薄层色谱和柱层析
柱层层析硅胶、薄层色谱硅胶
柱层层析硅胶、薄层色谱硅胶【结构式】mSiO2·nH2O 【物化性质】为白色状颗粒。
不溶于水和其他有机溶剂，在空气中能吸潮。
因具有对不同物质吸附保留时光上的差异，能使各种物质达到分别提纯的目的。
【质量标准】化工行业标准HG/T 2354-2010 【用途】用于石油产品精制脱除芳烃类物质及其他有机气体、液体的挑选性吸附分别；用作化学工业中的催化剂载体、色谱用载体；还可用于中草药中有效成分的分别、提纯及高纯物质的制备。
也是医药、农药、染料、橡胶等柱层分析中一种简易、迅速、敏捷的分析试剂。
【制法】浸渍法：将粗孔硅胶粉碎至40～200目后，筛选，用盐酸浸渍20h，用水洗涤后，举行烘干至含水量≤5％，制得柱层层析硅胶。
【平安性】无危急性。
用聚乙烯塑料瓶包装，每瓶净重250g。
贮运参见硅酸。
2.薄层色谱硅胶【英文名】silica gel, thin layer chromatographic 【结构式】mSiO2·nH2O 【物化性质】为白色、高纯并具有规定的孔容、比表面积和孔隙分布及一定粒度分布的试剂硅胶。
有H型、HF254型、G型、GH254型。
H型不含石膏和有机黏合剂，能汲取空气中的水分，溶于和热浓碱溶液，不溶于水或其他无机酸。
HF254型含有无机荧光粉，在紫外线波长254nm处显黄绿色荧光，易汲取空气中的水分。
G型含有13％石膏作黏合剂，略呈酸性，易汲取空气中的水分。
GH254型含有半水石膏和无机荧光粉，在紫外线波长254nm 处显示黄绿色荧光。
【质量标准】化工行业标准HG/T 2354-2010 要求：①外观为白色匀称粉末；②薄层色谱硅胶应符合表1要求；③柱层层析硅胶应符合表2要求。
表1薄层色谱硅胶要求注：1．活度指标中的“三色”指二甲基黄、苏丹红、靛酚蓝。
2.字母G表示硅胶中含有作黏合剂用的石膏，字母H表示不含有其他有机黏合剂，F254表示含有荧光指示剂，在用254nm波长的紫外光照耀时能显出荧光。
分析天然产物的分离与鉴定方法
分析天然产物的分离与鉴定方法天然产物是指从动植物中提取的具有药用、保健或化妆品等用途的化合物。
由于天然产物的复杂性和多样性，分离和鉴定方法对于研究和应用具有重要意义。
本文将从分离和鉴定两个方面进行探讨。
一、分离方法1. 薄层色谱法（TLC）TLC是一种简单、快速且经济的分离方法，常用于初步筛选和纯化天然产物。
通过将待测样品溶解在合适的溶剂中，然后在薄层硅胶或薄层聚脂酰胺基质上涂布样品，再将其置于合适的溶剂系统中进行展开。
展开过程中，不同组分会在硅胶上以不同速度移动，从而实现分离。
之后，可以使用紫外灯或化学试剂对分离的斑点进行检测和定性分析。
2. 柱层析法柱层析法是一种常用的分离方法，根据化合物在固定相和流动相之间的相互作用力差异实现分离。
常见的柱层析方法包括正相层析和反相层析。
正相层析使用极性较大的固定相，适用于分离极性化合物；反相层析则使用非极性固定相，适用于分离非极性化合物。
柱层析法可以通过调整流动相的组成、流速和温度等参数来实现分离和纯化。
3. 液液萃取法液液萃取法是一种将目标化合物从混合物中转移到溶剂中的方法。
通常使用有机溶剂作为萃取剂，将其与待测样品混合，通过摇床或离心机等设备进行充分混合，然后分离出有机相。
有机相中含有目标化合物，可以通过蒸发或浓缩等方法进行纯化。
二、鉴定方法1. 紫外-可见光谱法（UV-Vis）紫外-可见光谱法是一种常用的分析方法，可用于确定天然产物的吸收峰和吸收强度，从而推测其结构和功能。
通过将样品溶解在适当的溶剂中，然后使用紫外-可见光谱仪测量样品在一定波长范围内的吸收情况。
