肺结核快速诊断新技术介绍
结核病实验室诊断技术介绍
1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。
目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。
2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
肺结核最新诊断标准
肺结核最新诊断标准肺结核是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，其传播途径主要为空气传播。
肺结核的早期诊断对于控制疾病的传播和治疗患者至关重要。
随着医学技术的不断进步，肺结核的诊断标准也在不断更新和完善。
本文将介绍肺结核最新的诊断标准，以便医务人员和患者更好地了解和诊断肺结核病。
一、临床表现。
肺结核的临床表现多样，常见症状包括咳嗽、咳痰、胸痛、低热、盗汗、乏力等。
部分患者可能无明显症状，但在体检或X光检查中发现异常。
二、影像学检查。
胸部X光片和CT检查是肺结核诊断的重要辅助手段。
肺结核的X光表现主要有炎性浸润、结节、空洞、钙化灶等。
CT检查可以更清晰地显示病变范围和部位，有助于诊断和鉴别诊断。
三、痰涂片检查。
痰涂片检查是肺结核诊断的金标准之一。
通过显微镜下观察痰液中的结核分枝杆菌，可以直接确定患者是否感染结核分枝杆菌。
四、结核菌素试验。
结核菌素试验是一种常用的皮肤过敏试验，通过皮内注射结核菌素，观察注射部位的皮肤反应来判断患者是否感染结核分枝杆菌。
然而，结核菌素试验存在假阳性和假阴性结果的可能性，需结合临床表现和其他检查结果进行综合判断。
五、基因检测。
近年来，基因检测技术在肺结核诊断中的应用越来越广泛。
通过检测结核分枝杆菌的特异基因，可以更快速、准确地确定患者是否感染结核分枝杆菌，以及对抗生素的敏感性和耐药性。
六、痰培养。
痰培养是一种较为特异的诊断方法，通过培养痰液中的结核分枝杆菌，可以确定患者是否感染结核分枝杆菌，并对抗生素的敏感性进行检测。
综上所述，肺结核的诊断需要综合临床表现、影像学检查、痰涂片检查、结核菌素试验、基因检测和痰培养等多种方法，以提高诊断的准确性和可靠性。
随着医学技术的不断进步，相信肺结核的诊断标准将会更加完善，为患者的早期诊断和治疗提供更好的保障。
希望本文能够对肺结核的诊断和治疗有所帮助，也希望广大医务人员和患者能够加强对肺结核的认识，及时发现和治疗疾病，共同预防和控制肺结核的传播。
荧光定量PCR和FISH技术诊断肺结核的价值比较
荧光定量PCR和FISH技术诊断肺结核的价值比较肺结核是一种被感染的疾病，与世界卫生组织(WHO)的健康计划相关，它是一种由结核分枝杆菌(TB)引起的疾病，TB通常会影响肺部，但也可影响其他身体部位。
尽管结核病是全球传染病的主要成因之一，但其直接规模已被低估。
因此，快速且准确的肺结核诊断技术是非常重要的，这就是为什么荧光定量PCR和FISH技术非常重要的原因。
在本文中，我们将比较这两种方法分析肺结核的价值，以帮助医疗健康工作者更好地诊断和治疗病情。
什么是荧光定量PCR技术？荧光定量PCR是一种检测DNA序列数量的方法，PCR扩增和荧光检测可以在同一试管中完成，它使得反应更符合要求，同时也减少了误差的发生。
荧光定量PCR在测定细菌或病毒载量，病毒对药物的抵抗性等方面有广泛的应用。
这种技术的主要优势在于其高灵敏度、快速性和准确性。
此外，荧光定量PCR 可以用于高通量生产。
但需要注意的是，荧光定量PCR对样品数量有着较高的要求。
什么是FISH技术？FISH是一种分子生物学技术，用于检测彩色染色体上特定的DNA序列。
这种技术是通过将激光缩小至几个纳米尺度，使荧光材料发光来解决的，来启动荧光。
