细菌染色和涂片观察方法
培养观察细菌的简易方法
培养观察细菌的简易方法一、牙垢中的细菌用消毒牙签，在自己牙齿缝里挑下一些碎屑，放在洁净载玻片上的水滴中，调匀，制成涂片。
待涂片干燥后，在酒精灯火焰上徐徐来回掠过3～4次，细菌外面的一些胶质粘着在载玻片上，使细菌固定、稍冷，加一滴亚甲基蓝溶液，染色1～2分钟后，用清水冲洗，然后盖上盖玻片。
置显微镜下，先用低倍镜观察，再换高倍镜，可观察到杆菌、弧菌、球菌等。
若使用油镜观察，效果更清楚明显。
二、粪池里的细菌在粪池用吸管吸取一滴沤过的粪混合液上层液体，滴在洁净的载玻片上，盖上盖玻片。
置显微镜下观察，先用低倍镜，后用高倍镜。
可见到活的螺旋菌及杆菌。
注意在观察时光线应暗些，效果好。
三、酸莱、酸奶中的细菌取酸菜液上部的白色薄膜或酸奶澄清液，制成临时装片，放在高倍镜下观察，可看到乳酸杆菌。
四、根瘤菌的观察取豆科植物[大豆、蚕豆、花生]的根瘤用刀片切开，用针挑取一小块内容物，放在载玻片上的水滴中，制成涂片，晾干后，用酒精灯火焰烘烤固定，然后滴一滴亚甲基蓝溶液，染色2～3分钟，清水冲洗，盖上盖玻片，吸干后，用500倍高倍镜观察，可见到短杆状根瘤菌。
五、枯草杆菌的培养和观察把25克新鲜干草切成小段，放在盛200毫升清水烧杯中，加热煮沸15分钟，待溶液呈暗褐色时，倒入烧瓶，放在黑暗、20～30℃的温暖环境中。
2～3天后，液体混浊，表面形成薄膜。
用吸管吸取浮在上层的液体，制成临时涂片，放在高倍镜下观察，可看到连成线的枯草杆菌。
若将培养液放在低温处1～2天，再取出制成临时涂片，用600倍或更高倍数的显微镜观察还能看到枯草杆菌的芽孢。
微生物学实验细菌细胞的生化反应实验一、实验目的了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法。
二、实验原理各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。
糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。
实验一细菌形态和结构观察，涂片制作及染色法.pdf
实验一 细菌形态和结构观察，涂片制作及染色法 课程名称：兽医微生物学 实验学时： 2学时一、目的要求1．了解、熟悉油镜的使用和使用原理。
2．掌握细菌抹片的制备及美蓝和革兰氏染色方法。
3．能够识别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色特征。
4．熟悉细菌的基本形态学特征和特殊构造。
二、知识背景细菌个体微小，无色透明，在一般显微镜下不易识别，必须用适当的染料使其着色后，才能看到其形态、排列和结构。
某些细菌因有特殊的染色性，更可借特殊的染色方法加以鉴别。
因此染色技术是细菌鉴定中的基本技术之一。
检查微生物标本，需要使用显微镜。
比较多用的是普通光学显微镜。
根据不同要求，可使用暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜。
前几种显微镜用可见光线或紫外光线作照明光源，它们都属于光学显微镜；电子显微镜则是用电子流代替照明光源，与光学显微镜不同。
［普通光学显微镜的构造和使用］普通光学显微镜（或称生物显微镜）的构造，使用与保护方法，已在《组织学与胚胎学》教材中讲过，这里概述油镜的原理和使用要点：检查细菌标本，多用油镜进行，油镜是一种高倍放大（95-100倍）的物镜，一般都标有放大倍数（如95×；100×等）和特别标记，以便识别。
国产镜多用“油”字表示，国外产品则常用“Oil 或“HI”作记号。
油镜上还常漆有黑环或红环，而且油镜镜身比高倍镜和低倍镜长，镜片最小，这也是识别的另一个标志。
油镜头的晶片细小，进入镜中的光量也较少，其视野比用高倍镜时为暗。
当油镜头和载玻片之间为空气层所隔时，因为空气的折光指数与玻璃的不同，故有一部分光线被折射而不能进入镜头之内，使视野更暗；若在镜头与载玻片之间放上与玻璃的折光指数相似的油类，如香柏油等，使光线不致于因折射而大为损失，则可使视野充分照明，并能使操作者清楚地进行观察和检查（图l ）。
实验室中几种常用物质的折光指数 品名 玻璃 檀香油香柏油 加拿大树胶二甲苯 液体石蜡松节油甘油 水 折光指数 1.52-1.59 1.52 1.51 1.52 1.49 1.48 1.47 1.47 1.33进行油镜检查时，应先对好光线，但不可直对阳光，采取最强亮度（升高集光器，开大光圈，调好反光镜等）。
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告实验三细菌的简单染色和革兰氏染色实验三细菌的简单染色和革兰氏染色一、目的与要求1、掌握细菌涂片标本的制备2、掌握革兰氏染色法的步骤和关键点3、识别细菌革兰氏染色结果二、实验原理：细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。