根据吸收峰的位置和形状，可以初步判断天然产物的结构特征。
2. 质谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度的分析方法，可用于确定天然产物的分子量和分子结构。
通过将样品转化为气态或溶液态，然后使用质谱仪对样品进行离子化和分析。
质谱仪可以根据离子的质荷比和相对丰度，推测化合物的分子式和结构。
3. 核磁共振波谱法（NMR）核磁共振波谱法是一种常用的分析方法，可用于确定天然产物的结构和功能。
制备色谱技术与操作及实验经验
制备色谱技术与操作及实验经验一、制备色谱技术色谱技术是一种有效分离和分析混合物的方法，可以应用于许多领域，包括制药、化学、食品科学等。
制备色谱技术是在制备大量样品的基础上进行的，其目的是获得高纯度的目标化合物。
下面介绍几种常用的制备色谱技术及其操作方法。
1.柱层析法柱层析法是一种基于样品在固定相和流动相之间的分配行为进行分离的方法。
其操作步骤如下：(1)选择合适的填料和溶剂体系。
(2)装填填料至柱内。
(3)平衡填料与进样溶液。
(4)进样。
(5)清洗柱子。
(6)逐步洗脱目标化合物。
(7)收集目标化合物。
(8)分析收集的物质。
2.薄层色谱法薄层色谱法是一种在薄层介质上进行的分离技术，具有操作简便、分离高效等特点。
其操作步骤如下：(1)准备好薄层介质、样品溶解液和色谱槽。
(2)在薄层介质上均匀涂敷样品溶解液。
(3)把薄层介质放入色谱槽中，使之完全浸泡在流动相中。
(4)开始上升运动，让溶剂从底部上升至薄层介质上方。
(5)观察薄层介质上的色带。
(6)将色带切下并分析。
3.凝胶柱层析法凝胶柱层析法是一种利用孔洞大小和分布的差异进行分离的技术。
其操作步骤如下：(1)选择合适的凝胶和溶剂体系。
(2)将凝胶填充至柱内。
(3)平衡凝胶与进样溶液。
(4)进样。
(5)清洗柱子。
(6)逐步洗脱目标化合物。
(7)收集目标化合物。
(8)分析收集的物质。
二、制备色谱实验经验1.仔细选择合适的填料和溶剂体系，确保能够有效分离目标化合物。
2.对填充物进行适当的处理，如研磨、筛选等，以提高分离效果。
3.在操作中要注意保持良好的实验室操作习惯，避免交叉污染和实验结果的失真。
4.在样品的处理和进样过程中，要小心、谨慎操作，以免损坏设备和样品。
5.在制备色谱过程中，要根据实际情况调整流速和温度等操作条件，以获得更好的分离效果。
6.注意溶剂的选择和使用，避免对人体和环境造成危害。
总结：制备色谱技术是一种重要的分离和分析方法，可以有效地分离和提纯混合物中的目标化合物。
药物分离纯化技术
药物分离纯化技术
药物分离纯化技术是指将混合物中的目标药物分离出来，并进行纯化的过程。
常用的药物分离纯化技术包括以下几种：
1. 薄层色谱（TLC）：将混合物样品沿着薄层分离材料上均匀涂敷，然后用溶剂在材料上上升，通过不同药物的分区系数和吸附作用，将药物分离出来。
2. 柱层析：将混合物样品加入到柱层析柱中，利用不同药物在固定相和流动相间的分配系数和吸附作用，使药物在柱中分离。
3. 溶剂萃取：利用不同药物在不同溶剂中的溶解度差异，通过多次萃取步骤将目标药物从混合物中分离出来。
4. 结晶分离：选择适当的溶剂和结晶条件，将目标药物从混合物中结晶出来，然后通过过滤或离心分离固体药物。
5. 膜分离技术：利用膜的分子筛选性能，通过溶质在膜上的迁移速率差异将药物分离出来。
6. 超滤技术：通过膜的筛选作用，去除混合物中的大分子物质，将目标药物分离出来。