由于荧光信号只在与分子亲和的位点上才能形成，因此FISH技术具有准确性和高特异性，使其成为许多研究领域的重要工具。
尽管FISH技术采用了普通显微镜，但它更昂贵和耗时，而荧光定量PCR不需要太多的高端设备，而且样品制备速度更快。
荧光定量PCR和FISH技术用于诊断结核病的比较在诊断结核病方面，荧光定量PCR和FISH技术都具有一定的优势和局限性。
这两种技术都能够通过扩增和检测结核菌DNA序列来确定病人是否患有结核病。
但可以看出，荧光定量PCR的优势在于速度和精度，而FISH技术则有更高的特异性和分辨率。
荧光定量PCR技术在结核诊断中的优势荧光定量PCR技术可以用于检测1~2个细胞中的纳克级别DNA序列。
与传统诊断方法不同，它可以非常快速地检测结核病，并发现结核感染的病人，在症状没有明显出现之前就能识别出来。
肺结核治疗进展
肺结核治疗进展肺结核（Tuberculosis，简称TB）是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，主要通过空气飞沫传播。
近年来，肺结核的治疗进展取得了令人鼓舞的成果。
本文将就肺结核治疗的新方法、药物和疫苗等方面进行深入探讨。
一、新的治疗方法1. 全球核心抗结核药物联合治疗计划：此计划旨在提高耐多药结核治疗成功率。
通过联合使用包括里法布星、布达拉胺和异烟肼等在内的有效药物，从而减少药物耐药性。
2. 微生物组学：借助高通量测序技术，探索结核菌的基因组学、转录组学和蛋白质组学特征，以实现精准治疗和个体化治疗。
3. 快速诊断和检测技术：随着分子诊断技术的进步，如PCR和基因芯片技术的应用，肺结核的早期诊断和检测变得更加快速准确，为及时进行治疗提供了有力支持。
二、新的抗结核药物1. 利福平：这种新型抗结核药物可广泛应用于多种结核菌感染，特别是对多药耐药结核病的治疗效果显著。
2. 抗结核新药开发：研究人员正致力于开发更多种类、更高效和更安全的抗结核药物，以满足不同患者的需求，并应对药物耐药性的挑战。
三、肺结核疫苗研究进展1. BCG疫苗改良：BCG疫苗是目前最常用的预防结核病的疫苗，但其有效性存在一定限制。
研究人员正努力改良BCG疫苗，以提高保护效果和持久性。
2. 新型疫苗研发：目前，针对结核菌特定抗原的新型疫苗正在研发阶段，这些疫苗有望在预防肺结核的有效性和安全性上取得突破。
四、肺结核治疗策略1. 个体化治疗：根据病人的具体情况，采取个体化治疗策略，包括选择合适的药物组合、给药时间和剂量等，以提高治疗效果。
2. 药物依从性：提醒病人按照医嘱规定规律服药，并监测药物治疗的依从性，以确保药物的有效性和治疗的成功率。
3. 综合治疗：结合药物治疗、营养支持和健康教育，以促进患者的康复和恢复健康。
总结：随着科技的进步和全球合作的加强，肺结核治疗取得了显著的进展。
新的治疗方法、抗结核药物和疫苗的研究不断推进，为肺结核患者提供了更多的治疗选择和希望。
两种分子检测技术快速诊断肺外结核的研究
两种分子检测技术快速诊断肺外结核的研究肺外结核是指除了肺部以外的部位感染结核杆菌所引起的结核病。
肺外结核不同于肺结核，其临床病症多样，病程复杂，难以诊断和治疗。
传统的结核诊断方法主要是靠症状、体征、痰液涂片和培养等方法，但这些方法存在一定的局限性，如病情复杂时容易漏诊或误诊、诊断时间较长等。
因此，发展一种快速有效的分子检测技术诊断肺外结核具有重要意义。
目前，已发展出许多用于肺外结核的分子检测技术，下面将介绍其中两种主要的研究方法。
第一种是PCR（聚合酶链式反应）技术。
PCR技术是一种在体外复制DNA片段的重要方法，通过扩增病原体的核酸片段，使其达到可以被检测的浓度。
PCR技术能够快速、敏感地检测肺外结核感染，并且可以在早期感染时进行诊断。
