血型鉴定常见的疑难问题分析及处理
血型鉴定正反定
▼抗体太弱或消失 如新生儿、老年人、免疫抑制患者，应注意患者的年龄
和诊断
▼非正常高浓度的抗－A、抗－B可引起前带现象，导致假 阴性,将血清稀释或用EDTA（2.5％）处理可消除 ▼A2、A2B或其他ABO亚型人血清中可能有抗－A1, 抗－A1
只凝集A1型红细胞而不凝集A2、O型红细胞
三、意外的血清学反应所致的 ABO正反定不符及其处理
应用抗－A、抗－B试剂未能出现预期的凝集反应
原因
二、红细胞标问题
患者血清中高活性、高浓度冷自身抗体严重致敏（包
被）自身红细胞，以至自发地发生凝集，而不是抗体 试剂的特异性免疫反应所致
红细胞表面包被IgG类抗体
原因
三、血清标本的问题
免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。老
年人ABO抗体减弱
c.将血清用0.01mol/L DTT处理和再定型
三、意外的血清学反应所致的 ABO正反定不符及其处理
▼同种抗体/意外抗体 室温下抗-P、抗-M、抗E等，可能出现意外反应，干
扰ABO血型鉴定
抗体特异性抗体鉴定，选择抗原阴性的红细胞做反定
谢 谢
使用了受到细菌污染的试剂 试验器皿不干净 实验结果记录、解释错误
原因
二、红细胞标本问题
患者近期接受了大量ABO血型相容但不同
型的红细胞，如骨髓移植患者，或非O型
人接受O型红细胞
原因
二、红细胞标本问题
◆某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞，一些
白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱，
6.室温孵育30min后，离心观察结果，以检测弱的抗原抗体反应
7. 做自身红细胞做对照，以确定自身抗体的干扰
分析和处理
ABO正反定不符的分类
ABO疑难血型三步分析法
ABO疑难血型三步分析法在血型分类中没有疑难血型,迄今为止在文献中也查不到“疑难血型”的定义，因为“疑难血型”是1种血型难以检定或判定的“现象”,而不是1种型别。
检定1份标本是否属“疑难血型”，除了标本本身的特殊性外，还与实验室的设备、技术人员的水平、经验等多种因素有关，例如1份ABO亚型标本,在基层医院血库可能因为正定型与反定型不一致而分析不出原因被认为是“疑难血型”,但在血液中心血型参比实验室该问题可能就易于迎刃而解。
在检定血型时,标本如果受多种因素干扰使结果难以判定,便呈现“疑难血型”现象。
一、干扰ABO血型正确判定的因素（一）生理性因素1.年龄老年人(ABO抗原或ABO抗体减弱),6个月前的婴儿(ABO 抗原或ABO抗体不成熟),可能导致ABO血型误定。
2.ABO亚型包括A(B)型、B(A)型,ABO抗原减弱导致细胞定型(正定型)受干扰,或血清中出现不规则抗体干扰血清定型(反定型)。
3.冷凝集素有些健康人血清中含有冷凝集素,且在<4℃才有活性,不干扰ABO血型检定,如果冷凝集素效价升高,或在室温以上反应,致敏自身红细胞可能干扰ABO正定型,存在于血清可能干扰ABO反定型。
4.“先天性”无ABO抗体近年有“先天性”无ABO抗体的个案报告,原因有待研究。
5.双精子授精红细胞呈嵌合体。
6.个体特异性个别人血清中ABO可溶性血型物质过高,ABO正定型红细胞凝集减弱。
（二）实验技术原因1.标本混淆如采错被检者,红细胞和血清非同一人,记录结果与标本编号不对应。
2.静脉输液处采样ABO抗体被输液稀释,干扰ABO反定型。
3.采样不规范用凝血块洗下红细胞检定血型，其中混有凝集程度不一的红细胞；用血浆做ABO反定型,操作过程中纤维蛋白析出凝集试剂红细胞。
4.试剂质量问题或漏加试剂定型试剂过期失效，未达标准，被污染。
操作中未遵循“先加血清后加细胞”的原则，大批量样本试验时漏加试剂血清或试剂红细胞。
5.实验操作不规范被检红细胞未洗涤,非特异性粘附血浆蛋白,或被检红细胞悬液过浓或过稀。
疑难血型鉴定处理流程
疑难血型鉴定处理流程标题：疑难血型鉴定处理流程引言：血型鉴定是一项重要的医学检测程序，在医疗领域和犯罪调查中扮演着关键的角色。
然而，有时候在进行血型鉴定过程中，会遇到一些疑难的情况，这就需要专业的处理流程来解决问题。
本文将深入探讨疑难血型鉴定处理流程的多个方面，旨在帮助读者更全面、深刻和灵活地理解这一主题。
第一节：背景知识首先，我们将回顾一些背景知识，包括血型系统、血型鉴定的原理以及常见的血型类型。
这将为我们后续讨论提供基础。
第二节：疑难血型的定义与分类在这一部分，我们将详细介绍什么是疑难血型，以及针对不同类型的疑难血型鉴定，应如何分类和处理。
我们将探讨正反交叉试验、重复鉴定、特殊抗体检测等方法和步骤。
第三节：疑难血型的可能原因在这一部分，我们将讨论导致疑难血型出现的可能原因。
这可能涉及到基因突变、转染、婴儿溶血、移植相关的抗体产生等等。
我们将详细解释每种原因并提供相关示例和案例研究。
第四节：疑难血型的鉴定策略与流程在这一部分，我们将介绍处理疑难血型的鉴定策略与流程。
我们将强调疑难血型鉴定的关键步骤，如全面的样品准备、使用特殊的试剂与技术以及信息共享与交流等。
我们还将介绍一些实验室技术和设备，这些可以帮助进行更精确、可靠的疑难血型鉴定。
