疑难血型鉴定及处理分析
ABO疑难血型三步鉴定法
ABO疑难血型的三步分析鉴定法
第一步：排除人为因素或操作失误。
1.重新采集血样重新规范化采集抗凝血和不抗凝血两管。
2.核对试剂，器材核对试剂，仔细阅读试剂说明书和有效期；检查离心机及其他器材
3.复查AB0血型，排除人为因素或操作失误造成的AB0正、反定型不一致。
第二步：查阅临床资料，逐条分析对照可能导致ABO正反定型结果不一致的原因(表一)，或逐条分析排除不可能的原因，然后归纳总结不能排除的原因。
1.患者年龄、性别。
2.家系。
3.临床治疗用药史、输血史、造血干细胞移植史。
4.临床诊断。
第三步：根据逐条分析排除不可能的原因，归纳总结不能排除的原因，或最可能的原因，设计针对性验证实验。
表一ABO正反定型结果不一致的分类。
ABO疑难血型三步分析法
ABO疑难血型三步分析法在血型分类中没有疑难血型,迄今为止在文献中也查不到“疑难血型”的定义，因为“疑难血型”是1种血型难以检定或判定的“现象”,而不是1种型别。
检定1份标本是否属“疑难血型”，除了标本本身的特殊性外，还与实验室的设备、技术人员的水平、经验等多种因素有关，例如1份ABO亚型标本,在基层医院血库可能因为正定型与反定型不一致而分析不出原因被认为是“疑难血型”,但在血液中心血型参比实验室该问题可能就易于迎刃而解。
在检定血型时,标本如果受多种因素干扰使结果难以判定,便呈现“疑难血型”现象。
一、干扰ABO血型正确判定的因素（一）生理性因素1.年龄老年人(ABO抗原或ABO抗体减弱),6个月前的婴儿(ABO 抗原或ABO抗体不成熟),可能导致ABO血型误定。
2.ABO亚型包括A(B)型、B(A)型,ABO抗原减弱导致细胞定型(正定型)受干扰,或血清中出现不规则抗体干扰血清定型(反定型)。
3.冷凝集素有些健康人血清中含有冷凝集素,且在<4℃才有活性,不干扰ABO血型检定,如果冷凝集素效价升高,或在室温以上反应,致敏自身红细胞可能干扰ABO正定型,存在于血清可能干扰ABO反定型。
4.“先天性”无ABO抗体近年有“先天性”无ABO抗体的个案报告,原因有待研究。
5.双精子授精红细胞呈嵌合体。
6.个体特异性个别人血清中ABO可溶性血型物质过高,ABO正定型红细胞凝集减弱。
（二）实验技术原因1.标本混淆如采错被检者,红细胞和血清非同一人,记录结果与标本编号不对应。
2.静脉输液处采样ABO抗体被输液稀释,干扰ABO反定型。
3.采样不规范用凝血块洗下红细胞检定血型，其中混有凝集程度不一的红细胞；用血浆做ABO反定型,操作过程中纤维蛋白析出凝集试剂红细胞。
4.试剂质量问题或漏加试剂定型试剂过期失效，未达标准，被污染。
操作中未遵循“先加血清后加细胞”的原则，大批量样本试验时漏加试剂血清或试剂红细胞。
5.实验操作不规范被检红细胞未洗涤,非特异性粘附血浆蛋白,或被检红细胞悬液过浓或过稀。
疑难血型鉴定处理流程
疑难血型鉴定处理流程标题：疑难血型鉴定处理流程引言：血型鉴定是一项重要的医学检测程序，在医疗领域和犯罪调查中扮演着关键的角色。
然而，有时候在进行血型鉴定过程中，会遇到一些疑难的情况，这就需要专业的处理流程来解决问题。
本文将深入探讨疑难血型鉴定处理流程的多个方面，旨在帮助读者更全面、深刻和灵活地理解这一主题。
第一节：背景知识首先，我们将回顾一些背景知识，包括血型系统、血型鉴定的原理以及常见的血型类型。
这将为我们后续讨论提供基础。
第二节：疑难血型的定义与分类在这一部分，我们将详细介绍什么是疑难血型，以及针对不同类型的疑难血型鉴定，应如何分类和处理。
我们将探讨正反交叉试验、重复鉴定、特殊抗体检测等方法和步骤。
第三节：疑难血型的可能原因在这一部分，我们将讨论导致疑难血型出现的可能原因。
这可能涉及到基因突变、转染、婴儿溶血、移植相关的抗体产生等等。
我们将详细解释每种原因并提供相关示例和案例研究。
第四节：疑难血型的鉴定策略与流程在这一部分，我们将介绍处理疑难血型的鉴定策略与流程。
我们将强调疑难血型鉴定的关键步骤，如全面的样品准备、使用特殊的试剂与技术以及信息共享与交流等。
我们还将介绍一些实验室技术和设备，这些可以帮助进行更精确、可靠的疑难血型鉴定。
第五节：案例研究与解决方案在这一部分，我们将通过一些真实的案例研究，让读者更好地了解疑难血型鉴定处理流程的应用。
我们将提供不同案例的详细分析，包括疑难血型的特点、鉴定过程中遇到的问题以及最终的解决方案。
结论：通过本文的阐述，我们希望读者对疑难血型鉴定处理流程有更深入的理解。
我们强调了在处理疑难血型时需要注意的关键步骤和策略。
同时，我们提供了一些真实的案例研究，以帮助读者将理论知识更好地应用于实践。
最后，我们对疑难血型鉴定的未来发展进行了展望，并指出可能的研究方向。
观点和理解：在我的观点和理解中，疑难血型鉴定处理流程是一项复杂而重要的任务。
它需要严谨的实验室技术和专业的知识，以确保准确的鉴定结果。
血型鉴定常见疑难问题分析及处理