为什么要对细菌染色？细菌的细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。
简单染色法可用以观察微生物的形状、大小及细胞排列状态，是微生物技术中应用广泛，操作简便的染色法。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G?)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。
其原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。
革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞壁内使细胞呈蓝紫色，而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联少，且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，再经番红复染后细胞呈红色。
三、实验器材1、菌种牛肉膏琼脂斜面28℃培养24h的大肠杆菌(Escherichia coli)斜面菌种，牛肉膏琼脂斜面28℃培养16h的枯草杆菌(Bacillus subtilis)斜面菌种；2、仪器显微镜；3、材料载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。
4、染料草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液；细菌的简单染色步骤：细菌的革兰氏染色步骤：涂片,干燥,固定,结晶紫染色,水洗,碘液媒染,水洗,乙醇脱色,水洗,番红复染,水洗,干燥,镜检.五、实验关键步骤和注意点：1、玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。
实验二细菌的观察
细菌一般形态染色观察一、实验目的学习了解微生物染色的基本原理与方法学习掌握细菌的简单染色和革兰氏鉴别染色技术巩固显微镜油镜的使用方法。
二、实验原理细菌的个体极微小，无色透明，必须借助于染色法，使细菌（或背景）着色，与背景（或菌体）形成明显的对比便于在显微镜下观察细菌的形态构造。
染色方法主要有：见下图简单染色法简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用染料有：碱性染料：结晶紫、碱性复红、龙胆紫、番红、中性红、孔雀绿等。
酸性染料：酸性复红、刚果红、曙红等简单染色一般常用碱性染料进行染色原因：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，带正电荷，因此碱性染料很容易与细菌结合使细菌着色细菌细胞壁含有蛋白质或多肽，也就有等电点已知细菌的等电点pH为2～5。
革兰氏阳性菌为2～3，革兰氏阴性菌为4～5。
当细菌的培养液pH值大于等电点时，细菌带有负电荷；反之，带有正电荷。
一般，细菌的培养、染色、试验过程均在偏碱性（7～7.5）、中性、偏酸性（6～7）条件下，都高于细菌的等电点，故均带有负电荷革兰氏染色革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法，根据细菌对这种染色反应的不同，可分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两大类，其机理是由于细菌细胞壁的化学组成及结构不同和通透性不同的缘故。
革兰氏染色对于细菌的分类、鉴定及食品卫生检测都有重要意义。
革兰氏染色原理影响革兰氏染色结果的因素菌龄培养基pH值染色技术：涂片质量、染色时间、脱色时间、染色脱色均匀度等三、实验器材1. 器材：显微镜，擦镜纸，二甲苯，香柏油，载玻片，接种环，酒精灯,火柴，吸水纸，无菌牙签。
2. 染色液及试剂：石碳酸复红染液、碱性美蓝染液、结晶紫染色液，路戈氏碘液，95％的酒精，蕃红染色液，黑色素水溶液，蒸馏水。
3. 菌种：白葡萄球菌、大肠杆菌的新鲜斜面菌种各1支。
四、操作步骤（一）简单染色涂片火焰固定染色水洗干燥镜检（二）革兰氏染色涂片→干燥→火焰固定结晶紫染色→水洗碘液媒染95%酒精脱色→水洗蕃红复染→水洗干燥镜检（三）口腔中微生物观察负染色五、实验报告1、实验结果绘图2、思考题（1）细菌制片过程应注意哪些？（2）试分析菌龄、培养pH、染色技术对革兰氏染色结果的影响。
临床微生物学检验理论课：02细菌鉴定试验-涂片染色
涂片抗酸染色结果观察
镜检时，油镜下仔细查遍整个涂片或至少100个视野； 抗酸性菌呈红色，其它细菌及细胞呈蓝色； TB为细长，着色不均匀，可2个以上的菌形成V、Y、T
等或平行排列等。
涂片抗酸染色结果报告