7. 蒸馏技术：利用混合物中不同成分的沸点差异，将目标药物通过升温、蒸发然后冷凝的方式分离出来。
以上只是一些常见的药物分离纯化技术，具体应根据不同药物的特性和需求选择合适的方法。
薄层色谱和柱层析综述
薄层色谱和柱层析综述薄层色谱（TLC）是一种简单、快速、经济的分离方法，广泛应用于药物分析、天然产物分离等领域。
TLC的原理是基于物质在固定相（通常是硅胶或聚脂基质）和流动相（通常是有机溶剂或溶液）之间的分配行为。
通过在硅胶板上涂布样品，并将样品在硅胶上移动，样品中的成分会根据其在固体支持物和流动相之间的亲疏性不同而在硅胶上分离开来。
移动过程结束后，可以使用紫外线灯、显色剂或其他方法来观察和检测样品中的化合物。
薄层色谱具有许多优点。
首先，它可以同时分离多种成分，并提供对样品的初步评估。
其次，它是一种快速和经济的方法，几乎不需要仪器设备。
此外，它对样品的量要求很低，只需要微量的样品就可以进行分析。
最重要的是，TLC的操作简单，可以方便地进行实验室分析。
与薄层色谱相比，柱层析是一种更为高效和精确的分离技术。
柱层析的原理是利用固定相（通常是多孔吸附剂或树脂）和移动相（通常是有机溶剂或溶液）之间的相互作用来分离混合物中的化合物。
柱层析中，样品按照它们在固定相和移动相之间的相对亲疏性的不同以不同的速率通过柱子，从而实现物质的分离。
柱层析可以通过调整固定相和移动相的性质、柱子的大小和形状、操作温度等参数来改变分离的选择性和效果。
柱层析通常分为几种类型，包括固相萃取、分区层析、离子交换层析和亲和层析等。
柱层析相比于薄层色谱具有更高的分离能力和选择性。
柱层析通常用于复杂混合物的分离和纯化，如药物、天然产物、蛋白质等。
它不仅可以得到更准确和精确的分离结果，还可以得到更高纯度的样品。
尽管柱层析具有高分离效率和较高纯度的优点，但其操作相对复杂且较耗时。
此外，柱层析通常需要使用专用仪器和设备，使得其成本较高。
综上所述，薄层色谱和柱层析是化学分析和分离中常用的技术。
薄层色谱简单易操作，适用于快速分析和初步评估样品。
柱层析具有更高的分离能力和选择性，适用于复杂混合物的分离和纯化。
根据实际需求，可以选择合适的方法进行化学分析和分离。
常见的色谱法有哪几大类
常见的色谱法有哪几大类色谱法（chromatography）又称色谱分析、色谱分析法、层析法，是一种分离和分析方法，在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着非常广泛的应用。
常见的色谱法主要有：柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法、超临界流体色谱法。
1、柱色谱法原始的色谱方法，该方法将固定相注入下端塞有棉花或滤纸的玻璃管中，将被样品饱和的固定相粉末摊铺在玻璃管顶端，以流动相洗脱。
常见的洗脱方式有两种：一种是自上而下依靠溶剂本身的重力洗脱，另一种：自下而上依靠毛细作用洗脱。
收集分离后的纯净组分也有两种不同的方法：一种方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一种方法是烘干固定相后用机械方法分开各个色带，以合适的溶剂浸泡固定相提取组分分子。
柱色谱法被广泛应用于混合物的分离，包括：对有机合成产物、天然提取物以及生物大分子的分离。
2、薄层色谱法应用非常广泛的色谱方法，这种色谱方法将固定相涂布在金属或玻璃薄板上形成薄层，用毛细管、钢笔或者其他工具将样品点于薄板一端，之后将点样端浸入流动相中，依靠毛细作用令流动相溶剂沿薄板上行展开样品。