ABO血型系统特殊表达的血型 ABO血型亚型：亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异。 如A1、A2、A3/B3、Ax/Bx、Am/Bm、Ael /Bel,以及相应的AB亚型如A3B、AxB、ABx、ABel等。 输血时血型的选择：除非患者血清中存在37℃下有反应活性的抗-A1/-B1抗体，否则无必要同亚型输血。一般采用同类抗原血型或O型洗涤细胞输注则可。如A亚型输A型血、B亚型输B型血、AB亚型输AB型血。
三、反定型---血清自身相关问题
6.年龄因素 在未产生自己抗体的婴儿、由母亲被动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现不见凝集或仅见弱凝集反应等异常结果。 7.骨髓移植术后 ABO不同型骨髓移植患者术后。 8.纤维蛋白原的影响 使用血浆或凝固不完全的血清会形成很小的纤维蛋白凝集包裹的红细胞凝块。
ABO定型常见问题的解决方法
获得性B红细胞 * 询问病史 * 酸化抗-B血清（pH6.0) * 唾液型物质检测 * 家系调查证明没有遗传基础
ABO定型常见问题的解决方法
混合视野凝集 * ABO亚型：A3、B3亚型等 * ABO不同型输血（非O型人近期输入O型血)：询问近期输血史、毛细管离心分离自身红细胞等 * ABO不同型骨髓移植术后 * 单合子的相嵌红细胞、双合子交移体红细胞
一、技术和管理错误
（5）阳性反应产生溶血现象未能识别，导致假阴性结果。 （6）漏加试剂，产生假阴性结果。 （7）结果记录或判断错误，产生假阳性或假阴性结果。 （8）细胞与血清比例不适当，产生假阳性或假阴性结果。
二、正定型---红细胞自身相关问题
1.红细胞致敏 直接抗球蛋白试验阳性的红细胞（如自身免疫性溶血性贫血患者的红细胞）在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集，产生假阳性结果。 2.异常基因型 ABO亚型的弱抗原常规方法难以检出，产生假阴性结果。 3.Cis-AB型（顺式AB型） 指从父母的一方同时得到A和B基因在一条染色体上，而另一条染色体上是从父母中另一方来的O基因。顺式AB细胞的B抗原较弱，类似B3亚型。
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程一、正反定型不一致1、重复试验（严格正规操作）。
2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。
3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。
）1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。
2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。
3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型：①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）；②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。
③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。
4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。
）5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。
6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。
4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。
二、交叉配血不合（一）主侧端不相合1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。
2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。
3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。
4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性。
5、试验系统被污染。
（二）次侧端不相合1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。
2、病人与供血者的ABO血型不相合。
3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。