结果报告，1984年国内统一暂行规定报告方式： 未找到抗酸菌-； 找到抗酸杆菌1或2个，全视野发现1或2个； 找到抗酸杆菌+，全视野发现3-9个； 找到抗酸杆菌++，全视野发现10-99个； 找到抗酸杆菌+++，每视野发现1-9个： 找到抗酸杆菌++++，每视野发现10个以上。
（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验
吲哚（靛基质或蛋白胨水）试验： 阳性：色氨酸酶，分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚，
加入指示剂形成红色界面； 阴性：加入指示剂不变色； 区分普通变形杆菌（+），奇异变形杆菌（-）。
尿素分解试验： 阳性：尿素分解酶分解尿素产生大量的氨，使培养基
呈碱性，加入指示剂为红色； 阴性：加入指示剂不变色。
4、墨汁染色查隐球菌
新生隐球菌广泛分布于自然界，也可存在于人体体表、 口腔及肠道中；
经呼吸道侵入人体，由肺经血行播散时，可侵犯所有脏 器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜；
好发于细胞免疫功能低下者，如AIDS、恶性肿瘤、糖尿 病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者；
临床上怀疑脑膜炎时，常抽取脑脊液检查细菌真菌、抗 酸菌、隐球菌。
3、涂片抗酸染色：检查抗酸杆菌
据世界卫生组织估计，全球每年增加结核病人约800万 1000万，死亡病人约300万；
全人类的三分之一即17亿人曾感染过结核杆菌； 结核病人主要见于发展中国家，尤其经济落后地区； 我国是结核病高发国家，广东地区发病率较高。
实验二 细菌的形态观察(简单染色法和革兰氏染色法)
实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）一目的要求1．了解简单染色法和革兰氏染色法的基本原理，熟练掌握细菌的涂片与革兰氏染色技术。
2．初步学习细菌细胞特殊结构的染色方法，并观察细菌的特殊结构。
3．观察细菌的菌落平板，学会识别大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌的菌落特征，学会初步鉴别微生物的种类的方法。
二实验内容与原理1．简单染色法原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，一般用于观察个体形态与细菌排列。
由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫对细菌进行染色。
美蓝是美蓝的盐酸盐，可解离为带正电荷的美蓝，很容易与细菌结合使菌体着色。
染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
简单染色过程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检涂片→固定→干燥→水洗、吸干→镜检→染色 1mim2．革兰氏染色法原理革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。
它是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G + ）和革兰氏阴性菌（G －）两大类。
革兰氏染色过程：涂片→固定→结晶紫初染（1min）→碘液媒染（1min）→乙醇脱色（95% 酒精,30s）→番红复染（30 秒）→干燥→镜检阳性菌：紫色阴性菌：红色革兰氏染色要点：（1）初染：用结晶紫，染色 1 分钟，水洗。
（2）媒染：加碘液覆盖 1 分钟后水洗。
（3）脱色：连续滴加 95％乙醇，约 30 秒，直到滴下的乙醇无色为止，水洗。
（4）复染：加番红染色 1 分钟，水洗。
（5）干燥。
（6）镜检：先低倍镜，后油镜观察。
注意：涂片要薄而均匀，脱色程度要控制得当。
学生做大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草杆菌的革兰氏染色。
观察细菌个体形态与排列，绘图。
3．芽孢染色原理细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营养体结构。
微生物学实验一、细菌的革兰染色、特殊形态观察、细菌分布
革兰阳性菌与阴性菌细胞壁的比较
细胞壁 质地 厚度 肽聚糖层数 肽聚糖含量 糖类含量 脂类含量 磷壁酸 外膜
G+菌 坚韧 20-80nm 15-50 50-80%（干重） 约45% 1-4%
+ —
G-菌 疏松 10-15nm 1-2 5-20%（干重） 15-20% 11-22%
实验结果
（1） 绘图：画出大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的细胞 形态图。如果染色结果不理想，请分析原因。 （2） 思考: 进行革兰氏染色的意义?