此外，PCR技术还可以通过检测结核菌特异性核酸片段的多态性，进行结核病菌株的分型，以及抗结核药物敏感性检测等相关研究。
然而，PCR技术对样本的纯度要求较高，且存在较大的交叉反应的风险。
第二种是免疫分子检测技术，主要包括ELISA（酶联免疫吸附测定）和免疫荧光染色法。
这些技术通过检测结核杆菌特异性抗原或抗体来快速诊断肺外结核。
免疫测定技术具有高效、灵敏、特异性好等特点，能够在早期感染时进行诊断，且能够对结核病菌进行分型和抗结核药物敏感性测试。
免疫测定技术适用于多种临床标本的检测，如血液、尿液、脑脊液等。
然而，免疫测定技术对抗体的选择和不同抗体组合的优化仍然需要进一步研究。
此外，还有一些新兴的分子检测技术也在快速诊断肺外结核的研究中得到应用。
如基于核酸纳米传感器的技术、基于纳米孔技术的技术等，这些技术具有高灵敏度、高特异性、实时检测等特点，有望成为肺外结核诊断的新方法。
综上所述，肺外结核的快速诊断对于及时治疗和控制疾病具有重要意义。
PCR技术和免疫分子检测技术是目前较为常用的方法，但仍然存在一些局限性。
因此，未来应继续开展研究，探索新的分子检测技术，在提高诊断准确性和敏感性的同时，降低检测成本，为肺外结核的早期诊断和治疗提供更好的支持。
结核病的早期诊断与治疗新技术
结核病的早期诊断与治疗新技术结核病是一种由结核杆菌引起的慢性传染病，其早期诊断与治疗对于控制和防止病情进一步恶化至关重要。
近年来，随着科技的不断发展，出现了一些新技术，有助于提高结核病的早期诊断和治疗效果。
本文将介绍几种新技术，并探讨其在结核病防治中的应用前景。
一、基因检测技术基因检测技术是近年来结核病早期诊断的重要突破之一。
传统的结核病诊断主要依靠痰液培养和胸部X光片，但这些方法存在一定的局限性，如培养时间长、敏感性较低等。
而基因检测技术能够检测结核杆菌的DNA，准确快速地判断是否感染结核杆菌。
例如，PCR（聚合酶链反应）技术通过扩增结核杆菌DNA，能够在数小时内得出结果。
此外，核酸杂交试验和线探针杂交试验也是常用的基因检测方法。
这些新技术的出现大大提高了结核病的早期诊断效率，有助于尽早采取治疗措施。
二、放射诊断技术放射诊断技术在结核病的早期诊断中也起到了重要作用。
传统的胸部X光片诊断方法对于结核病的诊断存在一定的局限性，尤其是在肺结核的早期病变上。
而新兴的放射影像技术，如计算机断层扫描（CT）和磁共振成像（MRI），能够更加清晰地观察到病变细节，提高了结核病的早期诊断准确性。
例如，CT技术可以对肺部病灶进行三维重建，有助于更好地评估病情。
此外，正电子发射断层扫描（PET-CT）技术也可以用于结核病的分期和评估治疗效果。
三、药物治疗技术在结核病的治疗方面，药物治疗是最常用的方法。
传统的结核病治疗方案一般采用多种抗结核药物联合使用，但这种方法存在一些问题，如药物副作用大、治疗耐药性等。
近年来，一些新的治疗技术不断涌现，为结核病的治疗带来了新的希望。
例如，利福平（Levofloxacin）和利奈唑胺（Linezolid）等新型抗结核药物的使用，使得多药耐药结核的治疗效果得以提高。
此外，免疫治疗技术也逐渐受到关注，如干扰素和Toll样受体激动剂等，可增强机体免疫力和抗菌能力，有助于提高结核病的治疗效果。
结核病实验室诊断新技术
敏 感 性 和 特 异 性 最 好 。Ｐ Ｒ检 测 较 病 理 检 查 Ｃ
３ ．％ ， 易 误 诊 为 其 它 疾 病 ， 诊 率 高 达 ３６ 极 误
维普资讯
哮 喘与肺部 疾病 杂志 ２０ ０２年 第 １～２期
应在淋 巴结结核诊 断中的应用 ） 中介绍［ ： 在 ］
７ 标 本 中 ， 病 理 诊 断 证 实 为 淋 巴结 结 核 ３例 经
者４ ７例 。 用 Ｐ Ｒ法 检 测 Ｔ Ｃ Ｂ—Ｄ Ａ 阳 性 者 Ｎ