4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。
（三）配血不合的主要因素1、血型是否正确。
疑难血型鉴定及处理分析
疑难血型鉴定及处理分析摘要：目的：探究ABO疑难血型产生原因和正确血型鉴定方法，意在提高疑难血型鉴定准确性。
方法：把2022年1月到2023年7月本院收集的献血者45例纳入研究，经微孔板法开展ABO血型正反定型检测，选出疑问标本并开展试管法复检，并实行吸收放散试验、不规则抗体筛查、抗球蛋白试验、特异性鉴定工作，鉴别患者血型。
结果：本组45例患者进行血型鉴定后，无标本差错例数35例，10例ABO血型正反定型不相符样本，包括4例（40.00%）抗体减弱，2例（20.00%）抗原减弱，2例（20.00%）冷自身抗体，1例（10.00%）同种抗体，1例（10.00%）亚型。
结论：ABO疑难血型正反定型不相符的原因比较复杂，结合患者基本资料，开展科学检验和分析，可保证疑难血型鉴定准确性，提高患者输血安全。
关键词：疑难血型；鉴定；原因临床输血是抢救危重疾病患者的重要手段，但人体血型类型多样，只有选择合适的血型输血，才可保证患者安全，鉴于此，血型准确鉴定至关重要[1]。
然而实际血型鉴定过程中，正反定型不相符现象时常出现，导致血型鉴定难度变大。
为分析疑难血型的鉴定方法，提高实际鉴定结果准确性，本文以2022年1月到2023年7月收治的献血者为研究对象，现报道如下。
1资料和方法1.1一般资料2022年1月到2023年7月期间，在本院收集的献血者45例均为研究对象，其中男性患者25例，女性患者20例，年龄分布在24~67岁间，均数（44.27±4.58）岁。
医院伦理委员会批准，患者或家属签署同意书。
1.2研究方式本组患者分别完成相关检测工作，包括：（1）ABO血型初筛：微孔板法正反定型，如果血型正反定型不相符，盐水介质试管法二次检测，如果O细胞阴性，正定型抗-A、抗-B反应强度<4+，反定型A型或B型红细胞<2+，亦或者抗原抗体不对应，增加开展试管法抗-AB、抗-H、抗-A1、抗-A1c和抗-A2c血清检验，完成血型正反定型试验工作。
疑难血型鉴定和疑难交叉配血
疑难血型鉴定与疑难交叉配血1、疑难血型鉴定疑难血型就是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）得现象,多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。
因此,疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体与特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学与分子生物学研究方法对患者样本进行检测。
而对于不规则抗体筛查与鉴定，主要就是对抗体种类与特性进行研究，尤其就是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确得分析患者血清抗体得特异性。
在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析与处理：(１)分析可能存在得原因先排除人为操作因素,再通过了解患者临床资料分析可能得原因，主要包括抗原类影响因素与抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等,抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。
（2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。
流程图1 疑难血型鉴定流程2014年１月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例,经一系列血清学试验确证该患者为P１Pｋ血型系统得ｐ表型，经分子生物学基因测序,初步推断Ａ4GALT 基因第3外显子得９０3Ｃ＞G突变就是患者p表型形成得分子生物学基础,该研究成果从不同角度与深度撰写论文,先后发表《临床军医杂志》与《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。
在此之后得工作中，通过阅读文献自修学习,鉴定出Am、Bm、B３等血型亚型，形成了一套相对完整得疑难血型鉴定思路与流程。
２014年2月与2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗得患者,经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。
在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查与鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体得分布特征有了较为清晰得了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》,并形成了一套相对完整得不规则抗体筛查与鉴定流程。