薄层色谱法成本低廉、操作简单，被用于对样品的粗测、对有机合成反应进程的检测等用途。
3、高效液相色谱法（HPLC）目前，应用多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是，针对其流动相为液体的特点作出很多调整。
HPLC输液泵要求输液量稳定平衡；进样系统要求进样便利、切换严密；由于液体流动相黏度远远小于气体，为了减低柱压，高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。
HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。
4、气相色谱法气相色谱法是将氦或氩等气体作为载气(称移动相)，将混合物样品注入装有填充剂(称固定相)的色谱柱里，进行分离的一种方法。
分离后的各组分经检测器变为电信号并用记录仪记录下来。
柱层析和薄层层析实验报告
柱层析和薄层层析实验报告篇一：柱层析实验报告柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂6．饱和氯化钠溶液3．丙酮7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃）8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
薄层色谱和柱层析
薄层色谱和柱层析一、薄层色谱（TLC）1.原理：薄层色谱是一种基于分子在固体表面和流动相之间相互作用的分离技术。
它使用薄层固定在玻璃或铝板上的吸附剂（例如硅胶或氧化铝）来分离混合物中的化合物。
在色谱板上涂覆样品后，通过液态或气态的流动相让混合物成分在吸附剂上移动，不同化合物的移动速度不同，从而实现分离。
2.应用：薄层色谱被广泛应用于药物化学、食品科学、环境科学和生命科学等领域。
它通常用于混合物的分析，确定混合物中是否存在特定化合物。
此外，它也可用于纯化样品中的化合物，通过可视化或其他检测方法来定位目标化合物位置。
3.操作步骤：薄层色谱的操作步骤主要包括：（1）准备色谱板：将吸附剂均匀涂覆在固定的玻璃或铝板上，使其成为薄层。
（2）样品的涂覆：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，并用微量移液管将样品均匀地涂覆在色谱板上。
（3）开展分离：将涂覆了样品的色谱板悬挂在色谱槽中，加入合适的溶剂溶液，使之满足色谱板的一端。
（4）显色：在色谱板完全干燥后，通过目视或化学法将化合物可视化。
常用的显色剂包括碘、紫外线灯或化学染色剂。
二、柱层析（CC）1.原理：柱层析是一种基于分子在固定填料（固相）和流动相之间相互作用的分离技术。
根据样品的特性选择不同的固相材料，并将其装填在柱中。
当样品通过柱时，不同化合物与固相发生不同程度的相互作用，从而分离。
2.应用：柱层析广泛应用于化学和生物化学领域，用于分离和纯化化合物。
它可用于药物合成中的纯度检查、食品中毒素的分离、蛋白质的纯化等。
柱层析的分离效果通常较好，纯度高。
3.操作步骤：柱层析的操作步骤主要包括：（1）准备填料和柱子：根据需要选择适当的固相材料，并将其装填在柱子中。
（2）样品的预处理：将待分离的样品预处理，如溶解在适当的溶剂中，并清除杂质。
（3）样品注入：将样品注入柱中，注意控制样品体积和注入速度。
（4）洗脱：通过加入不同组成的洗脱液（流动相），使样品中不同化合物以不同速率从柱中洗脱。
