激原活含剂量、低部下分。凝血活酶悬液和钙离子用来启动内源凝血系统来形成纤维蛋白，使血浆浊度、粘稠度增加直至凝固。
。减少为先天性纤维蛋白原含量低下。
钙离子用来启动内源凝血系统来形成纤维蛋白，使血 缩（短AP，TT见是于监先测天肝性素因治子疗5增剂多量、的口首服选避指孕标药）和血栓形成性疾病。
方法原理：将在稀凝释血的酶血作浆用加下入，足待量检的血凝浆血中酶纤使维纤蛋维白蛋原白转原变转成变纤成维纤蛋维白蛋，白使，血测浆定浊其度凝及固粘时稠间度，增凝加血 直时至间凝的固长。短与血中纤维蛋白原含量成反比
缩短，见于先天性因子5增多、口服避孕药和血栓形成 方，法利原 用理浊：度将的稀变释化的测血得浆纤加维入蛋足白量原的含凝量血（酶散使射纤比维浊蛋法白和原透转射变比成浊纤法维，蛋原白理，为测将定测其得凝的固浊时度间变，化凝与血 校时准间血的浆长浊短度与的血变中化纤比维较蛋而白得原到含其量含成量反）比}
FIB操作规程一例(sop)
FIB操作规程一例纤维蛋白原测定（FIB）一、项目名称:纤维蛋白原凝结时间测定（Fibrinogen coagulative time, FIB）二、检验方法名称：凝结法三、方法学原理：在确定量的血浆样本经过一定时间的加温后，加入试剂。
加入试剂后，采用波长为660nm 的光照射样本。
凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。
从散射光光强度的测定，可以做出凝血曲线，通过Percentage Detection Method方法求得凝血时间。
四、方法学溯源：纤维蛋白原测定（Clauss法）原理：凝血酶将可溶性的血浆蛋白纤维蛋白原转化为不溶性的多聚体，纤维蛋白。
当凝血酶浓度较高（约为100NIH/ml）且纤维蛋白原浓度较低（0.05—0.8g/L）时该反应决定于纤维蛋白原浓度。
如在双对数坐标纸上画点，凝血酶凝块时间与纤维蛋白原浓度相比较呈线形关系。
五、仪器：（一）型号：Sysmex CA—1500自动血液凝血分析仪（二）分析和计算参数：1．处理量：约120个测试/小时2．所需样本量：10μl3．检验时间：在最长检验时间之内测出结果，典型最长检验时间：100秒4．重复性：CV≤4%5. 计算参数：纤维蛋白原浓度（Fbg）六、试剂及配套品：（一）试剂：1. 凝血酶试剂（Thrombin Reagent）（1）商标：德灵（DADE BEHRING）（2）包装规格：Pack for 10×1ml（3）代码：B4233 G25 E0533 (961) W（4）成分：牛凝血酶冻干粉（lyophilized preparation of bovine thrombin）（近似100 NIH units/ml）2．佛罗那巴比妥缓冲液（Dade® Owren'S Veronal Buffer）（1）商标：德灵（DADE BEHRING）（2）包装规格：Pack for 10×10ml（3）代码：B4234-25（4）成分：1）2.84×10­²M的巴比妥钠(sodium barbital)2）1.25×10­¹M的氯化钠(sodium chloride)3) PH 7.35±0.13. 清洗液（Cleaning）2%次氯酸钠溶液（自配）（二）配套品：1.标准血浆（Standard Human Plasma）(1) 商标：德灵（DADE BEHRING）(2) 代码：No. ORKL2.校准质控血浆（Ci-Trol®）(1) 商标：德灵（DADE BEHRING）(2) 代码：Level 1, B4244-10Level 2, B4244-20Level 3, B4244-303.质控血浆（Control Plasma）(1) 商标：太平洋（Pacific Hemostasis）(2) 代码及规格：Level 1 (Normal), 100595 10×1mlLevel 2 (Abnormal), 100596 10×1mlLevel 3 (Abnormal), 100597 10×1ml七、操作步骤：（一）开机：开机前，先打开连机的打印机。
C3510血浆纤维蛋白原(FIB)磁珠法
血浆纤维蛋白原（FIB）测定（分析仪器法）1实验原理：光电磁珠法测试杯两侧的有一组驱动线圈，它们产生恒定的交替电磁场，使测试杯内特制的去磁小钢珠保持等幅振荡运动。