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程一、正反定型不一致1、重复试验（严格正规操作）。
2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。
3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。
）1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。
2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。
3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型：①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）；②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。
③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。
4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。
）5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。
6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。
4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。
二、交叉配血不合（一）主侧端不相合1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。
2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。
3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。
4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性。
5、试验系统被污染。
（二）次侧端不相合1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。
2、病人与供血者的ABO血型不相合。
3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。
4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。
（三）配血不合的主要因素1、血型是否正确。
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疑难血型鉴定及处理分析
摘要：目的：探究ABO疑难血型产生原因和正确血型鉴定方法，意在提高疑
难血型鉴定准确性。
方法：把2022年1月到2022年12月本院收集的献血者45
例纳入研究，经微孔板法开展ABO血型正反定型检测，选出疑问标本并开展试管
法复检，并实行吸收放散试验、不规则抗体筛查、抗球蛋白试验、特异性鉴定工作，鉴别患者血型。
结果：本组45例患者进行血型鉴定后，无标本差错例数35例，10例ABO血型正反定型不相符样本，包括4例（40.00%）抗体减弱，2例（20.00%）抗原减弱，2例（20.00%）冷自身抗体，1例（10.00%）同种抗体，1
例（10.00%）亚型。
结论：ABO疑难血型正反定型不相符的原因比较复杂，结合
患者基本资料，开展科学检验和分析，可保证疑难血型鉴定准确性，提高患者输
血安全。
关键词：疑难血型；鉴定；原因
临床输血是抢救危重疾病患者的重要手段，但人体血型类型多样，只有选择
合适的血型输血，才可保证患者安全，鉴于此，血型准确鉴定至关重要[1]。
然而
实际血型鉴定过程中，正反定型不相符现象时常出现，导致血型鉴定难度变大。
为分析疑难血型的鉴定方法，提高实际鉴定结果准确性，本文以2022年1月到2022年12月收治的献血者为研究对象，现报道如下。
1资料和方法
1.1一般资料
2022年1月到2022年12月期间，在本院收集的献血者45例均为研究对象，其中男性患者25例，女性患者20例，年龄分布在24~67岁间，均数
（44.27±4.58）岁。
医院伦理委员会批准，患者或家属签署同意书。
1.2研究方式
本组患者分别完成相关检测工作，包括：（1）ABO血型初筛：微孔板法正反定型，如果血型正反定型不相符，盐水介质试管法二次检测，如果O细胞阴性，正定型抗-A、抗-B反应强度<4+，反定型A型或B型红细胞<2+，亦或者抗原抗体