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样品经色谱分离后，用适当方法定出色点或色带位置，然后 将色点部位的吸附剂取下，用溶剂将化合物洗脱萃取后进行测定。
3. 薄层扫描法
用仪器来测定每个斑点或谱带的含量，则更方便和客观，误 差在5％以下。
类别 薄层
几类化合物的薄层色谱
展开剂
显色剂
生物碱 甾体
氨基酸 酚类
氧化铝 硅胶 氧化铝 硅胶
氧化铝 硅胶 硅胶
1）氯仿+5-15%甲醇 2）苯+1-10%乙醇等
1）环己烷：乙酸乙酯=7：3 2）氯仿：丙酮=9：1 3）甲酸：乙酸：水=5：5：1
1）正丁醇+50%乙醇 2）甲醇：乙酸=97：3
1）苯 2）环己烷：氯仿：二乙胺=5：5：1
1）改良的碘化铋钾试剂 2）碘蒸气 1）5%磷钼酸 2）三氯化锑-氯仿溶液
用单一溶剂为展开剂时，由于溶剂组分简单，分离重现性好，对 于难分离的化合物经常要用二元、三元甚至多元溶剂组成的展开剂。 在混合展开剂中占比例大的主要溶剂起溶解物质和基本分离的作用， 比例较小的溶剂起调整改善分离物质的Rf值及对某些物质的选择作用。 一般主要溶剂选用不易形成氢键的溶剂，或极性比分离物质低的溶剂， 否则将使被分离物质的Rf值太大或甚至跟随溶剂前缘移动。
二、吸附柱色谱
吸附柱色谱是将待分离混合物样品均匀地加在装有 吸附剂的柱子中，再加适当的溶剂（洗脱剂）冲洗，由 于吸附剂对各组分吸附能力不同，各组分在柱中向下移 动的速度不同，吸附力最弱的组分随溶剂首先流出，通 过分段定量收集洗脱液而使各组分得到分离。柱色谱装 置如图示。
混合物中含A、B两个组分，溶解后 加至色谱柱中。开始A和B都被吸附在柱 的上端，形成原始谱带。当加入洗脱剂 冲洗时，A和B将随着向下流动而从吸附 剂上洗脱，接着又遇到吸附剂又被吸附， 又随着向下流动的洗脱剂冲洗而被洗脱， 如此连续不断地被再吸附、再洗脱，经 过一段时间的冲洗后，由于A、B的极性 不同，在该吸附剂和洗脱剂上被吸附和 被洗脱的性能也不同，最终出现A、B两 个色谱带。由于A的吸附力小于B，故A 移行较快，在色谱柱下段，而B移行较慢， 在柱的上段。继续用溶剂冲洗，A、B将 先后被洗脱出来。分别定量收集洗脱液， 用TLC跟踪检验，斑点相同的流分A、B 两个纯品化合物。
预饱和是减少边缘效应 的有效办法！
边缘效应示意图
预饱和：可在加入展开剂后使展开容器密闭， 放置15-30分钟，待溶剂蒸汽平衡后，迅速放入点有 样品的薄层板，立即密闭，展开。必要时可放置适 当大小的滤纸促使展开缸内蒸汽达到饱和。
15－30min 展 开
15－30min 倾倒
展开
常用展开剂
对展开剂的要求 ① 对被测组分有良好的溶解性； ② 有良好的分离效果； ③ 斑点圆整不拖尾； ④ Rf值最好在0.3-0.5，组分较多最好在0.25-0.75； ⑤ 展开剂不能和被测组分发生反应； ⑥ 沸点适中，粘度较小。
展 开 后 的 薄 层 板
（二）定 量
1. 目视比较法
将不同量的标准品作为系列，同样样品分别点在同一薄层上 展开，显色后，目测比较斑点颜色的深浅和面积大小，求出未知 物含量的近似值，作为半定量法，精密度为±10%。 例：硫酸长春碱的纯度检查（中国药典方法）
色谱条件：硅胶GF254制成的薄层板，展开剂为石油醚（30~50℃） －氯仿－丙酮－二乙胺（12:6:1:1）,根据硫酸长春碱结构在紫外灯 （254nm）下检测。
chrome意为“色彩”，graphy源自希腊文，“写”。色谱为 层析的同义语，都是从英语chromatography译来的。
茨维特色谱图 （1906）
叶绿素的石油醚溶液流经
装有CaCO3的柱子，然后 用石油醚淋洗.