第五节：案例研究与解决方案在这一部分，我们将通过一些真实的案例研究，让读者更好地了解疑难血型鉴定处理流程的应用。
我们将提供不同案例的详细分析，包括疑难血型的特点、鉴定过程中遇到的问题以及最终的解决方案。
结论：通过本文的阐述，我们希望读者对疑难血型鉴定处理流程有更深入的理解。
我们强调了在处理疑难血型时需要注意的关键步骤和策略。
同时，我们提供了一些真实的案例研究，以帮助读者将理论知识更好地应用于实践。
最后，我们对疑难血型鉴定的未来发展进行了展望，并指出可能的研究方向。
观点和理解：在我的观点和理解中，疑难血型鉴定处理流程是一项复杂而重要的任务。
它需要严谨的实验室技术和专业的知识，以确保准确的鉴定结果。
血型鉴定常见疑难问题分析及处理
ABO血型系统特殊表达的血型 ABO血型亚型：亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异。 如A1、A2、A3/B3、Ax/Bx、Am/Bm、Ael /Bel,以及相应的AB亚型如A3B、AxB、ABx、ABel等。 输血时血型的选择：除非患者血清中存在37℃下有反应活性的抗-A1/-B1抗体，否则无必要同亚型输血。一般采用同类抗原血型或O型洗涤细胞输注则可。如A亚型输A型血、B亚型输B型血、AB亚型输AB型血。
三、反定型---血清自身相关问题
6.年龄因素 在未产生自己抗体的婴儿、由母亲被动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现不见凝集或仅见弱凝集反应等异常结果。 7.骨髓移植术后 ABO不同型骨髓移植患者术后。 8.纤维蛋白原的影响 使用血浆或凝固不完全的血清会形成很小的纤维蛋白凝集包裹的红细胞凝块。
ABO定型常见问题的解决方法
获得性B红细胞 * 询问病史 * 酸化抗-B血清（pH6.0) * 唾液型物质检测 * 家系调查证明没有遗传基础
ABO定型常见问题的解决方法
混合视野凝集 * ABO亚型：A3、B3亚型等 * ABO不同型输血（非O型人近期输入O型血)：询问近期输血史、毛细管离心分离自身红细胞等 * ABO不同型骨髓移植术后 * 单合子的相嵌红细胞、双合子交移体红细胞
一、技术和管理错误
（5）阳性反应产生溶血现象未能识别，导致假阴性结果。 （6）漏加试剂，产生假阴性结果。 （7）结果记录或判断错误，产生假阳性或假阴性结果。 （8）细胞与血清比例不适当，产生假阳性或假阴性结果。
二、正定型---红细胞自身相关问题
1.红细胞致敏 直接抗球蛋白试验阳性的红细胞（如自身免疫性溶血性贫血患者的红细胞）在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集，产生假阳性结果。 2.异常基因型 ABO亚型的弱抗原常规方法难以检出，产生假阴性结果。 3.Cis-AB型（顺式AB型） 指从父母的一方同时得到A和B基因在一条染色体上，而另一条染色体上是从父母中另一方来的O基因。顺式AB细胞的B抗原较弱，类似B3亚型。
实验十五 ABO血型鉴定
实验十五 ABO血型鉴定一、正定型法【目的】掌握用盐水介质法进行ABO血型系统(ABO group)正定型(direct typing)的原理、操作方法和结果判断。
【原理】用已知的IgM类特异抗体（标准血清）与被检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集现象来测定被检红细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。
【器材】1. 1.小试管、记号笔、蜡笔、试管架。
2. 2.尖滴管、胶吸头。
3. 3.吸管、吸耳球。
4. 4.载玻片或有凹槽的玻璃板或白瓷板。
5. 5.离心机。
6. 6.显微镜。
【试剂】1．标准抗A、抗B血清（商品）分为人血清ABO血型抗体和人ABO血型单克隆抗体，要求如下：（1）人血清ABO血型抗体：①特异性高。
②凝集效价：抗A不低于1∶128 ，抗B不低于1∶64。
③亲和力：反应开始15s内即出现凝集，3min时明显凝集，血凝块大于1mm2。
④稳定性高。
⑤已灭活补体。
（2）人ABO血型单克隆抗体：①特异性：抗A抗体特异凝集具有A型红细胞抗原的A1、A2、A1B、A2B；抗B抗体只凝集含B抗原的B和AB型红细胞。
②亲和力：以开始反应到出现凝集的时间表示抗血清的亲和力，国家标准是抗A对A1、A2、A2B分别为15s、30s、45s；抗B对B型红细胞为15s。
③凝集效价：国家标准是抗A1、抗B均大于1∶128。
④稳定性：较人血清抗体的稳定性低。
2．生理盐水。
【标本】抗凝静脉血或末梢血。
【操作】制备被检者5％红细胞生理盐水悬液：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取试管下层的红细胞2滴于小试管中，加入生理盐水2ml，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀。
2 500r/min离心3 min 后弃去上清液，重复洗涤3次。