凝血激活剂加入后，随着纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度增加，小钢珠的运动振幅逐渐减弱，仪器根据另一组测量线圈感应到小钢珠运动的变化，当运动幅度衰减到50%时确定凝固终点。
2标本采集2.12.23.831长时间4566.16.2 ,室温保存7.7.17.27.37.4 仪器技术参数:7.4.1 速度:最快检测速度350测试/小时,组合检测约140测试/小时7.4.2 试剂位:24个,具冷藏功能。
7.4.3 样本位:80个,可自动连续添加。
7.5 仪器校准程序:7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准。
7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)8. 操作步骤:8.1 检查前准备:8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。
8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)。
8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。
8.2 开机先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,8.38.3.1试项目8.48.5 按,→测8.6 每日维护:完成每日的测定后,关机前维护。
8.6.1 用蘸有清洗液的纱布或棉签擦拭加样针和试剂的外表面。
8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯，检查清洗液是否充足。
8.6.3 检查预温及测量通道内是否有掉落的钢珠，如果有请清除。
8.6.4仪器连续工作24小时后需要关机1次。
9 检验结果的判断与分析:9.1 仪器测定FIB的线性范围在5-120秒,测定完成后仪器显示FIB秒数等参数。
若不能对参数进行正确计算,将出现下列信息:﹡﹡﹡.﹡出现错误,不能得到分析数据ˉˉˉ.ˉ不能计算参数＋＋＋.＋数值超出线性范围.9.2 仪器设定FIB参考范围在2-4g/L,如果得不到一个正常数值,在数据的左侧将出现下列标记:﹡出现错误信息< 数据低于可报告的低限> 数据高于可报告的高限10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失1111.111.1 F11.1.1所致。
纤维蛋白原(FIB)测试盒使用说明
纤维蛋白原（FIB）测试盒使用说明货号：BC0050试剂名称规格(200T)试剂主要成分R1凝血酶试剂（液体）1ml×6瓶>100u/ml牛凝血酶，稳定剂适量，防腐剂适量。
R2纤维蛋白原标准品1ml×1瓶200～400mg/dL纤维蛋白原，缓冲液适量，稳定剂适量。
R3咪唑缓冲液（IBS）75ml×2瓶 2.84×10-2M巴比妥钠，稳定剂适量。
一、适用范围:适用于凝固法为原理的各类半自动及全自动血凝仪检测人血浆中纤维蛋白原含量。
二、试剂保存和稳定性:2～8℃保存，未开封试剂有效期内稳定。
凝血酶试剂（液体）：开封后2～8℃下可稳定1周。
纤维蛋白原标准品：复溶后在2～8℃下可稳定4小时。
缓冲液2～8℃保存。
三、操作过程:1、检测前准备凝血酶试剂：使用前轻摇颠倒混匀.纤维蛋白原标准血浆：按标签要求用去离子水复溶。
静置使其完全溶解，轻摇颠倒混匀。
禁用含防腐剂的水。
2、样本收集和处理:新鲜静脉血与0.109gM的柠檬酸三钠按9：1（V/V）混合均匀，以3000rpm离心15分钟，收集上层血浆，在2～3小时内进行实验。
3、检测流程:①、标准曲线制作：将复溶后的纤维蛋白原标准品用缓冲液分别作1:5（100μl血浆+400μl缓冲液）、1:10、1:15、1:20、1:30稀释，取此不同浓度的标准血浆各200μl，37℃预温3分钟，然后分别加入凝血酶试剂100μl（不需预温），测定凝固时间。
②、待测血浆用缓冲液作1:10稀释，取待测血浆200μl，37℃预温3分钟，加入凝血酶试剂100μl，测定凝固时间。