细菌的基本结构
一、细胞壁 二、细胞膜 三、细胞质 四、核质
细菌的特殊形态结构
• 芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各 种极端环境。
• 荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体 • 鞭毛：运动，菌落形态。
实验一、细菌的革兰染色、特殊形态观察、细菌分布
实验目的
• 学习细菌的革兰氏染色原理和方法
• 了解细菌的特殊形态结构： 荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢
• 了解细菌在环境(空气、污水),人体(皮肤、 口咽腔)中的分布
革兰氏染色法基本原理
• 革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家 C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有 的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏 阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的 鉴别染色法。 G+ -紫色 G- - 红色
细菌荚膜的观察
主要成分是多糖、 多肽或蛋白质， 尤以多糖居多。
荚膜
细菌鞭毛的观察
菌毛
芽胞
肉毒梭菌
破伤风芽孢杆菌
了解细菌在环境中的分布 空 气: 每组一个琼脂培养皿 污 水: 每组一个琼脂培养皿
了解细菌在人体中的分布 皮 肤: 2人一个琼脂培养皿红 1min——水洗
微生物学实验-1 口腔微生物的染色观察与显微镜油镜的使用;细菌的革兰氏染色
蒸馏水； 草酸铵结晶紫染液 ；卢戈氏碘液
95%乙醇； 番红复染液；香柏油；二甲苯 光学显微镜
实验方法
滴水 取菌 涂片 自然干燥 火焰固定
结晶紫染色1分钟 乙醇脱色 （20~30秒） 水洗 碘液1分钟
水洗
水洗
番红1分钟
水洗
干燥
镜检 （油镜）
革兰氏染色操作步骤
E.coli
混合菌
S. aureus
涂片方法示意图
n=1.515 a 空气n=1
λ 分辨率 D= —— 2NA a 数值孔径 NA＝n×sin— 2
电源
电源
显微镜油镜的使用与保护
1.
2.
3.
开显微镜电源开关。 调节显微镜光源。 先用低倍镜、高倍镜查找标本视野，下降载物台约2cm ， 加香柏油一滴于标本的待检部位，换用油镜观察。 换用油镜后，眼睛从侧面注视油镜头，缓慢上升载物台至 油圈不再扩大为止，此时镜头几乎与装片接触，但不可压 及装片。 观察标本时，双眼同时挣开，左眼观察，右眼画图。 油镜用毕，转动粗调将载物台下降，取下标本，用擦镜纸 沾少许二甲苯将镜头擦净，然后再用擦镜纸擦去二甲苯。 使各部分还原，物镜镜头呈八字形，光源强度调至最暗， 关闭电源，罩上防尘罩，收拾干净台面。
实验目的
实验原理
微生物学实验-1
实验材料
实验方法 实验结果 注意事项 实验报告
实验一 细菌的革兰氏染色
思考题
实验目的
1. 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌 分类鉴定中的重要性。 2. 学习并掌握革兰氏染色技术，进一步 熟练光学显微镜油镜的使用技术。
实验原理
革兰氏染色法（Gram staining） 是微生物学中常用的一种染 色方法，该染色法由丹麦医 生（Christian Gram）于1884 年创立，故名。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
细菌染色和涂片观察方法
1、 涂片制备：
随标本的种类而略有不同。一般临床标本大多可 直接涂抹于洁净载玻片上；培养的细菌，若为液 体培养液，亦可直接涂于载玻片上；若为固体培 养基上的细菌，则先取一接种环生理盐水于载玻 片中央，然后从培养基上取菌少许，在盐水中研 磨均匀，使呈轻度乳浊，以接种环扩成1cm2或2 份硬币大小的涂面，在室温下自然干燥或放在火 焰上方的热空气中慢慢烘干。但切忌紧靠火焰烤 干。
细菌染色和涂片观察方法
常用染色法
细菌的常用染色法有：单染色法、复染色 法、特殊结构染色法、负染色法以及荧光 染色法等。
细菌染色和涂片观察方法
（一）、单染色法：
单染色法是指用一种染料进行染色的方法 。如用美兰或稀释石炭酸复红等，使各种 细菌均染成同一种单一的颜色。故此法只 能显示细菌的形态及大小，对细菌的鉴别 价值不大。
细菌染色和涂片观察方法
（1）、革兰氏染色的方法：
细菌染色和涂片观察方法
固定—→初染—→媒染—→脱色
（结晶紫或龙胆紫）
（ 卢戈氏碘液）
（95%酒精）
—→复 染 （稀释复红）
细菌染色和涂片观察方法
固定 初染 媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP”
（Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“G¯”或“GN”（
细菌染色和涂片观察方法
2、 固定：
染色前必须先行固定。其目的在于凝固细胞质和 其它细胞结构成分而杀死细菌；使菌体粘附于玻 片上以及改变细菌对染料的通透性（因活菌通常 不易使染料透入细胞内）。