CaCO3对叶绿素各成分吸 附能力不同，而分离成为
色带.
叶绿素 叶绿素
叶黄素'， " 叶黄素
薄层色谱和柱层析
色谱法
色谱法是目前最常用的一类分离技术，利用不同结构或不 同性质的物质在不相混溶的二相中分布不同而进行分离。当流 动相流过固定相时，这些物质被流动相带过，以不同速度向前 移动。经过一段时间之后，不同物质移动的距离有较明显的差 异，被分离成一条条的色带，从而可以取下、溶出，获得纯的 组分。
薄层点样
以使用的器具不同，点样可分为手动和自动点样。
•手动点样主要使用的器具有微升毛细管、微量注射 器或配合与之相应的手动点样仪等。
• 自动点样采用半自动点样仪或全自动点样仪，按 预设程序自动点样。
以点样方式的不同可分为接触式点样和喷雾点样两种。
接触式点样：多采用定量毛细管、微量注射器手动点样， 有的仪器也可进行自动接触式点样。
柱色谱是较经典的有机物分离技术，原理和薄层 色谱相同，但装置有所不同，主要由一个均匀玻璃柱 和填充填料组成，填料是决定柱效的主要因素，填料 必须满足具有不溶于所使用流动相、不使欲分离的样 品破坏或分解、惰性大、可逆性强和吸附容量大。同 时，填料颗粒直径要均匀。最常见的柱色谱是硅胶色 谱、氧化铝色谱、离子交换柱色谱、聚酰胺柱色谱和 凝胶柱色谱。
在展开剂中加入少量酸、碱可以使某些极性物质斑点集中，提高 分离度，用粘度太大的溶剂时，需要加入一种溶剂以降低展开剂的粘 度、加快展开速度。
例：环己烷－丙酮－二乙胺－水（10:5:2:5）这个系统中，水是极性 大的溶剂，环己烷是极性小的溶剂，后者的加入可以降低分离物质的 Rf值，丙酮起着混合整个系统及降低展开剂粘度的作用，少量二乙胺 的加入控制了展开剂的pH值以使分离后的斑点不致拖尾，分离清晰。
水合茚三酮溶液
5%三氯化铁溶液
醛类
黄酮类 及其单 糖甙类
纤维素 硅胶 纤维素
1）丁醇：醋酸：水=4：1：5 2）苯：醋酸：水=2：2：1或1：1：2
1）苯：石油醚=1：1 2）苯+5%乙酸乙酯
1）70%醋酸 2）30%醋酸 3）丁醇：醋酸：水=4：1：5
邻联茴香胺乙酸溶液 1%三氯化铝的乙醇溶液
柱色谱法 (Column Chromatograph)
薄层固定相
• 按照固定相的种类，薄层板可分为正相薄层板（如硅 胶薄层板、聚酰胺薄层板）、反相薄层板（如C18键合 相薄层板）等。
• 硅胶薄层板是目前使用最广的薄层板，有硅胶G板、 硅胶GF254板、硅胶H板和硅胶HF254板等规格。
• 高效薄层板（HPTLC，High Performance TLC）所使 用的固定相较普通薄层板平均粒度小，颗粒分布范围窄， 因此在相对短的展开距离中可以达到更好的分离效果。
应用实例：狄戈辛（异羟基洋地黄毒苷）的分离
支持剂：国产层析硅胶80100目，加2/3量的水（以乙酸乙酯饱和），调 匀，再以乙酸乙酯（水饱和）浸泡，调成稀糊状，湿法装柱，柱直 径与长度比 1:2 以上。
实验方法：取样品与1 2倍量硅胶磨匀，加入柱顶，用水饱和的乙酸乙 酯（含0.5%甲醇）洗脱，分部收集，各流分均作纸色谱及薄层色谱 检查，比移值相同的流分合并，减压蒸干，以甲醇结晶，得到洋地 黄毒苷、羟基洋地黄毒苷、异羟基洋地黄毒苷三种单体。