③、标准曲线绘制：以不同浓度的纤维蛋白原标准品含量（mg/dL）为横坐标，以相应的凝固时间为纵坐标，在双对数纸上作出标准曲线，或把FIB的浓度与相应的凝固时间输入到血凝仪中。
不同稀释度的标准血浆浓度计算：以测标本时1:10的稀释倍数与其它稀释倍数的比值作为稀释系数计算。
医院纤维蛋白原测定(FIB)凝固法操作规程
****医院纤维蛋白原测定（FIB）凝固法操作规程一、检验目的二、工作原理三、方法学溯源四、标本采集及处理五、参考范围与危急值处理六、报告审核制度七、临床意义一、检验目的：纤维蛋白原测定（FIB）二、工作原理：被测血浆加入带不锈钢球的检测杯内温育后，加入激活试剂血浆开始凝固，被测血浆粘度不断增加，不锈钢球在检测杯底沿弯曲的轨道运动逐渐减慢，并且振幅减小，此振幅的变化由数学算法通过计算得到凝固时间。
三、方法学溯源：纤维蛋白原测定（Clauss法）原理：凝血酶将可溶性的血浆蛋白纤维蛋白原转化为不溶性的多聚体，纤维蛋白。
当凝血酶浓度较高（约为100NIH/ml）且纤维蛋白原浓度较低（0.05—0.8g/L）时该反应决定于纤维蛋白原浓度。
如在双对数坐标纸上画点，凝血酶凝块时间与纤维蛋白原浓度相比较呈线形关系。
线性范围：6-12g/L四、标本采集及处理：试剂准备：按照试剂瓶标签上标明的量，用蒸偏水复溶Fg试剂，使用前预温到室温(20—25°C)。
1、采血步骤(1)登记：登记的内容包括病人的姓名、病历号、采血时间、登记编号、送检部门等。
(2)识别病人：问清病人并识别病人是至关重要的。
了解近期用药情况和特殊生理状况，并记录。
例如阿斯匹林、潘生丁等药物能抑制血小板聚集；口服避孕药会使血小板粘附、聚集功能、纤维蛋白原及多种凝血因子活性明显增高；当剧烈运动或输注肾上腺素时VD因子活性会快速上升。
应注明。
(3)病人的体位：坐位采血；卧位采血；采血时病人的口中不准含食物、口香糖或口表等，以防意外。
(4)选择适当的静脉，最宜采血的肘窝静脉，也可在腕，手，踝静脉采血。
2、注意事项:(1)病人宜处于休息状态，并在早餐前采血(乳糜血影响检测结果)。
(2)针头不应小于21GAVGE。
国际推荐用21G1.5或20G1.5号针头,确保针头与空针联接牢固，以免产生泡沫。
如果采血时产生泡沫，可能导致纤维蛋白原和vin因子变性。
FIB-SOP操作程序
FIB定值血浆：纤维蛋白原、稳定剂。
试剂稳定性与贮存
试剂2～8℃保存，可稳定至标签所示失效日期。
FIB凝血酶试剂溶解后2～8℃可保存7天，若于4小时﹣20℃内冻存，可保存20天，使用时37℃迅速解冻，勿反复冻融。
FIB定值血浆溶解后2～8℃可保存8小时，也可冻存。
注意事项
将FIB凝血酶用规定体积的蒸馏水复溶，轻摇混匀，并置于仪器试剂位。
将FIB定值血浆用1.0ml蒸馏水复溶，室温静置3分钟，轻摇混匀。用FIB缓冲液稀释成不同浓度的标准点。
根据血凝仪使用说明书及FIB试剂使用说明书选择合适的参数，在仪器主菜单中选择FIB项目进行检测，绘制标准曲线。
【方法学评价】
正常质控（混合）血浆时间：2~4g/L；
线性：线性相关系数r应大于0.98；
重复性：重复试验的变异系数（CV）≤5％；
瓶间差：瓶间相对极差≤6％。
【检验方法】
凝固法
【检验原理】
采用Clauss凝固法原理，在凝血酶过剩时，待测稀释血浆的凝固时间与其纤维蛋白原含量成反比关系。可用不同浓度定值血浆纤维蛋白原含量为横坐标，以相应的凝固时间为纵坐标，绘制标准曲线，待测样本FIB含量即可从标准曲线上读出。
【检验试剂】
测定时的各组成成分
FIB凝血酶：凝血酶、缓冲液、稳定剂、防腐剂；
血液与抗凝剂的比例，一般为9:1（枸橼酸钠浓度为10.9～12.9mmol/L）。若病人血细胞比容超过55%或小于20%时，则应调整抗凝剂用量。抗凝剂体积（ml）= 0.00185×血液体积（ml）×（100－比容）。
溶血可激活凝血因子并影响结果，黄疸或脂血症对结果也有影响。
【检验步骤】
打开血凝仪，等候一定时间，使仪器达到分析温度。
纤维蛋白原FIB（免疫比浊法）SOP
[试剂稳定性与贮存]
试剂自生产之日起避光贮存 2-8℃可稳定 18 个月。
[标本的收集与处理]