自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水中混匀，此即为5％的红细胞生理盐水悬液。
操作示意见图4-1。
图4-15％红细胞生理盐水悬液制备操作示意图1．玻片法（1）标记玻片或白瓷板：取洁净的载玻片或白瓷板1块，用蜡笔画出小格，标明抗A、抗B。
ABO血型鉴定实验中的问题及对策
ABO 血型鉴定实验中的问题及对策徐立峰（山东协和学院医学院济南250000)摘要本文阐述了在中学ABO 血型鉴定实验过程中会发生的实验结果与预期结果不一致的情况:一种是血型鉴定与采血机构 或医院鉴定的结果不一致;另一种是与根据父母血型或遗传规律推导出来的结果不一致。
本文分别从原因和对策两个方面进行讨论遥关键词血型遗传ABO 血型鉴定结果不一致原因及对策ABO 血型鉴定实验受到了师生的欢迎，尽管不是 中学规定的实验，但有些教师会把它作为自选实验。
ABO 血型鉴定的方法有多种，学生实验一般会采用玻片法、试管法，这两种方法便于观察红细胞凝集现象。
其中，玻片法操作简单、无需离心设备，在学生实验中 更为常用，该方法可采用人ABO 血型单克隆抗体代替 人血清ABO 血型抗体。
实验操作并不复杂，耗时也较短，但部分实验者会 出现血型鉴定结果与预期结果并不一致的状况:一种 情况是血型实验鉴定结果与采血机构或医院鉴定的结 果不一致;另一种情况是与根据父母血型或遗传规律 推导出来的结果不一致。
有些学生甚至会怀疑是否与 父母有着血缘关系，因而会产生焦虑症，影响身心健 康。
1血型鉴定与医院鉴定的结果不_致1.1原因采血机构和医院对血型的鉴定，是由专业 人员进行的，检测条件控制的非常严格，操作规范、方 法先进，并做正反定型，对正反定型不一致的疑难血型 会做进一步的检测，因而准确率远高于学生的实验。
影响学生血型鉴定实验准确性的因素一般有以下几种：(1)试剂已过有效期或保存不当而失效。
单抗是蛋白质，高温下长时间放置会因变性而失效，受微生物 污染会导致腐败变质。
(2)实验条件与方法受限。
为简化操作或缺乏相关设备和材料，加全血而不对红细胞进行洗涤，只进行 正定型不进行反定型。
玻片法由于无离心加速反应， 容易忽视较弱的凝集而导致定型错误。
不进行镜检， 靠肉眼观察为无凝集，镜检下仍有可能表现为显著凝 集。
(3)操作不规范。
抗体试剂与红细胞比例不合适，血液过多，未能被抗体试剂完全覆盖而发生凝固。
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程一、正反定型不一致1、重复试验（严格正规操作）。
2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。
3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。
）1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。
2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。
3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型：①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）；②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。
③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。
4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。
）5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。
6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。
4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。
二、交叉配血不合（一）主侧端不相合1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。
2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。
3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。
4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性。
5、试验系统被污染。
（二）次侧端不相合1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。
2、病人与供血者的ABO血型不相合。
3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。
4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。