４ ８例 ， 中 ２例 为假 阳性 （ 结 核 病 ） 另 有 １ 其 非 ； 例为 假 阴性 。 其 中 淋 巴 结 结 核 组 ３ ５例 标 本 仍 病 理诊 断 与 Ｐ Ｒ检 测 结 果 完 全 一 致 ； 诊 Ｃ 疑 淋 巴 结结 核 组 ２ ｌ例 中 病 理 诊 断 １ ２例 阳性 ，
维普资讯
哮喘与肺部疾病杂志 ２０ 年第 １ ？ ０２ 一 期
结 核 病 实 验 室诊 断 新 技 术
天津市肺科 医院 秦 超
按 照 传 统 习惯 ， 规 细 菌 学 涂 片 和 培 养 常 法 虽 阳性 率 各 异 但 临床 已将 “ 阳” 为诊 断 菌 作 病 的重 要 参 考 依 据 。但 由 于 这些 检 测 手 段 本 身 存 在 一 些 缺 点 ， 涂 片法 特 异 性 差 ， 结 核 如 非 分 支杆 菌 （ ｙ 或 其 他 细 菌 、 子 等 抗 酸 染 Ｍ（Ｉ Ｔ） 孢 色 亦 为 阳 性 ， 灵 敏 度 低 ， Ｈ 痰 液 中 含 且 每 ｌ ｌ ５０ ０ ０条 以 上 才 能 检 出 。培 养 法 虽 有 检 出 ｌ ０
Ｐ Ｒ法 检 出 １ 例 阳性 。 以上 结 果 表 明 Ｐ Ｒ Ｃ １ Ｃ
几种常见的结核分枝杆菌快速检测方法
肺结核属于肺部慢性传染疾病，临床发病率高，该病的主要致病菌为结核分枝杆菌，病程相对较长，会向全身多个脏器累及。
菌阴肺结核指的是通过一次结核杆菌培养以及三次痰涂片检查，结果均显示为阴性的肺结核患者，具有较低的传染性。
大多数患者不了解菌阴肺结核的相关性知识，如果没有采取及时有效的诊断、治疗，患者的病情就会延误，继而转变为阳性，对患者的预后造成不利影响。
目前，临床中对于菌阴肺结核的特异性诊断措施相对缺乏，最常用的方法就是痰或呼吸道采集标本中结核分枝杆菌的检验。
近年来，结核病的发病率及死亡率呈现逐年上升的趋势。
筛选出一种能有效确诊早期结核病的检验方法十分重要。
目前临床上应用于辅助结核病诊断的检验方法以结核分枝杆菌培养和抗酸染色涂片为主，其中培养法作为结核疾病诊断的金标准具有准确性高、特异性高的优势。
结核分枝杆菌痰的分离培养，消耗时间较长，如果利用固体改良罗氏培养基进行培养，一般会需要至少20d，最长可需要60d，如果使用先进的全自动分枝杆菌进行检测，至少需要7d，至多需要20d。
实验室一般会通过痰涂片法进行检测，该方法的操作相对简单，价格较低，但是，操作费时，在基层痰检实验室涂片量过大的时候，一天内无法得到实验结果，这种现象无法满足目前的结核病防治工作。
近些年来，随着染色技术的逐渐先进，荧光染色技术作为新型的实验手段，已经在医学科学领域中广泛应用。
目前，涂片染色法已经成为无菌体液的主要检查方法，但是，通过传统制片以及染色法的检出率相对较低，误诊率以及漏诊率较高。
主要是因为染色时制片以及标本固定环节容易出现误差，而细胞沉淀仪法、改良的抗酸染色法、萋-尼氏抗酸染色法、金胺O荧光染色法、PCR等技术的应用越来越多。
传统方法：获取痰标本后，排除口水痰，然后纳入研究范围，确认纳入的当天，需要在每份痰标本相同位置，取两份，制成痰涂片。
离心处理标本，再在洁净的玻片上涂抹沉渣，涂完一层之后，使其自然干燥，再次涂抹，形成厚涂片，先使用萋尼抗酸染色法进行染色，随后使用石炭酸复红溶液初染，再使用盐酸酒精脱色，然后用美兰复染，寻找红色区域，待涂片干燥后置于显微镜镜检，于蓝色背景中寻找红色的杆状、分枝状细菌。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
6
实验室快速诊断方法
推荐方法
7
检测原理(1)
检测原理
1.从标本中提取DNA （固体培养、液体培 养、涂阳临床标本）
3. 对扩增DNA产物进行反向杂交
2. PCR扩增 (将一条DNA复制变成几千万条)
4.判断结果
8
GenoType MTBDRplus结果