用血凝试验专用 1：9 枸橼酸钠抗凝真空采血管抽取静脉血，轻摇抗凝。3000r/m 离心 10 min，获乏血小板血浆。如样本不能及时测定应置于 2-8℃保存。
[质量控制品] STA 血凝质控物两种
[操作步骤] 1，将标本离心吸取血浆。 2，编码后上机检测。
[意义]
纤维蛋白原主要功能为参与凝血。增高时常见于感染症、恶 性肿瘤、手术后、脑血栓、 心肌梗塞、糖尿病；低值则见于低纤维蛋白原症、肝硬化大出血、大剂量使用尿激酶后。
xxxx 医院 临床检验实验室
纤维蛋白原 Fg
文件编号： XXXX
版序：xxxx 页码：第 1 页，共 1 页
[测定原理]
人血浆中的纤维蛋白原与其相应抗体在液相中相遇，立即形成 抗原-抗体复合物，形成一 定浊度。该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。
[试剂组成]
纤维蛋白原抗体：羊抗人纤维蛋白原血清，表面活性剂，电解质，防腐剂，动物蛋白等。
FIB-Clauss标准操作流程
纤维蛋白原(Clauss法)标准操作流程目录1 目的2 检测原理3 产品信息4 试剂准备5 试剂保存和稳定性6 警告和注意点7 样本收集和准备8 检测需要但试剂盒中未提供的耗材9 质量控制10定标11定标方法 (如需要)12检测程序13结果计算14 结果解释15局限性/干扰16 参考范围17 性能特征18 参考文献1 目的此程序提供在ACL 8000，ACL 9000仪器上使用HemosIL™ Fibrinogen-C 试剂用于纤维蛋白原(Clauss法)定量检测。
2 测试原理将试剂加入稀释的样本中，试剂中过量的牛凝血酶可直接作用血浆中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，反应过程的速率和纤维蛋白原的浓度呈函数关系。
3 产品信息HemosIL™ Fibrinogen-C纤维蛋白原测定试剂盒包含：牛凝血酶： 8 x 2 mL (P/N8469110)或者10 x 5 mL(P/N20003900) 冻干牛凝血酶(35 UNIH/瓶) ，内含牛血浆白蛋白，CaCl 2，缓冲液和稳定剂。
异常质控血浆：2 x 1 mL 冻干人枸橼酸抗凝血浆，含低值的纤维蛋白原，缓冲液和稳定剂（仅P/N8469110含有）。
4试剂配制牛凝血酶：用2 mL （或5mL ） NCCLS II 型或相同质量的去离子水溶解1瓶牛凝血酶，盖上盖子，轻摇至完全溶解，15-25˚C 室温平衡30分钟，使用前充分颠倒混匀。
不可用力振摇。
异常质控血浆：每瓶用1 mL NCCLS II 型或相同质量的去离子水溶解。
盖上盖子，轻摇至完全溶解，15-25˚C 室温平衡30分钟，使用前充分颠倒混匀。
不可用力振摇。
5 试剂保存和稳定性未开封的试剂可稳定至2-8 o C 至试剂盒上标明的有效期。
牛凝血酶：复溶后于原瓶中2-8 o C 稳定3天；于原瓶中-20 o C 稳定1个月；在ACL 8/9000上（15o C ）稳定8小时。
为了最佳试剂保存，建议不使用时，将试剂从仪器系统撤回，使用原瓶，保存于2-8 o C 。
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XXXX医院
纤维蛋白原测定(FIB)凝固法操作规程
一、检验目的
二、工作原理
三、方法学溯源
四、标本采集及处理
五、参考范围与危急值处理
六、报告审核制度
七、临床意义
一、检验目的：
纤维蛋白原测定（FIB）
二、工作原理：
被测血浆加入带不锈钢球的检测杯内温育后，加入激活试剂血浆开始凝固，被测血浆粘度不断增加，不锈钢球在检测杯底沿弯曲的轨道运动逐渐减慢，并且振幅减小，此振幅的变化由数学算法通过计算得到凝固时间。
三、方法学溯源：
纤维蛋白原测定（Clauss法）原理：凝血酶将可溶性的血浆蛋白纤维蛋白原转化为不溶性的多聚体，纤维蛋白。
当凝血酶浓度较高（约为100NIH/ml）且纤维蛋白原浓度较低（0.05—0.8g/L）时该反应决定于纤维蛋白原浓度。
如在双对数坐标纸上画点，凝血酶凝块时间与纤维蛋白原浓度相比较呈线形关系。
线性范围：6-12g/L
四、标本采集及处理：
试剂准备：按照试剂瓶标签上标明的量，用蒸馏水复溶Fg试剂，使用前预温到室温（20－25℃）。