供试液的溶剂在原点的残留，也会改变展开的选择性。 •极性与展开剂极性相差较大时更为明显； •亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分（特别在高湿度环 境）对色谱质量的影响也不可低估。
因此点样时，
• 应注意选择适宜的溶剂；
• 同步干燥或上样后继后干燥以除去原点残存的溶剂。尽可能
避免高温加热，以免遇热不稳定的成分的破坏导致样品中某些
接触式点样应注意： 正确选择溶解样品的溶剂 原点直径一般以3mm为宜 防止点样毛细管损伤薄层表面 尽量避免多次点样 防止点样环形色谱效应
点样环形色谱效应： 在点样的同时，样品在原点呈环状展开，如果样品在溶剂 中的溶解度很大，原点将变成空心环，称为“点样环形色 谱效应”。它会对展开造成不良影响。应选择样品组分溶 解度相对较小的溶剂以避免此现象的产生。
• 反相分配色谱：以亲脂性有机溶剂作固定（液）相，以水或亲水 性溶剂作移动相的分配色谱称为反相分配色谱。当分离脂溶性或 极性较小的成分，如高级脂肪酸、油脂、游离甾体等物质时，常 用反相分配色谱。实践中有70%以上的分配色谱都采用反相色谱。
分配柱色谱的应用
分配柱色谱往往适用于分离水溶性或极性较大的组分，如生物 碱、苷类、糖类、有机酸、酚类及氨基酸的衍生物；对某些非极性 化合物，如油脂、甾体等物质，可采用反相分配柱色谱法。
显色
1. 有色化合物——直接定位
有荧光斑
2. 无色
紫外吸收 显色剂定位
紫外灯检出 有暗斑
喷雾显色 （喷雾后加热显色） 蒸气熏蒸显色
浸渍显色∶盛有显色剂的展开缸 显色剂：通用有碘、硫酸
① 碘蒸气在浅黄色背景上，很多有机化合物吸附碘，可逆地产生棕色 到黄色斑点，不少化合物的检测灵敏度可达0.5~1μg。
• 分配色谱—样品组分的分配系数不同 • 吸附色谱— 样品组分对固定相表面吸
附力不同 • 体积排阻色谱—利用固定相孔径不同，
把样品组分按分子大小 分开 • 离子交换色谱—不同离子与固定相相
反电荷间的作用力大 小不同
薄层色谱法 (Thin Layer Chromatography)
最常用的薄层色谱也属于液-固吸附色谱。同柱色 谱不同的是吸附剂被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂 层。干燥后在涂层的一端点样，竖直放入一个盛有少量展 开剂的的有盖容器中。展开剂接触到吸附剂涂层，借毛细 作用向上移动。与柱色谱过程相同，经过在吸附剂和展开 剂之间的多次吸附-溶解作用，将混合物中各组分分离成 孤立的样点，实现混合物的分离。
② 10%硫酸乙醇液，喷雾后于105℃加热10~15min，日光或紫外光下 观察。大多数有机物呈有色斑点，如红色、棕色和紫色等，在炭化 以前，不同的化合物将出现一系列颜色的改变，被炭化的化合物常 出现荧光。
③ 高锰酸钾－硫酸液，结果为粉底本色上产生白色斑点。
④ 25%高氯酸水液，喷雾后加热至150 ℃观察。 ⑤ 10％～20％五氯化锑的四氯化碳液，或三氯化锑的乙醇饱和溶液。