（三）配血不合的主要因素1、血型是否正确。
疑难血型鉴定及处理分析
疑难血型鉴定及处理分析摘要：目的：探究ABO疑难血型产生原因和正确血型鉴定方法，意在提高疑难血型鉴定准确性。
方法：把2022年1月到2023年7月本院收集的献血者45例纳入研究，经微孔板法开展ABO血型正反定型检测，选出疑问标本并开展试管法复检，并实行吸收放散试验、不规则抗体筛查、抗球蛋白试验、特异性鉴定工作，鉴别患者血型。
结果：本组45例患者进行血型鉴定后，无标本差错例数35例，10例ABO血型正反定型不相符样本，包括4例（40.00%）抗体减弱，2例（20.00%）抗原减弱，2例（20.00%）冷自身抗体，1例（10.00%）同种抗体，1例（10.00%）亚型。
结论：ABO疑难血型正反定型不相符的原因比较复杂，结合患者基本资料，开展科学检验和分析，可保证疑难血型鉴定准确性，提高患者输血安全。
关键词：疑难血型；鉴定；原因临床输血是抢救危重疾病患者的重要手段，但人体血型类型多样，只有选择合适的血型输血，才可保证患者安全，鉴于此，血型准确鉴定至关重要[1]。
然而实际血型鉴定过程中，正反定型不相符现象时常出现，导致血型鉴定难度变大。
为分析疑难血型的鉴定方法，提高实际鉴定结果准确性，本文以2022年1月到2023年7月收治的献血者为研究对象，现报道如下。
1资料和方法1.1一般资料2022年1月到2023年7月期间，在本院收集的献血者45例均为研究对象，其中男性患者25例，女性患者20例，年龄分布在24~67岁间，均数（44.27±4.58）岁。
医院伦理委员会批准，患者或家属签署同意书。
1.2研究方式本组患者分别完成相关检测工作，包括：（1）ABO血型初筛：微孔板法正反定型，如果血型正反定型不相符，盐水介质试管法二次检测，如果O细胞阴性，正定型抗-A、抗-B反应强度<4+，反定型A型或B型红细胞<2+，亦或者抗原抗体不对应，增加开展试管法抗-AB、抗-H、抗-A1、抗-A1c和抗-A2c血清检验，完成血型正反定型试验工作。
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精品课件
概述
随着输血医学的发展，输血安全问题日益引起 各方面的关注，输血安全主要体现在两方面内容， 一是经血传播疾病问题，二是血液免疫学方面的 问题即血型血清方面的问题。
2021/3/11
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概述
血型血清学不同于一般的临床医学检验，有其自身特 点。一般临床医学检验的工作流程十分明了，即接受 临床医生的申请，按各项检验的操作规程完成其申请 内容并反馈结果。而血型血清学方面的检查则与此有 很大的不同，临床医生及各医院输血科向血站和血液 中心血型参比实验室提出的检测申请不外有以下几种 情况:
2021/3/11
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二、正定型---红细胞自身相关问题
5.疾病因素导致抗原减弱 常见的如白血病、何杰金病、 10号染色体转位、红细胞系统极度增生如海洋性贫血等 病人ABO血型抗原可受到暂时抑制，抗原减弱检出困难。 红细胞ABO抗原减弱与病程有关，病情缓解时抗原性会 恢复。
6.红细胞多凝集现象 当病人感染细菌或病毒后，病毒或 细菌产生的酶使红细胞上掩蔽的T抗原暴露激活，由于 正常人血清中都含有抗-T抗体，因此可与正常人血清产 生凝集反应，正定型试验假阳性。
2021/3/11
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二、正定型---红细胞自身相关问题
9.红细胞发生自凝现象 患者血清中的高效价 自身冷凝集素使红细胞发生凝集。
10. 近期输血 曾异型输血，使病人血液标本 成为不同型别的红细胞混合物，定型时显 示“混合外观凝集”现象。
2021/3/11
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三、反定型---血清自身相关问题
2021/3/11
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三、反定型---血清自身相关问题
4.不规则抗体或自身冷凝集素的存在 受检者血浆中含 有ABO血型抗体以外的IgM类不规则抗体与试剂A、 B、O细胞上的相应抗原起反应。
5.低丙种球蛋白血症 低丙种球蛋白血症病例(如白血病、 淋巴瘤及使用免疫抑制剂的患者、先天丙种球蛋白缺 乏的患者、免疫缺陷的患者) 可能会因免疫球蛋白水 平全面下降使血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应。
2021/3/11
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三、反定型---血清自身相关问题
6.年龄因素 在未产生自己抗体的婴儿、由母亲被动 获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验 时可出现不见凝集或仅见弱凝集反应等异常结果。