MTBC及其对利福平和/或异烟肼的耐药性
11
方法: 169临床标本,以国际标准的比例法对照
12
13
仪器系列
TwinCubator® 手工杂交仪 - 每次检测12个标本 - 手工加样及试剂
GT-Blot® 48 全自动杂交仪 - 每次检测48个标本 - 自动手工加样及试剂 - 准确温度控制
如果具备PCR实验室，只需要配备
14
技术优势
1. 获得结果只需6小时！
2. 世界卫生组织推荐的方法(在中国、南非、印 度及俄罗斯这些结核病高发区开始应用) 3. 同一个平台，检测耐多药、广泛耐药、30种 分枝杆菌菌种鉴定
15
分子线性探针综合检测时间
单位：日
传统手工 液体培养 & MTBDRplus AFB涂阴 28 – 42 28 21 77-89 培养、鉴定 及药敏 10-19 0 1 11-20 培养、TB鉴定、 NTM鉴定、 M/XDR-TB 0 1 1(6小时) TB鉴定及MDRTB MTBDRplus AFB涂阳 标本 培养 鉴定 药敏 报告结果 注:
GenoType ® MTBDRsl （结核分枝杆菌乙胺丁醇、喹诺酮类、氨基糖 苷类耐药性检测）
10
快速分子耐多药结核病检测系统 在南非公共卫生中心的应用
方法：将536份来自南非开普敦病人涂 片阳性的痰标本分成两部份, 一部份用 分子线性探针快速检测, 另一部份用 MGIT做培养和药敏。 结果：跟传统的培样对比，分子快速 的灵敏度，特异性，阳性及阴性预测 是 98.8%, 100%, 100% 和99.7%。
9
GenoType® 分支杆菌试剂盒系列
GenoType ® MTBC （来自于培养标本的结核分枝杆菌复合群菌种间的 鉴定） GenoType ® Mycobacteria Direct（来自于病人标本的结核分枝杆菌复 合群，非结核分枝杆菌复合群的鉴定） GenoType ® Mycobacterium CM（来自于培养物的结核分枝杆菌复合 群，非结核分枝杆菌的鉴定） GenoType ® Mycobacterium AS（来自于培养物的其他非结核分枝杆 菌的鉴定） GenoType ® MTBDRplus （结核分枝杆菌利福平、异烟肼耐药性检测）
3
政府的管理决心
世界卫生组织总干事陈冯富 珍在 2009 年 4 月 1 日的耐多 药和广泛耐多药结核病高负 担国家部长级会议上说： “ 如果不能应对耐多药结核 病，则它们将会取代当前占 世界95%的药物敏感性结核 杆菌，将把我们带回到没有 抗生素的岁月。”
4
耐药结核病获得结果时间
痰或其他标本
传统分枝杆菌培养及药敏的检测速度缓慢， 手工方法需要2-3月。液体培养方法也需要34星期，而且操作流程也非常繁琐。 手工 培养 鉴定 药敏 结果等候时 间 28-42天 28天 21天 8-13天 商业化液体 培养 再是星 期或天的概念，已经是 小时概念。
STOP-TB
谢谢!
17
18
肺结核快速诊断新技术介绍
王甦民 2011年10月14日
1
结核病，特别是耐药结核病的快速诊断是制约结核病 控制工作开展的瓶颈之一。而解决这一问题靠微生物 学技术难度很大，需要引入新一代的检测技术。
2
目前诊断技术存在的问题与解决办法
问题： 1、敏感性、特异性不高 2、需要太多的时间 解决办法： 1、引入现代分子生物学检测技术 2、引入现代免疫学检测技术
沉淀 物
去污染及液化
液体快速培养 抗酸杆菌涂片
24小时
固体培养基
2-3月
23-28天
分枝杆菌菌种鉴定
结核分枝杆菌
非结核分枝杆菌
最快药敏结果 约23-28天！
药敏试验
5
实验室快速诊断方法
6个小时之内完成对 疑似结核和“耐多 药结核”的快速甄 别与检测
2008年5月份世界卫生组织建议使用分 子线性探针(Molecular Line Probe) 来检 测耐多药结核病