固定的方法一般采用火焰加热法，在特殊目 的时也可用冷冻干燥法或化学法如醇、酸、氯化 高汞、重金属盐或氧化剂等进行固定。
4、 染色：
随目的而选用适宜的染液。染色时，滴加 染液以覆盖涂面为度，染色时间随方法而 定。单染法只用一种染料如吕氏美兰、稀 释石炭酸复红等；而多数染色法需用第二 种染液进行复染。
细菌染色和涂片观察方法
5、 脱色：
脱色：是使被染物脱去已染上的颜色。脱色的目 的是观察细菌与染料结合的稳定程度，故可作为 鉴别染色之用。
细菌染色和涂片观察方法
3、 媒染：
媒染的目的是增加染料和被染物的亲和力。凡使 染料固定于被染物；或引起细胞膜通透性改变的 物质统称为媒染剂。常用的媒染剂有明矾、苦味 酸、金属盐、碘等。也可用加热法媒染。媒染剂 可用于固定之后，亦可含于固定液或染液中，也 可在初染之后复染之前进行。
细菌染色和涂片观察方法
细菌染色和涂片观察方法
3）、革兰氏染色法的临床意义
细菌染色和涂片观察方法
第二节 染色标本检查法
所谓染色标本检查法是用特殊的手段对细 菌进行染色，而后再检查其形态、大小、 排列方式、染色反应以及特殊结构的一种 检查方法,有助于细菌的初步识别或诊断。
细菌染色和涂片观察方法
细菌染色的一般程序
细菌染色的基本程序是： 涂片 → 固定 → （媒染）→ 染色
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性产芽孢杆菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特 菌 x 1000)
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阴性弯曲菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性棒状杆菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件、操 作技术及菌龄等有密切的关系。 培养基成分：在缺乏镁盐的培养基中，革兰氏阳 性菌可变为革兰氏阴性菌。 培养条件：在酸性环境中细菌带正电荷。 操作技术：如涂片太厚影响酒精脱色，革兰氏阴 性菌则可染成革兰氏阳性菌；脱色时倘酒精作用 时间太长，革兰氏阳性菌又会染成革兰氏阴性菌。 菌龄：菌龄也能影响染色的结果，这和细菌生长 过程中核酸含量的改变有关。例如本是革兰氏阳 性的老龄菌，因核酸减少则常有许多菌细胞变为 革兰氏阴性。
细菌的染色和涂片观察
细菌染色和涂片观察方法
第一节 不染色标本检查法
所谓不染色标本检查法是将细菌标本不经 染色直接镜检，从而观察生活状态下细菌 的形态及运动状况的一种检查方法。这种 检查方法虽可看到细菌的大致轮廓，但主 要用于观察细菌的动力。
细菌染色和涂片观察方法
一、不染色标本检查法的具体方法
1 、压滴法 2、悬滴法 3、毛细管法
凡具有脱色作用的化学试剂称脱色剂。脱色剂或 呈溶媒作用，如醇类、丙酮等；或能影响蛋白质 的电离程度，改变其电荷性质或数量，因而影响 细菌与染料的结合程度，如酸类能减少细菌的负 电荷，故可作碱性染料的脱色剂。
细菌染色和涂片观察方法
6、 复染：
已经脱色处理的细胞或其结构常以复染液作复染 以便于观察。复染液与初染液的颜色不同而成鲜 明对比，所以复染也称为对比染色。复染液不宜 太强，以免掩盖初染的颜色而失去对比作用。
细菌染色和涂片法是用二种以上染料进行染色的方 法。此法除显示细菌的形态、大小外，还 有鉴别细菌种类的价值，因此也称鉴别染 色法。常用的鉴别染色法有革兰氏染色法 及抗酸染色法。
细菌染色和涂片观察方法
1、 革兰氏染色法（Gram’s Stain）
是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是 由丹麦细菌学家 Christian Gram氏于1882 ～1884年发明的，至今已逾百年，仍在广 泛使用，是细菌学中最为经典的染色方法 。
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量较多，脂类较少， 与95%酒精接触后可迅速导致细胞壁脱水，通透性 降低，使在细菌细胞内着色的染料——结晶紫与碘 的复合物不易透出，所以保留了紫色。而革兰氏阴 性菌细胞壁含肽聚糖较少、脂类较多，与95%酒精 接触后肽聚糖脱水不明显，而脂类被酒精溶解后使 细胞壁通透性增加，酒精易透入菌体内溶解染料— —碘复合物并使其透出，因而使紫色被洗脱后又被 染成红色。
Gram’s Negative）表示。
细菌染色和涂片观察方法
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄 色葡萄球菌 x 1000)
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性链球菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌 x 1000)
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阴性弧菌例子