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疑难血型鉴定常用的辅助实验
吸收试验 放散试验（常用热放散） DTT（二硫苏糖醇）处理自身凝集红细胞 唾液血型物质测定（中和试验） 分子生物学技术进行基因型检测
2021/3/11
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血型血清学的工作特点
鉴定技术因不同情况而异，没有一个固定的格式，因此在试验 过程中随时分析试验结果，选择最有效的方案(程序)是必要的。
2021/3/11
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二、正定型---红细胞自身相关问题
1.红细胞致敏 直接抗球蛋白试验阳性的红细胞（如自身 免疫性溶血性贫血患者的红细胞）在含高蛋白介质的试 剂中可发生凝集，产生假阳性结果。
2.异常基因型 ABO亚型的弱抗原常规方法难以检出，产 生假阴性结果。
3.Cis-AB型（顺式AB型） 指从父母的一方同时得到A和B 基因在一条染色体上，而另一条染色体上是从父母中另 一方来的O基因。顺式AB细胞的B抗原较弱，类似B3亚 型。
血型参比实验室必须全面分析病历情况，有选择的运用相应的 实验手段来解决问题，另外在接受检测申请时，还应详细了解 患者的既往史-性别、年龄、民族、临床诊断及临床症状和患者 的输血史和用药史，如女性已婚患者还应询问其妊娠史。这些 都对解决问题至关重要。
2021/3/11
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血型血清学的工作特点
例如：对于白血病患者，应考虑到由于疾 病原因而引起血型抗原减弱的可能性；对 消化系统的疾病的患者应考虑到由于产生 “类B物质”而导致血型鉴定错误的可能 性；对于多次输血的患者应考虑其体内产 生免疫性抗体的可能性，等等。
2021/3/11
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疑难血型鉴定
共同特点:正反定型不。
2021/3/11
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ABO血型正反定型不符及其原因
1.技术和管理错误 2.正定型---红细胞自身相关问题 3.反定型---血清自身相关问题
2021/3/11
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一、技术和管理错误
（1）标本或试剂搞错，造成假阳性或假阴性结果。 （2）器材不洁产生假阳性结果。 （3）试剂污染或失效产生假阳性或假阴性结果。 （4）离心过度或不足，产生假阳性或假阴性结果。
2021/3/11
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二、正定型---红细胞自身相关问题
7.获得性类B 由于革兰氏阴性杆菌的作用，红细胞可 获得“类B”的活性。(肠梗阻、结肠、直肠癌或其 他下消化道疾病时肠壁通透性增加，细菌多糖入血， 使A型患者出现获得性类B现象)
8.可溶性血型物质增多 胃或胰腺恶性肿瘤患者血清中 可能含有过多的可溶性血型物质，这些物质中和抗 A（B）血清从而影响正定型结果。
2021/3/11
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血型参比实验室涉及的检测内容
血型鉴定困难 交叉配血困难 输血反应原因分析 其它：如母婴血型不合新生儿溶血病检测、
coombs试验、血小板抗体检测等。
2021/3/11
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ABO血型常规定型方法
➢ 玻片法、纸片法 ➢ 试管法 ➢ 微量板法 ➢ 微柱凝集法
2021/3/11
2021/3/11
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二、正定型---红细胞自身相关问题
4.嵌合体血型 体内有两群红细胞，定型时显示“混合 外观凝集”现象。也可见于ABO不同型的骨髓移植 术后。真正的嵌合体非常少见，可出现于双胞胎， 在胚胎期由于血管的吻合使得2个胎儿的血液发生 混合，2种血液都被机体认做自我，不产生抗体。 人工嵌合状态可出现于输血后（如O型红细胞输给A 或B型人），骨髓移植术后，交换输血及母体、胎 儿出血。
1.血浆置换治疗后 近期内进行大量的血浆置换治疗，影响 抗体效价，造成反定型困难。
2.异常的血浆蛋白 病人血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例 和高浓度的纤维蛋白原等能导致缗钱状形成，造成假凝 集现象，多见于如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、何杰 金淋巴瘤、严重的肝病等患者 。
3.高分子聚合物的影响 血浆增容剂（葡聚糖、PVP等）也 会引起缗钱状凝集导致假阳性结果。