不对应，增加开展试管法抗-AB、抗-H、抗-A
1、抗-A
1
c和抗-A
2
c血清检验，完成
血型正反定型试验工作。
（2）吸收放散试验：正定型单克隆抗-A、抗-B、人源
抗-A和抗-B抗原检出难度大，针对反定型有关抗体完成吸收放散试验，洗涤红
细胞3次，取压积红细胞，把人源抗-A、抗-B血清加入并充分混合，放在4℃环
境中1h备用，离心处理3min，对吸收前和离心后的清液测定效应相互比较，生
理盐水洗涤6次压积红细胞，并加入适量0.9%生理盐水，放在56℃环境中水浴
处理，震荡1min再次水浴9min，离心检测凝集效价。
（3）自身冷凝聚素检测：
针对血型正反定型试验凝集的样本，取血清和自身O型红细胞相互混合，放置在4℃环境中4h完成冷凝集试验，37℃生理盐水洗涤红细胞3次，检测ABO血型，
高效价冷凝集素，O型红细胞吸收血清冷凝集素处理，再次完成反定型处理。
（4）自身抗体检验：洗涤红细胞3次，开展直接抗球蛋白试验，红细胞洗涤在吸收血
清自身抗体后开展反定型处理，红细胞吸收血清抗体完成同种抗体检测。
（5）
不规则抗体筛查鉴定：O型红细胞阳性，其余抗原抗体反应凝集强度对应，完成
血清抗体筛查和鉴定工作，不规则抗体筛检红细胞Ⅰ~Ⅲ型，血标本阳性后，需
应用谱细胞抗体特异性鉴定，并对特异性抗体相关抗原红细胞开展鉴定工作。
以
上操作仪器或试剂信息：上海血液生物医药有限公司抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H、抗-A1、反定型用红细胞和抗球蛋白试剂、不规则抗体筛查红细胞；珠海贝索生
物技术有限公司的凝聚胺试剂；法国DIAGAST公司的微孔板法ABO、RHD血型检
测卡、反定型红细胞、不规则抗体筛检红细胞；DIAMED公司的抗球蛋白卡；法国DIAGAST公司的QWALYS全自动血型鉴定和DIAMED半自动孵育器；日本久保田血
型血液专用离心机。
1.3观察指标
统计本组患者中，血型鉴定正反定型不相符的情况。
1.4统计分析
SPSS23.0统计工具分析，计量资料t检验；计数资料x2检验；P<0.05差异
存在统计学意义。
2结果
对本组45例患者进行血型鉴定后，无标本差错例数35例，10例ABO血型正
反定型不相符样本，包括4例（40.00%）抗体减弱，2例（20.00%）抗原减弱，2
例（20.00%）冷自身抗体，1例（10.00%）同种抗体，1例（10.00%）亚型。
3讨论
老年人群年龄大，免疫力低，抗体衰弱，ABO血型正反定型不相符，可适当
增加血清量，合理调节样本放置时间，提高鉴定准确性；新生儿抗原偏弱，抗体
出现时间晚，可在长大后再次检查。
人体血型具有终身性，但在恶性肿瘤的影响下，细胞膜血型抗原合成会减少抗原量，降低红细胞血型抗原量，病情恢复则恢
复正常，增加抗原性[2]白血病会对机体N-乙酰半乳糖转移酶产生影响，弱化机体
红细胞A或B抗原，正定型过程中，可能直接误诊O型，而且患者体内不规则抗
体形成，反定型过程中，可与红细胞膜抗原产生凝集反应，无关抗原A和抗原B，造成ABO血型不符现象，所以实际鉴定中，需筛查不规则抗体，借助谱细胞鉴定
抗体种类，如果患者抗原较弱，可增加血清量[3]。
人体血液内冷凝集素量少，效
价低，低温活性，不会影响ABO定型，但因红斑狼疮、再生障碍性贫血等疾病影响，高效价冷凝聚集会生成抗自身红细胞嗜异性冷抗体，如IgM类，以强阳性为
主[4]。
健康人员不规则抗体检出率并不高，多数IgG类抗体经盐水介质与相关抗
原红细胞凝集；M抗体属于冷抗体，37℃无反应发生，但术中低温麻醉患者，抗
体会激活补体，产生溶血反应，而37℃环境中则呈阳性[5]。
ABO亚型是红细胞糖
基转移酶基因突变或缺失，引起酶活性减弱，引起抗原A或抗原B弱表达现象，
增加血型鉴定难度，错误定型概率高。
总而言之，ABO疑难血型鉴定因素多样，血型准确鉴定是输血安全的基本条件，所以日常生活中，强化医护人员的工作技能，培养较高的工作责任感，积极
排除标本和操作误差，对患者病情状态进行全面掌握，分析ABO血型正反定型不
相符的原因，规范操作，积极复检，提高鉴定效果，保证临床输血安全性。
参考文献
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[2] 邓俊,黄蓉,刘凤霞,等. 自身抗体影响血型鉴定的处理方法及效果[J]. 中国输血杂志,2021,34(8):818-820.
[3] 邢昕,许金鹏,王爱华. 检验结果在ABO疑难血型鉴定中的作用[J]. 检验医学与临床,2021,18(5):713-716.
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[5] 王鹏槐. ABO疑难血型的血清学检测及配血处理分析[J]. 世界最新医学信息文摘（连续型电子期刊）,2019,19(64):206-207.。