1、采血步骤
（1）登记：登记的内容包括病人的姓名、病历号、采血时间、登记编号、送检部门等。
（2）识别病人：问清病人并识别病人是至关重要的。
了解近期用药情况和特殊生理状况,并记录。
例如阿斯匹林、潘生丁等药物能抑制血小板聚集；口服避孕药会使血小板粘附、聚集功能、纤维蛋白原及多种凝血因子活性明显增高；当剧烈运动或输注肾上腺素时Ⅶ因子活性会快速上升。
应注明。
（3）病人的体位：坐位采血；卧位采血；采血时病人的口中不准含食物、口香糖或口表等，以防意外。
（4）选择适当的静脉，最宜采血的肘窝静脉，也可在腕，手，踝静脉采血。
2、注意事项:
（1）病人宜处于休息状态，并在早餐前采血（乳糜血影响检测结果）。
（2）针头不应小于21GAVGE。
国际推荐用21G1.5或20G1.5号针头，确保针头与空针联接牢固，以免产生泡沬。
如果采血时产生泡沫，可能导致纤维蛋白原和Ⅷ因子变性。
（3）抽血时要“一针见血”，如抽血过慢或不太顺利，将会影响检测结果。
（4）取样完毕，立即与抗凝剂充分混合，混合抗凝标本时需轻微的但彻底的混匀，因为纤维蛋白在剧烈振荡混匀时可能变性,一般轻轻的翻转5至10次，要避免用力振摇，以免标本溶血影响结果。
（5）采血的注射器应是硅化玻璃或塑料注射器，并要求收集管刻度精确，所有试管应与参比管一一比较，弃去所有不符合要求的试管。
（6）不可在输液侧手臂采血，更不宜在输液针头内抽血。
采血前也不要拍打静脉。
3、抗凝剂的选择:
血液与抗凝剂的比例为9：1，并且应根据HCT调整抗凝剂比率；为了保证比例准确，推荐使用真空采血管含抗凝剂浓度为109MMOL/L的枸椽酸钠。
4、标本的送检:
（1）标本采取前先将标本编号贴在采血管上，采血后应进行核对。
（2）标本应带盖存放；存贮时间为2-8℃＜4小时；-20℃＜2周；-80℃＜6个月；因此取血后应及时送至实验室，以免检测结果受影响。
5、标本处理
(1) 检验人员收到标本后应首先逐个检查其是否符合检验要求。
如果不符合检验要求的标本需通知临床重新采血，
(2) 包括抽血量不标准（过多或过少）、目测发现采血管中存在小血丝或小血块，如果排除病人体内自身溶血的情况，人为造成的溶血标本以及重度乳糜血的标本等。
(3) 核对化验单申请检验项目，编号登记。
(4) 标本应在采集后离心，离心力1500G，15分钟，4小时内检测。
6、试剂准备
按照试剂瓶标签上标明的量，用蒸馏水复溶Fg试剂，使用前预温到室温（20－25℃）。
五、参考范围与危急值处理：
纤维蛋白原Fg：2-4g/L
凡是Fg<0.6g/L，且无使用抗凝药者。
启动危急报告程序，记录电话报告临床并记录相应信息，如患者姓名、病历号、标本唯一编号、病房及床号、检验结果、报告时间（精确至分钟）、接电话人的姓名。
六、报告审核制度：
实验报告发出前要求：
审核者需检查整个实验过程是否符合操作规程并核对相关信息方可发出报告。
1.室内质控合格
2.病人的各项信息有登记
3.报告发出时除急诊病人需有检验者与审核者双签字或盖章。
七、临床意义：
1、纤维蛋白原减少：
原发性纤维蛋白原减少的病例极少。
一种先天性纤维蛋白原缺乏症是极为罕见的遗传性疾病，通过常染色体隐性基因遗传，此患者肝脏不能合成纤维蛋白原。
男、女两性均能发生，但以男婴为多见，患婴出生时，半数出现脐带出血。
其血液凝固缓慢或只有部分凝固。
继发性血浆
纤维蛋白原减少是由于纤维蛋白溶酶溶解纤维蛋白所致如胎盘早剥，分娩时羊水进入血管形成血栓，引起弥漫性血管内凝血，激活纤维蛋白溶酶原，使血中纤维蛋白溶酶活力增加，溶解纤维蛋白，消耗了体内原有的纤维蛋白原，使其含量减少，有时可降至0.5g/L以下。
严重的肝实质损害，如各种原因引起的肝坏死、慢性肝病晚期、肝硬化等都可出现纤维蛋白原的减少。
此类疾病还常伴有凝血酶及第Ⅶ因子缺乏，也往往是病性严重的先兆。
此外，严重的低纤维蛋白原血症也可见于肺及前列腺手术中。
2、纤维蛋白原增加：
纤维蛋白原是一种急性时相蛋白，增加往往是机体的一种非特异反应，常见于下列疾病：
（1）感染：毒血症、肺炎、轻型肝炎、胆囊炎、肺结核及长期的局部炎症。
（2）无菌炎症：肾病综合征、肿瘤、风湿性关节炎等。
（3）其他：如外科手术、放射治疗、月经期及妊娠期可见轻度增高。